Исследование криоповреждений дрожжей Saccharomyces cerevisiae флуоресцентными методами
Saved in:
| Published in: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Date: | 2007 |
| Main Author: | |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2007
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138020 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Исследование криоповреждений дрожжей Saccharomyces cerevisiae флуоресцентными методами / И.А. Буряк // Проблемы криобиологии. — 2007. — Т. 17, № 2. — С. 197. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859633878005710848 |
|---|---|
| author | Буряк, И.А. |
| author_facet | Буряк, И.А. |
| citation_txt | Исследование криоповреждений дрожжей Saccharomyces cerevisiae флуоресцентными методами / И.А. Буряк // Проблемы криобиологии. — 2007. — Т. 17, № 2. — С. 197. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| first_indexed | 2025-12-07T13:14:06Z |
| format | Article |
| fulltext |
Исследование криоповреждений дрожжей Saccharomyces cerevisiae
флуоресцентными методами
И.А. БУРЯК
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Fluorescent Studies of Saccharomyces cerevisiae Cryodamage
I.A. BURYAK
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov
Развитие техники флуоресцентного анализа и
появление новых флуоресцентных зондов расширяют
возможности применения флуоресцентных методов в
биологии.
Цель данной работы – исследование возможностей
применения флуоресцентного красителя К8-3010,
синтезированного в ГНУ “Институт монокристаллов”,
для выявления повреждений клеток после холодовых
воздействий.
Объектом исследования являлись грибы Saccharo-
myces cerevisiae. Штамм получали в ГНИИ “Генетика”
(Москва). Дрожжи для исследований выращивали на
скошенном сусло-агаре в течение 48 ч при 30°С и
смывали с питательной среды физиологическим
раствором. Суспензии клеток замораживали в криопро-
бирках фирмы Corning двумя способами: быстрое
замораживание (погружение в жидкий азот) и медленное
(помещение пробирок в морозильную камеру при
температуре –20°С). Образцы отогревали на водяной
бане при 30°С. После замораживания-отогревания в
суспензию клеток дрожжей вводили краситель К8-3010
и исследовали на проточном цитофлуориметре BD FACS
Calibur и на флуоресцентном микроскопе Olympus IX - 70.
Оценивали жизнеспособность клеток после замо-
раживания-отогревания чашечным методом Коха по
количеству образовавшихся макроколоний, используя
для контроля показатели жизнеспособности для неза-
мороженных клеток. Аналогичные исследования
проводили на клетках, обработанных различными
дозами озона. Зонд К8-3010 окрашивает оболочки
неповрежденных клеток в ярко-зеленый цвет и имеет
ограниченную проницаемость внутрь них, о чем
свидетельствует менее яркое свечение цитоплазмы.
Нарушение проницаемости оболочки клеток для
красителя проявляется в окрашивании цитоплазмы и
внутриклеточных органелл в ярко-зеленый цвет. Было
установлено, что по степени повреждения клеток
замораживанием выявляются две субпопуляции с
разной интенсивностью окрашивания клеток красителем
К8-3010, причем данный метод позволяет выявить
влияние способа замораживания на степень пов-
реждения. Результаты исследования повреждений клеток
флуоресцентными методами коррелируют с резуль-
татами оценки жизнеспособности клеток методом Коха.
Полученные результаты свидетельствуют о перспек-
тивности использования красителя К8-3010 в крио-
биологии для выявления повреждений клеток после
криоконсервирования, однако разработка конкретных
протоколов его использования для обнаружения
повреждений клеток различных видов является пред-
метом дальнейших исследований.
Development of fluorescent analysis techniques and
appearance of new fluorescent probes have extended the
possibilities for fluorescent method application in biology.
This research was aimed to investigate the possibilities
for K8-3010 fluorescent dye application, synthesised at the
Scientific and Technological Corporation “Institute for
Single Crystals” in order to reveal cell damages after cold
effects.
Saccharomyces cerevisiae fungi served as the research
object. Strain was obtained at the State R&D Institute
“Genetics” (Moscow). Yeast for research was grown at a
slant wort agar-agar within 48 hours at 30°C and washed-
out from nutrient medium with physiological solution. Cell
suspensions were frozen in Corning cryovials using two
ways: rapid freezing (immersion into liquid nitrogen) and a
slow one (vial placing into freezing chamber at –20°C).
Samples were thawed on water bath at 30°C. After freeze-
thawing the K8-3010 dye was added into yeast cell
suspension, studied with BD FACS Calibur flow cytometer
and with Olympus IX-70 fluorescent microscope. Cell
viability was estimated after freeze-thawing with dish Koch
method by the number of formed macrocolonies using the
viability indices for unfrozen cells as the control. The same
research was carried-out in the cells, treated with different
ozone doses. K8-3010 probe stains the membranes of
undamaged cells in a bright green colour and has a limited
permeability inside of them, that is testified by a less bright
cytoplasm fluorescence. Disorder in cell membrane
permeability for a dye is manifested in cytoplasm and
intracellular organelle staining in bright green colour. There
was established that according to the cell damage extent
by freezing the two subpopulations with various intensity
rates of K8-3010 cell staining were revealed, moreover this
method enabled to reveal the freezing effect on a damage
extent. Results of cell damage study using fluorescence
methods correlate with those of cell viability estimation
using Koch method.
The results obtained testify to the perceptiveness of
K8-3010 dye use in cryobiology in order to reveal cell
damages after cryopreservation, however the elaboration
of detailed protocols for the probe usage to find-out
damages for different cells is the subject of further research.
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 17, 2007, №2
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 17, 2007, №2
197
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-138020 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T13:14:06Z |
| publishDate | 2007 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Буряк, И.А. 2018-06-17T21:17:02Z 2018-06-17T21:17:02Z 2007 Исследование криоповреждений дрожжей Saccharomyces cerevisiae флуоресцентными методами / И.А. Буряк // Проблемы криобиологии. — 2007. — Т. 17, № 2. — С. 197. — рос. https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138020 ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Исследование криоповреждений дрожжей Saccharomyces cerevisiae флуоресцентными методами Fluorescent studies of Saccharomyces cerevisiae cryodamage Article published earlier |
| spellingShingle | Исследование криоповреждений дрожжей Saccharomyces cerevisiae флуоресцентными методами Буряк, И.А. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| title | Исследование криоповреждений дрожжей Saccharomyces cerevisiae флуоресцентными методами |
| title_alt | Fluorescent studies of Saccharomyces cerevisiae cryodamage |
| title_full | Исследование криоповреждений дрожжей Saccharomyces cerevisiae флуоресцентными методами |
| title_fullStr | Исследование криоповреждений дрожжей Saccharomyces cerevisiae флуоресцентными методами |
| title_full_unstemmed | Исследование криоповреждений дрожжей Saccharomyces cerevisiae флуоресцентными методами |
| title_short | Исследование криоповреждений дрожжей Saccharomyces cerevisiae флуоресцентными методами |
| title_sort | исследование криоповреждений дрожжей saccharomyces cerevisiae флуоресцентными методами |
| topic | Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| topic_facet | Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138020 |
| work_keys_str_mv | AT burâkia issledovaniekriopovreždeniidrožžeisaccharomycescerevisiaefluorescentnymimetodami AT burâkia fluorescentstudiesofsaccharomycescerevisiaecryodamage |