Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения

Описывается характеристика трансфузионной среды с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови как средства для гемокомпонентной терапии по строго дифференцированным показаниям у больных с гемодепрессивными состояниями в онкологической и онкогематологической клиниках....

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
Datum:	2005
Hauptverfasser:	Перехрестенко, П.М., Глухенькая, Г.Т., Калиниченко, Т.А., Алгазинова, М.К.
Format:	Artikel
Sprache:	Russian
Veröffentlicht:	Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України 2005
Schriftenreihe:	Проблемы криобиологии и криомедицины
Schlagworte:	Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология
Online Zugang:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138523
Tags:	Tag hinzufügen Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:	Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения / П.М. Перехрестенко, Г.Т. Глухенькая, Т.А. Калиниченко, М.К. Алгазинова // Проблемы криобиологии. — 2005. — Т. 15, № 4. — С. 693-699. — Бібліогр.: 11 назв. — рос., англ.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-138523
record_format	dspace
spelling	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1385232025-02-09T11:43:20Z Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения Transfusion Medium with Cryopreserved Umbilical Blood Nucleated Cells: From Procurement to Possible Clinical Usage Перехрестенко, П.М. Глухенькая, Г.Т. Калиниченко, Т.А. Алгазинова, М.К. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Описывается характеристика трансфузионной среды с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови как средства для гемокомпонентной терапии по строго дифференцированным показаниям у больных с гемодепрессивными состояниями в онкологической и онкогематологической клиниках. There is characterised the transfusion medium with cryopreserved umbilical blood nucleated cells as hemocomponent therapy means according to strictly differentiated indications in patients with hemodepressive states in oncological and oncohematological clinics. Описано характеристику трансфузійного середовища з кріоконсервованими ядровмісними клітинами пуповинної крові як засобу для гемокомпонентної терапії за чітко диференційованими показаннями у хворих з гемодепресивними станами в онкологічній та онкогематологічній клініках. 2005 Article Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения / П.М. Перехрестенко, Г.Т. Глухенькая, Т.А. Калиниченко, М.К. Алгазинова // Проблемы криобиологии. — 2005. — Т. 15, № 4. — С. 693-699. — Бібліогр.: 11 назв. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138523 615.387+014.41 ru Проблемы криобиологии и криомедицины application/pdf Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
topic	Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология
spellingShingle	Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Перехрестенко, П.М. Глухенькая, Г.Т. Калиниченко, Т.А. Алгазинова, М.К. Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения Проблемы криобиологии и криомедицины
description	Описывается характеристика трансфузионной среды с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови как средства для гемокомпонентной терапии по строго дифференцированным показаниям у больных с гемодепрессивными состояниями в онкологической и онкогематологической клиниках.
format	Article
author	Перехрестенко, П.М. Глухенькая, Г.Т. Калиниченко, Т.А. Алгазинова, М.К.
author_facet	Перехрестенко, П.М. Глухенькая, Г.Т. Калиниченко, Т.А. Алгазинова, М.К.
author_sort	Перехрестенко, П.М.
title	Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения
title_short	Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения
title_full	Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения
title_fullStr	Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения
title_full_unstemmed	Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения
title_sort	трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения
publisher	Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
publishDate	2005
topic_facet	Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138523
citation_txt	Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения / П.М. Перехрестенко, Г.Т. Глухенькая, Т.А. Калиниченко, М.К. Алгазинова // Проблемы криобиологии. — 2005. — Т. 15, № 4. — С. 693-699. — Бібліогр.: 11 назв. — рос., англ.
series	Проблемы криобиологии и криомедицины
work_keys_str_mv	AT perehrestenkopm transfuzionnaâsredaskriokonservirovannymiâdrosoderžaŝimikletkamipupovinnojkroviotzagotovkidokliničeskogoprimeneniâ AT gluhenʹkaâgt transfuzionnaâsredaskriokonservirovannymiâdrosoderžaŝimikletkamipupovinnojkroviotzagotovkidokliničeskogoprimeneniâ AT kaliničenkota transfuzionnaâsredaskriokonservirovannymiâdrosoderžaŝimikletkamipupovinnojkroviotzagotovkidokliničeskogoprimeneniâ AT algazinovamk transfuzionnaâsredaskriokonservirovannymiâdrosoderžaŝimikletkamipupovinnojkroviotzagotovkidokliničeskogoprimeneniâ AT perehrestenkopm transfusionmediumwithcryopreservedumbilicalbloodnucleatedcellsfromprocurementtopossibleclinicalusage AT gluhenʹkaâgt transfusionmediumwithcryopreservedumbilicalbloodnucleatedcellsfromprocurementtopossibleclinicalusage AT kaliničenkota transfusionmediumwithcryopreservedumbilicalbloodnucleatedcellsfromprocurementtopossibleclinicalusage AT algazinovamk transfusionmediumwithcryopreservedumbilicalbloodnucleatedcellsfromprocurementtopossibleclinicalusage
first_indexed	2025-11-25T22:24:16Z
last_indexed	2025-11-25T22:24:16Z
_version_	1849802840614109184
fulltext	693ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 15, 2005, №4 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 15, 2005, №4 УДК 615.387+014.41 Адрес для корреспонденции: Калиниченко Т.А., Институт гематологии и трансфузиологии АМН Украины, ул. М. Берлинского, 12, г. Киев, Украина 04060; тел.:+38 (044) 440-31-55, факс: +38 (044) 440-27-22, e-mail: igt@ln.ua Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до возможностей клинического применения П.М. ПЕРЕХРЕСТЕНКО, Г.Т. ГЛУХЕНЬКАЯ, Т.А. КАЛИНИЧЕНКО, М.К. АЛГАЗИНОВА Институт гематологии и трансфузиологии АМН Украины, Киев Transfusion Medium with Cryopreserved Umbilical Blood Nucleated Cells: From Procurement to Possible Clinical Usage P.M. PEREKHRESTENKO, G.T. GLUKHENKAYA, T.A. KALINICHENKO, M.K. ALGAZINOVA Institute of Haematology and Transfusiology of Academy of Medical Sciences of Ukraine, Kiev Описывается характеристика трансфузионной среды с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови как средства для гемокомпонентной терапии по строго дифференцированным показаниям у больных с гемодепрессивными состояниями в онкологической и онкогематологической клиниках. Ключевые слова: гемотрансфузионная среда, пуповинная кровь, ядросодержащие клетки, криоконсервирование, гемодепрессии. Описано характеристику трансфузійного середовища з кріоконсервованими ядровмісними клітинами пуповинної крові як засобу для гемокомпонентної терапії за чітко диференційованими показаннями у хворих з гемодепресивними станами в онкологічній та онкогематологічній клініках. Ключові слова: гемотрансфузійне середовище, пуповинна кров, ядровмісні клітини, кріоконсервування, гемодепресії. There is characterised the transfusion medium with cryopreserved umbilical blood nucleated cells as hemocomponent therapy means according to strictly differentiated indications in patients with hemodepressive states in oncological and oncohematological clinics. Key-words: hemotransfusion medium, cord blood, nucleated cells, cryopreservation, hemodepressions. Address for correspondence: Kalinichenko T.A., Institute of Hematology and Transfusiology of Academy of Medical Sciences of Ukraine, 12, M. Berlinsky str., Kiev, Ukraine 04060; tel.:+380 44 440 3155, fax: +380 44 440 2722, e-mail: igt@ln.ua UDC 615.387+014.41 Компонентная гемотерапия – новая транс- фузионная тактика, пришедшая на смену перели- ванию цельной крови благодаря достижениям современной трансфузиологии и криобиологии в области консервирования и фракционирования крови. Такой подход позволяет повысить эффектив- ность гемотерапии по дифференцированным показаниям в зависимости от дефицита определён- ных клеточных или белковых компонентов крови больного, а также расширить сферу использования донорской крови в качестве многокомпонентного полифункционального лечебного средства при различных патологиях. В настоящее время наряду с традиционным источником получения необходимых компонен- тов – периферической кровью взрослого донора (ПКВД) – применяют и пуповинную кровь (ПК), которая является периферической кровью ново- рождённого, оставшейся в вене пуповины и плаценте после рождения и отделения от матери. В условиях растущей агрессивности цитостати- ческой терапии онкологических и онкогематологи- ческих заболеваний частота различных инфекцион- ных осложнений при низком уровне гранулоцитов у больных острыми лейкемиями возросла до 64-79% [7]. Арсенал лечения и предупреждения Component hemotherapy is a new transfusion tactics which replaced the one of the whole blood due to achievement in contemporary transfusiology and cryobiology in blood conservation and fractionation. Such an approach enables the enhancing of hemo- therapy efficiency on differentiated indices depending on deficit of certain cell and protein blood components of a patient as well as to extend the use sphere for donor’s blood as multicomponent polyfunctional therapeutic mean under various pathologies. Nowadays along with traditional source of deriving necessary components, adult donor peripheral blood (ADPhB), also umbilical blood (UB) is applied, it is newborn peripheral blood, remaining in umbilical vein and placenta after birth and separation from mother. Under conditions of growing aggression of cytostatic therapy of oncological and oncohematological diseases the frequency of various infection compli- cations at low level of granulocytes in patients with acute leukaemias has increased up to 64-79% [7]. Arsenal of treatment and prevention of complications of cytostatic disease are antiobiotics of new generation, recombinant growth factors, donor blood components. Herewith only 50-60% of cases are jugulated just by antibiotics [7, 10], therefore hemocomponent therapy of agranulogitosis has gained higher value. 694ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 15, 2005, №4 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 15, 2005, №4 осложнений цитостатической болезни – антибио- тики нового поколения, рекомбинантные факторы роста, компоненты донорской крови. При этом только 50-60% случаев купируются одними анти- биотиками [7, 10], поэтому гемокомпонентная терапия агранулогитоза приобретает всё большее значение. Результаты предварительных исследований, проведенных в Институте гематологии и трансфу- зиологии АМНУ и Институте онкологии АМНУ, показали, что применение компонентной транс- фузионной среды, содержащей ядерные клетки ПК, у больных с иммуногемодепрессиями снижает риск возникновения осложнений цитостатической болезни и повышает качество лечения основного заболевания [4-6, 8, 9]. При этом перспектива внедрения указанного ядерно-клеточного компо- нента ПК в клиническую практику как разно- видности трансфузионной среды имеет явные преимущества перед лейкоконцентратом ПКВД. Существенная отрицательная характеристика последнего – высокая иммунокомпетентность зрелых клеток белого ростка кроветворения, сконцентрированных в большом количестве (в среднем 12×109 лейкоцитов), необходимом для терапевтического результата от одной трансфу- зии). Для получения необходимой дозы фракциони- рованию подлежит около 5 л крови нескольких здоровых доноров [7]. При этом эффект от такой терапии не стойкий, поэтому необходимы повтор- ные введения лейкоконцентрата (иногда до 7 раз). Сложность получения указанной трансфузионной среды определяет высокий риск заражения трансмиссивными инфекциями, а также значитель- ную себестоимость курса терапии. В связи с небезопасностью для больного трансфузии концентрата лейкоцитов не нашли широкого применения в лечебной практике. Однако в клинических ситуациях, связанных с острыми формами гипоплазии костного мозга с лихорадочным состоянием и признаками локализо- ванной или генерализованной инфекции, а также при необходимости предупреждения септических и инфекционных осложнений трансфузии грануло- цитов всё же считаются патогенетически оправ- данными [10, 11]. Для таких категорий пациентов подобная лечебная тактика актуальна. В связи с тем, что положительный клинический эффект от введения трансфузионной среды с ядросодержащими клетками ПК при указанных ситуациях подобен позитивному действию лейкоконцентрата взрослого донора, необходимо отметить преимущества такой трансфузионной тактики. Прежде всего, для клинически значимого положительного эффекта достаточно введения однократной дозы ядросодержащих клеток Results of preliminary studies performed at the Institute of Hematology and Transfusiology of Academy of Medical Sciences of Ukraine and Institute of Oncology of Academy of Medical Sciences of Ukraine have shown that use of component transfusion medium containing nucleated cells of UB in patients with immune hemodepressions reduces a risk of appearance of cytostatic disease complications and increases the quality of main disease treatment [4-6, 8, 9]. In this case prospects of introduction of the mentioned above nucleated components of UB into practice as a type of transfusion medium has vivid advantages versus ADPhB leukoconсetrate. Important negative feature of the latter is high immune competence of white lineage mature cells, concentrated in a great number (in average 12×109 leukocytes necessary for therapeutic result from one transfusion). To obtain needed dose about 5l of several healthy donors’ blood is to be fractionated [7]. Herewith the effect of such a therapy is instable therefore repeated introductions of leukoconcentrates are indispensable (sometimes up to 7 times). Complicated obtaining of the mentioned transfusion medium determines a high risk of contamination with transmissive infections as well as therapy course high cost price. Because of their insecurity for a patient the leukocytes’ concentrate transfusion did not find wide use in therapeutic practice. However in clinical situations related to acute forms of bone marrow hypoplasia with fever state and signs of localized and generalized infection and also when needed to prevent septic and infection complications transfusions of granulocytes are still pathogenetically feasible [10, 11]. This therapeutic tactics for these categories of patients is actual. Due to positive clinical effect of introduction of transfusion medium with UB nucleated cells under mentioned conditions is similar to the one of adult donor’s leukoconcentrate the advantages of this transfusion tactics should be noted. First of all for clinically significant positive effect it is sufficient to introduce a single dose of nucleated cells of umbilical blood obtained at one standard procurement (50 ml volume) [4, 9]. Relatively decreased immune reactivity of neonatal leukocytes [2] enables avoiding non- hemolytic post-transfusion reactions in their recipients, as well as at sensibilisation by previous multiple transfusions. Latter statement is clinically confirmed including our observations in recipients with such reactions to other hemotransfusion media in their records [4, 5, 9]. To the advantages of hemocomponent medium of umbilical blood nucleated cells there should be referred extended in respect of adult recipient leukoconcentrate functional potential of the cells being the components due to content of components of different maturity level up to “stem” ones [1]. Low 695ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 15, 2005, №4 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 15, 2005, №4 пуповинной крови, полученной при одном стан- дартном заборе (объёмом от 50 мл) [4, 9]. Относительно сниженная иммунореактивность неонатальных лейкоцитов [2] позволяет избежать негемолитических посттрансфузионных реакций у их реципиентов, в том числе при сенсибилизации предыдущими многократными трансфузиями. Последний тезис подтверждён клинически, в том числе и нашими наблюдениями за реципиентами, имевшими в анамнезе такие реакции на другие гемотрансфузионные среды [4, 5, 9]. К преиму- ществам гемокомпонентной среды ядерных клеток пуповинной крови следует отнести и расширенный относительно лейкоконцентрата взрослого донора функциональный потенциал входящих в неё клеток за счёт содержания компонентов разного уровня зрелости, вплоть до “стволовых” [1]. Низкий риск передачи гемотрансфузионных инфекций реципиен- ту c неонатальным материалом делает ПК безопасным источником получения гемоком- понентных сред. Консервирование – единственный способ хранения трансфузионной среды в биологически полноценном состоянии длительное время, созда- ния достаточного запаса материала и транспорти- ровки его на значительные расстояния для осу- ществления направленной терапии строго по показаниям. Обеспечение гарантии качества трансфузионной среды обязательно на всех этапах: от заготовки безопасного источника до приготов- ления к введению в организм реципиента. Все стадии процесса должны соответствовать регла- ментированным общеотраслевым правилам с учетом специфики источника. Для обеспечения гарантии качества трансфузионной среды необхо- дима стандартизация операционных процедур по работе с ней. Существующие методы работы с ПК (от сбора до клинического применения) вызывают широкую дискуссию специалистов по вопросу их стандартизации. Следует отметить, что правовое и техническое обеспечение работы с ПК как объектом гемоком- понентной терапии (выбор донора, лабораторное обследование, хранение, транспортировка, клини- ческое применение клеток ПК с целью гемоком- понентной терапии) охватывается сферой действия законодательства о донорстве крови и её компо- нентов. Объем введения трансфузионной среды с ядерными клетками пуповинной крови не ограни- чен жесткими рамками, так как требования к клинически эффективной дозе в расчете на килограмм массы реципиента существенно ниже требований, предъявляемых к образцу пуповинной крови как трансплантату. Тестирование ПК, которая будет использована для приготовления компонентной трансфузионной среды, проводится risk of transmission of haemotransfusion infections to a recipient with neonatal material makes UB a safe source of obtaining hemocomponent media. Cryopreservation is a single way to store transfusion medium in biologically integral state for a long time, to create essential stocks of material and transport it for long distances to perform targeted therapy strictly according to indications. Providing the guarantee of transfusion medium quality is mandatory at all the stages: from procurement of safe source up to preparing to the introduction into a recipient’s organism. All stages of the process should correspond to specified industry-wide rules taking into account the specific origin of the source. To provide the quality guarantee of transfusion medium there is necessary standardizing of the procedure operations. Existing methods of UB use (from the collection up to clinical application) has started a wide discussion of experts on their standardizing issue. It should be noted that juridical and technical provision of the operating with UB as an object of hemocomponent therapy (donors’ selection, laboratory screening, storage, transportation, clinical application of UB cells with the aim of hemocomponent therapy) comes within the purview of legislation on donation of blood and its components. The volume of introduction of transfusion medium with umbilical blood nucleated cells is unlimited since the requirements to clinically effective dose per kilogram of recipient’s mass is significantly lower those demanded from the umbilical blood sample as a transplant. Testing of UB to be used for preparing component transfusion medium is performed in accordance with the “Inspection way for donors of blood and/or its components”, approved by the order of the Ministry of Health Care of Ukraine “On infection safety of donor’s blood and its components” N385 dated 01.08.2005. Full-scale complex approach to the development of quality standards of hemocomponent transfusion medium of the concentrate of umbilical blood nucleated cells should meet national rules and professional standards as well as to take into account international quality parameters. This concerns all the spheres of the process providing: quality guarantee of reagents, solutions and their components, testing, professional knowledge and skills of the staff involved into the development and further accomplishing the technique, technology implementation, material testing, measures on technical service of equipment, including recording and examining the causes of failures and emergency cases. We have considered the quality criteria of presented transfusion medium of UB nucleated cells as a therapy mean for immune hemodepressive states regarding the conformity of procedures and operations with it to branch rules and standards valid in Blood 696ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 15, 2005, №4 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 15, 2005, №4 в соответствии с “Порядком обследования доноров крови и (или) её компонентов”, утвержденным приказом МОЗ Украины “Про інфекційну безпеку донорської крові та її компонентів” №385 от 01.08.2005 г. Всесторонний комплексный подход к разра- ботке стандартов качества гемокомпонентной трансфузионной среды концентрата ядерных клеток пуповинной крови должен отвечать национальным правилам и профессиональным стандартам, а также учитывать международные параметры качества. Это касается всех сфер обеспечения процесса: гарантии качества реаген- тов, растворов и их компонентов; тестирования профессионального умения и навыков персонала, задействованного в разработке и дальнейшем выполнении технологии; тестирования материала, мероприятий по техническому обслуживанию оборудования, включая регистрацию и изучение причин ошибок и чрезвычайных ситуаций. Нами рассмотрены критерии качества пред- ставленной трансфузионной среды ядерных клеток ПК как средства для терапии иммуногемодеп- рессивных состояний с точки зрения соответствия процедур и операций при работе с ней отраслевым правилам и стандартам, действующим в Службе крови Украины. Был проведен анализ 200 образцов ПК, взятых у рожениц после получения осознанного согласия на её забор. Вопрос о допуске к кроводаче решает врач-трансфузиолог учреждения по перели- ванию крови, который после сбора анамнеза выполняет процедуру в соответствии с указанным выше приказом МОЗ Украины. Забор крови проводится методом “закрытой” системы в содержащие стабилизирующий раствор одноразо- вые контейнеры во время физиологических родов для забора крови сразу после отделения новорож- дённого от матери. Соотношение раствора к пуповинной крови составляет 1:4. Практика свиде- тельствует, что условиями получения образцов достаточного объёма можно считать макси- мально ограниченный срок, необходимый для перерезания пуповины, в совокупности с достаточ- ным промежутком времени до момента отделения плаценты. Маточные сокращения способствуют свободному оттоку крови из неотделённой плаценты в систему для сбора образца. Средний объём полученных таким образом образцов составил 58 мл (25-80 мл) с абсолютным количеством ядросодержащих клеток от 1,38×108 до 21,56×108 на один образец, из них мононуклеа- ров – от 15 до 56% клеток. Перед замораживанием образцы хранили в условиях стабильного температурного режима при комнатной температуре до 18 часов. Service of Ukraine. There were analyzed 200 UB samples derived from women in labor after receiving conscious consent for its procurement. The issue on permit to blood giving is solved by physician- transfusiologist of the blood transfusion institution after anamnesis collection, performing the procedure in accordance with the order of Ministry of Health Care of Ukraine “On infection safety of donor’s blood and its components” N385 dated 01.08.2005. Blood is procured by the method of “closed” system into containing stabilizing solution disposable containers during physiological labors for blood procurement just after separation of newborn and mother. Solution/ umbilical blood ratio is 1/4. Practice testifies to a fact that the conditions of obtaining the sample of essential volume may be considered: maximum limited term necessary for umbilical cord cutting, together with sufficient time interval up to the moment of placenta separation. Uterine contractions contribute to a free outflow of non-separated placenta into a system for sample procurement. Average volume of obtained thereby samples made 58 ml (25-80ml) with an absolute amount of nucleated cells from 1.38×108 to 21.56×108 per 1 sample among them from 15 to 56% of mononuclear cells. Prior to freezing the samples were stored under the conditions of stable temperature regimen a room temperature up to 18hrs. Samples were controlled for the absence of germs of transmissive infections by screening of woman in labor blood serum with immune enzyme analysis in accordance with the order specified for donor’s blood in laboratory of HIV-diagnosis of the Institute. Human HLA-antigens were examined in laboratory of tissue matching of Kiev Center of Bone Marrow Transplan- tation. UB samples were tested for belonging to AB0 system and Rh-factor as well as for sterility. When preparing to freezing there were used two approaches. The first one was isolation of nucleated cells into separate fraction with removing the majority of red blood cells using colloid solution of 6% hydroexylated starch and also volume reduction by concentrating the cells and following freezing. In this case the condition of successful preparing is non- traumatic fractionating, i.e. transformation of poly- phase system into one-phase. The second approach is freezing in preserved cell content with following preparing to transfusion after thawing with removing red blood cell hemolysis products. Expedient application of the techniques mentioned is stipulated by a need to preserve the samples of different volume for certain clinical situations. Herewith as cryoprotectant there was used medical low molecular polyvinyl pyrrolidone (PVP) with final 697ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 15, 2005, №4 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 15, 2005, №4 Контроль образцов на отсутствие возбудителей трансмиссивных инфекций проводили путём скрининга сыворотки крови роженицы методом ИФА в установленном для забора донорской крови порядке в лаборатории ВИЧ-диагностики инсти- тута. Определение HLA-антигенов человека осуществлялось в лаборатории тканевого типи- рования Киевского центра трансплантации костного мозга. Образцы ПК тестировали на принадлежность к группам крови по системе АВ0 и Rh-фактору, а также исследовали на стериль- ность. При подготовке к замораживанию образцов использовали два подхода. Первый подход – выделение ядерных клеток в отдельную фракцию при удалении большинства эритроцитов с помощью коллоидного раствора 6%-го гидроксэтилирован- ного крахмала, а также уменьшение объёма путём концентрации клеток и последующее заморажива- ние. В данном случае условием успешного приготовления является атравматичное фракцио- нирование, т.е. превращение полифазной системы в однофазную. Второй подход – замораживание при сохранённом клеточном составе с последующей подготовкой к трансфузии после размораживания путём удаления продуктов гемолиза эритроцитов. Целесообразность применения указанных техно- логий обусловлена необходимостью сохранения образцов разного объёма для определенных клинических ситуаций. При этом в качестве криопротектора использо- вали медицинский низкомолекулярный поливинил- пирролидон (ПВП) в конечной концентрации 8%, являющийся биологически инертным (нетоксич- ным) веществом относительно клеток и организма в целом [3]. При работе с ПВП не требуются дополнительные меры предосторожности, манипу- ляции и специальные условия. После программного замораживания (адаптированные к холоду при температуре 4°С в течение 20-ти минут образцы подвергали медленному замораживанию со скоростью 1°С/мин от 4°С до –6°С, далее от –6 до –80°С со скоростью 10°С/мин) образцы хранятся при температуре жидкого азота. Промежуточный контроль качества осуществляется путём анализа материала в ампулах-спутниках. Причинами непригодности образца являются низкая клеточность, связанная с заготовкой малых объёмов; нарушение условий стерильности; выявление маркёров контаминации возбудителями трансмиссивных инфекций; нарушение технологии заготовки (наличие сгустков вследствие непра- вильного смешивания с гемоконсервантом, большое разведение крови из-за несоблюдения пропорции крови и гемоконсерванта); технические concentration of 8% which is biologically inert (non- toxic) substance in respect of cells and entire organism [3]. When using PVP there is no necessity in additional precautions, manipulations and special conditions. After programmable freezing (cold exposure at 4°C during 20 min, followed by freezing with slow rate of 1°C per min from 4 to –6°C, and rate of 10°C from –6°C to 80°C) the samples are stored at liquid nitrogen temperature. In-between quality control is performed by means of analysis in satellite vials. The causes of unsuitability of sample are low cellularity, associated with the procurement of small volumes; failure of sterility requirements; revealing the contamination markers by the germs of transmissive infections; procedural violations of procurement technology (presence of clots as a consequence of incorrect mixing with hemopreservative, incorrect blood/ hemopreservative proportion when diluting blood); technical failures during cryopreservation process. All solutions and components used for technological process accomplishing are approved for application in blood service of Ukraine that is the main quality guarantee of a sample. All testing stages for blood are performed in specialized laboratories. Operations in preparing transfusion medium to freezing and frozen- thawed cells to transfusion have been developed by the researchers of the Institute and controlled by physician-transfusiologist with experienced nurses of Kiev City Blood Center. Cell viability is the only criterion of efficiency in the process of preparing transfusion medium as well as restricting factor when using the cryopreservation technology. To estimate sample quality along with visual control and express methods counting the number and viability of nucleated cells the tests for investigating composition and morphology of nucleated cells are used. Dose per kilogram of a recipient’s mass is calculated on the indices of total number of nucleated cells and/or mononuclear ones. The criterion confirming sample quality is its clinical efficiency extent, i.e.“competence” as therapeutic mean. Absence of negative post-transfusion responses of non-hemolytic type in recipients of transfusion medium with UB cryopreserved cells testifies to a proper quality of transfusion medium. Thus presented hemotransfusion medium with cryopreserved UB nucleated cells when meeting the guarantees of quality during preparation and storage is functionally integral, applicable for therapeutic practice in patients with immune hemodepressive states. Perspective of clinical introduction of UB hemotransfusion medium demands establishing of essential stocks of the material basing on legislative regulatory work. 698ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 15, 2005, №4 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 15, 2005, №4 проблемы, возникающие в процессе криоконсер- вирования. Все растворы и их компоненты, используемые при выполнении технологического процесса, разрешены к применению в Службе крови Украи- ны, что является основой гарантии качества образца. Все этапы тестирования крови проводятся в специализированных аккредитованных лаборато- риях. Операции по приготовлению трансфузионной среды к замораживанию и подготовке разморо- женных клеток к трансфузии разработаны сотрудниками института, выполняются под контролем врача-трансфузиолога опытными опера- ционными сёстрами Киевского городского центра крови. Жизнеспособность клеток – единственный критерий эффективности в процессе приготовления трансфузионной среды, а также фактор ограни- чения при осуществлении технологии криоконсер- вирования. Для оценки качества образца, наряду с визуальным контролем и экспресс-методами подсчета количества и жизнеспособности ядерных клеток, применяются тесты для изучения состава и морфологии ядерных клеток. Доза на килограмм массы реципиента рассчитывается по показателям общего количества ядерных клеток и/или моно- нуклеаров. Подтверждающий качество образца критерий – степень его клинической эффективности, т.е. “состоятельность” как терапевтического средст- ва. Отсутствие у реципиентов трансфузионной среды с криоконсервированными клетками ПК негативных посттрансфузионных реакций негемо- литического типа свидетельствует о надлежащем качестве трансфузионной среды. Таким образом, представленная гемотранс- фузионная среда с криоконсервированными ядерными клетками ПК при соблюдении гарантий качества при её приготовлении и хранении является функционально полноценным, пригодным для практического применения терапевтическим средством для больных с иммуногемодепрес- сивными состояниями. Перспектива клинического внедрения гемотрансфузионной среды ПК требует создания необходимых запасов материала на основе нормативно-правовой регламентации работы. Литература Гольцев А.Н., Калиниченко Т.А. Пуповинная кордовая кровь человека как источник гемопоэтических клеток для клинического применения. Часть 1. Характеристика гемопоэтического потенциала // Пробл. криобиологии.– 1998.– №1.– С. 3-24. Гольцев А.Н., Калиниченко Т.А. Пуповинная кордовая кровь человека как источник гемопоэтических клеток 1. 2. References Goltsev A.N., Kalinichenko T.A. Human umbilical cord blood as a source of hemopoietic cells for clinical application. Part I. Nature of hemopoietic potential // Problems of Cryobiology.– 1998.– N1.– P. 3-24. Goltsev A.N., Kalinichenko T.A. Human umbilical cord blood as a source of hemopoietic cells for clinical application. Part II. Immunologic characteristics // Problems of Cryobiology.– 1998.– N2.– P. 3-21. Lavrik S.S., Kogut G.I., Laricheva N.I. et al. Cryopreserving solution for bone marrow // Gematologiya i transfuziologiya.– 1984.– N4.– P. 62-64. Perekhrestenko P.M., Glukhenkaya G.T., Kalinichenko T.A. et al. Application of cryopreserved hemopoietic cells of human cord blood when treating chemo-radiation depressions of hemopoiesis in oncological patients // Coll. of Scientific Papers of Kiev Medical Academy of Post-Diploma Education named by P.L. Schupik.– 1999.– Issue 8.– P. 369-374. Perekherestenko P.M., Sivkovich S.O., Glukhenka G.T. et al. Use of cryopreserved cord blood when treating patients with malignant lymphoma // Lik. sprava.– 2003.– N2.– P. 76-80. Perekhrestenko P.M., Glukhenka G.T., Kalinichenko T.O. et al. Cryopreservation and clinical application of umbilical cord blood haemopoietic cells // Problems of Cryobiology. – 2001.– N3.– P. 151-152. Rumyantsev A.G., Agranenko V.A. Clinical transfusiology.– Moscow: GEOTAR Meditsina, 1998.– P. 173-188. Tretyak N.M., Glukhenka G.T., Perekhrestenko P.M. et al. Experience of cord blood application as component therapy in patients suffering from acute leukaemia // Gematologiya i perelivannya krovi.– 2004.– Issue 32.– P. 302-305. Shalimov S.A., Kejsevich L.V., Litvinenko A.A. et al. Treatment of inoperable tumours of peritoneal cavity organs.– Kiev: Pressa Ukrainy, 1998.– 253 p. McCulloch J. Granulocyte transfusions / In: Petz L.D., Swisher S.N., Kleinman S. et al. Clinical practice of transfusion medicine.– New York: Churchill Livingstone, 1995.– Р. 413-432. Strausse R.G. Granulocyte transfusions / In: Rossi E.C., Stimon T.L., Moss G.S., Gould S.A. (eds). Principles of transfusion medicine.– Baltimore: Williams and Wilkins, 1995.– Р. 321-328. Accepted in 1.09.2005. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 699ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 15, 2005, №4 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 15, 2005, №4 для клинического применения Часть 2. Иммуно- логическая характеристика // Пробл. криобиологии.– 1998.– №2.– С. 3-21. Лаврик С.С., Когут Г.И., Ларичева Н.И. и др. Криокон- сервирующий раствор для костного мозга // Гематология и трансфузиология.– 1984.– №4.– С. 62-64. Перехрестенко П.М., Глухенькая Г.Т., Калиниченко Т.А. и др. Применение криоконсервированных гемопоэтических клеток кордовой крови человека в лечении химио- лучевых депрессий кроветворения у онкологических больных // Зб. наук. праць КМАПО ім. П.Л. Шупика.– 1999.– Вип. 8.– С. 369-374. Перехрестенко П.М., Сівкович С.О., Глухенька Г.Т. та інш. Застосування кріоконсервованої кордової крові при лікуванні хворих на злоякісну лімфому // Лікарська справа.– 2002.– №2.– С. 76-80. Перехрестенко П.М., Глухенька Г.Т., Калиниченко Т.О. та інш. Кріоконсервування і клінічне застосування гемопое- тичних клітин пуповинної (кордової) крові // Пробл. криобиологии.– 2001.– №3.– С. 58-59. Румянцев А.Г., Аграненко В.А. Клиническая трансфузио- логия.– М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1998.– С. 173-188. Третяк Н.М., Глухенька Г.Т., Перехрестенко Т.П. та інш. Досвід застосування кордової крові в якості компо- нентної терапії у хворих на гострі лейкемії // Гематологія і переливання крові.– 2004.– Вип. 32. – С. 302-305. Шалимов С.А., Кейсевич Л.В., Литвиненко А.А. и др. Лечение неоперабельных опухолей органов брюшной полости.– К.: Пресса Украины, 1998.– 253 с. McCulloch J. Granulocyte transfusions / In: Petz L.D., Swisher S.N., Kleinman S. et al. Clinical practice of transfusion medicine.– New York: Churchill Livingstone, 1995.– Р. 413-432. Strausse R.G. Granulocyte transfusions / In: Rossi E.C., Stimon T.L., Moss G.S., Gould S.A. (eds). Principles of transfusion medicine.– Baltimore: Williams and Wilkins, 1995.– Р. 321-328. Поступила 01.09.2005 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11.

Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения

Institution

Ähnliche Einträge