Возможность использования продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса как корректора апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях
Изучена апоптотическая активность иммунокомпетентных клеток в экспериментальной модели ревматоидного артрита у мышей. Продемонстрирована возможность применения продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса (ПЭФПК) как модуляторов апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях (АИЗ). Вивчено а...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Дата: | 2003 |
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2003
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138482 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Возможность использования продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса как корректора апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях / А.Н. Гольцев, В.И. Грищенко, И.В. Рассоха, М.В. Останков // Проблемы криобиологии. — 2003. — № 4. — С. 41–48. — Бібліогр.: 15 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-138482 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Гольцев, А.Н. Грищенко, В.И. Рассоха, И.В. Останков, М.В. 2018-06-19T07:35:00Z 2018-06-19T07:35:00Z 2003 Возможность использования продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса как корректора апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях / А.Н. Гольцев, В.И. Грищенко, И.В. Рассоха, М.В. Останков // Проблемы криобиологии. — 2003. — № 4. — С. 41–48. — Бібліогр.: 15 назв. — рос. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138482 611.013.3/.8:576.367:616.72-002.77 Изучена апоптотическая активность иммунокомпетентных клеток в экспериментальной модели ревматоидного артрита у мышей. Продемонстрирована возможность применения продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса (ПЭФПК) как модуляторов апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях (АИЗ). Вивчено апоптотичну активність імунокомпетентних клітин в експериментальній моделі ревматоїдного артриту у мишей. Продемонстрована можливість застосування продуктів ембріофетоплацентарного комплексу як модуляторів апоптотичних процесів при аутоімунних захворюваннях. The authors have studied the activity of immune competent cells in an experimental model of rheumatoid arthritis in mice. There was demonstrated the possibility to apply the products of embryo fetoplacental complex (PEFPC) to modulate the apoptotic processes under autoimmune diseases (AIDs). Авторы выражают благодарность сотруднику института микробиологии и иммунологии им. Мечникова АМН Украины Колотовой Т.Ю. за методическую помощь. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Теоретическая и экспериментальная криобиология Возможность использования продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса как корректора апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях Possibility of Using the Embryo Fetoplacental Complex Products to Correct Apoptotic Processes under Autoimmune Diseases Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Возможность использования продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса как корректора апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях |
| spellingShingle |
Возможность использования продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса как корректора апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях Гольцев, А.Н. Грищенко, В.И. Рассоха, И.В. Останков, М.В. Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| title_short |
Возможность использования продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса как корректора апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях |
| title_full |
Возможность использования продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса как корректора апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях |
| title_fullStr |
Возможность использования продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса как корректора апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях |
| title_full_unstemmed |
Возможность использования продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса как корректора апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях |
| title_sort |
возможность использования продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса как корректора апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях |
| author |
Гольцев, А.Н. Грищенко, В.И. Рассоха, И.В. Останков, М.В. |
| author_facet |
Гольцев, А.Н. Грищенко, В.И. Рассоха, И.В. Останков, М.В. |
| topic |
Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| topic_facet |
Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| publishDate |
2003 |
| language |
Russian |
| container_title |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Possibility of Using the Embryo Fetoplacental Complex Products to Correct Apoptotic Processes under Autoimmune Diseases |
| description |
Изучена апоптотическая активность иммунокомпетентных клеток в экспериментальной модели ревматоидного артрита у мышей. Продемонстрирована возможность применения продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса (ПЭФПК) как модуляторов апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях (АИЗ).
Вивчено апоптотичну активність імунокомпетентних клітин в експериментальній моделі ревматоїдного артриту у мишей. Продемонстрована можливість застосування продуктів ембріофетоплацентарного комплексу як модуляторів апоптотичних процесів при аутоімунних захворюваннях.
The authors have studied the activity of immune competent cells in an experimental model of rheumatoid arthritis in mice. There was demonstrated the possibility to apply the products of embryo fetoplacental complex (PEFPC) to modulate the apoptotic processes under autoimmune diseases (AIDs).
|
| issn |
0233-7673 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138482 |
| citation_txt |
Возможность использования продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса как корректора апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях / А.Н. Гольцев, В.И. Грищенко, И.В. Рассоха, М.В. Останков // Проблемы криобиологии. — 2003. — № 4. — С. 41–48. — Бібліогр.: 15 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT golʹcevan vozmožnostʹispolʹzovaniâproduktovémbriofetoplacentarnogokompleksakakkorrektoraapoptotičeskihprocessovpriautoimmunnyhzabolevaniâh AT griŝenkovi vozmožnostʹispolʹzovaniâproduktovémbriofetoplacentarnogokompleksakakkorrektoraapoptotičeskihprocessovpriautoimmunnyhzabolevaniâh AT rassohaiv vozmožnostʹispolʹzovaniâproduktovémbriofetoplacentarnogokompleksakakkorrektoraapoptotičeskihprocessovpriautoimmunnyhzabolevaniâh AT ostankovmv vozmožnostʹispolʹzovaniâproduktovémbriofetoplacentarnogokompleksakakkorrektoraapoptotičeskihprocessovpriautoimmunnyhzabolevaniâh AT golʹcevan possibilityofusingtheembryofetoplacentalcomplexproductstocorrectapoptoticprocessesunderautoimmunediseases AT griŝenkovi possibilityofusingtheembryofetoplacentalcomplexproductstocorrectapoptoticprocessesunderautoimmunediseases AT rassohaiv possibilityofusingtheembryofetoplacentalcomplexproductstocorrectapoptoticprocessesunderautoimmunediseases AT ostankovmv possibilityofusingtheembryofetoplacentalcomplexproductstocorrectapoptoticprocessesunderautoimmunediseases |
| first_indexed |
2025-11-25T23:28:39Z |
| last_indexed |
2025-11-25T23:28:39Z |
| _version_ |
1850581334189146112 |
| fulltext |
41ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №4
УДК 611.013.3/.8:576.367:616.72-002.77
Возможность использования продуктов эмбриофетоплацентарного
комплекса как корректора апоптотических процессов при
аутоиммунных заболеваниях
А.Н. ГОЛЬЦЕВ, В.И. ГРИЩЕНКО, И.В. РАССОХА, М.В. ОСТАНКОВ
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Possibility of Using the Embryo Fetoplacental Complex Products to
Correct Apoptotic Processes under Autoimmune Diseases
GOLTSEV A.N., GRISCHENKO V.I., RASSOKHA I.V., OSTANKOV M.V.
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy
of Sciences of the Ukraine, Kharkov
Изучена апоптотическая активность иммунокомпетентных клеток в экспериментальной модели ревматоидного артрита у
мышей. Продемонстрирована возможность применения продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса (ПЭФПК) как
модуляторов апоптотических процессов при аутоиммунных заболеваниях (АИЗ).
Ключевые слова: апоптоз, ревматоидный артрит, продукты эмбриофетоплацентарного комплекса.
Вивчено апоптотичну активність імунокомпетентних клітин в експериментальній моделі ревматоїдного артриту у мишей.
Продемонстрована можливість застосування продуктів ембріофетоплацентарного комплексу як модуляторів апоптотичних
процесів при аутоімунних захворюваннях.
Ключові слова: апоптоз, ревматоїдний артрит, продукти ембріофетоплацентарного комплексу.
The authors have studied the activity of immune competent cells in an experimental model of rheumatoid arthritis in mice. There
was demonstrated the possibility to apply the products of embryo fetoplacental complex (PEFPC) to modulate the apoptotic
processes under autoimmune diseases (AIDs).
Key-words: apoptosis, rheumatoid arthritis, products of embryo fetoplacental complex.
UDC 611.013.3/.8:576.367:616.72-002.77
Ревматоидный артрит (РА), характери-
зующийся иммунологически обусловленным
воспалением, относится к наиболее тяжелым и
распространенным формам АИЗ. Несмотря на су-
ществование огромного количества антиревма-
тических препаратов на мировом фармацевти-
ческом рынке, а также на определенные успехи в
разработке различных схем по комбинированному
их применению, терапия РА является актуальной
проблемой.
В инициировании и поддержании аутоиммунного
процесса при РА принимают участие множество
факторов [9,15]. Одной из возможных причин
заболевания является дисрегуляция сигнальных
систем, обеспечивающих баланс между процес-
сами апоптоза и пролиферации. Действительно в
многоклеточном организме неотъемлемым
компонентом поддержания клеточного гомеостаза
выступает апоптоз, генетические и метабо-
лические нарушения которого вносят весомый
вклад в патогенез ряда патологий, в том числе и
РА [7]. На этом фоне отмечается инфильтрация
синовиальной оболочки лимфоцитами, моноци-
тами, плазматическими клетками, которые при
кооперативном взаимодействии высвобождают
Адрес для корреспонденции: Гольцев А.Н. Институт проблем
криобиологии и криомедицины НАН Украины,ул. Переяславская, 23,
г. Харьков, Украина 61015; тел.:+38 (057) 772-01-04, факс: +38 (057)
772-00-84, e-mail: cryo@online.kharkov.ua
Address for correspondence: Goltsev A.N., Institute for Problems
of Cryobiology&Cryomedicine of the Natl. Acad. Sci. of Ukraine,
23, Pereyaslavskaya str.,Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+38 (057)
7720104, fax: +38 (057) 7720084, e-mail:cryo@online.kharkov.ua
Rheumatoid arthritis (RA), characterising with
immunologically stipulated inflammation, is referred to
the most severe and widely spread forms of AIDs. In
spite of the existence of a large number of anti-
rheumatoid preparations on a world pharmaceutic
market, as well as certain successes in developing
different protocols on their combined application, RA
therapy is an actual task.
Many factors are engaged in initiation and
maintenance of autoimmune process at RA [9,15]. One
of possible causes of the disease is disregulation of
signal systems, providing the balance between the
processes of apoptosis and proliferation. Actually, in
multicellular organism the apoptosis acts as an integral
component. Its genetic and metabolic impairments
contribute greatly into pathogenesis of some
pathologies, including RA [7]. At this background there
was noted an infiltration of synovial membrane with
lymphocytes, monocytes, plasmatic cells, which under
co-operative interaction release the mediators,
provoking an inflammatory reaction and destruction
of tissues.
The data on intensity of apoptosis at RA are not
numerous and do not reflect a true picture of the
events, occurring with immune competent cells (ICCs)
42ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №4
медиаторы, провоцирующие воспалительную
реакцию и деструкцию тканей.
Данные об интенсивности апоптоза при РА
немногочисленны и не отражают истинной картины
событий, происходящих с иммунокомпетентными
клетками (ИКК) в условиях развития этой
патологии. Выяснение причин нарушений реали-
зации апоптоза при РА может иметь особую
значимость как в изучении патогенеза данного
заболевания, так и выборе стратегии его лечения.
Цель данной работы – определение взаимосвязи
между апоптотической активностью ИКК и
интенсивностью воспалительного процесса в
динамике развития РА до и после применения
ПЭФПК.
Материалы и методы
Эксперименты проведены на 3-месячных
мышах-самцах линии СВА массой 20-25 г.
Животные были разделены на 4 группы (в каждой
n=20). Контролем являлась 1-я группа интактных
животных. У мышей 2-, 3- и 4-й групп индуцировали
адъювантный артрит (АА) субплантарным
введением полного адъюванта Фрейнда (ПАФ).
Выбранная экспериментальная модель адекватна
клинической форме РА [8,11]. Животным 3- и 4-й
групп внутривенно вводили 0,2 мл соответственно
нативной и криоконсервированной суспензии
плаценты (НСП, КСП) мышей 19 суток гестации
с концентрацией белка 6 мг/мышь. Применение СП
предопределено ее потенциальной способностью
изменять цитокиновый профиль и в целом состоя-
ние иммунокомпетентной сферы реципиентов,
восстановливать баланс хелперно-супрессорного
звена иммунитета, искаженного при АИЗ [2].
Криоконсервирование СП проводили согласно [3].
Оценку интенсивности воспалительного процесса
при АА осуществляли по интегральному показа-
телю, а именно по динамике отека сустава,
который выражался как индекс артрита (отноше-
ние окружности опытного сустава к контрольному).
Для оценки тяжести течения АА был рассчитан
индекс суммарной степени отклонения пока-
зателей, который представляет собой сумму
отклонений исследуемых показателей в экспе-
риментальных группах животных от показателей
контрольной группы, принятых за 100%.
Для количественной оценки содержания
апоптотических клеток в тимусе, лимфоузлах,
региональных к месту введения ПАФ, и перито-
неальной полости (ПП) использовали апоп-
тотический индекс (АИ), который рассчитывали
по формуле [10]:
АИ= количество апоптотических клеток
общее количество клеток
× 100%
under development of this pathology. The revealing of
the causes of apoptosis realisation disorders at RA
can be of a special value both when studying the
pathogenesis of this disease and the selection of
strategy for its treatment.
The aim of this work was to determine the
relationship between apoptotic activity of ICCs and
the intensity of inflammatory process in the dynamics
of RA development before and after PEFPC
application.
Materials and methods
The experiments were carried out in 3-months’ CBA
male mice of 20-25g. The animals were divided into 4
groups (for each n=20). The control group was the 1st
one of intact animals. We induced the adjuvant arthritis
(AA) by subplantar injection of a complete Freund’s
adjuvant (CFA) in mice of 2nd, 3rd and 4th groups.
Chosen experimental model is adequate to RA clinical
form [8, 11]. Animals of the 3rd and 4th group were
intravenously injected with 0.2 ml, correspondingly, of
native and cryopreserved placenta suspension (NPS,
CPS) of 19 days’ gestation with the protein
concentration of 6 mg/mouse. Placenta suspension (PS)
application is pre-conditioned by its potential ability to
change cytokine profile and in an entire state of immune
competent sphere of recipients, to recover the balance
of helper-suppressor link of immunity, distorted at AIDs
[2]. PS cryopreservation was performed according to
the method [3]. The estimation of the intensity of
inflammatory process at AA was accomplished on an
integral index, namely on the dynamics of joint oedema,
which was expressed as arthritis index (ratio between
experimental joint circumference to the control one).
To estimate the severity of AA proceeding there was
calculated the index of total degree of parameter
deviation, which represents the sum of deviations of
the studied indices in experimental groups of animals
from those of the control group, assumed as 100%.
To qualitatively estimate the content of apoptotic
cells in thymus, lymph nodes in the region of CFA
injection site and peritoneal cavity (PC) we used in
apoptotic index (AI), which was calculated according
to the formula [10]:
АI= the number of apoptotic cells
total number of cells
× 100%
Apoptosis of PC cells was evaluated by the method
of light microscopy, allowing to reveal the morpho-
logical changes of this process (Fig. 1). To visualise
the nuclei of apoptotic cells in cells in thymus and
lymphocytes of regional lymph nodes the method of
luminescent analysis was applied. With this purpose
the tested cells were incubated with DNA-tropic dye,
Hoechst-33342 [10, 13]. Simultaneously with the
43ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №4
Апоптоз клеток ПП оценивали методом
световой микроскопии, позволяющим выявить
морфологические изменения данного процесса
(рис. 1). Для визуализации ядер апоптотических
клеток в тимусе и лимфоцитах региональных
лимфоузлов применяли метод люминесцентного
анализа. Для этого тестируемые клетки инкуби-
ровали с ДНК-тропным красителем – Хехст-33342
[10,13]. Параллельно с вышеуказанными метода-
ми для оценки апоптотических клеток был
применен также метод пульс-электорофореза,
который позволяет выявлять межнуклеосомную
фрагментацию ДНК [6,11]. Электрофоретическое
разделение фрагментов ДНК осуществляли в 1%-м
агарозном геле при напряжении 75 V с длитель-
ностью фореза 8 ч. Визуализацию результатов
разгонки ДНК проводили с помощью ультра-
фиолетовой лампы “Флускоп” с последующим
выведением информации на монитор через
видеокамеру “Panasonic”.
Экспрессию антиапоптотического белка Bcl-2
в клетках определяли методом люминесцентной
микроскопии с использованием антимышиных
моноклональных антител [14].
Оценку исследуемых показателей проводили на
7-е (острая фаза), 14-е и 21-е сутки (хроническая
фаза) после индукции патологии [8]. Полученные
результаты обрабатывали статистически с
применением критерия Стъюдента [1].
Результаты и обсуждение
Установлено, что после введения ПАФ у
животных на 7-,14- и 21-е сутки развития АА (2-я
группа) отмечается достоверное по сравнению с
контролем снижение количества Хехст+-клеток в
тимусе на 44±2,68; 47±1,8; 83±3,4% соответственно
и в лимфоцитах региональных узлов на 67±5,1;
36±2,6 и 66±3,5% соответственно (рис. 2). При
этом на фоне такого снижения содержания
Хехст+ -клеток наблюдается повышение уровня
содержания клеток, экспрессирующих белок Bcl-2, в
тимусе на 50±4,9; 25±1,8; 39±3,9% соответственно и
в лимфоцитах региональных узлов – на 78±6;
18±1,5; 36±2,9% соответственно. Данный факт
свидетельствует о том, что угнетение апоптоза в
тестируемых клетках при АА происходит на фоне
активации антиапоптотического каскада, что
подтверждается увеличением содержания в них
антиапоптического белка Bcl-2. Этот белок, как
известно, кооперируясь с различными онкогенами,
предотвращает апоптотическую гибель клеток,
ингибируя деградацию ДНК и проницаемость
мембран [7,14,15]. Возможно, по этой причине при
электрофорезе в геле фрагментации ДНК ти-
моцитов у животных с АА нами выявлено не было
(рис. 3).
Рис. 1. Апоптоз клеток перитонеальной полости (клетки
в апоптозе обозначены стрелками).
Fig. 1. Apoptosis of cells from peritoneal cavity (cells in
apoptosis are pointed by arrows).
mentioned above methods to estimate the apoptotic
cells there was applied as well the method of pulse-
electrophoresis, which allows of revealing the DNA
internucleosome fragmentation [6, 11]. Electrophoretic
separation of DNA fragments was accomplished in
1%-agarose gel at the voltage of 75 V, with the phoresis
duration of 8 hr. Visualisation of the results of DNA
separation was performed using “Fluskop” UV lamp
with further information presentation via “Panasonic”
video camera.
The expression of antiapoptotic protein Bcl-2 in cells
was investigated with the method of luminescent
microscopy using antimurine monoclonal antibodies
[14].
The assessment of studied indices was carried out
to the 7th (acute phase), 14th and 21st days (chronic
phase) after pathology induction [8]. The obtained
results were processed statistically using Student’s
criterion [1].
Results and discussion
CFA was established to cause a significant
decrease of Hoechst+ cells amount in thymus if
compared to the control to the 7th, 14th and 21st day of
development by 44±2,68; 47±1,8 and in lymphocytes
of regional lymphatic nodes by 67±5,1%, correspon-
dingly (Fig. 2). In this case at the background of such
a reduction of Hoechst cells’ content there have been
observed the increase of the level of the cells
expressing the Bcl-2 protein in thymus by 50±4.9;
25±1.8; 39±3.9% correspondingly. This fact testifies
that the apoptosis suppression in the cells tested at
AA occurs at the background of the antiapoptotic
cascade activation, that is confirmed by the increase
of Bcl-2 antiapoptotic protein. This protein is known
44ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №4
0
50
100
150
200
1 2 1 2 1 2
0
50
100
150
200
* *
*
*
0
50
100
150
200
1 2 1 2 1 2
0
50
100
150
200
*
*
*
*
*
*
0
50
100
150
200
1 2 1 2 1 2
0
50
100
150
200
*
*
*
*
*
Рис. 2. Динамика количества Хехст+-клеток и клеток,
экспрессирующих белок Bcl-2 при АА до и после
введения НСП и КСП: 1 – тимус; 2 – лимфоузлы; – АА;
– АА+НСП; – АА+КСП; * – различия достоверны при
Р<0,05 по сравнению с показателями контрольной
группы мышей, принятых за 100%.
Fig. 2. Dynamics in number of Hoehst+-cells and Bcl-2 pro-
tein expressing cells at AA before and after NPS and CPS
introduction: 1 – thymus; 2 – lymph nodes; – АА; –
АА+NPS; – АА+CPS; * – differences are statistically
true at P<0.05 in comparison with the indices of the control
group of mice, assumed for 100%.
После введения как НСП, так и КСП в течение
всего срока наблюдения имеет место стимуляция
апоптотических процессов, которая выражается в
повышении содержания Хехст+-клеток в иссле-
дуемых органах. Причем, как видно из рис. 2,
после лечения животных с адъювантным
артритом НСП (3-я группа) количество Хехст+-
клеток в тимусе на 7-е сутки наблюдения
увеличивается на 64% по сравнению с животными
2-й группы, а после введения КСП – на 24% (4-я
группа). Эти результаты коррелировали с данными
по электрофорезу, представленными на рис.3 и 4.
Как видно (рис. 3, а), однократное введение НСП
к 7-м суткам наблюдения вызывает фрагментацию
ДНК на низкомолекулярные фрагменты, ха-
рактеризующие завершающий этап апоптоза
[11,13]. Причем, 3-часовая инкубация тимоцитов
с глюкокортикоидами вызывает аналогичное
усиление апоптотической гибели клеток. Данный
факт свидетельствует о мощном апоптозном
потенциале НСП. После введения криоконсервиро-
ванного материала фрагментация ДНК имеет
менее выраженный характер.
to prevent the cell apoptotic death by inhibiting the
DNA degradation and membrane permeabilization [7,
14, 15] due to the cooperation with different oncogens.
Possibly because of this reason no DNA fragmentation
of thymocytes in AA animals was revealed in gel during
electrophoresis (Fig. 3) .
Following the injection of both CPS and NPS the
stimulation of the apoptotic processes manifested in
the rise of Hoechst+ cells in the organs under study
occurs within the entire observation term. As the Figure
2 shows after the NSP treatment of the animals with
adjuvant arthritis the amount of Hoechst+-cells in
thymus increases to the 7th day by 64% comparing to
the 2nd group animals, and after the CPS injection there
was a 24% rise (the 4th group). These results correlated
with the electrophoresis data presented in Fig. 3 and 4.
As the Fig. 3а shows a single NPS injection by the 7th
day of observation causes the DNA fragmentation onto
low molecular fragments, which characterize the final
apoptosis stage [11, 13]. A 3hrs’ thymocyte incubation
with glucocorticoids causes an analogous increase of
cell apoptotic death. Such a fact testifies to a strong
apoptotic potential of NPS. Following the cryo-
preserved material injection the DNA frag-mentation
has less manifested character.
It is also important that following the placenta
preparations therapy the Bcl-2 expression was
П
ро
це
нт
Х
ех
ст
+ -
кл
ет
ок
P
er
ce
nt
ag
e
of
H
oe
ch
st
+ -
ce
lls
П
ро
це
нт
B
cl
+ -
кл
ет
ок
P
er
ce
nt
ag
e
of
B
cl
+ -
ce
lls
П
ро
це
нт
Х
ех
ст
+ -
кл
ет
ок
P
er
ce
nt
ag
e
of
H
oe
ch
st
+ -
ce
lls
П
ро
це
нт
B
cl
+ -
кл
ет
ок
P
er
ce
nt
ag
e
of
B
cl
+ -
ce
lls
П
ро
це
нт
B
cl
+ -
кл
ет
ок
P
er
ce
nt
ag
e
of
B
cl
+ -
ce
lls
П
ро
це
нт
Х
ех
ст
+ -
кл
ет
ок
P
er
ce
nt
ag
e
of
H
oe
ch
st
+ -
ce
lls
45ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №4
Ст/St 1 2 3 4 5 Ст/St 1 2 3 4 5
15
0-
30
0
ты
с.
П
Н
15
0-
30
0
th
ou
sa
nd
s
of
P
N
15
0-
30
0
ты
с.
П
Н
15
0-
30
0
th
ou
sa
nd
s
of
P
N
Рис. 3. Результаты электрофоретического анализа фрагментации ДНК тимоцитов: 1 – интактных животных; 2 –
после 3-часовой инкубации с глюкокортикоидами; 3 – мышей с АА на 7-е (а) и 21-е (б) сутки наблюдения; 4 – мышей
с АА после введения НСП на 7-е (а) и 21-е (б) сутки наблюдения; 5 – мышей с АА после введения КСП на 7-е (а) и 21-е
(б) сутки наблюдения; Ст – стандарт.
Fig. 3. Results of electroforetic analysis of fragmentation in thymocyte DNA from 1 – intact animals; 2 – cells after 3 hrs
incubation with gluckocorticoids; 3 – mice with AA on the 7th (a) and 21st (b) day of observation; 4 – mice with AA after
NPS introduction on the 7th (a) and 21st (b) day of observation; 5 – mice with AA after CPS introduction on the 7th (a)
and 21st (b) day of observation; St – standard.
Важно также, что после терапии препаратами
плаценты экспрессия белка Bcl-2 приближалась к
контрольным значениям. Повышение количества
Хехст+-клеток и снижение уровня экспрессии белка
Bcl-2 могут быть обусловлены действием при-
сутствующего в плаценте α-фетопротеина, способ-
ного самостоятельно активировать каспазу-3, инду-
цировать апоптоз и, естественно, минимизировать
экспрессию белка Bcl-2 [4].
На этапе хронического развития АА (21-е
сутки) характер влияния вводимых препаратов
несколько изменялся. Если НСП сохраняла свою
активность в отношении стимуляции апоптоти-
ческих процессов, то активность КСП сущест-
венно снижалась как в тимусе, так и в лимфоцитах
региональных лимфоузлов и это выражалось в
уменьшении количества Хехст+-клеток (см. рис. 2)
и наличии очень слабой, возможно обратимой,
фрагментации ДНК (рис. 3, б).
На рис. 4 представлены результаты изучения в
сравнительном аспекте выраженности воспали-
тельного процесса и степени проявления апоптоза.
approaching to the control values. The rise in Hoechst +-
cells amount and the fall in Bcl-2 expression level may
be stipulated by the effect of a-fetoprotein present in
placenta, which is capable of caspase-3 activating, the
apoptosis reducing and, definitely, minimizing the Bcl-
2 protein expression [4].
At the stage of chronic AA development (the 21st
day) the character of the effect of the preparations
injected was slightly changing. The CPS activity
considerably decreased both in thymus and lympho-
cytes of regional lymphonodes if NPS kept its activity
in terms of apoptotic processes and it manifested in
the reduction of Hoechst+ cells (see Fig.2) as well as
in the presence of a slight, possibly reversible DNA
fragmentation (Fig.3b).
Fig. 4 presents the comparative study results of
an inflammatory process and apoptosis level
manifestation . In AA animals at all the observation
terms at the background of the AI rise (on the 7th day
by 60±4.3%; the 14th day by 61±5.8%, the 21st day by
45±1.2% ) and the increase of the adhesive cells
percentage in PP ( on the 7th by 25±3.4%; the 14th
a a б b
46ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №4
У животных с АА во все сроки наблюдения на
фоне достоверного увеличения индекса артрита
(7-е сутки на 60±4,3; 14-е – на 61±5,8; 21-е – на
45±1,2%) и повышения по сравнению с контролем
процента адгезивных клеток в ПП (7-е сутки на
25±3,4; 14-е – на 46±2,5; 21-е – на 53±2,8%)
отмечается снижение их АИ соответственно на
46±3,2; 40±2,5; 42±3,3%. При этом суммарная
степень отклонения индекса артрита и процента
адгезивных клеток у животных с АА на 7-е сутки
составляла 0,85; на 14-е – 1,06; на 21-е – 0,98%.
Возможно, снижение количества апоптозных
клеток в ПП, как и в других субстратах ИС,
происходит за счет характерного для РА повыше-
ния концентрации гранулоцитарно-макрофагального
колониестимулирующего фактора, способствую-
щего ингибиции апоптоза нейтрофилов и моноцитов,
которые мигрируют в очаг воспаления, накапли-
ваются там с сохранением полноценного арсенала
своих функций [5].
Введение НСП и КСП во все исследуемые
сроки (7-, 14- и 21-е сутки) повышало по сравнению
со 2-й группой процент апоптозных клеток в ПП
на 61±5,4; 25±1,5; 47±3,8 и на 66±3,9; 75±5,2;
36±3,3% соответственно. Одновременно умень-
шалась выраженность воспалительного процесса,
что проявлялось в снижении содержания адгезив-
ных клеток (соответственно на 25±1,2; 37±3,4;
43±2,2 и 44±3,8; 48±2,1; 13±1,1%), индекс артрита
(соответственно на 28±2,5; 30±3,3; 36±2,4 и 24±1,6;
20±1,3; 16±1,1%) и характеризовалось уменьше-
нием суммарной степени отклонения, которая
составила в 3-й группе на 7-е сутки 0,32; 14-е –
0,39; 21-е – 0,19%, и в 4-й группе на 7-е сутки –
0,55; 14-е – 0,48; 21-е – 0,69%.
Следовательно, СП может реализовывать
терапевтический эффект через включение меха-
низмов управления интенсивностью апоптоти-
ческих процессов. И в данном случае к 21-м
суткам наблюдения НСП в большей степени
обладал такого рода активностью, обеспечивая
почти полное восстановление исследуемых
показателей.
Выводы
На основании электрофоретического анализа
фрагментации ДНК и количественного учета
Хехст+ -, Bcl-2+ - клеток установлено, что в период
манифестации основных клинических показателей
АА отмечается выраженное угнетение апопто-
тической активности ИКК в тимусе, региональных
лимфоузлах, а также в перитонеальной полости.
Выявлена отрицательная корреляция между
интенсивностью воспалительных реакций и
изменением выраженности апоптоза.
Рис. 4. Динамика выраженности воспалительного
процесса и апоптотической активности клеток перито-
неальной полости при АА до и после введения НСП и
КСП: 1 – АА; 2 – АА + НСП; 3 – АА + КСП: – апоптоз-
ный индекс клеток перитонеальной полости; – коли-
чество адгезивных клеток; – индекс артрита; * –различия
достоверны при Р<0,05 по сравнению с показателями
контрольной группы мышей, принятых за 100%.
Fig. 4. Dynamics of manifestation of inflammatory process
and apoptotic activity of peritoneal cavity cells at AA
before and after NPS and CPS introduction: 1 – AA; 2 –
AA+NPS; 3 – AA+CPS: – apoptotic index of peritoneal
cavity cells; – number of adhesive cells; – index of
arthritis ; * – differences are statistically true at P<0.05 in
comparison with indices of the control group of mice,
assumed for 100%.
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
1 2 3 1 2 3 1 2 3
*
*
*
*
* *
*
*
* *
day by 46±2.5%, the 21st day by 53±2.8%) there have
been noted their AI decrease by 46±3.2%, 40±2.5%,
42±3.3%, correspondingly. In this case the total
deviation degree of AI and adhesive cell percentage
in AA animals by the 7th day made 0.85, by the 14th
day it was 1.06%, by the 21st day it made 0.98%. The
decrease of apoptotic cell number both in PP and other
IS substrates may occur due to the increase of
granulocyte-macrophagal colony forming factor
characteristic for RA, which promotes the apoptosis
inhibition in neutrophiles and monocytes, which migrate
into the inflammation focus, accumulate there with
keeping the main stock of their functions [5].
The NPS and CPS injection at all the studied terms
(the 7th , 14th and 21st day) increased the percentage of
apoptotic cells in PP comparing to the 2nd group by
61±5.4%; 25±1.5; 47±3.8 and by 66±3.9%; 75±5.2%;
36±3.3%, correspondingly. At the same time the
manifestation degree of the inflammatory process
significantly decreased, that manifested in the reduction
of adhesive cells content (by 25±1.2%; 37±3.4%;
43±2.2% and 44±3.8%; 48±2.1%; 13±1.1%, corres-
pondingly), of the arthritis index: by 28±2.5%; 30±3.3%;
36±2.4% and 24±1.6%; 20±1.3; 16±1.1% and
7-е сутки 14-е сутки 21-е сутки
7th day 14th day 21st day
П
ро
це
нт
о
т
ко
нт
ро
ля
Pe
rc
en
ta
ge
o
f
th
e
co
nt
ro
l
47ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №4
Введение суспензии плаценты способствовало
усилению апоптотических процессов ИКК и
снижению проявления клинических симптомов АА.
Суспензия плаценты обладает способностью
коррегировать состояние иммунокомпетентной
сферы и усиливать апоптотические процессы в
ИКК при АА. При этом активность КСП отличает-
ся от НСП, что может быть следствием измене-
ния функциональной активности клеток после
криоконсервирования.
Авторы выражают благодарность сотруднику
института микробиологии и иммунологии им. Мечни-
кова АМН Украины Колотовой Т.Ю. за методическую
помощь.
characterized by the reduction of a total deviation degree,
which at the 7th day in the 2nd group made 0.32%, at the
14th day this index made 0.39% and by the 21st day:
0.19%; in the 4th group it made 0.55% on the 7th day,
0.48% to the 14th day and 0.69% by the 21st day.
PS therefore may realize the therapeutic effect via
inclusion of the controlling mechanisms of the apoptotic
processes intensity. In this case the NPS in a greater
extent possessed such an activity providing a nearly
complete recovery of the indices studied.
Conclusions
Basing on electrophoretic analysis of the DNA
fragmentation and quantitative counting of Hoechst”,
Bcl-2+ cells it has been established that during the
manifestation period of the AA main clinical indices it
is noted the manifested suppression of ICCs apoptotic
activity in thymus, lymphocytes of regional lymph nodes
and peritoneal cavity.
It has been found a negative correlation between
the intensity of inflammatory reactions and the change
of the apoptosis manifestation.
Injection of the placenta suspension contributed to
the strengthening of apoptotic processes of ICCs and
reduction in manifestation of AA clinical symptoms.
Placenta suspension is capable of correcting the
state of immune competent sphere and strengthening
apoptotic processes in ICCs at AA. In this case the
activity of CPS differs from NPS, that can result from
the change in functional activity of cells after
cryopreservation.
Authors aknowlegde Kolotova T. Yu, research worker of
Mechnikov’s Institute of Microbiology and Immunology, for
her methodical help.
References
Ashmarin A.N., Vorobiev A.A. Statistical methods of
microbiological investigations.– Leningrad: Meditsina.– 1972.–
180 p.
Goltsev A.N., Ostankova L.V., Lutsenko E.D. et al. Response
of the lymphohemopoietic system of the organism on the
injection of the products of the fetoplacental complex //
Problems of Cryobiology.– 2000.– N2.– P. 15-31.
Grischenko V.I., Morozova T.F., Vorotilin O.M. et al. Preparing
and preserving of cryopreserved placenta suspension for
clinical application: Methodical recommendations.– Kharkov,
1997.– 14 p.
Dudich E.I., Semenkov L.N., Dudich I.V. et al. Role of α-protein
in apoptosis induction and in regulation of apoptotic signals,
generated by other factors // Bul. Exp. Biol. I Med.– 1998.–
Vol.126.– Suppl.1. – P. 141-146.
Mayansky N.A. State of caspase-3 when suppressing
apoptosis of neutrophiles with granulocyte-macrophage
colony-forming factor// Immunologiya.– 2001.– N2.– P. 22-25.
Molecular clinical diagnostics. Methods: Translated from
English / Ed. By S. Herrington, J. Macgy.– Moscow: Mir, 1992.–
558 p.
Литература
Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы
микробиологических исследований.– Л.: Медицина, 1972.–
180 с.
Гольцев А.Н., Останкова Л.В., Луценко Е.Д. и др. Ответ
лимфогемопоэтической системы организма на введение
продуктов фетоплацентарного комплекса // Пробл.
криобиологии.– 2000.– №2.– С. 15-31.
Грищенко В.І., Морозова Т.Ф., Воротілін О.М. та ін.
Приготування та зберігання кріоконсервованої суспензії
плаценти для клінічного використання: Метод. рекомен-
дації.– Харків, 1997.– 14 с.
Дудичь Е.И., Семенков Л.Н., Дудичь И.В. и др. Роль
α-фетопротеина в индукции апоптоза и в регуляции
апоптотических сигналов, генерируемых другими
факторами // Бюл. эксперим. биол. и мед.– 1998.– Т.126.–
Прил. 1.– С. 141-146.
Маянский Н.А. Состояние каспазы-3 при подавлении
апоптоза нейтрофилов гранулоцитарно-макрофагальным
колониестимулирующим фактором // Иммунология.–
2001.– №2.– С. 22-25.
Молекулярная клиническая диагностика. Методы: Пер.
с англ. / Под ред. С. Херрингтона, Дж. Макги.– М.: Мир,
1992.– 558 с.
Самуилов В.Д., Олескин А.В., Лагунова Е.М. Програм-
мируемая клеточная гибель // Биохимия.– 2000.– Т.65.–
Вып. 8.– С. 1029-1046.
Саратиков А.С., Венгеровский А.М. Адъювантная
болезнь.– Томск: Изд-во Томск. ун-та.– 1993.– 103 с.
Труфакин В.А. Иммунологичекие аспекты аутоим-
мунных процессов.– Новосибирск: Наука, 1983.– 132 с.
Фильченков А.А., Стойка Р.С. Апоптоз и рак.– Киев:
Морион, 1999.– 184 с.
Lagarkova M.A., Ivanova O.V., Razin S.V. Large-scale
fragmentation of mammalian DNA in the course of apoptosis
proceeds via excision of chromosomal DNA loops and their
oligomers // The Journal of Biological Chemistry.– 1995.–
Vol.270, N35.– P. 20239-20241.
Pearson C.M., Wood F.D. Studies of arthrotis and other lesions
induced in rats by the injection of mycobacterial adjuvant //
Americal. J. Pharmacolody.– 1963.– Vol.42.– P. 73-95.
Shapiro H.M. Flow cytometric estimation of DNA and RNA
content in intact cells stained with Hoechst 33342 and
pyronin // J. Cytometry.– 1981.– Vol.2.– N143.– P. 231-240.
Vies D.J., Sentman C.L., Bach E.A. et al. Expression of the
Bcl-2 protein in murine and human thymocytes and in
peripheral T lymphocytes // J. Immunology.– 1993.– Vol.151.–
N5.– P. 2546-2554.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
48ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
2003, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
2003, №4
Samuilov V.D., Oleskin A.V., Lagunova E.M. Programmable cell
death // Biokhimiya.– 2000.– Vol.65.– Issue 8.– P. 1029-1046.
Saratikov A.S., Vengerovsky A.M. Adjuvant disease. – Tomsk:
Publ. House of Tomsk University, 1993.– 103 p.
Trufakin V.A. Immunological aspects of autoimmune
processes. – Novosibirsk: Nauka, 1983 – P.
Filchenkov A.A., Stojka R.S. Apoptosis and cancer. – Kiev:
Morion, 1999.– 184 p.
Lagarkova M.A., Ivanova O.V., Razin S.V. Large-scale
fragmentation of mammalian DNA in the course of apoptosis
proceeds via excision of chromosomal DNA loops and their
oligomers // The Journal of Biological Chemistry.– 1995.–
Vol.270.– N35.– P. 20239-20241.
Pearson C.M., Wood F.D. Studies of arthrotis and other lesions
induced in rats by the injection of mycobacterial adjuvant //
Americal. J. Pharmacolody.– 1963.– Vol.42.– P. 73-95.
Shapiro H.M. Flow cytometric estimation of DNA and RNA
content in intact cells stained with Hoechst 33342 and
pyronin // J. Cytometry.– 1981.– Vol.2.– N143.– P. 231-240.
Vies D.J., Sentman C.L., Bach E.A., et al. Expression of the
Bcl-2 protein in murine and human thymocytes and in
peripheral T lymphocytes // J. Immunology.– 1993.– Vol.151.–
N5.– P. 2546-2554.
Willams G.T. Apoptosis in the immune system // J. Pathol.–
Vol.173.– P. 1-4.
Accepted in 29.07.2003
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
Willams G.T. Apoptosis in the immune system // J. Pathol.–
Vol.173.– P. 1-4.
Поступила 29.07.2003
15.
|