Роль гликолиза при холодовой адаптации карася серебряного Сarassius auratus gibelio
Представлены данные, которые характеризуют уровень анаэробного энергообмена у карася серебряного Carassius auratus gibelio в зимний период. Установлено, что зимой изменяется активность ЛДГ, увеличивается содержание лактата, а также соотношение лактат\пируват во всех тканях рыб. Изменения активности...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Datum: | 2007 |
| Hauptverfasser: | , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2007
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138014 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Роль гликолиза при холодовой адаптации карася серебряного Сarassius auratus gibelio / Л.И. Релина, Е.Г. Жегунова, Е.А. Грищенкова // Проблемы криобиологии. — 2007. — Т. 17, № 1. — С. 64-70. — Бібліогр.: 10 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-138014 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Релина, Л.И. Жегунова, Е.Г. Грищенкова, Е.А. 2018-06-17T21:12:13Z 2018-06-17T21:12:13Z 2007 Роль гликолиза при холодовой адаптации карася серебряного Сarassius auratus gibelio / Л.И. Релина, Е.Г. Жегунова, Е.А. Грищенкова // Проблемы криобиологии. — 2007. — Т. 17, № 1. — С. 64-70. — Бібліогр.: 10 назв. — рос. https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138014 57 043:577.124.22 Представлены данные, которые характеризуют уровень анаэробного энергообмена у карася серебряного Carassius auratus gibelio в зимний период. Установлено, что зимой изменяется активность ЛДГ, увеличивается содержание лактата, а также соотношение лактат\пируват во всех тканях рыб. Изменения активности ЛДГ и содержания указанных метаболитов при понижении температуры указывают на переход организма рыб преимущественно на анаэробный тип энергообмена при данных условиях. Представлено дані, які характеризують рівень анаеробного енергообміну у карася срібляного Carassius auratus gibelio в зимовий період. Встановлено, що взимку змінюється активність ЛДГ, зростає вміст лактату, а також співвідношення лактат/піруват в усіх тканинах риб. Зміни активності ЛДГ та вмісту вказаних метаболітів при зниженні температури свідчать про перехід організму риб переважно на анаеробний тип енергообміну за цих умов. The data characterizing the level of anaerobic energetic metabolism in the wild type of goldfish Carassius auratus gibelio during winter period are shown. It was determined that during winter LDH activity changed, lactate content as well as the lactate/pyruvate ratio increased for all fish tissues. Changes in LDH activity and metabolite content during temperature decrease indicate a switch of fish organism to predominantly anaerobic type if energetic metabolism under these conditions. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Теоретическая и экспериментальная криобиология Роль гликолиза при холодовой адаптации карася серебряного Сarassius auratus gibelio Glycolysis role during cold adaptation in Сarassius auratus gibelio Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Роль гликолиза при холодовой адаптации карася серебряного Сarassius auratus gibelio |
| spellingShingle |
Роль гликолиза при холодовой адаптации карася серебряного Сarassius auratus gibelio Релина, Л.И. Жегунова, Е.Г. Грищенкова, Е.А. Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| title_short |
Роль гликолиза при холодовой адаптации карася серебряного Сarassius auratus gibelio |
| title_full |
Роль гликолиза при холодовой адаптации карася серебряного Сarassius auratus gibelio |
| title_fullStr |
Роль гликолиза при холодовой адаптации карася серебряного Сarassius auratus gibelio |
| title_full_unstemmed |
Роль гликолиза при холодовой адаптации карася серебряного Сarassius auratus gibelio |
| title_sort |
роль гликолиза при холодовой адаптации карася серебряного сarassius auratus gibelio |
| author |
Релина, Л.И. Жегунова, Е.Г. Грищенкова, Е.А. |
| author_facet |
Релина, Л.И. Жегунова, Е.Г. Грищенкова, Е.А. |
| topic |
Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| topic_facet |
Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| publishDate |
2007 |
| language |
Russian |
| container_title |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Glycolysis role during cold adaptation in Сarassius auratus gibelio |
| description |
Представлены данные, которые характеризуют уровень анаэробного энергообмена у карася серебряного Carassius auratus gibelio в зимний период. Установлено, что зимой изменяется активность ЛДГ, увеличивается содержание лактата, а также соотношение лактат\пируват во всех тканях рыб. Изменения активности ЛДГ и содержания указанных метаболитов при понижении температуры указывают на переход организма рыб преимущественно на анаэробный тип энергообмена при данных условиях.
Представлено дані, які характеризують рівень анаеробного енергообміну у карася срібляного Carassius auratus gibelio в зимовий період. Встановлено, що взимку змінюється активність ЛДГ, зростає вміст лактату, а також співвідношення лактат/піруват в усіх тканинах риб. Зміни активності ЛДГ та вмісту вказаних метаболітів при зниженні температури свідчать про перехід організму риб переважно на анаеробний тип енергообміну за цих умов.
The data characterizing the level of anaerobic energetic metabolism in the wild type of goldfish Carassius auratus gibelio during winter period are shown. It was determined that during winter LDH activity changed, lactate content as well as the lactate/pyruvate ratio increased for all fish tissues. Changes in LDH activity and metabolite content during temperature decrease indicate a switch of fish organism to predominantly anaerobic type if energetic metabolism under these conditions.
|
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138014 |
| citation_txt |
Роль гликолиза при холодовой адаптации карася серебряного Сarassius auratus gibelio / Л.И. Релина, Е.Г. Жегунова, Е.А. Грищенкова // Проблемы криобиологии. — 2007. — Т. 17, № 1. — С. 64-70. — Бібліогр.: 10 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT relinali rolʹglikolizapriholodovoiadaptaciikarasâserebrânogosarassiusauratusgibelio AT žegunovaeg rolʹglikolizapriholodovoiadaptaciikarasâserebrânogosarassiusauratusgibelio AT griŝenkovaea rolʹglikolizapriholodovoiadaptaciikarasâserebrânogosarassiusauratusgibelio AT relinali glycolysisroleduringcoldadaptationinsarassiusauratusgibelio AT žegunovaeg glycolysisroleduringcoldadaptationinsarassiusauratusgibelio AT griŝenkovaea glycolysisroleduringcoldadaptationinsarassiusauratusgibelio |
| first_indexed |
2025-11-26T15:25:31Z |
| last_indexed |
2025-11-26T15:25:31Z |
| _version_ |
1850626380638715904 |
| fulltext |
64 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 17, 2007, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 17, 2007, №1
УДК 57 043:577.124.22
Л.И. РЕЛИНА*, Е.Г. ЖЕГУНОВА, Е.А. ГРИЩЕНКОВА
Роль гликолиза при холодовой адаптации
карася серебряного Сarassius auratus gibelio
UDC 57 043:577.124.22
L.I. RELINA*, YE.G. ZHEGUNOVA, YE.A. GRISCHENKOVA
Glycolysis Role During Cold Adaptation
in Сarassius auratus gibelio
Представлены данные, которые характеризуют уровень анаэробного энергообмена у карася серебряного Carassius auratus
gibelio в зимний период. Установлено, что зимой изменяется активность ЛДГ, увеличивается содержание лактата, а также
соотношение лактат\пируват во всех тканях рыб. Изменения активности ЛДГ и содержания указанных метаболитов при
понижении температуры указывают на переход организма рыб преимущественно на анаэробный тип энергообмена при данных
условиях.
Ключевые слова: карась серебряный, гликолиз, холодовая адаптация
Представлено дані, які характеризують рівень анаеробного енергообміну у карася срібляного Carassius auratus gibelio в
зимовий період. Встановлено, що взимку змінюється активність ЛДГ, зростає вміст лактату, а також співвідношення лактат/
піруват в усіх тканинах риб. Зміни активності ЛДГ та вмісту вказаних метаболітів при зниженні температури свідчать про
перехід організму риб переважно на анаеробний тип енергообміну за цих умов.
Ключові слова: карась срібляний, гліколіз, холодова адаптація.
The data characterizing the level of anaerobic energetic metabolism in the wild type of goldfish Carassius auratus gibelio during
winter period are shown. It was determined that during winter LDH activity changed, lactate content as well as the lactate/pyruvate
ratio increased for all fish tissues. Changes in LDH activity and metabolite content during temperature decrease indicate a switch of
fish organism to predominantly anaerobic type if energetic metabolism under these conditions.
Key-words: Carassius auratus gibelio, glycolysis, cold adaptation.
* Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015; тел.:+38
(057) 373-41-35, факс: +38 (057) 373-30-84, электронная почта:
cryo@online.kharkov.ua
* To whom correspondence should be addressed: 23, Pereyaslavskaya
str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373 4135, fax: +380 57
373 3084, e-mail: cryo@online.kharkov.ua
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na-
tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Институт проблем криобиологии и криомедицины
НАН Украины, г. Харьков
Одним из механизмов приспособления к выжи-
ванию в неблагоприятных условиях внешней
среды для многих видов животных является оцепе-
нение. В этом состоянии все процессы жизнедея-
тельности у животных сведены к минимуму и они
без вреда для организма могут переносить голод,
гипоксию, гиперкапнию, гипотермию и т.д. [2].
Некоторые виды рыб впадают в состояние зимнего
оцепенения или сноподобное состояние. Одним из
таких видов является карась серебряный Caras-
sius auratus gibelio L (1758). У рыб, относящихся
к пойкилотермным животным, при изменении
температуры окружающей среды меняются темпе-
ратура тела и интенсивность обмена веществ.
Приспособительные механизмы метаболизма,
вызванные колебаниями температуры, тесно связа-
ны с выработкой макроэргических соединений в
аэробных и анаэробных метаболических путях. О
функциональном состоянии гликолиза и цикла три-
карбоновых кислот косвенно можно судить по
активности отдельных ферментов при разных
температурах. Поскольку лактатдегидрогеназа
(ЛДГ) функционирует на заключительном этапе
One of the mechanisms of adaptation to survival
under unfavorable environmental conditions for many
animal species is torpor. In this state all processes of
vital activity in animals are reduced to minimum and
they may survive hunger, hypoxia, hypercapnia,
hypothermia etc. with no harm for their organisms [2].
Some fish species fall either into a winter torpor state
or sleep-like one. One of these species is the wild type
of goldfish Carassius auratus gibelio L (1758). In
fishes belonging to poikilotherms during change in
environmental temperature the body temperature and
metabolism intensity change.
Addaptive mechanisms of metabolism caused by
temperature variations are tightly related to the
production of macroergic compounds in aerobic and
anaerobic metabolic pathways.
Functional state of glycolysis and cycle of
tricarbone acids may be indirectly judged on the
activity of certain enzymes at various temperatures.
Since lactate dehydrogenase (LDH) functions at a final
stage of glycolysis its activity together with other
parameters are used as an index for the level of
anaerobic metabolism.
65 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 17, 2007, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 17, 2007, №1
гликолиза, её активность, наряду с другими
показателями, используют как показатель уровня
анаэробного обмена.
Цель работы – исследование изменения актив-
ности ЛДГ и содержания лактата и пирувата в
тканях у карася серебряного C. a. gibelio при адап-
тации к низким температурам.
Материалы и методы
В работе использовали рыб, выловленных зи-
мой (январь). Часть рыб содержали в холодовой
камере при температуре 4-5°С (адаптированные к
холоду), другую – при комнатной температуре
20-22°С (контроль) длительностью не менее 2-х
недель.
Для определения активности ЛДГ в белых и
красных мышцах и в печени в направлении
лактат→пируват использовали наборы фирмы
“Реагент” (г. Днепропетровск). Принцип метода
основан на способности ЛДГ в присутствии нико-
тинамидадениндинуклеотида (НАД) окислять
L-лактат до пировиноградной кислоты, которая
при реакции с 2,4-динитрофенилгидразином в
щелочной среде образует окрашенный продукт –
гидразон пировиноградной кислоты [3]. Интенсив-
ность окраски прямо пропорциональна активности
фермента. Фрагмент ткани весом около 400 мг
гомогенизировали на льду в 1,5 мл 0,1 М фосфат-
ного буфера, рН 7,4. Гомогенат центрифугировали
при 1800g в течение 5 мин, 50 мкл надосадка
отбирали для проведения ферментативной реак-
ции. Активность ЛДГ определяли при 20-22°С
спектрофотометрически при 540 нм, длительность
инкубации составляла 15 мин. Реакцию останав-
ливали добавлением 2,4-динитрофенилгидразина.
Лактатдегидрогеназную активность в направ-
лении пируват→лактат определяли по скорости
окисления восстановленного никотинамидаденин-
динуклеотида (НАДН2) при 340 нм [1]. Фермента-
тивную реакцию проводили при 20-22°С в течение
5 мин. Концентрацию белка в пробах определяли
по стандартной методике [6] с помощью раствора
Бредфорда.
Содержание лактата и пирувата определяли, как
описано в [5]. Фрагмент замороженной ткани
(300 мг) растирали, переносили в пробирку, содер-
жащую 1 мл 6% HClO4, и добавляли 6% HClO4 до
соотношения ткань:кислота 1:4. Пробы переме-
шивали и оставляли на ледяной бане на 10 мин,
затем центрифугировали в течение 15 мин при
1800 g. К надосадку приливали 5 М K2CO3 из
расчета 0,05 мл на 1 мл надосадка. Пробы пере-
мешивали, инкубировали на ледяной бане до прек-
ращения выделения СО2 и центрифугировали при
1800 g в течение 5 мин. Для определения количест-
ва лактата в кювету наливали 2,0 мл глицин-гидра-
The research aim is to investigate the change in
LDH activity and content of lactate and pyruvate in
the tissues of C. a. gibelio during adaptation to low
temperatures.
Materials and methods
In the research the fish caught in winter (January)
was used. The part of fish was maintained in cold
chamber at 4-5°C (cold-adapted), another part was kept
at room temperature of 20-22°C (control) for more
than 2 weeks.
To determine the LDH activity in white and red
muscles as well as in liver in lactate→pyruvate
direction the kits (“Reagent”, Dnepropetrovsk, Ukrai-
ne) were used. The method is based on LDH ability in
presence of nicotinamideadeninenucleotide (NAD) to
oxidize L-lactate to pyruvic acid, which being in reac-
tion with 2,4-dinitrophenylhydrasine in alkaline medi-
um forms the stained product: pyruvic acid hydrazone
[3]. Staining intensity is in a direct proportion with
the enzyme activity. A tissue fragment weighed about
400 mg was homogenized on ice in 1.5 ml of 0.1 M
phosphate buffer, pH 7.4. Homogenate was centrifuged
at 1800g for 5 min, 50 µl of supernatant was taken to
perform enzyme reaction. LDH activity was measured
at 20-22°C spectrophotometrically at 540 nm, incu-
bation duration was 15 min. The reaction was stopped
by adding 2,4-dinitrophenylhydrazine.
Lactate dehydrogenase activity in pyruvate→
lactate direction was examined on the rate of oxidation
of nicotinamideadeninedinucleotide (NADH2) at 340
nm [1]. Enzyme reaction was performed at 20-22°C
for 5 min. Protein concentration in the samples was
found on the standard methods [6] using Bredford
solution.
Contents of lactate and pyruvate were examined
as described [7]. A frozen tissue fragment weighed
300 mg was ground up, transferred into a vial, contai-
ning 1 ml 6% HClO4, and 6% HClO4 was added to
1:4 tissue:acid ratio. The samples were stirred and left
in ice bath for 10 min, and then they were centrifuged
for 15 min at 1800g. Then 5 M K2CO3 was added to
supernatants at the rate of 0.05 ml per 1 ml of
supernatant. The samples were stirred, incubated on
ice bath until CO2 emanation stopped and centrifuged
at 1800g for 5 min. To examine lactate quantity 2.0 ml
glycin-hydrazine buffer (0.4 M hydrazine sulphate,
1 M glycin, pH 9.5), 0.2 ml 0.05 M NAD and 0.2 ml
of tissue extract were added into a cuvette. Optical
density vs. buffer at 340 nm was measured, afterwards
0.05 ml of LDH preparation with protein content of
5 mg/ml was added and the extinction value was
measured after its growth ceasing.
To determine the pyruvate content a frozen tissue
fragment weighed 300 mg was ground with 2ml of
0.6 M HCO4 and incubated on ice bath for 15 min,
66 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 17, 2007, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 17, 2007, №1
зинового буфера (0,4 М гидразинсульфата, 1 М
глицина, рН 9,5), 0,2 мл 0,05 М раствора НАД и
0,2 мл тканевого экстракта. Измеряли оптическую
плотность против буфера при 340 нм, после чего
добавляли 0,05 мл препарата ЛДГ с содержанием
белка 5 мг/мл и измеряли величину экстинкции
после прекращения её роста.
При определении содержания пирувата фраг-
мент замороженной ткани (300 мг) растирали с
2 мл 0,6 М HClO4 и инкубировали на ледяной бане
15 мин, добавляли 0,6 М HClO4 до соотношения
ткань:кислота 1:9. Затем пробы центрифугировали
в течение 10 мин при 1800 g. Пробы нейтрализо-
вали, приливая по 0,2 мл 5 М K2CO3, и инкубиро-
вали 10 мин на ледяной бане, после чего центрифу-
гировали 10 мин при 1800 g. Надосадки отбирали
и хранили при –80°С. Для определения количества
пирувата в кювету вносили 1,2 мл 0,5 М триэтанол-
аминового буфера (рН 7,6) и 0,8 мл разморожен-
ного тканевого экстракта. Фоновое значение экс-
тинкции определяли при 340 нм. В пробу вносили
0,05 мл 6 мМ раствора НАДН2 и измеряли опти-
ческую плотность. Через 5 мин после добавления
0,05 мл препарата ЛДГ с содержанием фермента
0,5 мг/мл измеряли оптическую плотность. В
экспериментах использовали реактивы фирмы
“Sigma” (США).
Полученные цифровые данные были статисти-
чески обработаны с использованием критерия
Манна-Уитни в программе StatgraphicWin.
Результаты и обсуждение
В результате исследований установлено, что
активность ЛДГ в направлении лактат→пируват в
красных и белых мышцах, а также в печени была
снижена у рыб, адаптированных к низкой темпера-
туре (рис. 1). В то же время активность ЛДГ,
направленная на образование лактата у холодо-
адаптированных особей, достоверно выше по срав-
нению с контролем во всех изученных тканях
(рис. 2). Это хорошо согласуется с данными [4, 7],
свидетельствующими о повышении роли гликоли-
за при низкой температуре.
Не обнаружено достоверных различий между
красными и белыми мышцами в активности ЛДГ
при образовании пирувата у карасей, содержав-
шихся при комнатной температуре, хотя актив-
ность ЛДГ при образовании лактата в данных
условиях была выше в белых мышцах. Изменение
активности фермента только в одном направлении
реакции обусловлено работой разных изоформ.
Обнаружено, что в белых мышцах преобладает
анаэробный энергообмен [4]. Например, у морских
рыб наблюдается следующая закономерность: чем
выше их подвижность, тем выше активность ЛДГ,
определяемая по скорости окисления НАДН2, в
Рис. 1. Активность ЛДГ в направлении лактат→пируват
в тканях C. a. gibelio: – контроль; – холодоадаптиро-
ванные; * – достоверные отличия по cравнению с
контролем, р< 0,05; # – достоверные отличия по срав-
нению с белыми мышцами, р< 0,05; + – достоверные
отличия по сравнению с красными мышцами; р< 0,05,
n=10.
Fig. 1. LDH activity in lactate→pyruvate direction in tis-
sues of C. a. gibelio: – control; – cold-adapted; * –
significant differences if compared with the control, p<0.05,
n=10; # – significant differences if compared with white
muscles, p<0.05; + – significant differences if compared
with red muscles p< 0.05, n=10.
* # +
* #
* +
0
2
4
6
8
10
12
Белые мышцы Красные мышцы Печень
# +
Ак
ти
вн
ос
ть
Л
ДГ
, н
м
ол
ь
пи
ру
ва
та
/
м
ин
×
м
г б
ел
ка
LD
H
a
ct
iv
ity
, n
m
ol
o
f p
iru
va
te
/
m
in
×
m
g
of
p
ro
te
in
Белые
мышцы
White
muscles
Красные
мышцы
Red
muscles
Печень
Liver
0.6 M HClO4 was added up to 1:9 tissue:acid ratio.
Then the samples were centrifuged for 10 min at
1800g. The samples were neutralized by pouring
0.2 ml 5 M K2CO3 and incubated for 10 min on ice
bath afterwards they were centrifuged for 10 min at
1800g. The supernatants were removed and stored at
–80°C. To find out the amount of pyruvate 1.2 ml of
0.5 triethanolamine buffer (pH 7.6) and 0.8 ml of
thawed tissue extract were put into a cuvette. The
background value of extinction were determined at
340 nm. Into the sample 0.05 ml of 6 mM of solution
NADH2 was added and optical density was measured.
Five minnutes later after adding 0.05 ml of LDH
preparation with the enzyme content of 0.5 mg/ml an
optical density was measured. In the experiments the
reagents of Sigma company (USA) were used.
The obtained digital data were statistically
processed using Mann-Witney criterion with the
StatgraphicWin software.
Results and discussion
In the result of the research it has been established
that LDH activity in lactate→pyruvate direction in red
and white muscles as well as in liver was reduced in
the fish adapted to low temperature (Fig. 1). At the
same time LDH activity directed to the formation of
lactate in cold-adapted individuals is statistically
higher if compared with the control in the all studied
67 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 17, 2007, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 17, 2007, №1
печени и белых мышцах, и ниже – в красных [9].
Соотношение активности ЛДГ в белых и красных
мышцах у ставриды (пелагический вид с высокой
подвижностью) составляет 14:1, тогда как у скор-
пены (малоподвижный донный вид) – близко к 1:1.
У карася серебряного (придонный вид с невысокой
подвижностью) по нашим данным при темпера-
туре 20-22°С это соотношение составляет 1:1, т.е.
данная закономерность характерна не только для
морских видов рыб, но и для пресноводных.
В условиях пониженной температуры разница
в активности ЛДГ, направленной на образование
лактата, между белыми и красными мышцами
исчезает, в то время как в красных мышцах актив-
ность ЛДГ, определяемая по образованию пиру-
вата, достоверно выше по сравнению с белыми
мышцами у холодоадаптированных карасей. Дан-
ные результаты также свидетельствуют о функцио-
нировании разных изоформ ЛДГ в различных нап-
равлениях реакции.
Активность ЛДГ в направлении пируват→лак-
тат при пониженной температуре в белых мышцах
возрастает на 35, а в красных – на 55%. Хотя в крас-
ных мышцах, как правило, преобладает аэробный
тип энергообмена, в зимний период в этой ткани
значительно усиливается гликолитический про-
цесс.
По данным [9] у морских рыб активность ЛДГ
в направлении пируват→лактат в печени в среднем
Рис. 2. Активность ЛДГ в направлении пируват→лактат
в тканях C. a. gibelio: – контроль; – холодоадаптиро-
ванные; * – достоверные отличия по сравнению с
контролем, # – достоверные отличия по сравнению с
белыми мышцами; + – достоверные отличия по
сравнению с красными мышцами; р< 0,05, n=10.
Fig. 2. LDH activity in pyruvate-lactate direction in tissues
of C. a. gibelio: – control; – cold-adapted; * – statisti-
cal differences if compared with the control, p< 0.05, n=10;
# – significant differences if compared with white muscles
p<0.05; + – significant differences if compared with red
muscles p< 0.05, n=10.
#
*
*
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
Белые мышцы Красные мышцы Печень
# +
* #
Ак
ти
вн
ос
ть
Л
ДГ
, н
м
ол
ь
Н
А
ДН
2/
м
ин
×
м
г б
ел
ка
LD
H
a
ct
iv
ity
, n
m
ol
o
f N
AD
H
2/
m
in
×
m
g
of
p
ro
te
in
Белые
мышцы
White
muscles
Красные
мышцы
Red
muscles
Печень
Liver
tissues (Fig. 2). This is in conformity with the data
[4, 7] testifying to a rise in glycolysis role at low
temperature.
No statistically significant differences between red
and white muscles on LDH activity during the forma-
tion of pyruvate in C. a. gibelio being maintained at
room temperature, though LDH activity during the
lactate formation under these conditions is higher in
white muscles. The change in the enzyme activity is
stipulated by the functioning different isoforms. It has
been found that in white muscles anaerobic energy
metabolism predominates [4]. For instance, in marine
fish the following regularity is observed: the higher
its mobility is, the higher LDH activity, determined
by NADH2 oxidation rate, is in liver and white muscles
and lower in red ones [9]. The ratio of LDH activity
in red and white muscles in horse mackerel (pelagic
fish species with high mobility) is 14:1, whilst in
rockfish (low-mobile bottom-dwelling species) it is
close to 1:1. In C. a. gibelio which is also a bottom-
dwelling species with low mobility, at 20-22°C this
ratio makes 1:1, i.e. this regularity is characteristic
not only for marine species but also for fresh-water
ones.
Under conditions of lowered temperature the
difference in LDH activity directed to the formation
of lactate between white and red muscles disappears,
while in red muscles LDH activity found on the forma-
tion of pyruvate is statistically higher in comparison
with white ones in the cold-adapted C. a. gibelio.
These results also testify to the functioning different
LDH isoforms in various reaction directions.
LDH activity in pyruvate→lactate direction at
lowered temperature in white muscles increased by
35 and in red ones by 55%. Although in red muscles
as a rule aerobic energy metabolism predominates in
winter period in this tissues there is a significant rise
in glycolytic process.
The data show [9] that in marine fish LDH activity
in pyruvate→lactate direction in liver in average by 3
orders lower than in the muscles. We have found a
similar tendency of the changes in LDH activity,
though not so sharp when comparing with NADH2
expenditure in liver and muscles. At 20-22°C LDH
activity in liver is statistically lower if compared with
the one in white and red muscles. During temperature
decrease the statistically significant difference is kept
if compared with white muscles only. Under high
concentrations of lactate in liver LDH isoforms
functioning to form pyruvate prevail [8]. It has been
noticed that in C. a. gibelio the LDH activity in
lactate→pyruvate direction in liver is almost twice
lower than in muscles. This is characteristic for both
cold-adapted and control individuals.
Hypoxic conditions did not practically affect the
LDH activity toward lactate formation for the Black
68 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 17, 2007, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 17, 2007, №1
на 3 порядка ниже, чем в мышцах. Подобное
изменение активности ЛДГ, хотя и не столь резкое,
отмечено в наших экпериментах при сравнении
расхода НАДН2 в печени и мышцах карася серебря-
ного. При температуре 20-22°С активность ЛДГ в
печени достоверно ниже по сравнению с активно-
стью в белых и красных мышцах. При понижении
температуры достоверная разница сохраняется
только по сравнению с белыми мышцами. При
высоких концентрациях лактата в печени преоб-
ладают изоформы ЛДГ, работающие на образова-
ние пирувата [8]. Отмечено, что у карасей C. a. gibelio
активность ЛДГ в направлении лактат→пируват в
печени почти в 2 раза ниже, чем в мышцах. Это
свойственно и холодоадаптированным и контроль-
ным особям.
Гипоксические условия содержания черномор-
ских рыб [9] практически не влияли на активность
ЛДГ в направлении образования лактата, тогда как
проведенные нами исследования показали, что у
C. a. gibelio в зимний период, когда снижается тем-
пература и сокращается снабжение кислородом,
активность ЛДГ, как было уже отмечено, досто-
верно изменяется.
Информативным представляется сравнение
соотношения активности ЛДГ в направлении
пируват→лактат к активности ЛДГ в направлении
лактат→пируват. Как видно из табл. 1, данный
показатель для всех изученных нами тканей в усло-
виях пониженной температуры изменяется в сторо-
ну увеличения удельной доли ЛДГ, работающей
на образование лактата.
Изменение активности фермента у рыб, адапти-
рованных к разным температурам, может быть
обусловлено изменениями количества молекул
фермента, сродства фермента к субстрату из-за
температурозависимых конформационных перест-
роек, наличия различных изоформ фермента.
Вопрос, какой из этих механизмов реализуется при
температурной адаптации рыб, предстоит выяс-
нить в ходе дальнейшей работы.
По уровню активности ЛДГ невозможно судить
об интенсивности гликолиза и цикла трикарбоно-
вых кислот, поэтому мы определяли содержание
лактата и пирувата, которые являются субстратами
и продуктами ЛДГ в тканях карася при 4-5 и
20-22°С. Было показано, что при низкой температу-
ре количество лактата возрастает в белых и крас-
ных мышцах в 1,9 и 3,1 раза соответственно, а в
печени – в 2 раза (рис. 3). Увеличение содержания
лактата в этих условиях – логически ожидаемый
результат, так как в условиях гипотермии и
сниженного потребления кислорода активизи-
руются анаэробные процессы. При этом в красных
мышцах холодоадаптированных особей количест-
арутарепмеТ
C°,яинажредос
ecnaniatniaM
C°,erutarepmet
eussiTьнакТ
ыцшымеылеБ
selcsumetihW
еынсарK
ыцшым
selcsumdeR
ьнечеП
reviL
22-02 12:1 13:1 32:1
5-4 9:1 51:1 9:1
Таблица 1. Соотношение активности ЛДГ
в направлении пируват→лактат к активности ЛДГ
в направлении лактат→пируват в тканях карася C. a.
gibelio в зависимости от температуры содержания
Table 1. The ratio of LDH activity in pyruvate→lactate
direction to the one in lactate→pyruvate direction in
tissues of C. a. gibelio depending on maintenance
temperature
Sea fishes [9], whilst our own researches showed that
in C. a. gibelio in winter period when temperature
decreased and oxygen supply reduced, LDH activity
as it had been already noted changed significantly.
The comparison of the ratio of LDH activities in
pyruvate→lactate direction and in lactate→pyruvate
direction seems to be informative. Table 1 shows that
this index under conditions of lowered temperature
changes for all the studied tissues towards the increase
of LDH, functioning for lactate formation specific
share.
The change in enzyme activity in the fish adapted
to different temperatures may be stipulated by the
alterations in the number of enzyme molecules,
enzyme affinity to substrate due to temperature-
dependent conformational re-arrangements, the pre-
sence of various enzyme isoforms. The question what
of these mechanisms is realized during temperature
adaptation in fish is to be elucidated in future.
It is impossible to judge on LDH activity about the
intensity of glycolysis and cycle of tricarbon acids,
therefore we examined the content of lactate and
pyruvate, which are the substrates and products of
LDH, in C. a. gibelio tissues at 4-5 and 20-22°C. It
has been shown that at low temperature the amount of
lactate increases in white and red muscles in 1.9 and
3.1 times, correspondingly (Fig. 3) and in 2 times in
liver. The rise in lactate content under these conditions
is a logically expected result, because under
hypothermia conditions and reduced consumption of
oxygen anaerobic processes are activated. Herewith
in red muscles of cold-adapted individuals the amount
of lactate is statistically higher if compared with white
muscles. For example, the paper [10] describes the
lactate accumulation in hepatocytes of C. a. gibelio
due to acute and chronic hypoxia. At the same time
the amount of pyruvate in muscles of cold-adapted
69 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 17, 2007, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 17, 2007, №1
во лактата достоверно выше по сравнению с
белыми мышцами. Так, в работе [10] было
показано, что и острая и хроническая гипоксия
приводила к накоплению лактата в гепатоцитах
карася серебряного C. a. gibelio. В то же время
количество пирувата в мышцах холодоадаптиро-
ванных и контрольных рыб достоверно не отли-
чалось (рис. 4), тогда как в печени уровень
пирувата при низкой температуре существенно
снижается.
Cоотношение лактат/пируват увеличивается
при снижении температуры для всех тканей
(табл. 2).
Выводы
Исходя из приведенных результатов, можно
предположить, что процессы энергообеспечения
у карася C. a. gibelio при низких температурах
осуществляются в основном по анаэробному пути.
Поскольку обмен веществ и двигательные реакции
при этом значительно замедляются, уменьшается
потребление кислорода и энергетические потреб-
ности существенно снижаются, а, следовательно,
их можно удовлетворить за счет менее эффектив-
ного способа получения энергии – гликолиза.
Переход организма на генерирование энергии по
гликолитическому пути является своего рода адап-
тационным механизмом, позволяющим ему вы-
жить в неблагоприятных зимних условиях.
Снижение температуры внешней среды для
организма – лишь начальный этап сезонного
Рис. 3. Содержание лактата в тканях карася C. a. gibelio:
– контроль; – холодоадаптированные; * – досто-
верные отличия по сравнению с контролем, р< 0,05; # –
достоверные отличия по сравнению с белыми мышцами,
р<0,05, n=10.
Fig. 3. Lactate content in C. a. gibelio tissues: – control;
– cold-adapted; * – significant differences if compared
with the control, p< 0.05; # – significant differences if com-
pared with white muscles, p<0.05, n=10
*
*#
*
0
2
4
6
8
10
Белые мышцы Красные мышцы Печень
С
од
ер
жа
ни
е
л
ак
та
та
, м
км
ол
ь\
г т
ка
ни
La
ct
at
e
co
nt
en
t,
µm
ol
/m
g
of
ti
ss
ue
Белые
мышцы
White
muscles
Красные
мышцы
Red
muscles
Печень
Liver
*
0
0,04
0,08
0,12
0,16
Белые мышцы Красные мышцы ПеченьС
од
ер
жа
ни
е
п
ир
ув
ат
а,
м
км
ол
ь\
г т
ка
ни
Pi
ru
va
te
c
on
te
nt
, µ
m
ol
/m
g
of
ti
ss
ue
Белые
мышцы
White
muscles
Красные
мышцы
Red
muscles
Печень
Liver
Рис. 4. Содержание пирувата в тканях карася C. a. gibelio:
– контроль; – холодоадаптированные; * –
достоверные отличия по сравнению с контролем, р<0,05;
n=10.
Fig. 4. Pyruvate content in C. a. gibelio tissues: – con-
trol; – cold-adapted; * – significant differences if com-
pared with the control, p<0.05, n=10.
арутарепмеТ
C°,яинажредос
ecnaniatniaM
C°,erutarepmet
eussiTьнакТ
ыцшымеылеБ
selcsumetihW
еынсарK
ыцшым
selcsumdeR
ьнечеП
reviL
22-02 1:44 1:32 1:11
5-4 1:26 1:87 1:46
Таблица 2. Соотношение лактат/пируват в тканях
карася C. a. gibelio в зависимости от температуры
содержания
Table 2. Lactate/pyruvate ratio in tissues of C. a. gibelio
depending on maintenance temperature
and control fish does not differ (Fig. 4), while in liver
the pyruvate level at low temperature is significantly
reduced.
One more parameter: lactate/pyruvate ratio should
be considered. This ratio increases when temperature
reduces for all the tissues (Table 2).
Conclusions
Proceeding from the results given one may suppose
that the processes of energy supply in C. a. gibelio
under low temperatures is provided mainly on anae-
robic pathway. Since the metabolism and motor
reactions under these conditions are significantly
slowed down, the oxygen consumption and energetic
demands are considerably decreased and consequently
they may be satisfied due to less effective way of
energy obtaining, the glycolysis. An organism
70 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 17, 2007, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 17, 2007, №1
процесса холодовой адаптации. Необходимо учас-
тие таких эндогенных веществ, как гормоны и
регуляторные пептиды, обладающих гипоме-
таболическим и гипотермическим эффектами.
Последняя группа веществ наименее изучена у рыб
и исследование их роли в переключении метабо-
лизма на зимний режим представляется наиболее
перспективным для дальнейших исследований.
Литература
Асатиани В.С. Ферментативные методы анализа.– М.:
Наука, 1969. – 739 с.
Калабухов Н.И. Спячка животных.– Харьков, 1956.– 13 c.
Колб В.Г., Камышников В.С. Клиническая биохимия.–
Минск: Беларусь, 1976.– 311 с.
Лав М.Р. Химическая биология рыб.– М., 1976.– 349 с.
Методы биохимических исследований (липидный и
энергетический обмен). Учеб. пособие / Под ред.
М.И. Прохоровой.– Л., 1982.– 272 с.
Скоупс Р. Методы очистки белков: Пер. с англ.– М.: Мир,
1985.– 358 с.
Романенко В.Д., Арсан О.М., Соломатина В.Д. Механизмы
температурной акклимации рыб.– Киев: Наук. думка, 1991.–
192 с.
Хочачка П., Сомеро Дж. Стратегия биохимической
адаптации / Под ред. Е.М. Крепса.– М.: Мир, 1977.– 396 с.
Эмеретли И.В. Раздельное воздействие гидростатичес-
кого давления и гипоксии на активность лактатдегидрогена-
зы тканей рыб с разной подвижностью // Гидробиол. журн.–
1996.– Т. 32, №1.– С. 68-72.
Krumschnabel G., Schwarzbaum P.J., Lisch J. et al. Oxygen-
dependent energetics of anoxia-tolerant and anoxia-intolerant
hepatocytes // J. Exp. Biol.– 2000.– Vol. 203, N5.– P. 951-959.
Поступила 30.01.2007
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
switching to energy generation from glycolytic path-
way is a sort of adaptation mechanism enabling to
survive under unfavorable winter conditions.
Environmental temperature reduction for an
organism is just initial stage of seasonal process of
cold adaptation. The participation of many endogenic
substances having hypometabolic and hypothermic
effects such as hormones and regulatory peptides if
nesessary. The latter substances are less studied in fish
and their role in switching metabolism for winter
regimen seems to be the most perspective for further
studies.
References
Asatiani V.S. Enzyme methods of analysis. – Moscow: Nauka,
1969.– 739 p.
Kalabukhov N.I. Animals’ hibernation. – Kharkov, 1956.– 13p.
Kolb V.G., Kamyshnikov V.S. Clinical biochemistry.– Minsk:
Byelarus, 1976.– 311 p.
Lav M.R. Chemical biology of fishes.– Moscow, 1976.– 349 p.
Methods of biochemical studies (lipid and energetic exchange):
Manual / Ed. By M.I. Prokhorova.– Leningrad, 1982.– 272 p.
Scopes R. Methods of protein purification.– Moscow: Mir,
1985.– 358 p.
Romanenko V.D., Arsan O.M., Solomatina V.D. Mechanisms
of fish temperature acclimation.– Kiev: Naukova dumka,
1991.– 192 p.
Hochachka P., Somero J. Strategy of biochemical adaptation/
Ed.: E.M. Kreps.– Moscow: Mir, 1977.– 396 p.
Emeretli I.V. Separate effect of hydrostatic pressure and
hypoxia on activity of lactatedehydrogenase of fish tissues
with different mobility // Gidrobiol. Zhurn.– 1996.– Vol. 32, N1.–
P. 68-72.
Krumschnabel G., Schwarzbaum P.J., Lisch J. et al. Oxygen-
dependent energetics of anoxia-tolerant and anoxia-intolerant
hepatocytes // J. Exp. Biol.– 2000.– Vol. 203, N5.– P. 951-959.
Accepted in 30.01.2007.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
|