Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения
Описывается характеристика трансфузионной среды с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови как средства для гемокомпонентной терапии по строго дифференцированным показаниям у больных с гемодепрессивными состояниями в онкологической и онкогематологической клиниках....
Saved in:
| Date: | 2005 |
|---|---|
| Main Authors: | , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2005
|
| Series: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138523 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения / П.М. Перехрестенко, Г.Т. Глухенькая, Т.А. Калиниченко, М.К. Алгазинова // Проблемы криобиологии. — 2005. — Т. 15, № 4. — С. 693-699. — Бібліогр.: 11 назв. — рос., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-138523 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1385232025-02-09T11:43:20Z Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения Transfusion Medium with Cryopreserved Umbilical Blood Nucleated Cells: From Procurement to Possible Clinical Usage Перехрестенко, П.М. Глухенькая, Г.Т. Калиниченко, Т.А. Алгазинова, М.К. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Описывается характеристика трансфузионной среды с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови как средства для гемокомпонентной терапии по строго дифференцированным показаниям у больных с гемодепрессивными состояниями в онкологической и онкогематологической клиниках. There is characterised the transfusion medium with cryopreserved umbilical blood nucleated cells as hemocomponent therapy means according to strictly differentiated indications in patients with hemodepressive states in oncological and oncohematological clinics. Описано характеристику трансфузійного середовища з кріоконсервованими ядровмісними клітинами пуповинної крові як засобу для гемокомпонентної терапії за чітко диференційованими показаннями у хворих з гемодепресивними станами в онкологічній та онкогематологічній клініках. 2005 Article Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения / П.М. Перехрестенко, Г.Т. Глухенькая, Т.А. Калиниченко, М.К. Алгазинова // Проблемы криобиологии. — 2005. — Т. 15, № 4. — С. 693-699. — Бібліогр.: 11 назв. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138523 615.387+014.41 ru Проблемы криобиологии и криомедицины application/pdf Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| spellingShingle |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Перехрестенко, П.М. Глухенькая, Г.Т. Калиниченко, Т.А. Алгазинова, М.К. Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description |
Описывается характеристика трансфузионной среды с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови как средства для гемокомпонентной терапии по строго дифференцированным показаниям у больных с гемодепрессивными
состояниями в онкологической и онкогематологической клиниках. |
| format |
Article |
| author |
Перехрестенко, П.М. Глухенькая, Г.Т. Калиниченко, Т.А. Алгазинова, М.К. |
| author_facet |
Перехрестенко, П.М. Глухенькая, Г.Т. Калиниченко, Т.А. Алгазинова, М.К. |
| author_sort |
Перехрестенко, П.М. |
| title |
Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения |
| title_short |
Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения |
| title_full |
Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения |
| title_fullStr |
Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения |
| title_full_unstemmed |
Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения |
| title_sort |
трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2005 |
| topic_facet |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138523 |
| citation_txt |
Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной крови: от заготовки до клинического применения / П.М. Перехрестенко, Г.Т. Глухенькая, Т.А. Калиниченко, М.К. Алгазинова // Проблемы криобиологии. — 2005. — Т. 15, № 4. — С. 693-699. — Бібліогр.: 11 назв. — рос., англ. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT perehrestenkopm transfuzionnaâsredaskriokonservirovannymiâdrosoderžaŝimikletkamipupovinnojkroviotzagotovkidokliničeskogoprimeneniâ AT gluhenʹkaâgt transfuzionnaâsredaskriokonservirovannymiâdrosoderžaŝimikletkamipupovinnojkroviotzagotovkidokliničeskogoprimeneniâ AT kaliničenkota transfuzionnaâsredaskriokonservirovannymiâdrosoderžaŝimikletkamipupovinnojkroviotzagotovkidokliničeskogoprimeneniâ AT algazinovamk transfuzionnaâsredaskriokonservirovannymiâdrosoderžaŝimikletkamipupovinnojkroviotzagotovkidokliničeskogoprimeneniâ AT perehrestenkopm transfusionmediumwithcryopreservedumbilicalbloodnucleatedcellsfromprocurementtopossibleclinicalusage AT gluhenʹkaâgt transfusionmediumwithcryopreservedumbilicalbloodnucleatedcellsfromprocurementtopossibleclinicalusage AT kaliničenkota transfusionmediumwithcryopreservedumbilicalbloodnucleatedcellsfromprocurementtopossibleclinicalusage AT algazinovamk transfusionmediumwithcryopreservedumbilicalbloodnucleatedcellsfromprocurementtopossibleclinicalusage |
| first_indexed |
2025-11-25T22:24:16Z |
| last_indexed |
2025-11-25T22:24:16Z |
| _version_ |
1849802840614109184 |
| fulltext |
693ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 15, 2005, №4
УДК 615.387+014.41
Адрес для корреспонденции: Калиниченко Т.А., Институт
гематологии и трансфузиологии АМН Украины, ул. М. Берлинского,
12, г. Киев, Украина 04060; тел.:+38 (044) 440-31-55, факс: +38
(044) 440-27-22, e-mail: igt@ln.ua
Трансфузионная среда с криоконсервированными ядросодержащими
клетками пуповинной крови: от заготовки до возможностей
клинического применения
П.М. ПЕРЕХРЕСТЕНКО, Г.Т. ГЛУХЕНЬКАЯ, Т.А. КАЛИНИЧЕНКО, М.К. АЛГАЗИНОВА
Институт гематологии и трансфузиологии АМН Украины, Киев
Transfusion Medium with Cryopreserved Umbilical Blood Nucleated
Cells: From Procurement to Possible Clinical Usage
P.M. PEREKHRESTENKO, G.T. GLUKHENKAYA, T.A. KALINICHENKO, M.K. ALGAZINOVA
Institute of Haematology and Transfusiology of Academy of Medical Sciences of Ukraine, Kiev
Описывается характеристика трансфузионной среды с криоконсервированными ядросодержащими клетками пуповинной
крови как средства для гемокомпонентной терапии по строго дифференцированным показаниям у больных с гемодепрессивными
состояниями в онкологической и онкогематологической клиниках.
Ключевые слова: гемотрансфузионная среда, пуповинная кровь, ядросодержащие клетки, криоконсервирование,
гемодепрессии.
Описано характеристику трансфузійного середовища з кріоконсервованими ядровмісними клітинами пуповинної крові як
засобу для гемокомпонентної терапії за чітко диференційованими показаннями у хворих з гемодепресивними станами в
онкологічній та онкогематологічній клініках.
Ключові слова: гемотрансфузійне середовище, пуповинна кров, ядровмісні клітини, кріоконсервування, гемодепресії.
There is characterised the transfusion medium with cryopreserved umbilical blood nucleated cells as hemocomponent therapy
means according to strictly differentiated indications in patients with hemodepressive states in oncological and oncohematological
clinics.
Key-words: hemotransfusion medium, cord blood, nucleated cells, cryopreservation, hemodepressions.
Address for correspondence: Kalinichenko T.A., Institute of
Hematology and Transfusiology of Academy of Medical Sciences of
Ukraine, 12, M. Berlinsky str., Kiev, Ukraine 04060; tel.:+380 44 440
3155, fax: +380 44 440 2722, e-mail: igt@ln.ua
UDC 615.387+014.41
Компонентная гемотерапия – новая транс-
фузионная тактика, пришедшая на смену перели-
ванию цельной крови благодаря достижениям
современной трансфузиологии и криобиологии в
области консервирования и фракционирования
крови. Такой подход позволяет повысить эффектив-
ность гемотерапии по дифференцированным
показаниям в зависимости от дефицита определён-
ных клеточных или белковых компонентов крови
больного, а также расширить сферу использования
донорской крови в качестве многокомпонентного
полифункционального лечебного средства при
различных патологиях.
В настоящее время наряду с традиционным
источником получения необходимых компонен-
тов – периферической кровью взрослого донора
(ПКВД) – применяют и пуповинную кровь (ПК),
которая является периферической кровью ново-
рождённого, оставшейся в вене пуповины и
плаценте после рождения и отделения от матери.
В условиях растущей агрессивности цитостати-
ческой терапии онкологических и онкогематологи-
ческих заболеваний частота различных инфекцион-
ных осложнений при низком уровне гранулоцитов
у больных острыми лейкемиями возросла до
64-79% [7]. Арсенал лечения и предупреждения
Component hemotherapy is a new transfusion
tactics which replaced the one of the whole blood due
to achievement in contemporary transfusiology and
cryobiology in blood conservation and fractionation.
Such an approach enables the enhancing of hemo-
therapy efficiency on differentiated indices depending
on deficit of certain cell and protein blood components
of a patient as well as to extend the use sphere for
donor’s blood as multicomponent polyfunctional
therapeutic mean under various pathologies.
Nowadays along with traditional source of deriving
necessary components, adult donor peripheral blood
(ADPhB), also umbilical blood (UB) is applied, it is
newborn peripheral blood, remaining in umbilical vein
and placenta after birth and separation from mother.
Under conditions of growing aggression of
cytostatic therapy of oncological and oncohematological
diseases the frequency of various infection compli-
cations at low level of granulocytes in patients with
acute leukaemias has increased up to 64-79% [7].
Arsenal of treatment and prevention of complications
of cytostatic disease are antiobiotics of new generation,
recombinant growth factors, donor blood components.
Herewith only 50-60% of cases are jugulated just by
antibiotics [7, 10], therefore hemocomponent therapy
of agranulogitosis has gained higher value.
694ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 15, 2005, №4
осложнений цитостатической болезни – антибио-
тики нового поколения, рекомбинантные факторы
роста, компоненты донорской крови. При этом
только 50-60% случаев купируются одними анти-
биотиками [7, 10], поэтому гемокомпонентная
терапия агранулогитоза приобретает всё большее
значение.
Результаты предварительных исследований,
проведенных в Институте гематологии и трансфу-
зиологии АМНУ и Институте онкологии АМНУ,
показали, что применение компонентной транс-
фузионной среды, содержащей ядерные клетки
ПК, у больных с иммуногемодепрессиями снижает
риск возникновения осложнений цитостатической
болезни и повышает качество лечения основного
заболевания [4-6, 8, 9]. При этом перспектива
внедрения указанного ядерно-клеточного компо-
нента ПК в клиническую практику как разно-
видности трансфузионной среды имеет явные
преимущества перед лейкоконцентратом ПКВД.
Существенная отрицательная характеристика
последнего – высокая иммунокомпетентность
зрелых клеток белого ростка кроветворения,
сконцентрированных в большом количестве (в
среднем 12×109 лейкоцитов), необходимом для
терапевтического результата от одной трансфу-
зии). Для получения необходимой дозы фракциони-
рованию подлежит около 5 л крови нескольких
здоровых доноров [7]. При этом эффект от такой
терапии не стойкий, поэтому необходимы повтор-
ные введения лейкоконцентрата (иногда до 7 раз).
Сложность получения указанной трансфузионной
среды определяет высокий риск заражения
трансмиссивными инфекциями, а также значитель-
ную себестоимость курса терапии. В связи с
небезопасностью для больного трансфузии
концентрата лейкоцитов не нашли широкого
применения в лечебной практике.
Однако в клинических ситуациях, связанных с
острыми формами гипоплазии костного мозга с
лихорадочным состоянием и признаками локализо-
ванной или генерализованной инфекции, а также
при необходимости предупреждения септических
и инфекционных осложнений трансфузии грануло-
цитов всё же считаются патогенетически оправ-
данными [10, 11]. Для таких категорий пациентов
подобная лечебная тактика актуальна.
В связи с тем, что положительный клинический
эффект от введения трансфузионной среды с
ядросодержащими клетками ПК при указанных
ситуациях подобен позитивному действию
лейкоконцентрата взрослого донора, необходимо
отметить преимущества такой трансфузионной
тактики. Прежде всего, для клинически значимого
положительного эффекта достаточно введения
однократной дозы ядросодержащих клеток
Results of preliminary studies performed at the
Institute of Hematology and Transfusiology of
Academy of Medical Sciences of Ukraine and Institute
of Oncology of Academy of Medical Sciences of
Ukraine have shown that use of component transfusion
medium containing nucleated cells of UB in patients
with immune hemodepressions reduces a risk of
appearance of cytostatic disease complications and
increases the quality of main disease treatment [4-6,
8, 9]. In this case prospects of introduction of the
mentioned above nucleated components of UB into
practice as a type of transfusion medium has vivid
advantages versus ADPhB leukoconсetrate. Important
negative feature of the latter is high immune
competence of white lineage mature cells, concentrated
in a great number (in average 12×109 leukocytes
necessary for therapeutic result from one transfusion).
To obtain needed dose about 5l of several healthy
donors’ blood is to be fractionated [7]. Herewith the
effect of such a therapy is instable therefore repeated
introductions of leukoconcentrates are indispensable
(sometimes up to 7 times). Complicated obtaining of
the mentioned transfusion medium determines a high
risk of contamination with transmissive infections as
well as therapy course high cost price. Because of
their insecurity for a patient the leukocytes’
concentrate transfusion did not find wide use in
therapeutic practice.
However in clinical situations related to acute forms
of bone marrow hypoplasia with fever state and signs
of localized and generalized infection and also when
needed to prevent septic and infection complications
transfusions of granulocytes are still pathogenetically
feasible [10, 11]. This therapeutic tactics for these
categories of patients is actual.
Due to positive clinical effect of introduction of
transfusion medium with UB nucleated cells under
mentioned conditions is similar to the one of adult
donor’s leukoconcentrate the advantages of this
transfusion tactics should be noted. First of all for
clinically significant positive effect it is sufficient to
introduce a single dose of nucleated cells of umbilical
blood obtained at one standard procurement (50 ml
volume) [4, 9]. Relatively decreased immune reactivity
of neonatal leukocytes [2] enables avoiding non-
hemolytic post-transfusion reactions in their recipients,
as well as at sensibilisation by previous multiple
transfusions. Latter statement is clinically confirmed
including our observations in recipients with such
reactions to other hemotransfusion media in their
records [4, 5, 9]. To the advantages of hemocomponent
medium of umbilical blood nucleated cells there should
be referred extended in respect of adult recipient
leukoconcentrate functional potential of the cells being
the components due to content of components of
different maturity level up to “stem” ones [1]. Low
695ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 15, 2005, №4
пуповинной крови, полученной при одном стан-
дартном заборе (объёмом от 50 мл) [4, 9].
Относительно сниженная иммунореактивность
неонатальных лейкоцитов [2] позволяет избежать
негемолитических посттрансфузионных реакций у
их реципиентов, в том числе при сенсибилизации
предыдущими многократными трансфузиями.
Последний тезис подтверждён клинически, в том
числе и нашими наблюдениями за реципиентами,
имевшими в анамнезе такие реакции на другие
гемотрансфузионные среды [4, 5, 9]. К преиму-
ществам гемокомпонентной среды ядерных клеток
пуповинной крови следует отнести и расширенный
относительно лейкоконцентрата взрослого донора
функциональный потенциал входящих в неё клеток
за счёт содержания компонентов разного уровня
зрелости, вплоть до “стволовых” [1]. Низкий риск
передачи гемотрансфузионных инфекций реципиен-
ту c неонатальным материалом делает ПК
безопасным источником получения гемоком-
понентных сред.
Консервирование – единственный способ
хранения трансфузионной среды в биологически
полноценном состоянии длительное время, созда-
ния достаточного запаса материала и транспорти-
ровки его на значительные расстояния для осу-
ществления направленной терапии строго по
показаниям. Обеспечение гарантии качества
трансфузионной среды обязательно на всех этапах:
от заготовки безопасного источника до приготов-
ления к введению в организм реципиента. Все
стадии процесса должны соответствовать регла-
ментированным общеотраслевым правилам с
учетом специфики источника. Для обеспечения
гарантии качества трансфузионной среды необхо-
дима стандартизация операционных процедур по
работе с ней. Существующие методы работы с
ПК (от сбора до клинического применения)
вызывают широкую дискуссию специалистов по
вопросу их стандартизации.
Следует отметить, что правовое и техническое
обеспечение работы с ПК как объектом гемоком-
понентной терапии (выбор донора, лабораторное
обследование, хранение, транспортировка, клини-
ческое применение клеток ПК с целью гемоком-
понентной терапии) охватывается сферой действия
законодательства о донорстве крови и её компо-
нентов. Объем введения трансфузионной среды с
ядерными клетками пуповинной крови не ограни-
чен жесткими рамками, так как требования к
клинически эффективной дозе в расчете на
килограмм массы реципиента существенно ниже
требований, предъявляемых к образцу пуповинной
крови как трансплантату. Тестирование ПК,
которая будет использована для приготовления
компонентной трансфузионной среды, проводится
risk of transmission of haemotransfusion infections to
a recipient with neonatal material makes UB a safe
source of obtaining hemocomponent media.
Cryopreservation is a single way to store transfusion
medium in biologically integral state for a long time, to
create essential stocks of material and transport it for
long distances to perform targeted therapy strictly
according to indications. Providing the guarantee of
transfusion medium quality is mandatory at all the
stages: from procurement of safe source up to
preparing to the introduction into a recipient’s organism.
All stages of the process should correspond to specified
industry-wide rules taking into account the specific
origin of the source. To provide the quality guarantee
of transfusion medium there is necessary standardizing
of the procedure operations. Existing methods of UB
use (from the collection up to clinical application) has
started a wide discussion of experts on their
standardizing issue.
It should be noted that juridical and technical
provision of the operating with UB as an object of
hemocomponent therapy (donors’ selection, laboratory
screening, storage, transportation, clinical application
of UB cells with the aim of hemocomponent therapy)
comes within the purview of legislation on donation of
blood and its components. The volume of introduction
of transfusion medium with umbilical blood nucleated
cells is unlimited since the requirements to clinically
effective dose per kilogram of recipient’s mass is
significantly lower those demanded from the umbilical
blood sample as a transplant. Testing of UB to be used
for preparing component transfusion medium is
performed in accordance with the “Inspection way for
donors of blood and/or its components”, approved by
the order of the Ministry of Health Care of Ukraine
“On infection safety of donor’s blood and its
components” N385 dated 01.08.2005.
Full-scale complex approach to the development
of quality standards of hemocomponent transfusion
medium of the concentrate of umbilical blood nucleated
cells should meet national rules and professional
standards as well as to take into account international
quality parameters. This concerns all the spheres of
the process providing: quality guarantee of reagents,
solutions and their components, testing, professional
knowledge and skills of the staff involved into the
development and further accomplishing the technique,
technology implementation, material testing, measures
on technical service of equipment, including recording
and examining the causes of failures and emergency
cases.
We have considered the quality criteria of
presented transfusion medium of UB nucleated cells
as a therapy mean for immune hemodepressive states
regarding the conformity of procedures and operations
with it to branch rules and standards valid in Blood
696ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 15, 2005, №4
в соответствии с “Порядком обследования доноров
крови и (или) её компонентов”, утвержденным
приказом МОЗ Украины “Про інфекційну безпеку
донорської крові та її компонентів” №385 от
01.08.2005 г.
Всесторонний комплексный подход к разра-
ботке стандартов качества гемокомпонентной
трансфузионной среды концентрата ядерных
клеток пуповинной крови должен отвечать
национальным правилам и профессиональным
стандартам, а также учитывать международные
параметры качества. Это касается всех сфер
обеспечения процесса: гарантии качества реаген-
тов, растворов и их компонентов; тестирования
профессионального умения и навыков персонала,
задействованного в разработке и дальнейшем
выполнении технологии; тестирования материала,
мероприятий по техническому обслуживанию
оборудования, включая регистрацию и изучение
причин ошибок и чрезвычайных ситуаций.
Нами рассмотрены критерии качества пред-
ставленной трансфузионной среды ядерных клеток
ПК как средства для терапии иммуногемодеп-
рессивных состояний с точки зрения соответствия
процедур и операций при работе с ней отраслевым
правилам и стандартам, действующим в Службе
крови Украины. Был проведен анализ 200 образцов
ПК, взятых у рожениц после получения осознанного
согласия на её забор. Вопрос о допуске к кроводаче
решает врач-трансфузиолог учреждения по перели-
ванию крови, который после сбора анамнеза
выполняет процедуру в соответствии с указанным
выше приказом МОЗ Украины. Забор крови
проводится методом “закрытой” системы в
содержащие стабилизирующий раствор одноразо-
вые контейнеры во время физиологических родов
для забора крови сразу после отделения новорож-
дённого от матери. Соотношение раствора к
пуповинной крови составляет 1:4. Практика свиде-
тельствует, что условиями получения образцов
достаточного объёма можно считать макси-
мально ограниченный срок, необходимый для
перерезания пуповины, в совокупности с достаточ-
ным промежутком времени до момента отделения
плаценты. Маточные сокращения способствуют
свободному оттоку крови из неотделённой
плаценты в систему для сбора образца.
Средний объём полученных таким образом
образцов составил 58 мл (25-80 мл) с абсолютным
количеством ядросодержащих клеток от 1,38×108
до 21,56×108 на один образец, из них мононуклеа-
ров – от 15 до 56% клеток.
Перед замораживанием образцы хранили в
условиях стабильного температурного режима при
комнатной температуре до 18 часов.
Service of Ukraine. There were analyzed 200 UB
samples derived from women in labor after receiving
conscious consent for its procurement. The issue on
permit to blood giving is solved by physician-
transfusiologist of the blood transfusion institution after
anamnesis collection, performing the procedure in
accordance with the order of Ministry of Health Care
of Ukraine “On infection safety of donor’s blood and
its components” N385 dated 01.08.2005. Blood is
procured by the method of “closed” system into
containing stabilizing solution disposable containers
during physiological labors for blood procurement just
after separation of newborn and mother. Solution/
umbilical blood ratio is 1/4. Practice testifies to a fact
that the conditions of obtaining the sample of essential
volume may be considered: maximum limited term
necessary for umbilical cord cutting, together with
sufficient time interval up to the moment of placenta
separation. Uterine contractions contribute to a free
outflow of non-separated placenta into a system for
sample procurement.
Average volume of obtained thereby samples made
58 ml (25-80ml) with an absolute amount of nucleated
cells from 1.38×108 to 21.56×108 per 1 sample among
them from 15 to 56% of mononuclear cells.
Prior to freezing the samples were stored under
the conditions of stable temperature regimen a room
temperature up to 18hrs.
Samples were controlled for the absence of germs
of transmissive infections by screening of woman in
labor blood serum with immune enzyme analysis in
accordance with the order specified for donor’s blood
in laboratory of HIV-diagnosis of the Institute. Human
HLA-antigens were examined in laboratory of tissue
matching of Kiev Center of Bone Marrow Transplan-
tation. UB samples were tested for belonging to AB0
system and Rh-factor as well as for sterility.
When preparing to freezing there were used two
approaches. The first one was isolation of nucleated
cells into separate fraction with removing the majority
of red blood cells using colloid solution of 6%
hydroexylated starch and also volume reduction by
concentrating the cells and following freezing. In this
case the condition of successful preparing is non-
traumatic fractionating, i.e. transformation of poly-
phase system into one-phase.
The second approach is freezing in preserved cell
content with following preparing to transfusion after
thawing with removing red blood cell hemolysis
products. Expedient application of the techniques
mentioned is stipulated by a need to preserve the
samples of different volume for certain clinical
situations.
Herewith as cryoprotectant there was used medical
low molecular polyvinyl pyrrolidone (PVP) with final
697ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 15, 2005, №4
Контроль образцов на отсутствие возбудителей
трансмиссивных инфекций проводили путём
скрининга сыворотки крови роженицы методом
ИФА в установленном для забора донорской крови
порядке в лаборатории ВИЧ-диагностики инсти-
тута. Определение HLA-антигенов человека
осуществлялось в лаборатории тканевого типи-
рования Киевского центра трансплантации
костного мозга. Образцы ПК тестировали на
принадлежность к группам крови по системе АВ0
и Rh-фактору, а также исследовали на стериль-
ность.
При подготовке к замораживанию образцов
использовали два подхода. Первый подход –
выделение ядерных клеток в отдельную фракцию
при удалении большинства эритроцитов с помощью
коллоидного раствора 6%-го гидроксэтилирован-
ного крахмала, а также уменьшение объёма путём
концентрации клеток и последующее заморажива-
ние. В данном случае условием успешного
приготовления является атравматичное фракцио-
нирование, т.е. превращение полифазной системы
в однофазную. Второй подход – замораживание при
сохранённом клеточном составе с последующей
подготовкой к трансфузии после размораживания
путём удаления продуктов гемолиза эритроцитов.
Целесообразность применения указанных техно-
логий обусловлена необходимостью сохранения
образцов разного объёма для определенных
клинических ситуаций.
При этом в качестве криопротектора использо-
вали медицинский низкомолекулярный поливинил-
пирролидон (ПВП) в конечной концентрации 8%,
являющийся биологически инертным (нетоксич-
ным) веществом относительно клеток и организма
в целом [3]. При работе с ПВП не требуются
дополнительные меры предосторожности, манипу-
ляции и специальные условия. После программного
замораживания (адаптированные к холоду при
температуре 4°С в течение 20-ти минут образцы
подвергали медленному замораживанию со
скоростью 1°С/мин от 4°С до –6°С, далее от –6 до
–80°С со скоростью 10°С/мин) образцы хранятся
при температуре жидкого азота. Промежуточный
контроль качества осуществляется путём анализа
материала в ампулах-спутниках.
Причинами непригодности образца являются
низкая клеточность, связанная с заготовкой малых
объёмов; нарушение условий стерильности;
выявление маркёров контаминации возбудителями
трансмиссивных инфекций; нарушение технологии
заготовки (наличие сгустков вследствие непра-
вильного смешивания с гемоконсервантом,
большое разведение крови из-за несоблюдения
пропорции крови и гемоконсерванта); технические
concentration of 8% which is biologically inert (non-
toxic) substance in respect of cells and entire organism
[3]. When using PVP there is no necessity in additional
precautions, manipulations and special conditions. After
programmable freezing (cold exposure at 4°C during
20 min, followed by freezing with slow rate of 1°C per
min from 4 to –6°C, and rate of 10°C from –6°C to
80°C) the samples are stored at liquid nitrogen
temperature. In-between quality control is performed
by means of analysis in satellite vials.
The causes of unsuitability of sample are low
cellularity, associated with the procurement of small
volumes; failure of sterility requirements; revealing the
contamination markers by the germs of transmissive
infections; procedural violations of procurement
technology (presence of clots as a consequence of
incorrect mixing with hemopreservative, incorrect
blood/ hemopreservative proportion when diluting
blood); technical failures during cryopreservation
process.
All solutions and components used for technological
process accomplishing are approved for application in
blood service of Ukraine that is the main quality
guarantee of a sample. All testing stages for blood are
performed in specialized laboratories. Operations in
preparing transfusion medium to freezing and frozen-
thawed cells to transfusion have been developed by
the researchers of the Institute and controlled by
physician-transfusiologist with experienced nurses of
Kiev City Blood Center.
Cell viability is the only criterion of efficiency in
the process of preparing transfusion medium as well
as restricting factor when using the cryopreservation
technology. To estimate sample quality along with visual
control and express methods counting the number and
viability of nucleated cells the tests for investigating
composition and morphology of nucleated cells are
used. Dose per kilogram of a recipient’s mass is
calculated on the indices of total number of nucleated
cells and/or mononuclear ones.
The criterion confirming sample quality is its clinical
efficiency extent, i.e.“competence” as therapeutic
mean. Absence of negative post-transfusion responses
of non-hemolytic type in recipients of transfusion
medium with UB cryopreserved cells testifies to a
proper quality of transfusion medium.
Thus presented hemotransfusion medium with
cryopreserved UB nucleated cells when meeting the
guarantees of quality during preparation and storage
is functionally integral, applicable for therapeutic
practice in patients with immune hemodepressive
states. Perspective of clinical introduction of UB
hemotransfusion medium demands establishing of
essential stocks of the material basing on legislative
regulatory work.
698ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 15, 2005, №4
проблемы, возникающие в процессе криоконсер-
вирования.
Все растворы и их компоненты, используемые
при выполнении технологического процесса,
разрешены к применению в Службе крови Украи-
ны, что является основой гарантии качества
образца. Все этапы тестирования крови проводятся
в специализированных аккредитованных лаборато-
риях. Операции по приготовлению трансфузионной
среды к замораживанию и подготовке разморо-
женных клеток к трансфузии разработаны
сотрудниками института, выполняются под
контролем врача-трансфузиолога опытными опера-
ционными сёстрами Киевского городского центра
крови.
Жизнеспособность клеток – единственный
критерий эффективности в процессе приготовления
трансфузионной среды, а также фактор ограни-
чения при осуществлении технологии криоконсер-
вирования. Для оценки качества образца, наряду с
визуальным контролем и экспресс-методами
подсчета количества и жизнеспособности ядерных
клеток, применяются тесты для изучения состава
и морфологии ядерных клеток. Доза на килограмм
массы реципиента рассчитывается по показателям
общего количества ядерных клеток и/или моно-
нуклеаров.
Подтверждающий качество образца критерий –
степень его клинической эффективности, т.е.
“состоятельность” как терапевтического средст-
ва. Отсутствие у реципиентов трансфузионной
среды с криоконсервированными клетками ПК
негативных посттрансфузионных реакций негемо-
литического типа свидетельствует о надлежащем
качестве трансфузионной среды.
Таким образом, представленная гемотранс-
фузионная среда с криоконсервированными
ядерными клетками ПК при соблюдении гарантий
качества при её приготовлении и хранении является
функционально полноценным, пригодным для
практического применения терапевтическим
средством для больных с иммуногемодепрес-
сивными состояниями. Перспектива клинического
внедрения гемотрансфузионной среды ПК требует
создания необходимых запасов материала на
основе нормативно-правовой регламентации
работы.
Литература
Гольцев А.Н., Калиниченко Т.А. Пуповинная кордовая
кровь человека как источник гемопоэтических клеток
для клинического применения. Часть 1. Характеристика
гемопоэтического потенциала // Пробл. криобиологии.–
1998.– №1.– С. 3-24.
Гольцев А.Н., Калиниченко Т.А. Пуповинная кордовая
кровь человека как источник гемопоэтических клеток
1.
2.
References
Goltsev A.N., Kalinichenko T.A. Human umbilical cord blood
as a source of hemopoietic cells for clinical application. Part
I. Nature of hemopoietic potential // Problems of Cryobiology.–
1998.– N1.– P. 3-24.
Goltsev A.N., Kalinichenko T.A. Human umbilical cord blood
as a source of hemopoietic cells for clinical application. Part
II. Immunologic characteristics // Problems of Cryobiology.–
1998.– N2.– P. 3-21.
Lavrik S.S., Kogut G.I., Laricheva N.I. et al. Cryopreserving
solution for bone marrow // Gematologiya i transfuziologiya.–
1984.– N4.– P. 62-64.
Perekhrestenko P.M., Glukhenkaya G.T., Kalinichenko T.A.
et al. Application of cryopreserved hemopoietic cells of human
cord blood when treating chemo-radiation depressions of
hemopoiesis in oncological patients // Coll. of Scientific Papers
of Kiev Medical Academy of Post-Diploma Education named
by P.L. Schupik.– 1999.– Issue 8.– P. 369-374.
Perekherestenko P.M., Sivkovich S.O., Glukhenka G.T. et al.
Use of cryopreserved cord blood when treating patients with
malignant lymphoma // Lik. sprava.– 2003.– N2.– P. 76-80.
Perekhrestenko P.M., Glukhenka G.T., Kalinichenko T.O.
et al. Cryopreservation and clinical application of umbilical
cord blood haemopoietic cells // Problems of Cryobiology. –
2001.– N3.– P. 151-152.
Rumyantsev A.G., Agranenko V.A. Clinical transfusiology.–
Moscow: GEOTAR Meditsina, 1998.– P. 173-188.
Tretyak N.M., Glukhenka G.T., Perekhrestenko P.M. et al.
Experience of cord blood application as component therapy
in patients suffering from acute leukaemia // Gematologiya i
perelivannya krovi.– 2004.– Issue 32.– P. 302-305.
Shalimov S.A., Kejsevich L.V., Litvinenko A.A. et al. Treatment
of inoperable tumours of peritoneal cavity organs.– Kiev:
Pressa Ukrainy, 1998.– 253 p.
McCulloch J. Granulocyte transfusions / In: Petz L.D.,
Swisher S.N., Kleinman S. et al. Clinical practice of transfusion
medicine.– New York: Churchill Livingstone, 1995.– Р. 413-432.
Strausse R.G. Granulocyte transfusions / In: Rossi E.C.,
Stimon T.L., Moss G.S., Gould S.A. (eds). Principles of
transfusion medicine.– Baltimore: Williams and Wilkins, 1995.–
Р. 321-328.
Accepted in 1.09.2005.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
699ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 15, 2005, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 15, 2005, №4
для клинического применения Часть 2. Иммуно-
логическая характеристика // Пробл. криобиологии.–
1998.– №2.– С. 3-21.
Лаврик С.С., Когут Г.И., Ларичева Н.И. и др. Криокон-
сервирующий раствор для костного мозга // Гематология
и трансфузиология.– 1984.– №4.– С. 62-64.
Перехрестенко П.М., Глухенькая Г.Т., Калиниченко Т.А. и др.
Применение криоконсервированных гемопоэтических
клеток кордовой крови человека в лечении химио-
лучевых депрессий кроветворения у онкологических
больных // Зб. наук. праць КМАПО ім. П.Л. Шупика.– 1999.–
Вип. 8.– С. 369-374.
Перехрестенко П.М., Сівкович С.О., Глухенька Г.Т. та інш.
Застосування кріоконсервованої кордової крові при
лікуванні хворих на злоякісну лімфому // Лікарська
справа.– 2002.– №2.– С. 76-80.
Перехрестенко П.М., Глухенька Г.Т., Калиниченко Т.О. та інш.
Кріоконсервування і клінічне застосування гемопое-
тичних клітин пуповинної (кордової) крові // Пробл.
криобиологии.– 2001.– №3.– С. 58-59.
Румянцев А.Г., Аграненко В.А. Клиническая трансфузио-
логия.– М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1998.– С. 173-188.
Третяк Н.М., Глухенька Г.Т., Перехрестенко Т.П. та інш.
Досвід застосування кордової крові в якості компо-
нентної терапії у хворих на гострі лейкемії // Гематологія
і переливання крові.– 2004.– Вип. 32. – С. 302-305.
Шалимов С.А., Кейсевич Л.В., Литвиненко А.А. и др.
Лечение неоперабельных опухолей органов брюшной
полости.– К.: Пресса Украины, 1998.– 253 с.
McCulloch J. Granulocyte transfusions / In: Petz L.D.,
Swisher S.N., Kleinman S. et al. Clinical practice of transfusion
medicine.– New York: Churchill Livingstone, 1995.– Р. 413-432.
Strausse R.G. Granulocyte transfusions / In: Rossi E.C.,
Stimon T.L., Moss G.S., Gould S.A. (eds). Principles of
transfusion medicine.– Baltimore: Williams and Wilkins, 1995.–
Р. 321-328.
Поступила 01.09.2005
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
|