Течение экспериментальной гиперхолестеринемии после аллотрансплантации криоконсервированных гепатоцитов
В работе изучалось действие криоконсервированных гепатоцитов на обмен липидов при аллотрансплантации кроликам с экспериментальной гиперхолестеринемией (ГХ). Показано, что криоконсервированные изолированные гепатоциты способны оказывать значительное регулирующее действие на липидный обмен, однако отм...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Дата: | 2003 |
| Автори: | , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2003
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138152 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Течение экспериментальной гиперхолестеринемии после аллотрансплантации криоконсервированных гепатоцитов / А.С. Лебединский, А.Ю. Петренко, А.Н. Сукач // Проблемы криобиологии. — 2003. — № 3. — С. 54–61. — Бібліогр.: 18 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860149926385680384 |
|---|---|
| author | Лебединский, А.С. Петренко, А.Ю. Сукач, А.Н. |
| author_facet | Лебединский, А.С. Петренко, А.Ю. Сукач, А.Н. |
| citation_txt | Течение экспериментальной гиперхолестеринемии после аллотрансплантации криоконсервированных гепатоцитов / А.С. Лебединский, А.Ю. Петренко, А.Н. Сукач // Проблемы криобиологии. — 2003. — № 3. — С. 54–61. — Бібліогр.: 18 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description | В работе изучалось действие криоконсервированных гепатоцитов на обмен липидов при аллотрансплантации кроликам с экспериментальной гиперхолестеринемией (ГХ). Показано, что криоконсервированные изолированные гепатоциты способны оказывать значительное регулирующее действие на липидный обмен, однако отмеченные эффекты ограничиваются первой неделей наблюдения.
У роботі вивчалася дія кріоконсервованих гепатоцитів на обмін ліпідів при алотрансплантації кролям з експериментальною гіперхолестеринемією. Показано, що кріоконсервовані ізольовані гепатоцити здатні спричиняти значну регулюючу дію на ліпідний обмін, але ефекти, що відзначаються, обмежені першим тижнем спостереження.
The effect of cryopreserved hepatocytes on lipid metabolism under allotransplantation to rabbits with experimental hypercholesterolemia (HC) was studied in this work. It was demonstrated, that the cryopreserved isolated hepatocytes were capable to cause a significant regulatory effect on lipid metabolism, but the noted effects were limited by the first week of observation.
|
| first_indexed | 2025-12-07T17:51:30Z |
| format | Article |
| fulltext |
54ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №3
УДК 616.153.922-092.4:616-089.843:615.361.36.018.1
Течение экспериментальной гиперхолестеринемии после
аллотрансплантации криоконсервированных гепатоцитов
А.С. ЛЕБЕДИНСКИЙ, А.Ю. ПЕТРЕНКО, А.Н. СУКАЧ
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Proceeding of Experimental Hypercholesterolemia After Cryopreserved
Hepatocyte Allotransplantation
LEBEDINSKIY A.S., PETRENKO A.YU., SUKACH A.N.
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy
of Sciences of the Ukraine, Kharkov
В работе изучалось действие криоконсервированных гепатоцитов на обмен липидов при аллотрансплантации кроликам с
экспериментальной гиперхолестеринемией (ГХ). Показано, что криоконсервированные изолированные гепатоциты способны
оказывать значительное регулирующее действие на липидный обмен, однако отмеченные эффекты ограничиваются первой
неделей наблюдения.
Ключевые слова: экспериментальная гиперхолестеринемия кроликов, криоконсервированные гепатоциты, аллогенная
трансплантация, липидный обмен, холестерин.
У роботі вивчалася дія кріоконсервованих гепатоцитів на обмін ліпідів при алотрансплантації кролям з експериментальною
гіперхолестеринемією. Показано, що кріоконсервовані ізольовані гепатоцити здатні спричиняти значну регулюючу дію на
ліпідний обмін, але ефекти, що відзначаються, обмежені першим тижнем спостереження.
Ключові слова: експериментальна гіперхолестеринемія кролів, кріоконсервовані гепатоцити, алогенна трансплантація,
ліпідний обмін, холестерин.
The effect of cryopreserved hepatocytes on lipid metabolism under allotransplantation to rabbits with experimental
hypercholesterolemia (HC) was studied in this work. It was demonstrated, that the cryopreserved isolated hepatocytes were capable
to cause a significant regulatory effect on lipid metabolism, but the noted effects were limited by the first week of observation.
Key-words: rabbit’s experimental hypercholesterolemia, cryopreserved hepatocytes, allogenic transplantation, lipid metabolism,
cholesterol
UDC 616.153.922-092.4:616-089.843:615.361.36.018.1
Среди многочисленных работ, посвященных
изучению обмена липидов, значительное место
занимают исследования ГХ, которая наблюдается
при ряде заболеваний человека и сопряжена с
риском развития атеросклероза [2]. Тяжесть
данного состояния в большой степени зависит от
соотношения в крови главных транспортных форм
липидов – липопротеинов и распределения
холестерина (ХС) между атерогенными и анти-
атерогенными фракциями липопротеинов. Особое
значение в развитии ГХ имеет активность
протекания свободно-радикальных процессов
перекисного окисления липидов (ПОЛ).
Печень – основное регуляторное звено в обмене
липидов и липопротеинов, поэтому нормальное
выполнение ею липорегуляторной функции – очень
важный фактор в коррекции состояний ГХ.
Традиционной экспериментальной моделью таких
состояний является алиментарная ГХ кроликов,
развитие которой характеризуется значительным
повышением содержания ХС в крови, за счет
многократного повышения содержания атероген-
ных липопротеинов, в частности липопротеинов
низкой плотности (ЛПНП). При этом наблюдается
Адрес для корреспонденции: Лебединский А.С., Институт проблем
криобиологии и криомедицины НАН Украины,ул. Переяславская,23,
г. Харьков, Украина 61015; тел.:+38 (057) 7720135, факс: +38 (057)
7720084, e-mail: cryo@online.kharkov.ua
Address for correspondence: Lebedinskiy A.S., Institute for Problems
of Cryobiology&Cryomedicine of the Natl. Acad. Sci. of Ukraine, 23,
Pereyaslavskaya str.,Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+38 (057) 7720135,
fax: +38 (057) 7720084, e-mail:cryo@online.kharkov.ua
The investigations of HC, observed at some human
diseases and related to the risk of atherosclerosis
development, take a considerable place among the
numerous works, devoted to the lipid metabolism study
[2]. The severity of this state depends in a greater
extent on the ratio of the major transport forms of lipids
in blood: lipoproteins and cholesterol (CS) distribution
between atherogenic and antiatherogenic lipoprotein
fractions. The proceeding activity of lipid peroxidation
(LPO) free-radical processes is of special importance
at the HC development.
The liver is the principal regulatory link in the lipid
and lipoprotein metabolism, therefore its normal
liporegulatory function performance is an important
factor when correcting the HC state. The traditional
experimental model of such states is the alimentary
HC of rabbits, which development is characterised by
a considerable increase in HC content in blood, due to
a multiple augmentation of atherogenic lipoprotein
content, in particular, lipoproteins of low density (LLD).
In this case there is observed the activation of LPO
processes, accompanying by an increase in the
concentration of peroxide-modified forms of
lipoproteins in blood [4].
55ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №3
активация процессов ПОЛ, сопровождающаяся
нарастанием концентрации перекисно-модифи-
цированных форм липопротеинов в крови [4].
Последние десятилетия активно изучается
возможность трансплантации изолированных
клеток печени. Было показано, что в организме
реципиента при условии использования адекватной
иммуносупрессии они способны длительно
выживать, выполнять гепатоспецифические
функции и даже делиться [11, 12]. Центральная
роль, которую печень играет в обмене липидов и
развитии его расстройств [2], может рассматри-
ваться как достаточное основание для изучения
возможности коррекции дислипидемических
состояний путем трансплантации клеток печени.
Возможности клинического применения клеток
печени значительно расширяются с разработкой
методов их низкотемпературного консервирования
и хранения, поэтому наиболее целесообразно
рассмотреть на экспериментальной модели
именно использование криоконсервированного
материала.
Цель настоящей работы – изучение действия
криоконсервированных гепатоцитов на обмен
липидов при аллотрансплантации кроликам с
экспериментальной ГХ.
Материалы и методы
Эксперименты проводили на зрелых беспород-
ных кроликах-самцах массой 2-3,5 кг. Для создания
модели экспериментальной ГХ животных содер-
жали на стандартном рационе вивария и ежеднев-
но вводили per os по 0,5 г ХС в сутки.
Гепатоциты кроликов выделяли неферментатив-
ным методом [15], криоконсервировали по
трехэтапной программе замораживания под
защитой 5%-го диметилсульфоксида [14] и хранили
в условиях низкотемпературного банка при -196°С.
Жизнеспособность клеток печени определяли по
устойчивости к прокрашиванию трипановым синим
[17], концентрацию клеток подсчитывали в камере
Горяева [7].
Через 5 мес холестериновой диеты животных
разбили на две группы (n=5). Первой группе
интрапортально вводили 20 мл суспензии, содержа-
щей 108 криоконсервированных аллогенных
гепатоцитов. Вторую группу (контрольную)
подвергали ложной операции, при которой в
портальную вену вводили 20 мл среды Хенкса. При
подборе доз трансплантируемых клеток руковод-
ствовались данными [10, 12, 18].
Трансплантацию клеточных суспензий произво-
дили внутривенным введением в v. porta [5]. На
1-е, 2-е, 3-и, 5-е, 7-е, 14-е, 21-е и 28-е сутки у
подопытных кроликов брали кровь для биохими-
ческих исследований. На протяжении всего срока
The possibility for the liver isolated cell
transplantation has been studied for recent decades.
It has been shown that in a recipient’s organism if one
uses the adequate immune suppression they are
capable of surviving for a long time, accomplish
hepatospecific functions and even cleave [11, 12]. The
central role, which liver plays in the lipid metabolism
and in the development of its disorders [2], can be
considered as a sufficient reason for studying the
possibility to correct the dyslipidemic states via the liver
cell transplantation. The possibilities for the liver cell
clinical application have been considerably extended
with the development of methods of their low
temperature preservation and storage, therefore the
most expedient is to consider namely the usage of
cryopreserved material in the experimental model.
The aim of this work was to study the effect of
cryopreserved hepatocytes to the lipid metabolism at
allotransplantation to the rabbits with experimental HC.
Materials and methods
The experiments were carried-out in the 2-3.5 kg
adult breedless male rabbits. In order to create the
model of experimental HC the animals were maintained
under the standard vivarium conditions and they were
introduced with 0.5 g of CS per os per day.
Rabbits’ hepatocytes were isolated using a non-
enzymatic method [15], cryopreserved according to a
three-stage freezing program under protection of 5%
dimethyl sulfoxide [14] and stored under low
temperature bank conditions at -196°C. The viability
of liver cells was determined by the resistance to the
staining rate with trypane blue [17], the cell
concentration was counted in Goryaev’s chamber [7].
Five months after cholesterol diet the animals were
divided into two groups (n=5). The first group was
intraportally introduced with 20 ml of the suspension,
containing 108 of cryopreserved allogenic hepatocytes.
The second group (the control) was pseudo-operated,
where 20 ml of Hank’s solution were injected into a
portal vein. When selecting the doses of the
transplanted cells we followed the data of the papers
[10, 12, 18].
The transplantation of cell suspensions was
performed by an intravenous injection into a v. porta
[5]. To the 1st, 2nd, 3rd, 5th, 7th, 14th, 21st and 28 days
the blood was taken in rabbits for biochemical
investigations. Within the whole term of post-operative
observation (28 days) the animals have still had CS.
The concentration of total CS, CS of lipoproteins of
high density (LHD) and triacyl glycerides (TAG) were
determined in blood serum by enzymatic methods using
the sets of “Vektor-Best” and “Olvex” firms (Russia),
as well as the TBA (thiobarbituric acid) active products
[1].
The results were statistically processed with PC
56ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №3
послеоперационного наблюдения (28 сут) животные
продолжали получать ХС.
Ферментативными методами с использованием
наборов фирм “Вектор-Бест” и “Ольвекс” (Россия)
в сыворотке крови определяли концентрацию
общего ХС, ХС, липопротеинов высокой плотности
(ЛПВП) и триацилглицеридов (ТАГ), а также
содержание ТБК (тиобарбитуровая кислота)
активных продуктов [1].
Статистически результаты обрабатывали на
персональном компьютере по специализированным
программам. Для определения достоверности
данных использовали непараметрический метод
статистического анализа Манна-Уитни.
Результаты и обсуждение
В послеоперационный период гибели животных
отмечено не было. Вместе с тем в течение первой
недели после хирургического вмешательства
наблюдалось значительное снижение массы тела,
подвижности и некоторое ухудшение качества
шерстного покрова кроликов как эксперимен-
тальной, так и контрольной групп. В течение 2-3
суток после операции отмечался отказ от пищи. К
21-м суткам масса тела восстанавливалась, по
внешнему виду и поведенческим реакциям
состояние животных не отличалось от исходного.
Наблюдение за концентрацией в сыворотке
крови подопытных кроликов общего ХС показало
(рис. 1), что в контрольной группе животных в
течение первой недели после операции отмечается
значительное его повышение, причем особенно
резко на 5-е и 7-е сутки. Далее происходит его
медленное снижение до дооперационного уровня.
В группе животных, которым трансплантировали
криоконсервированные гепатоциты, концентрация
общего ХС в течение 2-7 суток после транс-
плантации оставалась неизменной, а в контрольной
группе наблюдалось ее резкое повышение. Далее
динамика изменения показателя в экспери-
ментальной и контрольной группах совпадала.
На рис. 2 представлена динамика изменения
содержания ХС ЛПВП после трансплантации
криоконсервированных гепатоцитов. В контрольной
группе она практически повторяет картину
изменения общего ХС. В группе, подвергшейся
трансплантации аллогепатоцитов, в пределах
недельного срока повышение концентрации ХС
ЛПВП наблюдается только на 5-е сутки (р<0,05
по сравнению с исходным уровнем). В дальнейшем
направленность изменений содержания ХС ЛПВП
в сыворотке крови животных после трансплан-
тации гепатоцитов практически совпадает с
таковой для общего ХС. Достоверных отличий по
сравнению с контролем на протяжении всего
периода наблюдения не выявлено.
0 1 2 3 4 5 6 7 14 21 28
0
1
2
3
4
5
6
7
8
*
Рис.1. Концентрация общего ХС в сыворотке крови
кроликов с экспериментальной ГХ после аллотрансплан-
тации криоконсервированных гепатоцитов: – норма;
– контроль; ▲ – криоконсервированные гепатоциты;
* – р<0,05 по сравнению с контролем.
Fig. 1. Concentration of total CS in blood serum of rabbits
with experimental HC after cryopreserved hepatocyte al-
lotransplantation: – norm; – control; ▲ – cryopreserved
hepatocytes;* - p<0.05 in comparison with the control.
Время, сут Time, days
ХС
, м
м
ол
ь/
л
C
S,
m
m
ol
/l
by special programs. The non-parametric method of
statistical analysis: Mann-Whitney test was used for
determining the data statistical truth.
Results and discussion
In a post-operative period no death in animals was
observed. However, during the first week after surgical
invasion there was observed a considerable decrease
in body mass, mobility and a certain worsening of the
hairy cover quality in rabbits of both experimental and
control groups. During 2-3 days after operation there
was noted a refusal of food. To the 21st day the body
mass was recovered, by the appearance and behaviour
reactions the state of animals did not differ from the
initial one.
The observation for total CL concentration in blood
serum of experimental rabbits demonstrated (Fig. 1),
that in the control group of animals during the first
week after operation there was noted its considerable
increase, moreover especially sharp to the 5th and 7th
days. Then its slow decrease down to a pre-operative
level occurs. In the group of animals, to which the
cryopreserved hepatocytes were transplanted, the total
CS concentration during 2-7 days after transplantation
remained without any change, but in the control group
its sharp increase was observed. Further the dynamics
of the index change in the experimental and control
groups coincided. The Fig. 2 shows the dynamics of
change in CL LHD after cryopreserved hepatocyte
transplantation. In the control group it practically
57ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №3
Изучение концентрации ТАГ в сыворотке крови
показало значительное снижение данного пара-
метра на протяжении первой недели в группе
животных, подвергнутых трансплантации криокон-
сервированных гепатоцитов. При этом в контроль-
ной группе животных значения данного показателя
хотя и претерпевали некоторые колебания, но
достоверных отличий от дооперационного уровня
все же не наблюдалось (рис.3). На 14-28-е сутки
после введения клеток печени содержание в
сыворотке ТАГ повышалось и достоверно не
отличалось ни от исходного, ни от значений в
контрольной группе.
Изучение интенсивности процессов ПОЛ,
оцененное по содержанию в сыворотке крови ТБК
активных продуктов, показало (рис.4), что в ответ
на оперативное вмешательство в контрольной
группе кроликов наблюдается значительное его
увеличение с пиком на 3-и сутки (р<0,01), после
чего отмечается постепенное снижение до
дооперационного уровня на 28-й день. Достоверное
повышение значения данного показателя по
сравнению с контролем в группе, которой транс-
плантировали криоконсервированные гепатоциты,
наблюдается только на 14-е сутки. Введение
криоконсервированных гепатоцитов приводит к
увеличению концентрации малонового альдегида
(МДА) в сыворотке крови уже на первые сутки
после трансплантации (р<0,01). Достаточно
0 1 2 3 4 5 6 7 14 21 28
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
Время, сут Time, days
Рис. 2. Концентрация ХС ЛПВП в сыворотке крови
кроликов с экспериментальной ГХ после аллогенной
трансплантации криоконсервированных гепатоцитов:
– норма; – контроль; ▲ – криоконсервированные
гепатоциты.
Fig. 2. Concentration of CS LHD in blood serum of rabbits
with experimental HC after cryopreserved hepatocyte allo-
genic transplantation: – norm; – control; ▲ – cryo-
preserved hepatocytes.
0 1 2 3 4 5 6 7 14 21 28
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
*
***
Рис.3. Концентрация ТАГ в сыворотке крови кроликов с
экспериментальной ГХ после аллотрансплантации
криоконсервированных гепатоцитов: – норма; –
контроль; ▲ – криоконсервированные гепатоциты. * –
р<0,05 по сравнению с контролем.
Fig. 3. Concentration of TAG in blood serum of rabbits with
experimental HC after cryopreserved hepatocyte allotrans-
plantation: – norm; – control; ▲ – cryopreserved
hepatocytes;* – p<0.05 in comparison with the control.
Время, сут Time, days
repeats the image of change in total CS. In the group,
subjected to the allohepatocyte transplantation, within
a week term, an increase in CS LHD concentration is
noted only to the 5th day (p<0.05 in comparison with
the initial level). Further the orientation of changes in
CS LHD content in blood serum of animals after
hepatocyte transplantation practically coincides with
that for total CS. During the whole observation period
no statistical and true differences in comparison with
the control were found.
The study of TAG concentration in blood serum
demonstrated a considerable reduction of this
parameter during all the first week in the group of animals,
subjected to the transplantation of cryopreserved
hepatocytes. At the same time in the control group of
animals the values of this index although underwent
some alterations, but nevertheless no statistical and
true differences from a pre-operative level were
observed (Fig. 3). To the 14th-28th days after introducing
liver cells the TAG content in serum increased and did
not statistically and truly differ either from the initial
one, or from the values in the control group.
The study of the intensity of LPO process,
estimated by the TBA-active products content in blood
serum, demonstrated (Fig. 4), that in response to an
operative invasion in the control group of rabbits there
was observed its considerable increase with the peak
to the 3rd day (p<0.01), afterwards a gradual decrease
down to a preoperative level to the 28th day was noted.
ХС
Л
П
ВП
, м
м
ол
ь/
л
C
S
LH
D
, m
m
ol
/l
ТА
Г,
м
м
ол
ь/
л
T
AG
, m
m
ol
/l
58ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №3
0 1 2 3 4 5 6 7 14 21 28
5
10
15
20
25
30
*
Рис.4. Концентрация ТБК-активных продуктов в
сыворотке крови кроликов с экспериментальной ГХ
после аллотрансплантации криоконсервированных
гепатоцитов: – норма; – контроль; ▲ – криокон-
сервированные гепатоциты; * – р<0,05 по сравнению с
контролем.
Fig. 4. Concentration of TBA-active products in blood se-
rum of rabbits with experimental HC after cryopreserved
hepatocyte allotransplantation: – norm; – control; ▲ –
cryopreserved hepatocytes;* – p<0.05 in comparison with
the control.
Время, сут Time, days
ТБ
К
ак
ти
вн
ы
е
пр
од
ук
ты
,
м
км
м
ол
ь/
л
TB
A
ac
tiv
e
pr
od
uc
ts
, µ
m
ol
/l
высокий уровень исследуемого параметра
сохраняется до 14-х суток включительно. На
21-28-е сутки происходит постепенное снижение
концентрации МДА, в конечном итоге достигая
исходного уровня.
Нами установлено, что в течение первой недели
после операции в сыворотке крови животных
контрольной группы происходит значительное
повышение концентрации общего ХС, ХС ЛПВП и
ТБК активных продуктов, при этом содержание
ТАГ остается неизменным. Трансплантация
криоконсервированных гепатоцитов препятствует
резкому повышению как общего ХС, так и ХС
ЛПВП (исключая 5-е сутки после трансплантации),
однако при этом в сыворотке крови наблюдаются
значительное повышение уровня ТБК активных
продуктов и резкое снижение концентрации ТАГ.
В более поздние сроки достоверных отличий
между экспериментальной и контрольной группами
практически не выявлено, все исследуемые
показатели плавно возвращаются к доопера-
ционным значениям.
Резкое повышение концентрации общего ХС,
происходящее в контрольной группе в течение
первой недели после хирургической операции (см.
рис. 1), явилось фактом неожиданным. Наиболее
богаты ХС ЛПНП, поэтому можно предположить,
что наблюдаемый эффект происходит именно за
счет повышения концентрации ЛПНП. Поскольку
концентрация ХС, входящего в состав ЛПВП,
известна (см. рис. 2), то можно утверждать, что
повышение концентрации общего ХС в течение
первой недели после ложной операции происходит
не за счет роста уровня ЛПВП. Отсутствие в
контрольной группе пропорционального возрастания
концентрации ТАГ исключает ведущую роль
липопротеинов очень низкой плотности в увеличе-
нии общего ХС, поскольку эта фракция на 50-70%
состоит именно из ТАГ. Исходя из этого, можно
говорить о том, что хирургическое вмешательство
на фоне экспериментальной ГХ (без трансплан-
тации клеток) приводит к повышению концентрации
двух фракций липопротеинов: ЛПНП и ЛПВП.
Следует отметить, что в гепатоцитах утилизирует-
ся основная часть обеих фракций липопротеинов
[15].
Можно предположить, что хирургическая
операция, являясь сильным стрессом, приводит к
нарушению способности печени утилизировать
липопротеины крови. Этот эффект, очевидно,
связан с тем, что клетки паренхимы печени
животных с экспериментальной ГХ имеют
значительные нарушения метаболизма [4].
Хирургическое вмешательство неизбежно
приводит к тканевым повреждениям, следствием
чего является развитие воспалительной реакции.
Statistical and true increase in this index value in
comparison with the control in the group, which the
cryopreserved hepatocytes were transplanted to, was
observed only to the 14th day. The introduction of
cryopreserved hepatocytes results in the augmentation
of malone dialdehyde (MDA) concentration in blood
serum even to the first 24 hrs after transplantation
(p<0.01). Up to the 14th day including a quite high level
of the studied parameter is kept. To the 21st-28th day a
gradual decrease in MDA concentration occurs, finally
achieving the initial level.
We found, that during the first week after operation
in blood serum of the control animal group a
considerable increase in the concentration of total CS,
CS LHD and TBA active products occurs, at the same
time the TAG content remains without any change.
The transplantation of cryopreserved hepatocytes
impedes a sharp increase in both total CS and CS LHD
(excluding the 5th day after transplantation), however
in this case a considerable augmentation of the TBA
active product level and a sharp reduction of TAG
concentration are observed in blood serum. No
statistical and considerable differences between
experimental and control groups were practically
59ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №3
С одной стороны, это может усиливать повреж-
дения измененной при формировании модели ГХ
печеночной паренхимы, а с другой - при участии
медиаторов воспаления функции гепатоцитов
могут переключаться на синтез белков острой
фазы [6].
Кроме того, трансплантированные гепатоциты
не могут функционировать полноценно, пока не
попадут в физиологичное микроокружение. Полная
интеграция донорских гепатоцитов в печеночную
паренхиму реципиента с формированием нормаль-
ных межклеточных контактов занимает не менее
3-х суток [11].
Известно также, что используемые нами
криоконсервированные клетки не могут немед-
ленно выполнять гепатоспецифические функции.
Для реабилитации клеток после низкотемпе-
ратурного консервирования и восстановления их
нормального метаболизма необходимо некоторое
время [9]. Вероятно, вышеперечисленные причины
и определяют отсутствие эффектов от введения
трансплантированных клеток в первые 3-е суток
после трансплантации.
Тот факт, что на 5-7-е сутки после трансплан-
тации концентрация общего ХС в опытной группе
ниже, чем в контрольной, вероятнее всего, связан
с функционированием трансплантированных
клеток, которые либо непосредственно осущест-
вляют захват ЛПНП, либо оказывают стимули-
рующее и регулирующее действие на печеночную
паренхиму реципиента. Следует отметить, что в
этот период происходит и снижение коэффициента
атерогенности, характеризующего степень риска
развития атеросклероза.
Согласно данным [3], при развитии модели
экспериментальной ГХ в микросомах печени
кроликов возрастает скорость ферментативного
генерирования липопероксидов, что изменяет
активность мембраносвязанных ферментов [3],
подавляет активность ключевого фермента
катаболизма ХС – 7α-холестерингидроксилазы [4].
Это приводит к усилению жирового перерождения
печени и к значительным нарушениям клеточного
метаболизма. При этом не происходит нарушений
в секреции липопротеинов, в связи с чем в кровь
животных могут поступать окисленные липопро-
теины. Перекисно-модифицированные липопротеи-
ны, в первую очередь ЛПНП, быстро теряют
сродство к рецепторам, ответственным за их
нормальное удаление из кровотока в связи со
структурными и конформационными изменениями
аполипопротеинов, входящих в их состав. Тем не
менее они быстро удаляются из кровотока
клетками ретикуло-эндотелиальной системы,
оказываясь вовлеченными в происходящий в
интиме сосудов каскад реакций, приводящих к
revealed in later terms, all the studied indices smoothly
revert to the preoperative values.
A sharp increase in the total CS concentration,
occurring in the control group during the first week
after surgical operation (see Fig. 1) was unexpected.
The LLD are the richest with cholesterol, therefore
we can suppose, that the observed effect occurs due
to an increase in LLD concentration. Since the
concentration of CS, being a part of LHD, is known
(see Fig. 2), we can state, that an increase in the total
CS concentration during the first week after pseudo-
operation occurs not due to the LHD level growth.
The absence in the control group of a proportional
increase in the TAG concentration excludes the leading
role of lipoproteins with a very low density in the
augmentation of total CS, because this fraction for 50-
70% consists namely of TAG. Proceeding from this,
we can speak about the fact, that surgical invasion at
the background of experimental HC (without cell
transplantation) results in an increase of the
concentration of two lipoprotein fractions: LLD and
LHD. It should be noted, that the main part of both
lipoprotein fractions is utilised in hepatocytes [15].
We can suppose that surgical operation, being a
strong stress, results in the disorders of liver capability
to utilise blood lipoproteins. This effect is evidently
related to the fact, that the liver parenchyma cells of
animals with experimental HC have considerable
metabolism disorders [4].
Surgical invasion inevitably leads to the tissue
damages, resulting in the development of inflammatory
reactions. On the one hand, this can strength the
damages of changed liver parenchyma during HC
model formation, on the other hand, when the
inflammation mediators take part, the hepatocyte
functions can be shifted towards the synthesis of acute
phase proteins [6].
In addition, the transplanted hepatocytes can not
integrally function until they get into a physiological
microenvironment. A complete integration of donor
hepatocytes into a recipient’s liver parenchyma with
formation of normal intercellular contacts takes not
less than 3 days [11].
It is also known, that the used by us cryopreserved
cells can not immediately accomplish the hepatospecific
functions. Some time is necessary for cell rehabilitation
after low temperature preservation and for recovering
their normal metabolism [9]. Probably, the mentioned
above reasons determine the absence of the effect
from the transplanted cell introduction during the first
3 days after transplantation.
The fact, that to the 5th-7th day after transplantation
the total CS concentration in the experimental group is
lower, than in the control group is probably related to
the functioning of transplanted cells, which either
directly accomplish the LLD capture, or cause a
60ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №3
развитию атеросклероза.
Параллельное повышение концентрации общего
ХС и ТБК-активных продуктов объясняется тем,
что основная часть ХС сыворотки крови сосредо-
точена в ЛПНП, а этот класс липопротеинов очень
беден антиоксидантами и легко подвергается
процессам перекисного окисления. Также возмо-
жен выброс окисленных ЛПНП непосредственно
печенью.
Результаты, полученные ранее в системе in vitro
[8] и представленные в работе в системе in vivo,
свидетельствуют о способности изолированных
гепатоцитов снижать содержание ХС в гипер-
холестеринемической сыворотке крови. При
трансплантации исследуемого материала в печень
реципиентов с экспериментальной ГХ отмечаемые
эффекты ограничиваются первой неделей наблю-
дения, вероятно, вследствие прекращения функцио-
нирования трансплантата.
Выводы
Таким образом, представленные эксперимен-
тальные данные позволяют оценивать криоконсер-
вированные изолированные гепатоциты как
биологический объект, способный оказывать
значительное регулирующее действие на липидный
обмен при экспериментальной ГХ.
Литература
Андреева Л.Н. Модификация метода определения
перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кисло-
той // Лаб. дело.– 1988.– №11.– С. 41-43.
Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопро-
теидов и его нарушения.– СПб, 1999.– 512 с.
Ланкин В.З. Биохимия липидов и их роль в обмене
веществ.– М., 1981.– С. 75-95.
Ланкин В.З., Вихерт А.М. Перекисное окисление липидов
в этиологии и патогенезе атеросклероза// Архив
патологии.– 1989.– Т.51, №1.– С. 80-85.
Лебединский А.С., Петренко А.Ю. Особенности выделе-
ния, криоконсервирования и аллогенной трансплантации
гепатоцитов кроликов // Пробл. криобиологии.– 2003.–
№1.– С. 51-58.
Нагорнев В. А., Назаров П. Г., Полевщиков В. А. и др.
Атерогенез и реакция “острой фазы” печени // Архив
патологии.– 1998.– №6.– C. 62-68.
Неменова Ю.М. Методы лабораторных клинических
исследований.– М., 1972.– 424 с.
Сукач А.Н., Лебединский А.С. Влияние изолированных
гепатоцитов на концентрацию атерогенных липопро-
теинов в сыворотке крови человека // Биол. вестник.–
1999.– Т.3, №1-2.– С. 33-35.
Borel Rinkes I.H., Toner M., Sheeha S.J., et al. Long-term
functional recovery of hepatocytes after cryopreservation
in a three-dimensional culture configuration // Cell Transplant.–
1992.– Vol.1, N4.– P. 281-292.
Eguchi S., Rozga J., Lebow L.T. et al. Treatment of hyper-
cholesterolemia in the Watanabe rabbit using allogeneic
hepatocellular transplantation under a regeneration stimulus //
Transplantation.– 1996.– Vol.15, N62(5).– P. 588-593.
stimulating and regulating effect on a recipient’s hepatic
parenchyma. It should be noted as well, that during
this period a decrease in the atherogeneity coefficient
occurs, characterising the risk degree of athero-
sclerosis development.
According to the data [3], at the development of
the model of experimental HC in rabbit’s liver
microsomes, there is an increase in the rate of
enzymatic generating of lipoperoxides, that changes
the activity of membrane-bound enzymes [3],
suppresses the activity of key enzyme of CS-7α-
cholesterol hydroxidase catabolism [4]. This results in
strengthening the liver fat degeneration and in the
considerable disorders of cellular metabolism. At the
same time no impairments in lipoprotein secretion
occur, due to this the oxidised lipoproteins can enter
into the animals’ blood. Peroxide-modified lipoproteins,
first of all, LLD, lose quickly the affinity to the receptors,
responsible for their normal removal from blood flow,
due to the structural and conformational changes of
apoliproteins, being their part. However, they are
quickly removed from blood flow by cells of
reticuloendothelial system, being involved in the
proceeding reaction cascade in the vessel intima,
leading to the atherosclerosis development.
The parallel increase in the total CS and TBA active
products concentration is explained by the fact, that
the main CS part of blood serum is concentrated in
LLD, and this class of lipoproteins is very poor of
antioxidants and is easily subjected to the lipid
peroxidation processes. The release of oxidised LLD
by liver itself is possible as well.
The recent results, obtained by us in the in vitro
system [8] and presented in this work in the in vivo
system testify to the capability of isolated hepatocytes
to reduce the CS content in hypercolesterolemic blood
serum.
When transplanting the studied material into
recipients’ liver with the experimental HC, the noted
effects are limited with the first observation week,
probably due to the transplant functioning ceasing.
Conclusions
Thus, the presented experimental data allow to
estimate the cryopreserved isolated hepatocytes as a
biological object, able to cause the considerable
regulating effect on lipid metabolism under
experimental HC.
References
Andreeva L.N. Modification of the method for determining lipid
peroxides in the test with thiobarbituric acid // Lab. Delo.–
1988.– N11.– P. 41-43.
Klimov A.N., Nikulcheva N.G. Lipid and lipoproteid metabolism
and its impairments.– Saint-Petersburg, 1999.– 512p.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10. 1.
2.
61ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №3
Guha C., Parashar Bh., Deb N. J. et al. Normal hepatocytes
correct serum bilirubin after repopulation of Gunn rat liver
subjected to irradiation/partial resection // Hepatology.– 2002.–
P. 354-362.
Gunsalus J.R., Brady D.A., Coulter S.M. et al. Reduction of
serum cholesterol in Watanabe rabbits by xenogeneic
hepatocellular transplantation // Nat Med. – 1997. – Vol.3, N1.–
P. 48-53.
Gupta S, Rajvanshi P, Sokhi R, et al. Entry and integration of
transplanted hepatocytes in rat liver plates occur by disruption
of hepatic sinusoidal endothelium // Hepatology.– 1999.–
Vol.29, N2.– P. 509-519.
Petrenko A.Yu., Sukach A.N. Isolation of intact mitochondria
and hepatocytes using vibration // Analytical Biochem.–
1991.– Vol.194, N2.– P. 326-329
Petrenko A.Yu., Sukach A.N., Grischuk V.P. et al. Separation
of intact and damaged hepatocytes in sucrose following non-
enzymatic liver perfusion // Cytotechnology.– 1995.– Vol.17.–
P. 127-131.
Pittman R.C., Steinberg D. Sites and mechanisms of uptake
and degradation of high density and low density lipoprotein //
J. Lipid Res.– 1984.– Vol.25.– P. 67-72.
Seglen P.O. Preparation of isolated rat liver cells // Meth. Cell
Biol.– 1976.– Vol.13. – P. 29-83.
Wiederkehr J.C., Kondos G.T., Pollak R. Hepatocyte
transplantation for the low-density lipoprotein receptor-
deficient state. A study in the Watanabe rabbit // Transplan-
tation.– 1990.– Vol.50, N3.– P. 466-471.
Поступила 9.09.2003
Lankin V.Z. Lipid biochemistry and their role in metabolism.–
Moscow, 1981.– P. 75-95.
Lankin V.Z., Vikhert A.M. Lipid peroxidation in etiology and
pathogenesis of atherosclerosis // Arkh. patol.– 1989.– Vol.51,
N1.– P. 80-85.
Lebedinsky A.S., Petrenko A.Yu. Peculiarities of isolation,
cryopreservation and allogenic transplantation of rabbit’s
hepatocytes // Problems of Cryobiology.– 2003.– N1.– P.51-58.
Nagornev V.A., Nazarov P.G., Polevschikov V.A. et al.
Atherogenesis and reaction of the liver “acute phase” // Arkh.
patol.– 1998.– N6.– P.62-68.
Nemenova Yu.M. Methods of laboratory clinical investiga-
tions.– Moscow, 1972.– 424 p.
Sukach A.N., Lebedinsky A.S. Effect of isolated hepatocytes
on the concentration of atherogenic lipoproteins in human
blood serum // Biologicheskiy vestnik.– 1999.– Vol.3, N1-2.–
P.33-35.
Borel Rinkes I.H., Toner M., Sheeha S.J., et al. Long-term
functional recovery of hepatocytes after cryopreservation
in a three-dimensional culture configuration // Cell Transplant.–
1992.– Vol.1, N4.– P. 281-292.
Eguchi S., Rozga J., Lebow L.T. et al. Treatment of hyper-
cholesterolemia in the Watanabe rabbit using allogeneic
hepatocellular transplantation under a regeneration stimulus //
Transplantation.– 1996.– Vol.15, N62(5).– P. 588-593.
Guha C., Parashar Bh., Deb N. J. et al. Normal hepatocytes
correct serum bilirubin after repopulation of Gunn rat
livesubjected to irradiation/partial resection // Hepatology.–
2002.– P. 354-362.
Gunsalus J.R., Brady D.A., Coulter S.M. et al. Reduction of
serum cholesterol in Watanabe rabbits by xenogeneic
hepatocellular transplantation // Nat Med. – 1997. – Vol.3, N1.–
P. 48-53.
Gupta S, Rajvanshi P, Sokhi R, et al. Entry and integration of
transplanted hepatocytes in rat liver plates occur by disruption
of hepatic sinusoidal endothelium // Hepatology.– 1999.–
Vol.29, N2.– P. 509-519.
Petrenko A.Yu., Sukach A.N. Isolation of intact mitochondria
and hepatocytes using vibration // Analytical Biochem.–
1991.– Vol.194, N2.– P. 326-329
Petrenko A.Yu., Sukach A.N., Grischuk V.P. et al. Separation
of intact and damaged hepatocytes in sucrose following non-
enzymatic liver perfusion // Cytotechnology.– 1995.– Vol.17.–
P. 127-131.
Pittman R.C., Steinberg D. Sites and mechanisms of uptake
and degradation of high density and low density lipoprotein //
J. Lipid Res.– 1984.– Vol.25.– P. 67-72.
Seglen P.O. Preparation of isolated rat liver cells // Meth. Cell
Biol.– 1976.– Vol.13. – P. 29-83.
Wiederkehr J.C., Kondos G.T., Pollak R. Hepatocyte
transplantation for the low-density lipoprotein receptor-
deficient state. A study in the Watanabe rabbit // Transplan-
tation.– 1990.– Vol.50, N3.– P. 466-471.
Accepted in 9.09.2003
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-138152 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T17:51:30Z |
| publishDate | 2003 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Лебединский, А.С. Петренко, А.Ю. Сукач, А.Н. 2018-06-18T09:59:12Z 2018-06-18T09:59:12Z 2003 Течение экспериментальной гиперхолестеринемии после аллотрансплантации криоконсервированных гепатоцитов / А.С. Лебединский, А.Ю. Петренко, А.Н. Сукач // Проблемы криобиологии. — 2003. — № 3. — С. 54–61. — Бібліогр.: 18 назв. — рос. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138152 616.153.922-092.4:616-089.843:615.361.36.018.1 В работе изучалось действие криоконсервированных гепатоцитов на обмен липидов при аллотрансплантации кроликам с экспериментальной гиперхолестеринемией (ГХ). Показано, что криоконсервированные изолированные гепатоциты способны оказывать значительное регулирующее действие на липидный обмен, однако отмеченные эффекты ограничиваются первой неделей наблюдения. У роботі вивчалася дія кріоконсервованих гепатоцитів на обмін ліпідів при алотрансплантації кролям з експериментальною гіперхолестеринемією. Показано, що кріоконсервовані ізольовані гепатоцити здатні спричиняти значну регулюючу дію на ліпідний обмін, але ефекти, що відзначаються, обмежені першим тижнем спостереження. The effect of cryopreserved hepatocytes on lipid metabolism under allotransplantation to rabbits with experimental hypercholesterolemia (HC) was studied in this work. It was demonstrated, that the cryopreserved isolated hepatocytes were capable to cause a significant regulatory effect on lipid metabolism, but the noted effects were limited by the first week of observation. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Теоретическая и экспериментальная криобиология Течение экспериментальной гиперхолестеринемии после аллотрансплантации криоконсервированных гепатоцитов Proceeding of Experimental Hypercholesterolemia After Cryopreserved Hepatocyte Allotransplantation Article published earlier |
| spellingShingle | Течение экспериментальной гиперхолестеринемии после аллотрансплантации криоконсервированных гепатоцитов Лебединский, А.С. Петренко, А.Ю. Сукач, А.Н. Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| title | Течение экспериментальной гиперхолестеринемии после аллотрансплантации криоконсервированных гепатоцитов |
| title_alt | Proceeding of Experimental Hypercholesterolemia After Cryopreserved Hepatocyte Allotransplantation |
| title_full | Течение экспериментальной гиперхолестеринемии после аллотрансплантации криоконсервированных гепатоцитов |
| title_fullStr | Течение экспериментальной гиперхолестеринемии после аллотрансплантации криоконсервированных гепатоцитов |
| title_full_unstemmed | Течение экспериментальной гиперхолестеринемии после аллотрансплантации криоконсервированных гепатоцитов |
| title_short | Течение экспериментальной гиперхолестеринемии после аллотрансплантации криоконсервированных гепатоцитов |
| title_sort | течение экспериментальной гиперхолестеринемии после аллотрансплантации криоконсервированных гепатоцитов |
| topic | Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| topic_facet | Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138152 |
| work_keys_str_mv | AT lebedinskiias tečenieéksperimentalʹnoigiperholesterinemiiposleallotransplantaciikriokonservirovannyhgepatocitov AT petrenkoaû tečenieéksperimentalʹnoigiperholesterinemiiposleallotransplantaciikriokonservirovannyhgepatocitov AT sukačan tečenieéksperimentalʹnoigiperholesterinemiiposleallotransplantaciikriokonservirovannyhgepatocitov AT lebedinskiias proceedingofexperimentalhypercholesterolemiaaftercryopreservedhepatocyteallotransplantation AT petrenkoaû proceedingofexperimentalhypercholesterolemiaaftercryopreservedhepatocyteallotransplantation AT sukačan proceedingofexperimentalhypercholesterolemiaaftercryopreservedhepatocyteallotransplantation |