Влияние криопротектора ПЭО-1500 и режимов обработки на асимметрию мембраны эритроцитов в процессе криоконсервирования
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Дата: | 2005 |
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2005
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138170 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Влияние криопротектора ПЭО-1500 и режимов обработки на асимметрию мембраны эритроцитов в процессе криоконсервирования / П.М. Зубов, Л.А. Бабийчук, В.В. Рязанцев, О.Л. Тимченко // Проблемы криобиологии. — 2005. — Т. 15, № 3. — С. 573–574. — Бібліогр.: 2 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-138170 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Зубов, П.М. Бабийчук, Л.А. Рязанцев, В.В. Тимченко, О.Л. 2018-06-18T10:21:48Z 2018-06-18T10:21:48Z 2005 Влияние криопротектора ПЭО-1500 и режимов обработки на асимметрию мембраны эритроцитов в процессе криоконсервирования / П.М. Зубов, Л.А. Бабийчук, В.В. Рязанцев, О.Л. Тимченко // Проблемы криобиологии. — 2005. — Т. 15, № 3. — С. 573–574. — Бібліогр.: 2 назв. — рос. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138170 547.422:577.115:615.014.4 ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Биологические особенности криоконсервированных клеток крови и их применение в медицине Влияние криопротектора ПЭО-1500 и режимов обработки на асимметрию мембраны эритроцитов в процессе криоконсервирования Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Влияние криопротектора ПЭО-1500 и режимов обработки на асимметрию мембраны эритроцитов в процессе криоконсервирования |
| spellingShingle |
Влияние криопротектора ПЭО-1500 и режимов обработки на асимметрию мембраны эритроцитов в процессе криоконсервирования Зубов, П.М. Бабийчук, Л.А. Рязанцев, В.В. Тимченко, О.Л. Биологические особенности криоконсервированных клеток крови и их применение в медицине |
| title_short |
Влияние криопротектора ПЭО-1500 и режимов обработки на асимметрию мембраны эритроцитов в процессе криоконсервирования |
| title_full |
Влияние криопротектора ПЭО-1500 и режимов обработки на асимметрию мембраны эритроцитов в процессе криоконсервирования |
| title_fullStr |
Влияние криопротектора ПЭО-1500 и режимов обработки на асимметрию мембраны эритроцитов в процессе криоконсервирования |
| title_full_unstemmed |
Влияние криопротектора ПЭО-1500 и режимов обработки на асимметрию мембраны эритроцитов в процессе криоконсервирования |
| title_sort |
влияние криопротектора пэо-1500 и режимов обработки на асимметрию мембраны эритроцитов в процессе криоконсервирования |
| author |
Зубов, П.М. Бабийчук, Л.А. Рязанцев, В.В. Тимченко, О.Л. |
| author_facet |
Зубов, П.М. Бабийчук, Л.А. Рязанцев, В.В. Тимченко, О.Л. |
| topic |
Биологические особенности криоконсервированных клеток крови и их применение в медицине |
| topic_facet |
Биологические особенности криоконсервированных клеток крови и их применение в медицине |
| publishDate |
2005 |
| language |
Russian |
| container_title |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| format |
Article |
| issn |
0233-7673 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138170 |
| citation_txt |
Влияние криопротектора ПЭО-1500 и режимов обработки на асимметрию мембраны эритроцитов в процессе криоконсервирования / П.М. Зубов, Л.А. Бабийчук, В.В. Рязанцев, О.Л. Тимченко // Проблемы криобиологии. — 2005. — Т. 15, № 3. — С. 573–574. — Бібліогр.: 2 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT zubovpm vliâniekrioprotektorapéo1500irežimovobrabotkinaasimmetriûmembranyéritrocitovvprocessekriokonservirovaniâ AT babiičukla vliâniekrioprotektorapéo1500irežimovobrabotkinaasimmetriûmembranyéritrocitovvprocessekriokonservirovaniâ AT râzancevvv vliâniekrioprotektorapéo1500irežimovobrabotkinaasimmetriûmembranyéritrocitovvprocessekriokonservirovaniâ AT timčenkool vliâniekrioprotektorapéo1500irežimovobrabotkinaasimmetriûmembranyéritrocitovvprocessekriokonservirovaniâ |
| first_indexed |
2025-11-26T03:13:19Z |
| last_indexed |
2025-11-26T03:13:19Z |
| _version_ |
1850609910186770432 |
| fulltext |
573ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 15, 2005, №3
УДК 547.422:577.115:615.014.4
Влияния криопротектора ПЭО-1500 и режимов обработки
на асимметрию мембраны эритроцитов в процессе
криоконсервирования
П.М. ЗУБОВ, Л.А. БАБИЙчУК, В.В. РЯЗАНЦЕВ, О.Л. ТИМчЕНКО
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Адрес для корреспонденции: Зубов П.М., Институт проблем
криобиологии и криомедицины НАН Украины, ул. Переяславская,
23, г. Харьков, Украина 61015; тел.:+38 (057) 373-31-26, факс: +38
(057) 373-30-84, e-mail: cryo@online.kharkov.ua
Мембрана эритроцитов структурно и функцио-
нально асимметрична. Существует выраженная
асимметрия расположения фосфолипидов: фосфа-
тидилхолин и сфингомиелин преимущественно
локализованы во внешнем монослое, а фосфати-
дилэтаноламин (ФЭА) и фосфатидилсерин (ФС)
располагаются во внутреннем [1]. Взаимо-
действия мембранного цитоскелета с фосфо-
липидным бислоем также вносят свой вклад в
стабилизацию асимметричного распределения ФС
в бислое. Полагают, что фосфолипиды ФЭА и ФС
взаимодействуют со спектрином, основным
белком цитоскелета и белками полосы 4.1 и 4.2.
Нарушение структурной организации этих белков
может привести к уменьшению взаимодействия
между фосфолипидами и белками, увеличению
скорости флип-флоп переходов и потере
асимметрии липидного бислоя, что приводит к
дестабилизации клеток [2]. В условиях криоконсер-
вирования клетки подвергаются множественным
генерализованным повреждениям и для мини-
мизации этих эффектов используются криопро-
текторы. Введение непроникающего криопро-
тектора ПЭО-1500 в клеточную суспензию может
вызывать целый ряд адаптивных перестроек в
клетках, позволяющих им выжить в процессе
криоконсервирования.
Таким образом, целью данной работы было
изучение влияния непроникающего криопротектора
ПЭО-1500 и режимов обработки на асимметрию
мембраны эритроцитов как на стадии экви-
либрации с криопротектором, так и после размора-
живания суспензии клеток.
Объектом исследования служили эритроциты
кордовой и донорской крови человека. Эритроциты
подвергались трехкратной отмывке от плазмы и
лейкоцитов в физиологическом растворе. Суспензия
эритроцитов была разделена на 3 группы: контроль;
эритроциты, к которым добавляли ПЭО-1500 при
низкой положительной температуре (PEO-cold);
эритроциты, к которым добавляли ПЭО-1500 при
комнатной температуре (PEO-warm).
Исследования были проведены методом
проточной цитофлуориметрии на проточном
цитометре FACS Calibur фирмы Becton Dickinson
(США) с использованием реактивов фирмы Becton
Dickinson. Для оценки числа эритроцитов с
нарушенной асимметрией мембраны использовали
набор Annexin V-FITC detection KIT I фирмы
Becton Dickinson (США) в соответствии с Annexin
V-FITC staining protocol. Сбор данных и анализ
осуществляли с использованием программного
обеспечения CELLQUEST (Becton Dickinson).Для
минимизации ошибки в пробе собирали 500000
событий.
Аннексин V – 35-36 кДа Са2+-зависимый
фосфолипидсвязывающий белок, который имеет
высокое сродство к фосфатидилсерину и свя-
зывается с клетками, экспрессирующими на
внешней стороне мембраны ФС. Анализ получе-
нных результатов показал, что группа контрольных
эритроцитов характеризовалась очень низким
процентом аннексин V+-клеток. Сравнение данного
показателя у эритроцитов кордовой и донорской
крови свидетельствует о более высоком проценте
аннексин V+-клеток кордовой крови по сравнению
с эритроцитами донорской крови (таблица).
Предобработка эритроцитов криопротектором
ПЭО-1500 приводит к увеличению числа аннексин
V+-клеток, что может быть связано со структур-
ными перестройками, вызванными действием
криопротектора на клетку. Обращает на себя
внимание тот факт, что обработка эритроцитов
ПЭО-1500 при PEO-warm приводит к более
выраженному связыванию аннексина V с ФС чем
при PEO-cold. Это может свидетельствовать о
большей степени нарушения асимметрии мембра-
ны при PEO-warm и указывать на возможное
повышение устойчивости эритроцитов на этапе
замораживания в случае «холодовой» обработки
клеток, где наблюдается минимальное нарушение
асимметрии.
Определение аннексин V+-клеток после
размораживания показало, что процент клеток с
экспонированным на внешней стороне мембраны
ФС практически не отличается от соответс-
твующих групп до криоконсервирования. Различия
в проценте аннексин V+-клеток в зависимости от
способа обработки криопротектором также
сохранялись. После деконсервации суспензии
эритроцитов наблюдался невысокий уровень
574ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 15, 2005, №3
Процент аннексин V+ клеток и гемолиз эритроцитов кордовой и донорской крови при разных режимах
обработки и после размораживания
кинчотсИ
вотицортирэ ьлетазакоП ьлортноK dloc-OEP mraw-OEP dloc-OEP еинавижаромаз
mraw-OEP
еинавижаромаз
яаводроKЌ
ьворк
VнискеннА + 1,0-60,0 61,0-1,0 4,0-2,0 2,0-1,0 4,0-2,0
зиломеГ ястеадюлбанеН ястеадюлбанеН ястеадюлбанеН 8,1-6,1 5,3-3,2
яаксроноД
ьворк
VнискеннА + 30,0-20,0 90,0-50,0 2,0-80,0 90,0-40,0 90,0-60,0
ЌзиломеГ ястеадюлбанеН ястеадюлбанеН ястеадюлбанеН 5,2-1,2 8,3-2,2
гемолиза (таблица), особенно у эритроцитов,
обработанных ПЭО при 0-4°С. Можно пред-
положить, что в первую очередь гемолизируют
аннексин V+ клетки. Подтверждением этому может
служить корреляция между уровнем аннексин V+-
клеток до замораживания и уровнем гемолиза
после оттаивания в зависимости от температурных
режимов предобработки эритроцитов. Из таблицы
четко видно, что процент аннексин V+-клеток и
гемолиз эритроцитов с холодовой предобработкой
ниже, чем при обработке при комнатной тем-
пературе.
Холодовая обработка эритроцитов ПЭО-1500 в
меньшей степени приводит к изменению локали-
зации ФС в мембране эритроцитов, что корре-
лирует с более низким уровнем гемолиза после
криоконсервирования по сравнению с эритро-
цитами, обработанными при комнатной температуре.
В процессе криоконсервирования с ПЭО-500 в
первую очередь, по-видимому, гемолизу под-
вергаются эритроциты, меченные аннексином V
до замораживания.
Литература
Boas F., Forman L., Beutler E. Phosphatidilserine exposure
and red cell viability in red cell aging and in hemolytic anemia //
PNAS.– 1998.– Vol 95.– Р. 3077-3081.
Jong K., Larkin S., Eber S. Hereditary spherocytosis and ellipto-
cytosis erythrocytes show a normal transbilayer phospholipid
distribution // Blood.– 1999.– Vol. 94, 1.– Р. 319-325.2.
1.
2.
|