Оценка жизнеспособности эмбрионов млекопитающих и эффективности технологии их криоконсервирования
Для исключения влияния разнокачественности эмбрионов на уровень оценки эффективности технологии их криоконсервирования применялся относительный показатель изменения жизнеспособности биообъекта – выживаемость. Использование количественного метода статистической обработки для оценки уровня жизнеспособ...
Saved in:
| Published in: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Date: | 2003 |
| Main Author: | |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2003
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138475 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Оценка жизнеспособности эмбрионов млекопитающих и эффективности технологии их криоконсервирования / Л.В. Горбунов // Проблемы криобиологии. — 2003. — № 4. — С. 35–40. — Бібліогр.: 6 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860026537100705792 |
|---|---|
| author | Горбунов, Л.В. |
| author_facet | Горбунов, Л.В. |
| citation_txt | Оценка жизнеспособности эмбрионов млекопитающих и эффективности технологии их криоконсервирования / Л.В. Горбунов // Проблемы криобиологии. — 2003. — № 4. — С. 35–40. — Бібліогр.: 6 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description | Для исключения влияния разнокачественности эмбрионов на уровень оценки эффективности технологии их криоконсервирования применялся относительный показатель изменения жизнеспособности биообъекта – выживаемость. Использование количественного метода статистической обработки для оценки уровня жизнеспособности эмбрионов млекопитающих и определения эффективности технологии их криоконсервирования дало возможность более чем вдвое снизить величину ошибки среднеквадратического отклонения по сравнению с общепринятым методом альтернативного варьирования.
Для вилучення впливу різноякісності ембріонів на рівень оцінки ефективності технології їх кріоконсервування використовувався відносний показник зміни життєздатності біооб’єкту – виживаність. Використання кількісного методу статистичної обробки для оцінки рівня життєздатності ембріонів ссавців і визначення ефективності технології їх кріоконсервування дало можливість більш ніж удвічі знизити величину помилки середньоквадратичного відхилення у порівнянні з загальновідомим методом альтернативного варіювання.
To exclude the effect of different quality for embryos on the rate of efficiency estimation as for their cryopreservation technology we propose a relative index for bioobject’s viability alteration, the survival. Using the quantitative method of statistical evaluation in estimation of mammals’ embryos viability rate and determining of the efficiency of their cryopreservation technology allowed to decrease the value of standard deviation error more than twice comparing with a standard method of alternate variation.
|
| first_indexed | 2025-12-07T16:50:03Z |
| format | Article |
| fulltext |
35ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №4
УДК 591.15.16
Оценка жизнеспособности эмбрионов млекопитающих
и эффективности технологии их криоконсервирования
Л.В. ГОРБУНОВ
Харьковский биотехнологический центр
Estimation of Mammalian Embryos Viability and Efficiency of Their
Cryopreservation Technology
GORBUNOV L.V.
Kharkov Biotechnology Centre
Для исключения влияния разнокачественности эмбрионов на уровень оценки эффективности технологии их
криоконсервирования применялся относительный показатель изменения жизнеспособности биообъекта – выживаемость.
Использование количественного метода статистической обработки для оценки уровня жизнеспособности эмбрионов
млекопитающих и определения эффективности технологии их криоконсервирования дало возможность более чем вдвое снизить
величину ошибки среднеквадратического отклонения по сравнению с общепринятым методом альтернативного варьирования.
Ключевые слова: жизнеспособность, сохранность, эффективность технологии криоконсервирования, качественный и
количественный методы оценки качества эмбрионов.
Для вилучення впливу різноякісності ембріонів на рівень оцінки ефективності технології їх кріоконсервування
використовувався відносний показник зміни життєздатності біооб’єкту – виживаність. Використання кількісного методу
статистичної обробки для оцінки рівня життєздатності ембріонів ссавців і визначення ефективності технології їх
кріоконсервування дало можливість більш ніж удвічі знизити величину помилки середньоквадратичного відхилення у порівнянні
з загальновідомим методом альтернативного варіювання.
Ключові слова: життєздатність, цілість, ефективність технології кріоконсервування, якісний і кількісний методи оцінки
якості ембріонів.
To exclude the effect of different quality for embryos on the rate of efficiency estimation as for their cryopreservation technology
we propose a relative index for bioobject’s viability alteration, the survival. Using the quantitative method of statistical evaluation in
estimation of mammals’ embryos viability rate and determining of the efficiency of their cryopreservation technology allowed to
decrease the value of standard deviation error more than twice comparing with a standard method of alternate variation.
Key words: viability, integrity, efficiency of cryopreservation technology, qualitative and quatitative methods of embryo quality
estimation.
UDC 591.15.16
Наиболее распространенный способ оценки
эффективности технологии криоконсервирования
эмбрионов млекопитающих основывается на
определении уровня сохранности деконсервиро-
ванного биообъекта. Этот показатель обычно
устанавливается по результатам визуальной оценки
морфологической целостности бластомеров
(повреждение зоны пелюцида, степень зернистос-
ти цитоплазмы и т.д.) после оттаивания и
культивирования эмбрионов. Жизнеспособными
считаются эмбрионы, у которых более 50%
бластомеров сохранили морфологическую целост-
ность и только такие эмбрионы пригодны для
последующей трансплантации сельскохозяйствен-
ным животным [5]. Показатель сохранности
зависит от доли эмбрионов отличного качества,
присутствующих в выборке. После деконсервиро-
вания качество некоторых эмбрионов изменяется
с отличного на хорошее, но их всё равно считают
сохранившимися. Для постановки метода иногда
используют эмбрионы удовлетворительного
Адрес для корреспонденции: Горбунов Л.В., Харьковский
биотехнологический центр, п.Кулиничи, Харьковский район,
Харьковская область, Украина 62404; тел.: +38 (0572) 95-31-66,
факс: +38 (0572) 95-31-66, e-mail: cryo@animal.kharkov.ua.
Address for correspondence: Gorbunov L.V. Kharkiv Biotechnology
Centre, Kulinichi, Kharkov Region, Ukraine 62404; tel.: +38 (0572)
953166, fax: +38 (0572) 953166, e-mail: cryo@animal.kharkov.ua.
The most spread method for estimation of efficiency
of mammals embryos cryopreservation technology is
based on the determining of integrity value of frozen-
thawed object. Usually this index is found basing on
the results of a visual observation of blastomeres
integrity (damaging of zona pelucida, extent of
cytoplasm granulation, etc.) after embryo thawing and
cultivation. As viable embryos one considers the cells
with more than 50% morphologically integral
blastomeres, only these embryos are suitable for further
transplantation to farm animals [3]. Integrity index
depends on a share of “excellent” quality embryos,
being in a sample. After freeze-thawing the quality of
some embryos changes from “excellent” to “good”
one, but they are considered as integral ones.
Sometimes one uses for elaboration of a method the
embryos of “satisfactory” quality and considers them
as the ones preserving their integrity after freeze-
thawing.
It is obvious, that using the various criteria for
estimation of frozen-thawed embryos integrity leads
36ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №4
качества и причисляют их к сохранившимся после
криоконсервирования. Очевидно, что применение
различных критериев оценки сохранности декон-
сервированных эмбрионов приводит к искажению
оцениваемой технологии криоконсервирования.
Биологическая разнокачественность эмбрионов,
обусловленная получением биообьекта от разных
видов и пород животных с различными условиями
кормления и содержания, может влиять на
показатель его сохранности. Применение контроль-
ной группы частично решает данную проблему.
Однако это приводит к значительному увеличению
количества используемых эмбрионов. Для получе-
ния достоверного результата при традиционных
качественных методах оценки жизнеспособности
необходимо от нескольких десятков до сотен
полноценных эмбрионов [3]. Высокая стоимость
одного эмбриона (крупного рогатого скота не менее
30 усл.ед.) является существенной проблемой
оптимизации технологии криоконсервирования.
Цель данной работы – разработка количествен-
ного метода оценки жизнеспособности эмбрионов
млекопитающих и эффективности технологии их
криоконсервирования, повышающего точность
определения этих параметров в 2 и более раза.
Материалы и методы
Криоконсервирование эмбрионов при медлен-
ных скоростях проводили в устройстве, основанном
на пассивном охлаждении термоблока в горловине
сосуда Дьюара, которое позволяет реализовать
среднюю скорость замораживания 0,3°С/мин.
В качестве биообъекта использовали эмбрионы
крупного рогатого скота и мыши на стадии ранняя
морула-расширенная бластоциста. Все манипуля-
ции с биообъектом – поиск, отмывание и подготов-
ку к экспериментам проводили по общепринятым
методикам [5]. Жизнеспособность нативных и
деконсервированных эмбрионов оценивали по их
способности к развитию до следующей стадии в
культуре [3].
Результаты и обсуждение
Уменьшить количество эмбрионов (на стадии
развития от ранней морулы до расширенной
бластоцисты), необходимых для проведения
исследования, можно посредством перехода от
качественного (5-балльного) метода оценки
эмбрионов к количественному (численному) [1].
Жизнеспособность S совокупности нативных,
деконсервированных и культивируемых эмбрионов
различного качества предложено определять по
формуле:
∑∑
==
=
k
i
i
k
i
ii nhСS
11
, (1)
to a distortion of estimated cryopreservation technology
index.
Various biological quality of embryos, resulted from
delivery of objects from various animal species with
different feeding and maintaining conditions, could
affect the value of their integrity. The applying of
control group solves this problem partially. However
this leads to a considerable increase in the number of
embryos used. To obtain the statistically true result
with the traditional qualitative methods of viability
estimation it is necessary to use several dozens to
hundreds of high value embryos [3]. A high cost of
one embryo (e.g. for cattle it makes not less than 30
USD) is an considerable problem for optimisation of
cryopreservation technology.
The aim of this study is to develop a quantitative
method for estimation of mammals embryos viability
and efficiency of cryopreservation technology for them,
which would increase the accuracy of these
parameters determining by two and more times.
Materials and methods
Embryos’ cryopreservation was performed at low
cooling rates in a device, based on a passive cooling of
thermal block in Dewar vessel neck. This device allows
to realise an average cooling rate of 0.3°C/min [6].
As a bioobject we used cattle and mice embryos at
the stage of early morula-extended blastocyst. All the
manipulations with bioobject (searching, washing-out
and preparing for experiments) were performed
according to standard methods [5]. Viability of native
and frozen-thawed embryos was assessed by its ability
for development up to the next stage in culture [3].
A decrease in the number of embryos (at the
development stage of early morula to extended
blastocyst), necessary for conducting the investiga-
tions, is possible to reach by means of transition from
a qualitative method (5 point scale) of embryos
evaluation to a quantitative (numerical) one [1].
Viability, S, of total group of native, frozen-thawed
and cultured embryos of various quality is proposed to
be determined by the formula:
∑∑
==
=
k
i
i
k
i
ii nhСS
11
, (1)
where k is the number of embryos’ groups of various
quality (the excellent, good and satisfactory ones); i is
the group number; ni is the number of native embryos
of the quality in each group; hi is the number of
embryos of certain quality after freeze-thawing or
culturing (when estimating the integrity of native
embryos, h=n, and of frozen-thawed or cultured h≠n);
Ci is the integrity index (ability to develop) of embryos
of the quality, and it is established from the results of a
short-term culturing by the following formula:
37ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №4
где k – количество групп эмбрионов различного
качества (отличного, хорошего, удовлетво-
рительного); i – номер группы; ni – количество
нативных эмбрионов данного качества в каждой
группе; hi – количество эмбрионов определенного
качества после замораживания или культивирова-
ния (при оценке сохранности нативных эмбрионов
h=n, деконсервированных или культивированных
h≠n); Сi – показатель сохранности (способности к
развитию) эмбрионов заданного качества, устанав-
ливается по результатам краткосрочного культи-
вирования по формуле:
( ) %100⋅= nnС кi , (2)
где n – количество нативных эмбрионов опреде-
ленного качества; nк – количество культиви-
руемых эмбрионов (прошедших следующий этап
дробления) заданного качества.
Чтобы исключить влияние разнокачественности
эмбрионов на уровень оценки эффективности
технологии их криоконсервирования и составляю-
щих ее операций, в частности культивирования,
рекомендуется применять относительный показа-
тель изменения жизнеспособности биообъекта –
выживаемость:
( ) %100⋅= nd SSW , (3)
где Sn и Sd – показатели жизнеспособности
нативных и деконсервированных или культивиро-
ванных эмбрионов, вычисленные по формуле (1).
Очевидно, что показатель сохранности эмбрио-
нов может изменяться в широких пределах, так
как зависит от стадии их развития, качества,
условий проведения культивирования, вида живот-
ного, от которого они получены, и других факторов.
По данным [3] для эмбрионов крупного рогатого
скота на стадии развития от ранней морулы до
расширенной бластоцисты (n=581) показатель
сохранности составляет: для эмбрионов отличного
и хорошего качества – 85,0±2,0%, удовлетво-
рительного – 70,0±4,9%, неудовлетворительного –
30,0±9,5% и для дегенерированных эмбрионов –
5,0±1,9% (рисунок). Исходя из наших исследований,
максимальное отклонение данного показателя для
эмбрионов мыши и крупного рогатого скота может
составлять: отличного качества 100÷90, хороше-
го – 90÷80, удовлетворительного – 80÷60 и неудов-
летворительного – 60÷20%.
Максимальная величина разброса доверитель-
ного интервала для эмбрионов отличного, хорошего,
удовлетворительного и неудовлетворительного
качества (95±5, 85±5, 70±10, 40±20% соответствен-
но) дает возможность оценить среднюю величину
жизнеспособности совокупности эмбрионов, полу-
ченных от разных животных и имеющих различное
качество и стадию развития. Однако степень ва-
Зависимость показателя сохранности нативных эмбрио-
нов крупного рогатого скота (А) и мыши (В)от их
качества: 1 – дегенерирующего; 2 – неудовлетвори-
тельного; 3 – удовлетворительного; 4 – хорошего; 5 –
отличного.
Dependence of native embryo integrity of cattle (A) and
mice (B) on their quality: 1 – degenerating; 2 – unsatisfac-
tory; 3 – satisfactory; 4 – good; 5 – excellent.
1 2 3 4 5
2
1
100
90
80
70
60
50
40
30
20
A
B
( ) %100⋅= nnС кi , (2)
where n is the number of native embryos of a certain
quality; nk is the number of cultured embryos of the
quality (which have passed the next cleavage stage).
To exclude the influence of various quality of
embryos to the level of estimation of the efficiency of
their cryopreservation technology and its integral parts,
in particular, culturing, it is recommended to apply a
relative index of bioobject viability alteration, the
survival:
( ) %100⋅= nd SSW , (3)
where Sn and Sd are the viability values of native and
frozen-thawed or cultivated embryos, calculated by the
formula (1). It is obvious, that embryos integrity value
may alter within wide limits, since it depends on the
stage of their development, quality, culturing conditions,
species of donor animals, and other factors. According
to the data of the paper [3] the integrity value for cattle
embryos at the development stage of early morula to
extended blastocyst (n=581) made 85.0±2.0% for
embryos of excellent and good quality, 70.0±4.9% for
the ones of satisfactory quality, and 30.0±9.5 for the
ones with unsatistactory quality, and 5.0±1.9% for
degenerated embryos (Figure). Proceeding from our
investigations, the maximum deviation of this index for
mice and cattle embryos can make 100÷90, 90÷80,
Номер группы Group number
С
ох
ра
нн
ос
ть
, %
In
te
gr
ity
, %
38ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №4
риации показателя сохран-
ности, характеризующего
жизнеспособность кон-
кретного эмбриона, может
влиять на точность оценки
относительного и абсолют-
ного показателей жизне-
способности совокупности
биообъектов.
Так как относительная
величина погрешности вы-
числения отдельных иссле-
дуемых параметров может
превышать допустимый
уровень (5%), то необхо-
димо уточнить показатель
сохранности эмбриона мле-
копитающего с учетом его
йымеуделссИ
ртемарап
retemarapdeidutS
акогончилзарвоноирбмэитсоннархосикнецоаничилевяамитсупоД %,Савтсеч
%,CytilauqsuoiravfosoyrbmerofnoitamitseytirgetnifoeulavelbissimdA
огончилто
tnelecxe
огешорох
doog
-ировтелводу
огоньлет
yrotcafsitas
-ировтелводуен
огоньлет
yrotcafsitasnu
ьтсонбосопсензиЖ
ytilibaiV 4± 3± 3± 2±
ьтсомеавижыВ
lavivruS 5± 5± 5±
5±
Таблица 1. Точность оценки показателей сохранности эмбрионов
млекопитающих различного качества, необходимая для получения достоверного
результата α≤5%
Table 1. Accuracy in integrity estimation for mammalin embryos of various quality,
which is necessary for obtaining the statistically true result, α≤5%
80÷60 and 60÷20 for embryos of excellent, good,
satisfactory and unsatisfactory quality, correspondingly.
Maximum value of dispersion of confidence interval
for embryos of excellent, good, satisfactory and unsatis-
factory quality (95±5, 85±5, 70±10 and 40±20%,
correspondingly) allows to estimate the average value
of viability of total embryos, derived from different
animals and being of various quality and development
stage. However, the variability extent of viability index,
characterising the viability of certain embryo, could
affect the accuracy of estimation of relative and
absolute value of bioobject viability.
Since the relative value of calculation error of some
studied parameters could exceed the admissible value
(5%), it is necessary to specify the mammal embryo
integrity index with considering its development stage,
quality and animal species according to the results of
short-term culturing. Admissible values of confidence
intervals when determining the average indices of
studied integrity parameters, estimated at various
stages of conducted biotechnological operations, are
presented in Table 1.
Integrity index of total embryos should be deter-
mined with an accuracy of 3% for obtaining of
statistically true value of viability, and 5% for survival.
Since the relative error of calculation of viability and
survival indices made less than 5%, the increase of
accuracy of visual estimation of certain embryo
integrity is possible with its video recording and further
making digital and transforming into a computer record.
The use of quantitative indices of embryo viability
and survival allow the applying of a quantitative method
of statistical evaluation [2], that promotes the decrease
of value of root mean square deviation error (m) by
several times and when obtaining the significant result
decreases the number of embryos, used in experiment.
Efficiency of different methods for evaluation of
cryopreservation technology could be analysed on the
example of freezing of mice embryos in various
стадии развития, качества и вида животного по
результатам краткосрочного культивирования. До-
пустимые величины доверительных интервалов
при определении средних показателей исследуе-
мых параметров сохранности, оцененные на раз-
личных этапах проведения биотехнологических
операций, представлены в табл. 1.
Показатель сохранности совокупности эмбрио-
нов должен быть определен с точностью до 3%
для получения достоверного значения жизне-
способности и до 5% – выживаемости. Поскольку
именно при таких условиях относительная
погрешность вычисления показателей жизне-
способности и выживаемости составляет меньше
5%, то повысить точность визуальной оценки
уровня сохранности конкретного эмбриона можно
посредством его видеофиксации с последующей
оцифровкой видеоизображения и записью на ЭВМ.
Использование количественных показателей
жизнеспособности и выживаемости эмбрионов
дает возможность применять количественный
метод статистической обработки [2], что способ-
ствует снижению величины ошибки среднеквад-
ратического отклонения (m) в несколько раз и при
получении достоверного результата значительно
уменьшает количество эмбрионов, используемых
в опыте.
Эффективность различных способов оценки
технологии криоконсервирования можно проанали-
зировать на примере замораживания эмбрионов
мыши в различных контейнерах в устройстве,
основанном на пассивном остывании термоблока
в горловине сосуда Дьюара (табл. 2) [6]. Количес-
тво эмбрионов отличного, хорошего и удовлет-
ворительного качества в соломинках (пробирках)
до замораживания составило 33 (42), 35 (20), 0 (0),
после оттаивания – 18 (40), 40 (18), 10 (4), а после
культивирования – 15 (37), 36 (16), 17 (9) соот-
ветственно.
39ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №4
ыноирбмЭ
soyrbmE
яинавижаромазииголонхетитсонвиткеффэилетазакоП
%,m±М
%,m±М,ycneiciffeygolonhcetgnizeerffosecidnI
ьтсоннархоС
ytirgetnI
ьтсонбосопсензиЖ
ytilibaiV
ьтсомеавижыВ
lavivruS
еыннечулопежевС
detalosiylhserF
0,0±001
)0,0±001(
6,0±8,19 с
6,0±9,98( d)
-
-
еыннаворивреснокеД
dewahT
1,3±6,39 а
3,4±3,58( а)
5,0±5,09 d
6,0±4,58( e)
6,0±6,89 k
7,0±1,59( h)
К еыннаворивитьлу
detavitluC
5,4±5,58 а
3,5±0,57( b,а )
1,1±8,88 i
3,1±5,38( l)
8,0±8,69 m
8,0±9,29( n)
Показателями оценки способа замораживания
эмбрионов в пластиковых соломинках (V=200 мкл)
и пробирках Уленгута (V=750 мкл) являлись
общепринятый метод вычисления сохранности
биообъекта и предлагаемый, основанный на опре-
делении жизнеспособности и выживаемости эм-
брионов на различных этапах проведения процесса
криоконсервирования. Сохранность эмбрионов и
ошибку ее среднеквадратического отклонения m
оценивали качественным методом (альтернатив-
ное варьирование) [4]:
n
CCm )100( −= . (4)
Ошибка среднеквадратического отклонения (m)
для оценки среднего показателя (М) жизне-
способности и выживаемости вычислялась по
общепринятому методу количественного анализа [4]:
)1(
)(
1
2
−
−
=
∑
=
nn
MM
m
n
i
i
, (5).
Величины сохранности деконсервированных
эмбрионов, замороженных в соломинках (n=68) и
пробирках (n=62), оцененные по результатам
краткосрочного культивирования, не дают досто-
верности различия р>0,1 (td=1,5). По показателям
жизнеспособности и выживаемости для указанных
контейнеров получено значимое различие р<0,01
(td=3,1 и td=3,4 соответственно).
containers and in device, based on the
passive cooling of thermal block in
Dewar vessel neck (Table 2) [6].
Number of embryos of excellent, good
and satisfactory quality in straws
(tubes) before freezing made 33 (42),
35 (20), 0 (0), after thawing this made
18 (40), 40 (18), 10 (4), and after
culturing the value made 15 (37), 36
(16) and 17 (9), correspondingly.
The indices for estimation of em-
bryos freezing method in plastic
straws (V=200 mcl) and Uhlenhuth’s
tubes (V=750 mcl) were the standard
method of bioobject viability estimation
and the one proposed by us, based on
the determining of viability and survival
of embryos on different stages of
cryopreservation process. Embryos’
viability and its SD error, m, was esti-
mated by qualitative method (alternate
Таблица 2. Способы оценки эффективности технологии замораживания
эмбрионов мыши в соломинке n=68 (в пробирке Уленгута n=62)
Table 2. Efficiency estimation for technology of freezing of mice embryos in
straws n=68 (in Uhlenhuth’s tubes n=62)
variation) [4]:
n
CCm )100( −= . (4)
SD error, m, for estimation of viability and survival
mean value, M, was calculated with standard method
of quantitative analysis [4].
)1(
)(
1
2
−
−
=
∑
=
nn
MM
m
n
i
i
. (5)
Integrity values of frozen-thawed embryos, frozen
in straws (n=68) and tubes (n=62), estimated on results
of a short-term culturing, do not show the significant
difference, p>0.1 (td=1.5). For viability and survival
indices for the mentioned containers we observed the
significant difference, p<0.01 (td=3.1 and td=3.4,
correspondingly).
Multiple decrease of SD error value in proposed
method of studied indices estimation significantly
increases the method sensibility and as a result it allows
to diminish the embryos’ number, essential for obtaining
of statistically true result. The using of relative index
of survival neutralises the problem of influence of
embryos’ various quality on outcome of compared
cryopreservation methods. In addition the evaluation
of cryopreservation technology in a whole, there is a
possibility of revealing its separate stages. Survival of
frozen-thawed embryos, found by viability indices ratio
before and after culturing, makes 98.2±0.8 and
Примечание: одинаковыми суперскриптами обозначены величины, не имеющие
достоверности различия – а:а p>0,1, и разными – имеющие различие с высоким
уровнем значимости – c:d p<0,02; i:l, k:h, m:n p<0,01; d:e p<0,001.
Note: the same superscripts are in valiues without significant differences – а:а p>0.1,
and different superscripts are in values with highly significant differences – c:d p<0.02;
i:l, k:h, m:n p<0.01; d:e p<0.001.
40ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №4
97.7±0.9 for straws and tubes, correspondingly.
Relatively close results for survival, 97.6±2.6% of native
embryos in culture, testify to a similar performing of
bioobject cultivation (td=0.4, p>0.32).
Conclusions
Relative index of the change in bioobject viability
(survival) considerably decreases the effect of
different quality of embryos on the estimation rate of
cryopreservation technology efficiency.
The use of quantitative indices for viability and
survival of embryos contributes to decease of SD error,
m, by several times and significantly diminishes the
amount of used in experiment embryos with a precon-
dition of statistically true result.
Многократное уменьшение величины ошибки
среднеквадратического отклонения, полученное
при предложенном способе оценки исследуемых
показателей, значительно повышает чувствитель-
ность метода и, как следствие, позволяет много-
кратно снизить количество эмбрионов, необхо-
димых для получения достоверного результата.
Использование относительного показателя выжи-
ваемости снимает проблему влияния разнокачест-
венности биообъекта на результат сравниваемых
способов криоконсервирования. Помимо оценки
уровня технологии криоконсервирования в целом,
существует возможность установления эффектив-
ности её отдельных этапов. Выживаемость декон-
сервированных эмбрионов, определенная по соот-
ношению показателей их жизнеспособности до и
после культивирования, составляет для соломинок
98,2±0,8% и пробирок 97,7±0,9%. Относительно
близкие показатели выживаемости (97,6±2,6%)
нативных эмбрионов (n=26) в культуре свидетель-
ствуют об одинаковом уровне проведения культи-
вирования биообъектов (td=0,4, p>0,32).
Выводы
Относительный показатель изменения жизне-
способности биообъекта (выживаемость) сущест-
венно снижает влияние разнокачественности
эмбрионов на уровень оценки эффективности
технологии их криоконсервирования.
Использование количественных показателей
жизнеспособности и выживаемости эмбрионов
способствует снижению величины ошибки средне-
квадратического отклонения m в несколько раз и
значительно уменьшает количество эмбрионов,
используемых в опыте, при условии получения
достоверного результата.
Литература
Горбунов Л.В., Бугров О.Д., Горбунова Н.І. Спосіб оцінки
ефективності проведення біотехнологічних операцій, які
пов’язані з кріоконсервацією сперматозоїдів та ембріонів
ссавців // Вісник Білоцерків. держ. аграрного ун-ту.– Біла
Церква.– 2000.– №14.– С. 178-183.
Горбунов Л.В. Кількісний спосіб оцінки життєздатності
ембріонів ссавців // Вісник Білоцерків. держ. аграрного
ун-ту.– Біла Церква.– 2001.– №17.– С. 30-34.
Кауффольд П., Тамм И., Шихов И.Я. и др. Оценка
качества эмбрионов крупного рогатого скота: Руковод-
ство для работы по пересадке эмбрионов.– М.: Агропром-
издат.– 1990.– 56 с.
Лакин Б.Ф. Биометрия.– М.: Высш. школа, 1990.– 254 с.
Манк М. Биология развития млекопитающих.– М.: Мир,
1990.– 406 с.
А.с. 1802700А3 МКИ А61D 19/00. Установка для замора-
живания зародышей / Ф.И. Осташко, Н.Д. Безуглый,
Е.Г. Валигура, Л.В. Горбунов Заявлено 29.03.91. Опубл.
15.03.93. Бюл.№10.– С. 178.
Поступила 14.03.2003
1.
2.
3.
4.
5.
6.
References
Gorbunov L.V., Bugrov O.D., Gorbunova N.I. Method of
efficiency estimation for performing the biotechnological
operations, associated with cryopreservation of mammals
sperm and embryos // Visnyk Bilotserkiv. Derzh. Agrarnogo
Univ.– 2000.– N14.– P. 178-183.
Gorbunov L.V. Quantitative method for estimation of mammals
embryos viability // Visnyk Bilotserkiv. Derzh. Agrarnogo Univ.–
2001.– N17.– P. 30-34.
Kauffold P., Tamm I., Shikhov I.Ya. et al. Estimation of quality
of cattle embryos: Instruction manual for embryos
transplantation.– Moscow: Agropromizdat, 1990.– 56 p.
Lakin B.F. Biometry.– Moscow: Vysshaya shkola, 1990.–
254 p.
Mank M. Biology of mammals development.- Moscow: Mir,
1990.– 406 p.
Author’s certificate 1802700A3 ICI A61D19/00 Device for
embryos freezing / F.I. Ostashko, N.D. Bezugly, Ye.G. Valigura,
L.V. Gorbunov. Filed 29.03.91. Published 15.03.93. Bulletin
N10.– P. 178.
Accepted in 14.03.2003
1.
2.
3.
4.
5.
6.
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-138475 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T16:50:03Z |
| publishDate | 2003 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Горбунов, Л.В. 2018-06-19T07:28:42Z 2018-06-19T07:28:42Z 2003 Оценка жизнеспособности эмбрионов млекопитающих и эффективности технологии их криоконсервирования / Л.В. Горбунов // Проблемы криобиологии. — 2003. — № 4. — С. 35–40. — Бібліогр.: 6 назв. — рос. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138475 591.15.16 Для исключения влияния разнокачественности эмбрионов на уровень оценки эффективности технологии их криоконсервирования применялся относительный показатель изменения жизнеспособности биообъекта – выживаемость. Использование количественного метода статистической обработки для оценки уровня жизнеспособности эмбрионов млекопитающих и определения эффективности технологии их криоконсервирования дало возможность более чем вдвое снизить величину ошибки среднеквадратического отклонения по сравнению с общепринятым методом альтернативного варьирования. Для вилучення впливу різноякісності ембріонів на рівень оцінки ефективності технології їх кріоконсервування використовувався відносний показник зміни життєздатності біооб’єкту – виживаність. Використання кількісного методу статистичної обробки для оцінки рівня життєздатності ембріонів ссавців і визначення ефективності технології їх кріоконсервування дало можливість більш ніж удвічі знизити величину помилки середньоквадратичного відхилення у порівнянні з загальновідомим методом альтернативного варіювання. To exclude the effect of different quality for embryos on the rate of efficiency estimation as for their cryopreservation technology we propose a relative index for bioobject’s viability alteration, the survival. Using the quantitative method of statistical evaluation in estimation of mammals’ embryos viability rate and determining of the efficiency of their cryopreservation technology allowed to decrease the value of standard deviation error more than twice comparing with a standard method of alternate variation. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Теоретическая и экспериментальная криобиология Оценка жизнеспособности эмбрионов млекопитающих и эффективности технологии их криоконсервирования Estimation of Mammalian Embryos Viability and Efficiency of Their Cryopreservation Technology Article published earlier |
| spellingShingle | Оценка жизнеспособности эмбрионов млекопитающих и эффективности технологии их криоконсервирования Горбунов, Л.В. Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| title | Оценка жизнеспособности эмбрионов млекопитающих и эффективности технологии их криоконсервирования |
| title_alt | Estimation of Mammalian Embryos Viability and Efficiency of Their Cryopreservation Technology |
| title_full | Оценка жизнеспособности эмбрионов млекопитающих и эффективности технологии их криоконсервирования |
| title_fullStr | Оценка жизнеспособности эмбрионов млекопитающих и эффективности технологии их криоконсервирования |
| title_full_unstemmed | Оценка жизнеспособности эмбрионов млекопитающих и эффективности технологии их криоконсервирования |
| title_short | Оценка жизнеспособности эмбрионов млекопитающих и эффективности технологии их криоконсервирования |
| title_sort | оценка жизнеспособности эмбрионов млекопитающих и эффективности технологии их криоконсервирования |
| topic | Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| topic_facet | Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138475 |
| work_keys_str_mv | AT gorbunovlv ocenkažiznesposobnostiémbrionovmlekopitaûŝihiéffektivnostitehnologiiihkriokonservirovaniâ AT gorbunovlv estimationofmammalianembryosviabilityandefficiencyoftheircryopreservationtechnology |