Лектинсвязывающие и туморогенные свойства клеток глиомы С6

Цель: изучение адгезии клеток глиомы С6 к пластиковым поверхностям с сорбированными лектинами с различной углеводной специфичностью и оценка in vivo туморогенной активности выделенных адгезивных фракций. Методы: адгезивную активность клеток С6 к 11 лектинам (PHA, ConA, GNA, HPL, SBA, PNA, Mil, P...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
Datum:	2015
Hauptverfasser:	Гнедкова, И.А., Лисяный, Н.И., Станецкая, Д.Н., Розуменко, В.Д., Главацкий, А.Я., Шмелева, А.А., Малышева, Т.А., Черненко, О.Г., Гнедкова, М.А.
Format:	Artikel
Sprache:	Russian
Veröffentlicht:	Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України 2015
Schriftenreihe:	Онкологія
Schlagworte:	Оригинальные исследования
Online Zugang:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137861
Tags:	Tag hinzufügen Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:	Лектинсвязывающие и туморогенные свойства клеток глиомы С6 / И.А. Гнедкова, Н.И. Лисяный, Д.Н. Станецкая, В.Д. Розуменко, А.Я. Главацкий, А.А. Шмелева, Т.А. Малышева, О.Г. Черненко, М.А. Гнедкова // Онкологія. — 2015. — Т. 17, № 1. — С. 4-11. — Бібліогр.: 36 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-137861
record_format	dspace
spelling	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1378612025-02-09T22:23:11Z Лектинсвязывающие и туморогенные свойства клеток глиомы С6 Lectin-binding and tumorigenic properties of glioma C6 cells Гнедкова, И.А. Лисяный, Н.И. Станецкая, Д.Н. Розуменко, В.Д. Главацкий, А.Я. Шмелева, А.А. Малышева, Т.А. Черненко, О.Г. Гнедкова, М.А. Оригинальные исследования Цель: изучение адгезии клеток глиомы С6 к пластиковым поверхностям с сорбированными лектинами с различной углеводной специфичностью и оценка in vivo туморогенной активности выделенных адгезивных фракций. Методы: адгезивную активность клеток С6 к 11 лектинам (PHA, ConA, GNA, HPL, SBA, PNA, Mil, PFL, LABA, WGA, SNA) оценивали спектрофотометрически. Клетки адгезивных фракций вводили интракраниально нелинейным крысам в дозе 5•10<sup>5</sup> . Туморогенность фракций оценивали по средней продолжительности жизни (СПЖ) животных. Результаты: при инкубации клеток С6 на пластике с сорбированными лектинами в течение 1 и 3 ч маннозоспецифичные лектины PHA и ConA (50–10 мкг) усиливали адгезию этих клеток на 30–50%, тогда как лектины, связывающие нейраминовую кислоту (SNA и WGA), достоверно снижали адгезивную активность клеток С6 во всех используемых дозах. Введение in vivo фракций клеток С6, сорбированных на поверхностях с лектинами PHA, SBA (связывающими N-гликозидные цепи), PNA (галактозосвязывающий лектин) и LABA (фукозоспецифичный лектин) приводило к достоверному сокращению СПЖ по сравнению с животными контрольной группы, которым были инокулированы клетки исходной культуры С6. Наименьшая СПЖ крыс с глиомой С6 отмечена при введении фракции клеток, адгезированной на лектине LABA. Сниженной туморогенностью (увеличение СПЖ по сравнению с контрольной и другими опытными группами в 1,7– 2,2 раза) обладали клетки С6, адгезированные на лектине омелы (Mil). Выводы: клетки глиомы С6 экспрессируют определенные углеводные эпитопы, из которых с повышением туморогенности клеток и сокращением СПЖ ассоциируются рецепторы, содержащие D-галактозу, N-ацетилглюкозамин, N-ацетилгалактозамин, α-фукозу и нейраминовую кислоту, что важно учитывать при разработке методов иммунотерапии. The aim of this study was to investigate adhesive and tumorogenic activity of glioma C6 cells fractions with different adhesive properties. Objects and methods: Adhesive activity glioma C6 cells to 11 lectins was estimated by means of spectrophotometry. The cells of adhesive fractions were injected intracranially to the rats in dose of 5•10<sup>5</sup> cells. Tumorogenic activity of the fractions was determined by median survival of life of animals. Results: Sorbed on plastic plane tables in definite doses of PHA and ConA lectins reinforced adhesion glioma C6 cells to 30–50% by approximation while binding neuraminic acid (SNA and WGA) lectins reduced adhesive activity of glioma C6 cells in all used doses upon the incubation for 1 and 3 hours really. Bin ding N-glycosidic chains PHA and SBA lectins increased tumoro genic properties of glioma C6 cells and reduced median survi val of rats. It was noted that the injection of adhesived on lectine of LABA, which bind α-fucose, the fraction cells caused least of all median survival of life. Adhesived on mistletoes lectin glioma C6 cells had least of all tumorigenic properties. Conclusion: Glioma C6 cells express specific epitops. Keeping D-galactosa, N-acetylgluco samine, N-acetylgalactosamine, α-fucosa and neuraminic acid receptors have the most tumorogenic effect for growth of the proliferative brain tumor. This should be considered in choosing the me thods of immunotherapy. 2015 Article Лектинсвязывающие и туморогенные свойства клеток глиомы С6 / И.А. Гнедкова, Н.И. Лисяный, Д.Н. Станецкая, В.Д. Розуменко, А.Я. Главацкий, А.А. Шмелева, Т.А. Малышева, О.Г. Черненко, М.А. Гнедкова // Онкологія. — 2015. — Т. 17, № 1. — С. 4-11. — Бібліогр.: 36 назв. — рос. https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137861 ru Онкологія application/pdf Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
topic	Оригинальные исследования Оригинальные исследования
spellingShingle	Оригинальные исследования Оригинальные исследования Гнедкова, И.А. Лисяный, Н.И. Станецкая, Д.Н. Розуменко, В.Д. Главацкий, А.Я. Шмелева, А.А. Малышева, Т.А. Черненко, О.Г. Гнедкова, М.А. Лектинсвязывающие и туморогенные свойства клеток глиомы С6 Онкологія
description	Цель: изучение адгезии клеток глиомы С6 к пластиковым поверхностям с сорбированными лектинами с различной углеводной специфичностью и оценка in vivo туморогенной активности выделенных адгезивных фракций. Методы: адгезивную активность клеток С6 к 11 лектинам (PHA, ConA, GNA, HPL, SBA, PNA, Mil, PFL, LABA, WGA, SNA) оценивали спектрофотометрически. Клетки адгезивных фракций вводили интракраниально нелинейным крысам в дозе 5•10<sup>5</sup> . Туморогенность фракций оценивали по средней продолжительности жизни (СПЖ) животных. Результаты: при инкубации клеток С6 на пластике с сорбированными лектинами в течение 1 и 3 ч маннозоспецифичные лектины PHA и ConA (50–10 мкг) усиливали адгезию этих клеток на 30–50%, тогда как лектины, связывающие нейраминовую кислоту (SNA и WGA), достоверно снижали адгезивную активность клеток С6 во всех используемых дозах. Введение in vivo фракций клеток С6, сорбированных на поверхностях с лектинами PHA, SBA (связывающими N-гликозидные цепи), PNA (галактозосвязывающий лектин) и LABA (фукозоспецифичный лектин) приводило к достоверному сокращению СПЖ по сравнению с животными контрольной группы, которым были инокулированы клетки исходной культуры С6. Наименьшая СПЖ крыс с глиомой С6 отмечена при введении фракции клеток, адгезированной на лектине LABA. Сниженной туморогенностью (увеличение СПЖ по сравнению с контрольной и другими опытными группами в 1,7– 2,2 раза) обладали клетки С6, адгезированные на лектине омелы (Mil). Выводы: клетки глиомы С6 экспрессируют определенные углеводные эпитопы, из которых с повышением туморогенности клеток и сокращением СПЖ ассоциируются рецепторы, содержащие D-галактозу, N-ацетилглюкозамин, N-ацетилгалактозамин, α-фукозу и нейраминовую кислоту, что важно учитывать при разработке методов иммунотерапии.
format	Article
author	Гнедкова, И.А. Лисяный, Н.И. Станецкая, Д.Н. Розуменко, В.Д. Главацкий, А.Я. Шмелева, А.А. Малышева, Т.А. Черненко, О.Г. Гнедкова, М.А.
author_facet	Гнедкова, И.А. Лисяный, Н.И. Станецкая, Д.Н. Розуменко, В.Д. Главацкий, А.Я. Шмелева, А.А. Малышева, Т.А. Черненко, О.Г. Гнедкова, М.А.
author_sort	Гнедкова, И.А.
title	Лектинсвязывающие и туморогенные свойства клеток глиомы С6
title_short	Лектинсвязывающие и туморогенные свойства клеток глиомы С6
title_full	Лектинсвязывающие и туморогенные свойства клеток глиомы С6
title_fullStr	Лектинсвязывающие и туморогенные свойства клеток глиомы С6
title_full_unstemmed	Лектинсвязывающие и туморогенные свойства клеток глиомы С6
title_sort	лектинсвязывающие и туморогенные свойства клеток глиомы с6
publisher	Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України
publishDate	2015
topic_facet	Оригинальные исследования
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/137861
citation_txt	Лектинсвязывающие и туморогенные свойства клеток глиомы С6 / И.А. Гнедкова, Н.И. Лисяный, Д.Н. Станецкая, В.Д. Розуменко, А.Я. Главацкий, А.А. Шмелева, Т.А. Малышева, О.Г. Черненко, М.А. Гнедкова // Онкологія. — 2015. — Т. 17, № 1. — С. 4-11. — Бібліогр.: 36 назв. — рос.
series	Онкологія
work_keys_str_mv	AT gnedkovaia lektinsvâzyvaûŝieitumorogennyesvoistvakletokgliomys6 AT lisânyini lektinsvâzyvaûŝieitumorogennyesvoistvakletokgliomys6 AT staneckaâdn lektinsvâzyvaûŝieitumorogennyesvoistvakletokgliomys6 AT rozumenkovd lektinsvâzyvaûŝieitumorogennyesvoistvakletokgliomys6 AT glavackiiaâ lektinsvâzyvaûŝieitumorogennyesvoistvakletokgliomys6 AT šmelevaaa lektinsvâzyvaûŝieitumorogennyesvoistvakletokgliomys6 AT malyševata lektinsvâzyvaûŝieitumorogennyesvoistvakletokgliomys6 AT černenkoog lektinsvâzyvaûŝieitumorogennyesvoistvakletokgliomys6 AT gnedkovama lektinsvâzyvaûŝieitumorogennyesvoistvakletokgliomys6 AT gnedkovaia lectinbindingandtumorigenicpropertiesofgliomac6cells AT lisânyini lectinbindingandtumorigenicpropertiesofgliomac6cells AT staneckaâdn lectinbindingandtumorigenicpropertiesofgliomac6cells AT rozumenkovd lectinbindingandtumorigenicpropertiesofgliomac6cells AT glavackiiaâ lectinbindingandtumorigenicpropertiesofgliomac6cells AT šmelevaaa lectinbindingandtumorigenicpropertiesofgliomac6cells AT malyševata lectinbindingandtumorigenicpropertiesofgliomac6cells AT černenkoog lectinbindingandtumorigenicpropertiesofgliomac6cells AT gnedkovama lectinbindingandtumorigenicpropertiesofgliomac6cells
first_indexed	2025-12-01T09:28:51Z
last_indexed	2025-12-01T09:28:51Z
_version_	1850297635827613696
fulltext	ÎÍÊÎËÎÃÈß • Ò. 17 • ¹ 1 • 2015 ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÛ Å ÈÑ Ñ ËÅÄÎ ÂÀ ÍÈß 4 ВВЕДЕНИЕ Как известно, в состав опухолевых антигенов входят углеводные структуры мембранных глико- протеинов, гликолипидов и полисахаридов. Уста- новлено, что при онкогенезе изменяется структу- ра мембранных гликоконъюгатов как опухолевых, так и иммунокомпетентных клеток, причем отме- чают опережающую изменчивость гликоконъюга- тов на опухолевых клетках (ОК). Эти изменения связывают с нарушением синтеза специфических гликозилтрансфераз [1]. Изменения в сиалирова- нии терминальных углеводных молекул гликопро- теинов клеточных мембран могут определять инва- зивный рост опухолей, в частности глиом. На этот процесс можно повлиять трансфекцией гена глико- зилтрансферазы, что способствует восстановлению сиалирования клеточной мембраны [2]. При опухолевом процессе отмечают тенден- цию к утрате дисахарида N-ацетилнейраминовой кислоты-N-ацетилглюкозамина (NAcNeu- NAcGlc) — рецептора лектина зародышей пше- ницы (WGA) и увеличение количества на мем- бранах злокачественных клеток различного про- исхождения рецепторов к лектину сои (SBA), арахиса (PNA) и чечевицы (LCL), связывающих со- ответственно N-ацетилгалактозамин, D-галактозу, D-маннозу [3]. В наших предыдущих исследованиях установлено, что на клетках глиом различной степе- ни анаплазии экспрессируются рецепторы ко мно- гим лектинам [4]. Так, повышению степени анапла- зии опухолей мозга пропорционально увеличение количества клеток глиомы с рецепторами, содержа- щими D-маннозу, связываемую лектином чечеви- цы (LCL) [5]. Далее показано, что если рецепторы к лектинам преобладали на лимфоцитах перифери- ческой крови по сравнению с аутологичными ОК, то ремиссия при опухолях головного мозга была до- стоверно более длительной, чем при преобладании соответствующих рецепторов на ОК [6]. В клетках глиом изменяется состав ганглиозидов — уменьша- ется количество моносиалированных GM3 и GM2 и выявляются дисиалированные GD3, GD2. Со- держание GD3 корреллирует со степенью злокаче- ственности глиомы. В глиобластомах определяют- ся Galα1–4 Gal-цепи лактоцерамида [7]. Одним из направлений в иммунотерапии глиом является использование опухолеассоциированных углеводных антигенов, в частности для приготов- ЛЕКТИНСВЯЗЫВАЮЩИЕ И ТУМОРОГЕННЫЕ СВОЙСТВА КЛЕТОК ГЛИОМЫ С6 Цель: изучение адгезии клеток глиомы С6 к пластиковым поверхностям с сорбированными лектинами с различной углеводной специфичностью и оценка in vivo туморогенной активности выделенных адгезивных фрак- ций. Методы: адгезивную активность клеток С6 к 11 лектинам (PHA, ConA, GNA, HPL, SBA, PNA, Mil, PFL, LABA, WGA, SNA) оценивали спек- трофотометрически. Клетки адгезивных фракций вводили интракрани- ально нелинейным крысам в дозе 5•105. Туморогенность фракций оценива- ли по средней продолжительности жизни (СПЖ) животных. Результа- ты: при инкубации клеток С6 на пластике с сорбированными лектинами в течение 1 и 3 ч маннозоспецифичные лектины PHA и ConA (50–10 мкг) усиливали адгезию этих клеток на 30–50%, тогда как лектины, связыва- ющие нейраминовую кислоту (SNA и WGA), достоверно снижали адгезив- ную активность клеток С6 во всех используемых дозах. Введение in vivo фракций клеток С6, сорбированных на поверхностях с лектинами PHA, SBA (связывающими N-гликозидные цепи), PNA (галактозосвязывающий лектин) и LABA (фукозоспецифичный лектин) приводило к достоверному сокращению СПЖ по сравнению с животными контрольной группы, ко- торым были инокулированы клетки исходной культуры С6. Наименьшая СПЖ крыс с глиомой С6 отмечена при введении фракции клеток, адге- зированной на лектине LABA. Сниженной туморогенностью (увеличение СПЖ по сравнению с контрольной и другими опытными группами в 1,7– 2,2 раза) обладали клетки С6, адгезированные на лектине омелы (Mil). Вы- воды: клетки глиомы С6 экспрессируют определенные углеводные эпитопы, из которых с повышением туморогенности клеток и сокращением СПЖ ас- социируются рецепторы, содержащие D-галактозу, N-ацетилглюкозамин, N-ацетилгалактозамин, α-фукозу и нейраминовую кислоту, что важно учитывать при разработке методов иммунотерапии. И.А. Гнедкова Н.И. Лисяный Д.Н. Станецкая В.Д. Розуменко А.Я. Главацкий А.А. Шмелева Т.А. Малышева О.Г. Черненко М.А. Гнедкова ГУ «Институт нейрохирургии им. акад. А.П. Ромоданова НАМН Украины», Киев, Украина Ключевые слова: глиома С6, углеводсодержащие структуры клеточных мембран, лектины, адгезивность, туморогенность. ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÛÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß 5ÎÍÊÎËÎÃÈß • Ò. 17 • ¹ 1 • 2015 5 ления вакцин. К углеводным эпитопам получают антитела с комплементзависимой цитотоксично- стью, а также обеспечивающие антителозависимую клеточную цитотоксичность. Наиболее интересны 4 из 75 используемых с этой целью антигенов: ган- глиозиды GD2, GD3, FucosylGM1 и N-acetylGM3. Следует также отметить, что эпитопы рецепторов ростовых факторов, играющих важную роль в опу- холевом росте, — эпидермального (EGFR) и фак- тора роста эндотелия сосудов (VEGFR) взаимодей- ствуют с ганглиозидами [8]. Рецепторы к лектинам определяются на стволо- вых клетках, в том числе опухолей мозга [9]. Так, ре- цептор к фитогемагглютинину (phytohemagglutinin — PHA) слабо экспрессирован на эмбриональных стволовых клетках (ЭСК) (14,0 ± 4,4%) и значитель- но — на нейральных и мезенхимальных стволовых клетках (МСK) (99,0 ± 0,4%) [10]. С помощью лек- тина Vicia villosa, связывающего терминальные мо- лекулы N-ацетил-D-галактозамина, удалось выде- лить нервные клетки-предшественники из смеси ЭСК и MСК [10]. При выявлении особенностей рецепторного ап- парата дифференцированных и недифференциро- ванных клеток было изучено 79 гликопротеинов с помощью лектинов ConA, WGA, PNA. Обнару- жено 18 гликопротеинов в лизосомах, участвую- щих в дифференцировке клеток. Установлено, что в процессе дифференцировки нейрональных кле- ток увеличивалось содержание лизосомальных гли- копротеинов [11]. Ряд исследователей использовали панель из 20 лектинов, связывающих определенные тер- минальные углеводы или олигосахариды. Показа- но, что углеводы N-ацетилгалактозамин (GalNAc) и N-ацетилглюкозамин (GlcNAc) экспрессирова- ны на поверхности недифференцированных кле- ток и не выявляются на 12-й день эмбрионально- го развития. Агглютинин Dolichos biflorus (DBA), специфичный к GalNAc, селективно связывал ство- ловые клетки глиом. Установлено, что терминаль- ные молекулы GalNAc и GlcNAc экспрессированы на стволовых клетках, содержащихся в глиобласто- мах [12]. DBA использовали также для выделения ЭСК у мышей [13]. Показано, что экстраклеточный домен рецепто- ра муцина подопланин (PDPN) высокогликозили- рован α2,3-сиаловыми цепями, связанными с га- лактозой. PDPN активирует эндогенные лиганды, индуцирует рост и метастазирование опухоли. Лек- тины, которые связывают протеины с терминальны- ми молекулами α-2,3-сиаловой кислоты, подавляют рост опухоли [14]. Лектин Maackia amurensis (MASL) связывает О-цепи, содержащие сиаловую кислоту. PDPN экспрессирован на 40% клеток рака молоч- ной железы, 50% клеток рака глотки, 80% клеток рака кожи. PDPN содержит 150 аминокислот. По- лагают, что связывание PDPN лектином MASL мо- жет подавлять пролиферацию трансформированных клеток. Кроме того, под действием MASL описана индукция каспаз, вызывающая гибель клеток мела- номы. Использование данного лектина на 99% по- давляло миграцию клеток гепатомы [14]. Гиалуроновая кислота (ГК) относится к глю- козамингликанам, которые обладают различны- ми физиологическими функциями: участвуют в ре- гуляции эмбриогенеза, морфогенезе, миграции, пролиферации клеток; определяет резистентность к терапии [15]. Функции ГК регулируют рецепторы CD44, LYVE-1 (lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor), HARE (hyaluronan receptor for endoсytosis), ламелин и RHAMM (hyaluronan mediated motility receptor). ГК входит в состав полисахарида клеточ- ного матрикса и клеточных мембран, дисахарида глюкуроновой кислоты и N-ацетилглюкозамина. ГК играет определенную роль в канцерогенезе и ин- дукции ангиогенеза. Многие функции ГК связаны с HARE, который известен как трансмембранный рецептор стабилин-2, протеин, содержащий С-тип лектина и ГК. Этот рецептор в норме определяет процесс обмена гиалуроната в глюкозаминглика- нах (GAGs) и деградацию ГК в лизосомах. Нейрон-глиальный антиген протеогликан – NG2, хондроитинсульфат (CSPG4) клеточной по- верхности активируют сигнальный путь RTK через MAPK. Активация этого сигнального пути CSPC4/ NG2 регулирует большое число клеточных функ- ций, включая туморогенность, реорганизацию ци- тоскелета, адгезию, миграцию, рост, выживаемость, химиорезистентность. Интегрин α4β1 (фибронек- тин) активируется в присутствии CSPG4/NG2, вы- деленного из ОК. Опухолеассоциированные пери- циты стимулируют миграцию эндотелиальных кле- ток [16]. Экспрессия на поверхности клеток CSPG4/ NG2 сопровождается коротким периодом клиниче- ской ремиссии, опосредует резистентность к химио- и лучевой терапии, является мишенью для иммуно- терапии. Так, иммунотерапия антителами к NG2/ CSPG4 92,27/mAb9227 увеличивала среднюю про- должительность жизни (СПЖ) животных с опухо- лями [17]. Ламелинподобный HARE — трансмембранный протеин, гомологичный С-типу лектинов. Полага- ют, что ГК на ЭСК является центральной молекулой в процессе эмбрио- и морфогенеза [15]. Экспрессия углеводных структур на мембранах ОК может ока- зывать существенное и разнонаправленное влия- ние на противоопухолевые реакции, так как в одних случаях они могут быть мишенью для распознава- ния ОК и индуцировать специфический иммуно- логический противоопухолевый ответ, а в других — вызывать иммунологическую толерантность [18]. Экспериментальная глиома крыс С6 соответ- ствует наиболее злокачественной опухоли мозга — глиобластоме, содержит P-гликопротеин и рецеп- тор стволовых клеток CD133 — проминин. CD133+ клетки глиомы С6 устойчивы к апоптозу, при куль- тивировании образовывают нейросферы [19, 20]. ÎÍÊÎËÎÃÈß • Ò. 17 • ¹ 1 • 2015 ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÛ Å ÈÑ Ñ ËÅÄÎ ÂÀ ÍÈß 6 В этой связи важно было изучить и сопоставить ад- гезивные и лектинсвязывающие особенности кле- ток глиомы С6 и их туморогенные свойства. Целью нашего исследования было изучение ад- гезивных свойств крысиной глиомы С6 к различ- ным лектинам и оценка их туморогенной активно- сти при внутримозговом введении животным. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Опыты проведены на нелинейных крысах (мас- сой 80 г) разведения вивария научно-исследователь- ского Института нейрохирургии им. А.П. Ромодано- ва НАМН Украины. Условия содержания животных и проведения экспериментов соответствовали Меж- дународным правилам работы с лабораторными жи- вотными [36]. Клетки крысиной глиомы С6 были любезно предоставлены сотрудниками Националь- ного банка клеточных линий из тканей животных и человека Института экспериментальной патоло- гии, онкологии и радиобиологии им. Р.Е. Кавецко- го НАН Украины. Клетки глиомы С6 культивирова- ли в среде RPMI-1640 с добавлением 150 мкг гента- мицина и 10% эмбриональной телячьей сыворотки в пластиковых флаконах в атмосфере 5% СО 2 . Пас- сировали культуру С6 1 раз в 3 дня. Через 24 ч куль- тивирования клетки глиомы С6 образовывали сфе- роиды. Наблюдения вели в течение 20 сут культи- вирования. Изучали способность клеток С6 к адгезии на пла- стиковых поверхностях (планшетах и чашках Пе- три) с сорбированными лектинами. В пластиковые планшеты вносили лектины в исходной концентра- ции 1 мг/мл в забуференном растворе хлорида на- трия (ЗФР): от 100 мкг в первой лунке до 5 мкг в по- следней. Планшеты помещали в холодильник (4 °С) на 24 ч. Затем содержимое лунок удаляли, дважды отмывали их ЗФР. Планшеты высушивали, далее вносили в каждую лунку 2•105 клеток глиомы С6 в среде Игла и культивировали их, в зависимости от задачи эксперимента, 1; 3 и 24 ч при 37 °С в СО 2 - инкубаторе. После культивирования клетки встря- хивали на шекере 10 мин, надосадок с неприлипши- ми клетками удаляли. После двукратного отмыва- ния ЗФР монослой высушивали, фиксировали 96° этанолом 10 мин и окрашивали азур-эозином по Ро- мановскому. После высушивания в каждую лунку добавляли растворитель: 40 мМ HCl в изопропило- вом спирте на 10 мин. Адгезивиную активность ОК оценивали по оп- тической плотности, которую измеряли на спектро- фотометре согласно рекомендациям [21] при дли- не волны 620 нм и референсной волне 492 нм. Рас- считывали коэффициент адгезии (КА) для каждого лектина, который представляет собой соотношение величины экстинкции в лунке с адгезированными клетками с сорбированным лектином и величины экстинкции адгезии клеток в лунке без лектина: К = Е (ад + лек) / Е (адгезия). Аналогично в стерильных условиях наслаивали лектины на чашки Петри (d = 3 cм) в дозе 100 мкг/мл (200 мкг на чашку). Лектины сорбировали в холо- дильнике 18 ч. Чашки дважды отмывали в ЗФР и вы- сушивали в стерильных условиях. Были использо- ваны лектины научно-производственного объеди- нения «Лектинотест» (Львов, Украина). Углеводные последовательности на клетках глиомы С6 изучали с помощью лектинов, связывающих соответствую- щие детерминанты (табл. 1). Таблица 1 Специфичность и сокращенные наименования лектинов, представленные в соответствие с Международной номенклатурой [22] Углеводные детерминанты Связывающие их лектины GlcNAcβ1–2ManlR Лектин фасоли обычной — Phaseolus vulgaris agglutinin (PHA) α-манноза-R Конканавалин А — Concanavalin А (СonA) 6-деокси-маннопиранозид Лектин подснежника — Galantus nivalis agglutinin (GNA) Galβ1–3GalNAc Лектин арахиса — Peanut agglutinin (PNA) Galβ1–3GalNAc Лектин омелы белой — Mistletoe lectin (Mil) NeuAcα2–6 Gal Лектин бузины черной — Sambicus nigra agglutinin (SNA) Fucα1–2Galβ1–3GalNAc Лектин бобовника — Laburnum anagyroides agglutinin (LABA) Fucα11–4 Fucα1–3-R Лектин икры окуня — Perca fluviatilis lectin (PFL) NeuAc–NAcGlc-R Лектин из зародышей пшеницы – Wheat germ agglutinin (WGA) GalNAcα1–3GalR Лектин сои — Soybean lectin (SBA) αGalNAc–αGlcNAc-R Лектин улитки виноградной — Helix pomatia lectin (HPL) На стерильные чашки с лектинами и без лек- тинов (контроль) наносили клетки глиомы С6 (8•106 на чашку), культивировали их в СО 2 - инкубаторе 24 ч. После этого неадгезироанные клет- ки удаляли, а фракцию адгезированных клеток сни- мали стерильным резиновым шпателем и холодным ЗФР. Клетки отмывали и ресуспендировали в среде ДМЕМ, после этого в концентрации 5•105 вводи- ли крысам в левую теменную долю в объеме 0,1 мл под эфирным наркозом. Туморогенность адгезив- ных фракций и исходной культуры С6 оценивали по СПЖ крыс с перевивными глиомами. В каждой экспериментальной группе было по 7 животных. Статистическую обработку результатов прово- дили при помощи стандартного компьютерного па- кета программ «Анализ данных» Microsoft Excel для Windows 1995, v. 7.0а, 1996. Достоверность отличий оценивали по критерию Стьюдента. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Для определения экспрессии различных угле- водных эпитопов на клетках глиомы С6 изучены особенности адгезии ОК С6 на пластиковых по- верхностях с сорбированными лектинами [23]. Проанализировано влияние 11 лектинов. КА >1 от- ражал усиление адгезии на пластиковой поверх- ности с сорбированным лектином по отношению к контрольным значениям (процент адгезирован- ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÛÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß 7ÎÍÊÎËÎÃÈß • Ò. 17 • ¹ 1 • 2015 7 ных клеток на пластике без лектина). Установле- но, что в зависимости от дозы лектинов и времени культивирования клеток С6 изменялась направлен- ность КА (табл. 2). При изучении интенсивности адгезии на пла- стике с сорбированным PHA отмечено, что по- сле 1 ч культивирования происходит увеличение КА при использовании доз PHА 50; 25 и 10 мкг на лунку. После 3-часового культивирования так- же отмечали увеличение количества прилипших клеток: КА >1 установлен при исходной дозе PHA 100; 50; 25; 10 мкг. После культивирования в те- чение 24 ч отмечено уменьшение количества ад- гезированных клеток (КА<1), особенно в лунках с 50–10 мкг лектина. Аналогичные изменения КА отмечали при культивировании ОК в планшетах с сорбированным ConA. Оба лектина (в дозе 50– 10 мкг) при культивировании ОК в течение 1 и 3 ч усиливали адгезию, примерно на 30–50%. Лек- тины PHA и ConA связывают сложные олигоса- харидные структуры с терминальными молеку- лами Gal1–4GlcNAcβ1–2ManlR, соединенные с α (1–6) маннозой. Другой эпитоп для связы- вания PHA — GlcNAcβ12 Man, тогда как ConА связывает ди- и трисахариды D-маннозы, с α 1–2-связями. Лектин подснежника (GNA) также являет- ся маннозоспецифичным, однако он связывается с α-метил-D-маннопиранозидом и дисахаридом ту- ранозой, наиболее специфически — с углеводными остатками с терминальными Man α (1–3). Исследо- вания показали, что специфичность к маннозе GNA отличается от таковой ConA: GNA связывается с по- лисахаридами, имеющими разветвленную α (1–3), α (1–6) или (1–2) цепи, содержащие маннозу [24]. При культивировании в течение 1 ч GNA так же, как и СonA, в дозе 50–10 мкг/мл усиливал адгезию клеток С6, однако достоверное увеличение КА от- мечено лишь в пробах с 10 мкг лектина. При куль- тивировании на протяжении 3 ч GNA в дозе 100– 25 мкг усиливал адгезию, тогда как дозы 10–5 мкг подавляли ее. После 24 ч культивирования отме- чена слабая тенденция к увеличению адгезии ОК к пластику с сорбированным GNA в дозе 100–50 мкг и практически не был изменен показатель адгезии при дозе лектина 25–5 мкг (см. табл. 2). Таким образом, анализ адгезии клеток С6 на пла- стиковых поверхностях с маннозосвязывающими Таблица 2 КА к пластику с сорбированными лектинами клеток глиомы крыс С6 Сроки культивирования с лектином, ч (n = 5) КА в зависимости от дозы лектина, мкг 100 50 25 10 5 PHA, 1 0,9 ± 0,01, * 1,26 ± 0,11* 1,36 ± 0,15,* 1,5 ± 0,31 0,9 ± 0,11 3 1,12 ± 0,11 1,47 ± 0,21 1,41 ± 0,25 1,34 ± 0,23 0,95 ± 0,15 24 0,89 ± 0,11 0,69 ± 0,3 0,71 ± 0,18 0,58 ± 0,31 1,0 ± 0,01 ConA, 1 1,0 ± 0,11* 1,63 ± 0,18, * 1,42 ± 0,09,* 1,51 ± 0,11, * 0,88 ± 0,12** 3 1,19 ± 0,21 1,48 ± 0,03, * 1,59 ± 0,31 1,26 ± 0,12 0,65 ± 0,09 24 0,89 ± 0,11 0,69 ± 0,3 0,71 ± 0,18 0,58 ± 0,31 1,0 ± 0,01 GNA, 1 0,82 ± 0,12, * 1,19 ± 0,07 1,22 ± 0,29 1,5 ± 0,34, * 0,9 ± 0,11 3 1,13 ± 0,09 1,52 ± 0,31 1,21 ± 0,25 0,65 ± 0,07, * 0,58 ± 0,10, * 24 1,27 ± 0,19 1,26 ± 0,18 0,99 ± 0,05 1,12 ± 0,05 1,0 ± 0,05 HPL, 1 0,95 ± 0,07 0,77 ± 0,12 0,92±0,05 1,08 ± 0,12 1,02 ± 0,08 3 0,76 ± 0,11 0,86 ± 0,07 0,59 ± 0,11,* 0,80 ± 0,03 0,92 ± 0,05 24 1,08 ± 0,10 1,08 ± 0,02 1,07 ± 0,08 0,96 ± 0,01 0,95 ± 0,04 SBA, 1 0,51 ± 0,21 0,51 ± 0,17 0,41 ± 0,24** 0,35 ± 0,14, * 0,88 ± 0,09 3 0,43 ± 0,09 0,58 ± 0,11 0,59 ± 0,09 0,61 ± 0,17 0,58 ± 0,02** 24 0,87 ± 0,12,* 0,94 ± 0,08 1,18 ± 0,05 1,23 ± 0,05, * 1,57 ± 0,12** PNA, 1 0,65 ± 0,11 0,54 ± 0,09 0,61 ± 0,19 0,33 ± 0,12, * 0,88 ± 0,18 3 0,43 ± 0,09, * 0,41 ± 0,11, * 1,51 ± 0,06** 1,51 ± 0,14, * 0,95 ± 0,07** 24 1,01 ± 0,08, * 1,12 ± 0,09** 1,22 ± 0,07,* 1,24 ± 0,11, * 1,21 ± 0,01** Mil, 1 0,8 ± 0,04* 1,12 ± 0,09 1,2 ± 0,03 1,23 ± 0,07* 0,74 ± 0,11 3 1,17 ± 0,14 0,65 ± 0,07 0,68 ± 0,15 0,64 ± 0,03 0,63 ± 0,09 24 0,99 ± 0,11 0,91 ± 0,12 0,89 ± 0,12 0,91 ± 0,11 0,94 ± 0,09 PFL, 1 1,35 ± 0,10 1,49 ± 0,21** 1,40 ± 0,29 1,29 ± 0,15 1,28 ± 0,18 3 1,07 ± 0,14* 1,39 ± 0,09* 1,51 ± 0,06,* 1,51 ± 0,14,* 0,95 ± 0,07 24 1,23 ± 0,08 1,09 ± 0,03 1,09 ± 0,05 0,91 ± 0,04 0,96 ± 0,01 LABA, 1 0,45 ± 0,09, * 0,55 ± 0,08* 0,50 ± 0,15 0,59 ± 0,11 0,91 ± 0,07* 3 0,58 ± 0,05 0,51 ± 0,03 0,49 ± 0,08 0,57 ± 0,01** 0,38 ± 0,03, * 24 1,03 ± 0,07 0,84 ± 0,3 0,84 ± 0,10 0,94 ± 0,14 1,2 ± 0,12 WGA, 1 0,46 ± 0,17, * 0,44±0,18, * 0,44 ± 0,12,* 0,47 ± 0,15* 0,82 ± 0,08* 3 0,62 ± 0,09 0,67 ± 0,11 0,71 ± 0,07 0,63 ± 0,03 0,56 ± 0,15** 24 1,09 ± 0,10, * 1,05 ± 0,03 0,98 ± 0,05 1,44 ± 0,11,* 1,21 ± 0,14 SNA, 1 0,47 ± 0,17 0,55 ± 0,12 0,44 ± 0,15 0,76 ± 0,12 0,75 ± 0,10 3 0,55 ± 0,11 0,91 ± 0,07 0,79 ± 0,09 0,42 ± 0,03 0,51 ± 0,05 24 1,25 ± 0,10 1,49 ± 0,12, * 1,18 ± 0,08 1,25 ± 0,11 1,07 ± 0,04, * Достоверность отличий между значениями КА при инкубации с различными дозами лектинов р < 0,001. Достоверность отличий между значениями КА при различных сроках инкубации р < 0,01. ÎÍÊÎËÎÃÈß • Ò. 17 • ¹ 1 • 2015 ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÛ Å ÈÑ Ñ ËÅÄÎ ÂÀ ÍÈß 8 лектинами (PHA, ConА, GNA) продемонстрировал определенные отличия их эффекта в зависимости от дозы лектина и времени культивирования кле- ток, что, возможно, связано с особенностями рас- пределения маннозных рецепторов на клетках гли- омы С6 и с особенностями связывания таких рецеп- торов исследованными лектинами. Лектин виноградной улитки (HPL) связыва- ет терминальную молекулу α-метил-Nа-цетил-D- галактозамина (GalNAcα), в том числе в пентаса- хариде, определяющем групповую принадлежность крови человека (АII), взаимодействует с антиге- ном Форсмана (GalNAcα1–3GalNAc). Молекулу GalNAcα и олигосахаридные остатки с терминаль- ными молекулами GalNAcα связывает также лектин сои (SBA) [24]. HPL практически не влиял на адге- зию клеток глиомы С6 при инкубации в течение 1 ч; незначительно снижал КА при 3-часовой инкуба- ции, что в определенной степени может отражать связывание молекул GalNAcα этим лектином. Лек- тин SBA на 40–50% подавлял адгезивную активность ОК С6 в исходной дозе 100–10 мкг при культивиро- вании на протяжении 1 и 3 ч. Результаты проведен- ных раннее исследований показали, что подавле- ние адгезии ОК при культивировании на пластике с сорбированным лектином связано с его прямым цитотоксическим действием [18, 25]; установлено, что к такому действию SBA наиболее чувствитель- ны клетки злокачественных опухолей человека: ана- пластических астроцитом, глио бластом, медулло- бластом [18]. После культивирования в течение 24 ч HPL и SBA практически не влияли на адгезивную активность клеток С6. Однако после культивирова- ния клеток С6 в пластиковых чашках с SBA при пе- ресеве адгезивной фракции отмечено более интен- сивное образование сфероидов ОК, чем в контроле. Это косвенно может отражать способность лекти- на SBA обогащать адгезивную фракцию стволовы- ми CD133 клетками. Лектин арахиса (PNA) взаимодействует с Т-антигеном и родственными структурами, име- ющими терминальные молекулы D-галактозы, с в я з а н н ы е c N - а ц е т и л г а л а к т о з а м и н о м или N-ацетилглюкозамином, а также асиало-GM1 тетрасахаридом [24]. Из омелы выделено три лек- тина: М1 — D-галактозоспецифичный, М2 связы- вает дисахарид D-галактоза-N-ацетилгалактозамин (D-Gal-NGalNAc) и М3 — NGalNAc. Установ- лено, что последовательности типа Galβ1–3Gal и Galβ1–1Gal имеют большую аффинность к лек- тину Mil, чем D-галактоза (D-Gal) [24]. Галактозо- связывающие лектины PNA и Mil воздействова- ли на клетки С6 по-разному. PNA, связывающий D-галактозу, при культивировании на протяжении 1 ч в дозах 100–5 мкг и 3 ч в дозах 100–50 мкг по- давлял адгезию. В проведенных нами ранее иссле- дованиях установлено, что PNA оказывает прямое цитотоксическое действие на клетки глиомы [18]. При исходной дозе 25–10 мкг после культивирова- ния в течение 3 ч отмечено достоверное увеличение КА (до 1,51). При культивировании 24 ч зафикси- ровано усиление адгезии клеток С6 при исходных дозах PNA 25–5 мкг. Таким образом, краткосроч- ное культивирование ОК на пластиковых поверх- ностях с лектином PNA подавляло их адгезию, тог- да как культивирование в течение 24 ч усиливало ее, что может быть связано с чувствительностью клеток С6 к определенной дозе лектина и особенностями структуры углеводсодержащих рецепторов. Влияние лектина омелы (Mil) несколько от- личалось от описанного. После 1 ч культивирова- ния на планшете с сорбированным Mil отмечали подавление адгезии при исходных дозах лектина 100 и 5 мкг на лунку (КА составил 0,80 ± 0,04 и 0,74 ± 0,11 соответственно). 3-часовое культивирова- ние сопровождалось достоверным снижением КА (до 0,63–0,68) при исходных дозах 50–5 мкг. По- сле 24 ч культивирования Mil практически не вли- ял на показатель адгезии клеток С6. Лектины бобовника (LABA) и икры окуня (PFL) являются фукозоспецифичными. LABA луч- ше реагирует с молекулами трисахарида Fuc1– 2Galβ1–4Glc, с дифукозиллактозой (Fuc1–2Galβ1– 4[Fucα1–3]Glc и трисахаридом Lea. Лектин PFL вза- имодействует с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и антигеном Льюиса Lcb и не взаимодейству- ет с Lea, Lex Lec.; агглютинирует эритроциты чело- века группы крови Н (0I) [24]. Лектин LABA пода- влял адгезию клеток C6 при всех использованных дозах после культивирования 1 и 3 ч. В то же вре- мя PFL в течение 1 и 3 ч культивирования увеличи- вал адгезию клеток С6. Через 24 ч культивирования действие обоих лектинов на адгезию клеток глиомы С6 к пластику было примерно одинаковым (значе- ния КА приближалось к 1) и незначительно колеба- лось в зависимости от дозы лектинов. Возможно, это обусловлено особенностями связывания тетрасаха- ридных остатков фукозоспецифичными лектинами. Известно, что PFL взаимодействует с тетрасахаридом группового вещества Н, но не А, тогда как LABA — с обоими группоспецифичными антигенами [24]. Связывающий нейраминовую кислоту лектин бузины черной (SNA) и лектин зародышей пшени- цы (WGA), связывающий дисахарид нейраминовая кислота-N-ацетилглюкозамин (NeuAc-NAcGlc-R), достоверно снижали адгезивную активность кле- ток С6 при всех используемых дозах при инкуба- ции 1 и 3 ч. И, напротив, усиливали адгезию по- сле 24 ч культивирования: WGA в концентрации 10 и 5 мкг, SNA во всех изученных концентрациях. Эти результаты косвенно могут отражать преобла- дание на клетках глиомы С6 рецепторов, содержа- щих нейраминовую кислоту. Известно, что на ОК С6 экспрессируется рецептор CD133 — проминин, со- держащий терминальные молекулы нейраминовой кислоты, связанной N-олигосахаридными цепями. Через 24 ч культивирования глиомы С6 в пласти- ковых чашках в стерильных стандартных условиях ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÛÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß 9ÎÍÊÎËÎÃÈß • Ò. 17 • ¹ 1 • 2015 9 выявляют нейросферы, образованные стволовыми клетками глиомы. Лектин SNA можно использовать для оценки сте- пени сиалирования глиомы С6. Лектин WGA взаи- модействует с множеством гликопротеинов: РЭА, овомукоидом, гликопротеинами мембран эритро- цитов; установлена его цитотоксичность по отно- шению к клеткам гепатомы человека, хориокарци- номы и остеосаркомы крыс [24]. Для оценки роли углеводных рецепторов в ту- морогенных свойствах клеток глиомы С6 проведе- но предварительное культивирование ОК на пла- стиковых чашках с сорбированным определенным лектином в течение 24 ч. Затем клетки адгезивной фракции в объеме 0,1 мл вводили в левую теменную долю головного мозга крыс. Опухолеродные свой- ства и злокачественность клеток адгезивных фрак- ций, выявляемых по связыванию с различными лек- тинами, оценивали по показателю СПЖ (табл. 3). СПЖ крыс с глиомой С6 составила 29,3 ± 1,5 сут; при введении ОК, адгезированных к необработан- ному пластику (контроль 2), СПЖ достоверно не из- менилась (p > 0,1), хотя и отмечена тенденция к ее уменьшению. Адгезия к маннозосвязывающему лектину ConA не изменяла достоверно показатель СПЖ по сравнению с контролями 1 и 2. При вве- дении фракций ОК, сорбированных на PHA, SBA и PNA, СПЖ была достоверно меньше, чем в кон- троле 1. Наименьшая СПЖ крыс с глиомой С6 от- мечена при введении фракции ОК, адгезирован- ных на лектине LABA, связывающем α-фукозу (p < 0,05 по сравнению с контролями 1 и 2). Таблица 3 СПЖ крыс после введения фракций клеток глиомы С6, адгезированных на пластике с сорбированными лектинами Введенные клетки СПЖ, сут ОК глиомы С6 (контроль 1) 29,3 ± 1,5 Клетки С6, адгезированные к пластику (контроль 2) 27,5 ± 2,9 Клетки С6, адгезированные к пластику с ConA 27,5 ± 2,5 Клетки С6, адгезированные к пластику с PHA 24,5 ± 1,9 Клетки С6, адгезированные к пластику с SBA 24,8 ± 2,5* Клетки С6, адгезированные к пластику с LABA 22,8 ± 1,5, * Клетки, адгезированные к пластику с PNA 23,5 ± 2,1* Клетки, адгезированные к пластику с Mil 49,5 ± 4,5, * Отличия достоверны по сравнению с группой контроля 1. *Отличия достоверны по сравнению с группой контроля 2. Галактозоспецифичные лектины PNA и Mil по- разному влияли на СПЖ. В то время как при вве- дении крысам PNA-фракции клеток С6 СПЖ до- стоверно сокращалась, при введении ОК, сорби- рованных на Mil, СПЖ составила 49,5 ± 4,5 сут, что достоверно больше (p < 0,01), чем в остальных груп- пах. По-видимому, PNA и Mil обладают различным механизмом воздействия на ОК. Так, лектин PNA связывает преимущественно мембранные терми- нальные углеводные молекулы, тогда как Mil содер- жит гликопротеины, вискотоксины, энзимы, спо- собные не только связывать мембранные гликоко- ньюгаты, но и ингибировать рибосомальный синтез белка, индуцировать апоптоз, способствовать вы- свобождению фактора некроза опухоли, IL-1, -2, -6 [1, 12]. Инкубирование ОК с лектином омелы может индуцировать апоптоз и подавлять жизнеспособ- ность клеток глиомы. Эти предположения, в опре- деленной степени, подтверждаются полученными нами результатами. Как мы уже упоминали, углеводные эпитопы ис- пользуют в качестве мишеней для проведения имму- нотерапии. В частности, на клетках глиом человека обнаружен сиалиллактотетрацерамид [26]. В клетках нормального мозга млекопитающих выявлен ней- ростатин — ингибитор О-ацетилирования, который имеет общие эпитопы с EGFR и антигенами групп крови [27]. Нейростатин — О-ацетилированная форма ганглиозидов GD1b и GT1b — обладает ци- тостатическим действием на нормальные астробла- сты и цитолитическим эффектом по отношению к клеткам глиомы С6 и глиом человека III и IV степе- ни анаплазии. Нейростатин не подавляет нейроны или фибробласты в дозе ≥ 4 мМ/мл. Клетки, акти- вированные нейростатином, опосредованно оказы- вали противоопухолевое действие — подавляли нео- васкуляризацию опухоли, активировали микроглию и естественные киллеры. Был синтезирован тетра- сахарид αDGalNAc (1–3)-βDGal1–4-α-Fuc(1–3)- β-DGlcMe(TS4) — аналог нейростатина, специфи- ческий ингибитор нейробластов, который обладал цитолитическим действием по отношению к клет- кам глиомы С6 [28]. На основании накопленных многочислен- ных данных об экспрессии углеводных рецепто- ров на ОК разрабатывают различные стратегии воздействия на мишени, в качестве которых ис- пользуют поверхностные мембранные гликопро- теины и гликолипиды [29]. В частности, наиболее выраженным действием при развитии внутримоз- говой опухоли обладают рецепторные структуры, содерждащие D-галактозу, N-ацетилглюкозамин, N-ацетилгалактозамин и α-фукозу и нейрамино- вую кислоту. При изучении влияния лектинов in vivo и in vitro установлено, что связывание указанных ре- цепторов обусловливает только частичный цито- токсический эффект, не превышающий 50% [3, 17]. Этот факт важен для разработки методов иммуно- терапии глиом, так как связывание только опреде- ленного углеводного эпитопа или даже прямое ци- тотоксическое действие на ОК и уничтожение 50% клеток с данным рецептором приводит к формиро- ванию клона, устойчивого к действию определен- ного лектина [30]. В настоящее время на основании изучения угле- водных эпитопов на ОК разрабатываются новые под- ходы к иммунотерапии глиом [31, 32, 35]. Так, про- ходит III фазу изучения для клинического исполь- зования вакцина, содержащая NeGc-ганглиозид (антиидиотипические антитела Vaxira и NeGcGM3/ VSSP ганглиозид в протеосоме). Эта вакцина в со- четании с рекотумомабом (recotumomab) оказыва- ла определенный клинический эффект при мела- номе [8, 33, 34]. ÎÍÊÎËÎÃÈß • Ò. 17 • ¹ 1 • 2015 ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÛ Å ÈÑ Ñ ËÅÄÎ ÂÀ ÍÈß 10 ВЫВОДЫ 1. Проявление адгезивных и туморогенных свойств глиомы С6 связано с особенностями струк- туры мембранных олигосахаридных цепей. 2. Лектины, связывающие нейраминовую кисло- ту (SNA, WGA), угнетают адгезию к пластику кле- ток глиомы С6 при культивировании в течение 1–3 ч во всех изученных дозах. 3. Введение адгезивных фракций PHA+, SBA+, LABA+, PNA+ клеток С6 экспериментальным жи- вотным приводило к достоверному снижению СПЖ по сравнению с контрольной группой, что косвен- но может отражать обогащение этих фракций (осо- бенно клеток, сорбированных на LABA) стволовы- ми ОК. 4. Фракции клеток глиомы С6, сорбированные на лектине омелы Mil, обладали наименьшей тумо- рогенностью: СПЖ крыс этой группы была досто- верно большей по сравнению с остальными груп- пами животных. 5. Изучение лектинсвязывающих особенностей клеток глиомы С6 является адекватной моделью для разработки подходов к иммунотерапии глиом головного мозга. CПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 1. Hakomori S. Tumor malignancy defined by aberrant glycosylation and sphingoglycolipid metabolism. Cancer Res 1996; 56 (23): 5309–18. 2. Dawson G, Moskal JR, Dawson SA. Transfection of 2,6 and 2,3 transferase genes and GlcNac-transferase genes into human glioma cell line U-373 MG affects glycoconjugate expression and enchances cell death. J Neurochem 2004; 89: 1436–44. 3. Гнедкова ИА. Использование лектинов для модифи- кации клеток глиом головного мозга к цитотоксическому действию лимфоцитов крови. XI З’їзд онкологів України: матеріали з’їзду. Судак, АР Крим, 29 травня – 2 червня 2006; 15. 4. Гнедкова ИА, Гнедкова МА, Розуменко ВД и др. Лекти- ны в диагностике, изучении патогенеза и лечении глиом го- ловного мозга различной степени анаплазии. Матеріали IV З’їзду нейрохірургів України. 27–30 травня. Дніпропетровськ, 2008; 206–207. 5. Гнедкова ИА, Лисяный НИ, Ромоданов СА и др. Распре- деление иммунорегуляторных рецепторов к лектинам на мем- бранах клеток глиом и аутологичных периферических моно- нуклеарах у нейроонкологических больных в зависимости от степени анаплазии опухоли мозга. Бюлл эксперим биол мед 1996; (10): 441–5. 6. Лисяный НИ, Гнедкова ИА, Бычкова СА и др. Особен- ности иммунологических нарушений при глиомах голов- ного мозга в период ремиссии. Укр нейрохірург журн 2004; (2): 55–61. 7. Lou YW, Wang P-Y, Yeh SCh, et al. Stage-specific embry- onic antigen-4 as a potential therapeutic target in glioblastoma multiforme and other cancers Proc Natl Acad Sci USA 2014; 111 (7): 2482–7. 8. Krengel U, Bousquet PA. Molecular recognition of ganglio- sides and their potential for cancere immunotherapies. Front Im- munol 2014; 5: 325. PMCID: PMC 41048338. 9. Лисяный НИ, Гнедкова ИА, Розуменко ВД и др. Получе- ние популяции опухолевых клеток, обогащенной стволовы- ми клетками CD133 и CD15 с сорбированными лектинами. «Вплив науково-технічного прогресу на розвиток медичної науки та практики: реалії сьогодення». Збірн мат міжнар наук- практ конф, 8–9 серпня 2014, Київ, 2014: 10–15. 10. Dodla MC, Young A, Venable AI, et al. Differening lec- tin binding profiles among human embryonic stem cells and de- rivates aid in the isolation of neural progenytor cells. PLoS One 2011; 6 (8): e23266. 11. He J, Liu Y, Zhu TS, et al. Glycoproteomic analysis of glioblastoma stem cell differentiation. J Proteome Res 2011; 10 (1): 330–8. 12. Tucker-Burden C, Chappa P, Krishnamoonthy M, et al. Lectins identify glycan biomarkers on glioblastoma-derived can- cer stem cells. Stem Cells Dev 2012; 21 (13): 2374–86. 13. Venable A, Metalipova M, Lyons I, et al. Lectin binding profiles of SSEA4 enriched pluripotent human embryonic stem cell surfaces. Cell Dev Biol 2005 (Published online). 14. Ohoa-Alvarez JA, Krishnan H, Shen Y, et al. Plant lec- tin can target receptors contaning sialic acid exemplified by pa- doplanin to inhibit transformed cell growth and migration. PLoS One 2012; 7 (7): e41845. 15. Solis MA, Chen Y-H, Wang TY, et al. Hyaluranat regulates cell behavior: a potentional niche matrix for stem cells. Biochem Res Int 2012; e346972. 16. Price MA, Wanshuu LEC, Yang J, et al. CSPG4, a poten- tial therapeutic target facilitates malignant progression of melano- ma. Pigment Cell Melanoma Res 2011; 24 (6): 1148–57. 17. Rygh CB, Wang J, Thuen M, et al. Dynamic contrast en- chanced MRI. Detects early response to adoptive NK cellular immunotherapy targeting the NG2 proteoglycan in a rat model of glioblatoma. PLoS One 2014; 9 (9): e108414. 18. Лисяный НИ, Гнедкова ИА, Гнедкова МА и др. Влияние лектинов на цитотоксическую активность лимфоцитов, по отношению к клеткам глиом различной степени анаплазии. Імунологія алергологія 2008; (1): 83–8. 19. Schraen-Maschke S, Zanetta JP. Role of oligomannosidic N-glycans in the proliferation, adhesion and signaling of C6 glio- blastoma cells. Biochimie 2003; 85 (1–2): 219–29. 20. Angelastro JM, Lame MW. Overexpression of CD133 pro- motes drug resistance in C6 glioma cells. Mol Cancer Res 2010; 8 (8): 1105–15. 21. Бутаков АА, Оганезов ВГ, Пинегин БВ и др. Спектрофотометрическое определение адгезивной с п о с о б н о с т и п о л и м о р ф о я д е р н ы х л е й к о ц и т о в периферической крови. Иммунология 1991; (5): 71–3. 22. Lectins biology, biochemistry, clinical biochemistry (eds. TC Bog-Hansen, GA Spangler) Proc. V Lectin Meeting. Ber- lin, 1983; 3: 87–327. 23. Dai L, Liu Y, He J, et al. Differential profiling studies of N-linked glycoproteins in glioblastoma cancer stem cells upon treatment with γ-secretase inhibitor. Proteomics 2011; 11 (20): 4021–8. 24. Антонюк ВО. Лектини та їх сировинні джерела. Львів: 2005. 554 с 25. Лисяный НИ, Гнедкова ИА, Гнедкова МА. Иммуно- логические особенности злокачественных глиом головного мозга. Нейроиммунология 2012; 10 (3–4): 4–10. 26. Heimburg-Molinaro J, Lum M, Vijay G, et al. Cancer vac- cines and carbohydrate epitopes. Vaccine 2011; 89 (48): 8802–26. 27. Murrey HE, Hsieh-Wilson LC. The chemical neurobiology of carbohydrates. Chem Rev 2008; 105 (5): 1708–31. 28. Barone A, Saljo K, Benktander J, et al. Sialyl-lactotetra a novel cell surface marker of undifferentiated human pluripotent stem cells. J Biol Chem 2014; 289 (27): 18846–59. 29. Nieto-Sampedro M, Valle-Argos B, Gomes-Nicola D, et al. Inhibitors of glioma growth that reveal the tumor to the immune system. Clin Med Inoghts Oncol 2011; (5): 265–314. 30. Jackson Ch, Rezevik JR, Brem H, Lim H. Vaccine strate- gies for glioblastoma: progress and future directions. Immunothe- rapy 2013; 5 (2): 155–67. ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÛÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß 11ÎÍÊÎËÎÃÈß • Ò. 17 • ¹ 1 • 2015 11 31. Nduom ERT, Hadjipanavis CG, Meir EG. Glioblastoma cancer stem like cells — implications for pathogenesis and treat- ment. Cancer J 2012; 18 (1): 100–106. 32. Ji J, Black KL, Yu J. Glioma stem cell research for the de- velopment of immunotherapy. Neurosurg Clin N Am 2011; (1): 1–6. 33. Wang JCh, Nakagawa M, Garitaonandia I, et al. Speci- fic lectin biomarkers for isolation of human pluripotent stem cells identified through array — based glycomic analysis. Cell Res 2011; 21 (11): 1551–63. 34. Son MJ, Woolard K, Nam DH, et al. SSEA-1 is an enrich- ment marker for tumor-initiating cells in human glioblastoma. Cell Stem Cell 2009; 4 (5): 440–52. 35. Tateno H, Toyota M, Saito Sh, et al. Glycome diagnosis of human induced pluripotent stem cells using lectin microarray. J Biol Chem 2011; 286 (23): 20346–53. 36. Council Directive 2010/63/EU of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific pur- poses. Official Journal of the European Communities 2010; L276: 33–79. LECTIN-BINDING AND TUMORIGENIC PROPERTIES OF GLIOMA C6 CELLS I.A. Gnedkova, N.I. Lisyany, D.N. Stanetskaya, V.D. Rozumenko, A.Y. Glavatskiy, A.A. Shmeleva, T.A. Malysheva, O.G. Chernenko, M.A. Gnedkova Summary. The aim of this study was to investigate adhe- sive and tumorogenic activity of glioma C6 cells fractions with different adhesive properties. Objects and methods: Adhesive activity glioma C6 cells to 11 lectins was esti- mated by means of spectrophotometry. The cells of ad- hesive fractions were injected intracranially to the rats in dose of 5•105 cells. Tumorogenic activity of the frac- tions was determined by median survival of life of ani- mals. Results: Sorbed on plastic plane tables in defi- nite doses of PHA and ConA lectins reinforced ad- hesion glioma C6 cells to 30–50% by approximation while binding neuraminic acid (SNA and WGA) lec- tins reduced adhesive activity of glioma C6 cells in all used doses upon the incubation for 1 and 3 hours re- ally. Bin ding N-glycosidic chains PHA and SBA lec- tins increased tumoro genic properties of glioma C6 cells and reduced median survi val of rats. It was noted that the injection of adhesived on lectine of LABA, which bind α-fucose, the fraction cells caused least of all medi- an survival of life. Adhesived on mistletoes lectin glioma C6 cells had least of all tumorigenic properties. Conclu- sion: Glioma C6 cells express specific epitops. Keeping D-galactosa, N-acetylgluco samine, N-acetylgalacto- samine, α-fucosa and neuraminic acid receptors have the most tumorogenic effect for growth of the prolifera- tive brain tumor. This should be considered in choosing the me thods of immunotherapy. Кeу Words: glioma C6, carbohydrate containing structures of the cell membrane, lectins, adhesive activity, tumorogenic activity. Адрес для переписки: Гнедкова И.А. 04050, Киев, ул. Платона Майбороды, 32 ГУ «Институт нейрохирургии им. акад. А.П. Ромоданова НАМН Украины» E-mail: irinagned@mail.ru Получено: 26.01.2015

Лектинсвязывающие и туморогенные свойства клеток глиомы С6

Institution

Ähnliche Einträge