Цитофлуориметрическая оценка эффективности криоконсервирования цельной суспензии и различных субпопуляций адреноцитов новорожденных поросят
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Дата: | 2007 |
| Автори: | , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2007
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138032 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Цитофлуориметрическая оценка эффективности криоконсервирования цельной суспензии и различных субпопуляций адреноцитов новорожденных поросят / Г.В. Дудецкая, В.Д. Устиченко, Н.М. Алабедалькарим // Проблемы криобиологии. — 2007. — Т. 17, № 2. — С. 204. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859636852982546432 |
|---|---|
| author | Дудецкая, Г.В. Устиченко, В.Д. Алабедалькарим, Н.М. |
| author_facet | Дудецкая, Г.В. Устиченко, В.Д. Алабедалькарим, Н.М. |
| citation_txt | Цитофлуориметрическая оценка эффективности криоконсервирования цельной суспензии и различных субпопуляций адреноцитов новорожденных поросят / Г.В. Дудецкая, В.Д. Устиченко, Н.М. Алабедалькарим // Проблемы криобиологии. — 2007. — Т. 17, № 2. — С. 204. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| first_indexed | 2025-12-07T13:17:46Z |
| format | Article |
| fulltext |
Цитофлуориметрическая оценка эффективности криоконсервирования цельной
суспензии и различных субпопуляций адреноцитов новорожденных поросят
Г.В. ДУДЕЦКАЯ, В.Д. УСТИчЕНКО, Н.М. АЛАБЕДАЛЬКАРИМ
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Flow Cytometry Estimation of Cryopreservation Efficiency of Whole Suspension and
Different Subpopulations of Newborn Piglet Adrenocytes
G.V. DUDETSKAYA, V.D. USTICHENKO, N.M. ALABEDALKARIM
Institute for Problems of Cryobiology & Cryomedicine of the National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov
Nowadays there have been designed the successful
cryopreservation regimens for adrenal organotypic
cultures. However the attempts to cryopreserve mice and
newborn piglet adrenocortical cell suspensions, especially
with high freeze-thawing rates, were unsuccessful. When
transferring cells out of cryoprotective medium into that of
isotonic culture there was a sharp decrease not only in
viability but in cellularity of adrenocyte suspension,
cryopreserved with freezing rate higher than 100°C/min as
well. Based on the feedback from tolerance in adrenocytes,
cryopreserved as fragments there was assumed that a
limitation of volume changes in cells at the stages of cryo-
protectant adding-removal and under freeze-thawing
augmented the cryopreserved adrenal cell integrity.
The research was aimed to estimate the integrity of
cytoplasmic membrane and mitochondrial potential of
attached adrenocytes using fluorescent dyes (propidium
iodide (PI), FDA and JC1) after freeze-thawing.
Newborn piglet adrenocytes were procured using an
enzyme way, different cell populations were separated in
ficoll gradient. For the research performance the adreno-
cytes were precultured for 18 hrs on an embedding: small
intestine segment (SIS) of newborn piglets. Freeze-thawing
was done using the method of Gurina, designed for
organotypic cultures of newborn piglet adrenal glands. For
the flow cytometry analysis the cells were removed from
embedding by trypsinisation and PI, FDA and JC1 staining.
Percentage of necrotic cells, determined by PI inclusion
did not statistically and significantly differ for native and
cryopreserved adrenocytes. During FDV.N.A staining the
integrity of cytoplasmic membrane of native and cryo-
preserved cells was established as not preserved. However
when analysing the ratio of orange and green fluorescence
during JC1 staining a different cryosensitivity of differen-
tiated subpopulations of adrenocytes has been revealed.
No statistically significant changes in mitochondrial activity
after cryopreservation for non-separated adrenocyte
suspension and main cell population, isolated in ficoll
gradient with 1.0274 g/cm3 were established. Significant
cryosensitivity is typical for cells, localised in ficoll gradient
with 1.044-1.058 g/cm3. We believe that this effect may be
related with preactivation of these subpopulations of
adrenocytes during separated culturing, preceded
cryopreservation.
В настоящее время разработаны успешные режимы
криоконсервирования органотипических культур над-
почечных желез. Однако попытки криоконсервирования
суспензии адренокортикальных клеток мышей и ново-
рожденных поросят, особенно с высокими скоростями
замораживания-отогрева, были неудачными. При пере-
носе клеток из криозащитной в изотоническую среду
культивирования резко снижалась не только жизне-
способность, но и клеточность суспензии адреноцитов,
криоконсервированной со скоростью замораживания
более 100°С/мин. По результатам криотолерантности
адреноцитов, криоконсервированных в виде фрагментов,
сделано предположение: ограничение объемных изме-
нений клеток на этапах добавления-удаления крио-
протектора и при замораживании-отогреве повышает
сохранность криоконсервированных клеток надпочеч-
ников.
Цель работы – оценка целостности цитоплазма-
тической мембраны и митохондриального потенциала
прикрепленных адреноцитов с использованием флуо-
ресцентных красителей (пропидиум йодид (PI), FDA и
JC1) после замораживания-отогрева.
Адреноциты новорожденных поросят получали
ферментативным способом, различные популяции
клеток – разделением в градиенте фиколла. Для выпол-
нения работы адреноциты прекультивировали 18 ч на
подложке – фрагменте тонкого кишечника новорож-
денных поросят (SIS). Замораживание-отогрев осущест-
вляли по методу Гуриной, разработанному для органо-
типических культур надпочечников новорожденных
поросят. Для цитофлуориметрического анализа клетки
снимали с подложки трипсинизацией и окрашивали PI,
FDA и JC1.
Процент некротических клеток, определенный по
включению PI, достоверно не отличался для нативных и
криоконсервированных адреноцитов. Установлено, что
при окрашивании FDA не сохраняется целостность цито-
плазматической мембраны нативных и криоконсер-
вированных клеток. Однако анализ соотношения оран-
жевой и зеленой флуоресценции при окрашивании JC1
выявил различную криочувствительность диффе-
ренцированных субпопуляций адреноцитов. Досто-
верных изменений в митохондриальной активности
после криоконсервирования для неразделенной суспен-
зии адреноцитов и основной популяции клеток, выделен-
ной в градиенте фиколла с плотностью 1,0274 г/см3, не
установлено. Значительная криочувствительность
характерна для клеток, локализованных в градиентах
фиколла с плотностью 1,044-1,058 г/см3. Мы полагаем, что
данный эффект может быть связан с преактивацией этих
субпопуляций адреноцитов в процессе раздельного
культивирования, предшествующего криоконсервиро-
ванию.
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 17, 2007, №2
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 17, 2007, №2
204
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-138032 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T13:17:46Z |
| publishDate | 2007 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Дудецкая, Г.В. Устиченко, В.Д. Алабедалькарим, Н.М. 2018-06-17T21:24:13Z 2018-06-17T21:24:13Z 2007 Цитофлуориметрическая оценка эффективности криоконсервирования цельной суспензии и различных субпопуляций адреноцитов новорожденных поросят / Г.В. Дудецкая, В.Д. Устиченко, Н.М. Алабедалькарим // Проблемы криобиологии. — 2007. — Т. 17, № 2. — С. 204. — рос. https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138032 ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Цитофлуориметрическая оценка эффективности криоконсервирования цельной суспензии и различных субпопуляций адреноцитов новорожденных поросят Flow cytometry estimation of cryopreservation efficiency of whole suspension and different subpopulations of newborn piglet adrenocytes Article published earlier |
| spellingShingle | Цитофлуориметрическая оценка эффективности криоконсервирования цельной суспензии и различных субпопуляций адреноцитов новорожденных поросят Дудецкая, Г.В. Устиченко, В.Д. Алабедалькарим, Н.М. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| title | Цитофлуориметрическая оценка эффективности криоконсервирования цельной суспензии и различных субпопуляций адреноцитов новорожденных поросят |
| title_alt | Flow cytometry estimation of cryopreservation efficiency of whole suspension and different subpopulations of newborn piglet adrenocytes |
| title_full | Цитофлуориметрическая оценка эффективности криоконсервирования цельной суспензии и различных субпопуляций адреноцитов новорожденных поросят |
| title_fullStr | Цитофлуориметрическая оценка эффективности криоконсервирования цельной суспензии и различных субпопуляций адреноцитов новорожденных поросят |
| title_full_unstemmed | Цитофлуориметрическая оценка эффективности криоконсервирования цельной суспензии и различных субпопуляций адреноцитов новорожденных поросят |
| title_short | Цитофлуориметрическая оценка эффективности криоконсервирования цельной суспензии и различных субпопуляций адреноцитов новорожденных поросят |
| title_sort | цитофлуориметрическая оценка эффективности криоконсервирования цельной суспензии и различных субпопуляций адреноцитов новорожденных поросят |
| topic | Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| topic_facet | Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138032 |
| work_keys_str_mv | AT dudeckaâgv citofluorimetričeskaâocenkaéffektivnostikriokonservirovaniâcelʹnoisuspenziiirazličnyhsubpopulâciiadrenocitovnovoroždennyhporosât AT ustičenkovd citofluorimetričeskaâocenkaéffektivnostikriokonservirovaniâcelʹnoisuspenziiirazličnyhsubpopulâciiadrenocitovnovoroždennyhporosât AT alabedalʹkarimnm citofluorimetričeskaâocenkaéffektivnostikriokonservirovaniâcelʹnoisuspenziiirazličnyhsubpopulâciiadrenocitovnovoroždennyhporosât AT dudeckaâgv flowcytometryestimationofcryopreservationefficiencyofwholesuspensionanddifferentsubpopulationsofnewbornpigletadrenocytes AT ustičenkovd flowcytometryestimationofcryopreservationefficiencyofwholesuspensionanddifferentsubpopulationsofnewbornpigletadrenocytes AT alabedalʹkarimnm flowcytometryestimationofcryopreservationefficiencyofwholesuspensionanddifferentsubpopulationsofnewbornpigletadrenocytes |