Autogeneic RNA-electroporated CD40-ligand activated B-cells from hepatocellular carcinoma patients induce CD8+ T-cell responses ex vivo
Since dendritic cells (DCs) constitute only 0.1–0.5% of human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), and generation of DCs from monocytes or stem cells is difficult and expensive, we choose B-lymphocytes as an alternative, cost-effective source of antigen presenting cells (APC). Aim: To induce...
Saved in:
| Published in: | Experimental Oncology |
|---|---|
| Date: | 2007 |
| Main Authors: | , , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | English |
| Published: |
Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України
2007
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138573 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Autogeneic RNA-electroporated CD40-ligand activated B-cells from hepatocellular carcinoma patients induce CD8+ T-cell responses ex vivo / S. Shen, Z. Xu, X. Qian, Y. Ding, L. Yu, B. Liu // Experimental Oncology. — 2007. — Т. 29, № 2. — С. 137-143. — Бібліогр.: 49 назв. — англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-138573 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Shen, S. Xu, Z. Qian, X. Ding, Y. Yu, L. Liu, B. 2018-06-19T09:40:26Z 2018-06-19T09:40:26Z 2007 Autogeneic RNA-electroporated CD40-ligand activated B-cells from hepatocellular carcinoma patients induce CD8+ T-cell responses ex vivo / S. Shen, Z. Xu, X. Qian, Y. Ding, L. Yu, B. Liu // Experimental Oncology. — 2007. — Т. 29, № 2. — С. 137-143. — Бібліогр.: 49 назв. — англ. 1812-9269 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138573 Since dendritic cells (DCs) constitute only 0.1–0.5% of human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), and generation of DCs from monocytes or stem cells is difficult and expensive, we choose B-lymphocytes as an alternative, cost-effective source of antigen presenting cells (APC). Aim: To induce specific CTLs response ex vivo by CD40L activated B-cells (CD40-B) transfected with hepatocellular carcinoma (HCC) total RNA. Methods: To induce CD40-B PBMCs of patients with HCC were isolated by Ficoll technique and cultured in RMPI 1640 supplemented with 10% fetal calf serum (FCS), sCD40L (2 µg/ml), recombinant human interleukin-4 (IL-4) (4 ng/ml). The expression of CD80 and CD86 was evaluated by flow cytometry. The level of interleukin-12 (IL-12) produced by cultured B-lymphocytes was measured using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). HCC patient’s T-lymphocytes were obtained from PBMCs cultured in RMPI 1640 supplemented with 10% FCS, 2 ng/mL IL-4 and 10 ng/ml IL-7. CD40-B transfected with tumor total RNA isolated from HCC cells were used to induce specific CTL proliferation. The level of IFN-g was measured using ELISA and the expression of CD8 was determined by FCAS. Specific cytotoxicity was measured using MTT method. Results: The results show that the activated B-lymphocytes were easily expandable and formed large clones, and a high expression of CD80/CD86 and a high IL-12 secretion by CD40-B was registered. CD40-B transfected with tumor total RNA can induce CTLs to express CD8 and generate IFN-g at high levels. Compared to the control group, the specific cytotoxicity of CTLs was up-regulated. Conclusion: These findings demonstrate that CD40-B-cells electroporated with total RNA derived from carcinoma cells can be used as alternative APC for the induction of antigen-specific CD8+ T-cell responses, which might be used in HCC immunotherapy. Поскольку дендритные клетки (ДК) составляют только 0,1–0,5% мононуклеаров периферической крови (МПК) человека, и получение ДК из моноцитов и стволовых кроветворных клеток является трудоемкой и дорогостоящей процедурой, выбраны В-лимфоциты в качестве альтернативного источника антигенпрезентирующих клеток (АПК). Цель: изучить возможность активированных CD40-лигандом В-лимфоцитов (CD40-B), трансфецированных суммарной РНК, выделенной из клеток гепатоцеллюлярной карциномы, индуцировать специфический ответ цитотоксических Т-лимфоцитов ex vivo Методы: МПК пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой изолировали на градиенте фиколла и культивировали в среде RMPI 1640 с 10% эмбриональной сыворотки телят (ЭСТ), sCD40 (2 мкг/мл) и рекомбинантным человеческим интерлейкином-4 (ИЛ-4, 4 нг/мл). Экспрессию СD80 и CD86 оценивали на проточном цитофлюориметре. Концентрацию интерлейкина-12, продуцируемого культивируемыми В-лимфоцитами, оценивали с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). Т-лимфоциты получали из МПК пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой и культивировали в среде RMPI 1640 с 10% ЭСТ, 2 нг/мл ИЛ-4 и 10 нг/мл ИЛ-7 и культивированы совместно с CD40- клетками, трансфецированными опухолевой РНК, для индукции пролиферации специфических цитотоксических Т-лимфоцитов. Уровень интерферона- (ИНФ-γ) определяли с помощью ИФА, а экспрессию CD8 на проточном цитофлуориметре. Специфическую цитотоксичность оценивали в МТТ тесте. Результаты: показано, что активированные in В-лимфоциты формируют большие колонии, на поверхности клеток отмечается высокая экспрессия антигенов CD80/CD86, и ими в повышенных количествах секретируется ИЛ-12. CD40-B-лимфоциты, трансфецированные опухолевой РНК, могут активировать CD + цитотоксические лимфоциты, которые продуцируют ИНФ-γ. Выводы: CD40-B-клетки, трансфецированные суммарной РНК, выделенной из опухолевых клеток больных с гепатоцеллюлярной карциномой, — это альтернативные АПК для индукции антигенспецифического CD + T-клеточного ответа, что может быть использовано для иммунотерапии пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой. We thank Prof. Xiang Gao and Prof. Minsheng Zhu of Model Animal Research Center (MARC) of Nanjing University. We also thank Prof. Xiaodong Han and Prof. Yayi Hou of Immunology and Reproductive Biology Laboratory, Medical School, Nanjing University. This work was supported by National Natural Science Foundation of China (No. 30471701). en Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України Experimental Oncology Original contributions Autogeneic RNA-electroporated CD40-ligand activated B-cells from hepatocellular carcinoma patients induce CD8+ T-cell responses ex vivo CD40-лиганд активированные В-клетки, трансфецированные РНК клеток гепатоцеллюлярной карциномы, индуцируют ответ CD8+ T-клеток ex vivo Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Autogeneic RNA-electroporated CD40-ligand activated B-cells from hepatocellular carcinoma patients induce CD8+ T-cell responses ex vivo |
| spellingShingle |
Autogeneic RNA-electroporated CD40-ligand activated B-cells from hepatocellular carcinoma patients induce CD8+ T-cell responses ex vivo Shen, S. Xu, Z. Qian, X. Ding, Y. Yu, L. Liu, B. Original contributions |
| title_short |
Autogeneic RNA-electroporated CD40-ligand activated B-cells from hepatocellular carcinoma patients induce CD8+ T-cell responses ex vivo |
| title_full |
Autogeneic RNA-electroporated CD40-ligand activated B-cells from hepatocellular carcinoma patients induce CD8+ T-cell responses ex vivo |
| title_fullStr |
Autogeneic RNA-electroporated CD40-ligand activated B-cells from hepatocellular carcinoma patients induce CD8+ T-cell responses ex vivo |
| title_full_unstemmed |
Autogeneic RNA-electroporated CD40-ligand activated B-cells from hepatocellular carcinoma patients induce CD8+ T-cell responses ex vivo |
| title_sort |
autogeneic rna-electroporated cd40-ligand activated b-cells from hepatocellular carcinoma patients induce cd8+ t-cell responses ex vivo |
| author |
Shen, S. Xu, Z. Qian, X. Ding, Y. Yu, L. Liu, B. |
| author_facet |
Shen, S. Xu, Z. Qian, X. Ding, Y. Yu, L. Liu, B. |
| topic |
Original contributions |
| topic_facet |
Original contributions |
| publishDate |
2007 |
| language |
English |
| container_title |
Experimental Oncology |
| publisher |
Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
CD40-лиганд активированные В-клетки, трансфецированные РНК клеток гепатоцеллюлярной карциномы, индуцируют ответ CD8+ T-клеток ex vivo |
| description |
Since dendritic cells (DCs) constitute only 0.1–0.5% of human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), and generation of DCs from monocytes or stem cells is difficult and expensive, we choose B-lymphocytes as an alternative, cost-effective source of antigen presenting cells (APC). Aim: To induce specific CTLs response ex vivo by CD40L activated B-cells (CD40-B) transfected with hepatocellular carcinoma (HCC) total RNA. Methods: To induce CD40-B PBMCs of patients with HCC were isolated by Ficoll technique and cultured in RMPI 1640 supplemented with 10% fetal calf serum (FCS), sCD40L (2 µg/ml), recombinant human interleukin-4 (IL-4) (4 ng/ml). The expression of CD80 and CD86 was evaluated by flow cytometry. The level of interleukin-12 (IL-12) produced by cultured B-lymphocytes was measured using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). HCC patient’s T-lymphocytes were obtained from PBMCs cultured in RMPI 1640 supplemented with 10% FCS, 2 ng/mL IL-4 and 10 ng/ml IL-7. CD40-B transfected with tumor total RNA isolated from HCC cells were used to induce specific CTL proliferation. The level of IFN-g was measured using ELISA and the expression of CD8 was determined by FCAS. Specific cytotoxicity was measured using MTT method. Results: The results show that the activated B-lymphocytes were easily expandable and formed large clones, and a high expression of CD80/CD86 and a high IL-12 secretion by CD40-B was registered. CD40-B transfected with tumor total RNA can induce CTLs to express CD8 and generate IFN-g at high levels. Compared to the control group, the specific cytotoxicity of CTLs was up-regulated. Conclusion: These findings demonstrate that CD40-B-cells electroporated with total RNA derived from carcinoma cells can be used as alternative APC for the induction of antigen-specific CD8+ T-cell responses, which might be used in HCC immunotherapy.
Поскольку дендритные клетки (ДК) составляют только 0,1–0,5% мононуклеаров периферической крови (МПК) человека, и
получение ДК из моноцитов и стволовых кроветворных клеток является трудоемкой и дорогостоящей процедурой, выбраны
В-лимфоциты в качестве альтернативного источника антигенпрезентирующих клеток (АПК). Цель: изучить возможность
активированных CD40-лигандом В-лимфоцитов (CD40-B), трансфецированных суммарной РНК, выделенной из клеток
гепатоцеллюлярной карциномы, индуцировать специфический ответ цитотоксических Т-лимфоцитов ex vivo Методы: МПК
пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой изолировали на градиенте фиколла и культивировали в среде RMPI 1640 с
10% эмбриональной сыворотки телят (ЭСТ), sCD40 (2 мкг/мл) и рекомбинантным человеческим интерлейкином-4 (ИЛ-4,
4 нг/мл). Экспрессию СD80 и CD86 оценивали на проточном цитофлюориметре. Концентрацию интерлейкина-12, продуцируемого
культивируемыми В-лимфоцитами, оценивали с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). Т-лимфоциты
получали из МПК пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой и культивировали в среде RMPI 1640 с 10% ЭСТ, 2 нг/мл
ИЛ-4 и 10 нг/мл ИЛ-7 и культивированы совместно с CD40- клетками, трансфецированными опухолевой РНК, для
индукции пролиферации специфических цитотоксических Т-лимфоцитов. Уровень интерферона- (ИНФ-γ) определяли с
помощью ИФА, а экспрессию CD8 на проточном цитофлуориметре. Специфическую цитотоксичность оценивали в МТТ
тесте. Результаты: показано, что активированные in В-лимфоциты формируют большие колонии, на поверхности
клеток отмечается высокая экспрессия антигенов CD80/CD86, и ими в повышенных количествах секретируется ИЛ-12.
CD40-B-лимфоциты, трансфецированные опухолевой РНК, могут активировать CD + цитотоксические лимфоциты, которые
продуцируют ИНФ-γ. Выводы: CD40-B-клетки, трансфецированные суммарной РНК, выделенной из опухолевых
клеток больных с гепатоцеллюлярной карциномой, — это альтернативные АПК для индукции антигенспецифического CD +
T-клеточного ответа, что может быть использовано для иммунотерапии пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой.
|
| issn |
1812-9269 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/138573 |
| citation_txt |
Autogeneic RNA-electroporated CD40-ligand activated B-cells from hepatocellular carcinoma patients induce CD8+ T-cell responses ex vivo / S. Shen, Z. Xu, X. Qian, Y. Ding, L. Yu, B. Liu // Experimental Oncology. — 2007. — Т. 29, № 2. — С. 137-143. — Бібліогр.: 49 назв. — англ. |
| work_keys_str_mv |
AT shens autogeneicrnaelectroporatedcd40ligandactivatedbcellsfromhepatocellularcarcinomapatientsinducecd8tcellresponsesexvivo AT xuz autogeneicrnaelectroporatedcd40ligandactivatedbcellsfromhepatocellularcarcinomapatientsinducecd8tcellresponsesexvivo AT qianx autogeneicrnaelectroporatedcd40ligandactivatedbcellsfromhepatocellularcarcinomapatientsinducecd8tcellresponsesexvivo AT dingy autogeneicrnaelectroporatedcd40ligandactivatedbcellsfromhepatocellularcarcinomapatientsinducecd8tcellresponsesexvivo AT yul autogeneicrnaelectroporatedcd40ligandactivatedbcellsfromhepatocellularcarcinomapatientsinducecd8tcellresponsesexvivo AT liub autogeneicrnaelectroporatedcd40ligandactivatedbcellsfromhepatocellularcarcinomapatientsinducecd8tcellresponsesexvivo AT shens cd40ligandaktivirovannyevkletkitransfecirovannyernkkletokgepatocellûlârnoikarcinomyinduciruûtotvetcd8tkletokexvivo AT xuz cd40ligandaktivirovannyevkletkitransfecirovannyernkkletokgepatocellûlârnoikarcinomyinduciruûtotvetcd8tkletokexvivo AT qianx cd40ligandaktivirovannyevkletkitransfecirovannyernkkletokgepatocellûlârnoikarcinomyinduciruûtotvetcd8tkletokexvivo AT dingy cd40ligandaktivirovannyevkletkitransfecirovannyernkkletokgepatocellûlârnoikarcinomyinduciruûtotvetcd8tkletokexvivo AT yul cd40ligandaktivirovannyevkletkitransfecirovannyernkkletokgepatocellûlârnoikarcinomyinduciruûtotvetcd8tkletokexvivo AT liub cd40ligandaktivirovannyevkletkitransfecirovannyernkkletokgepatocellûlârnoikarcinomyinduciruûtotvetcd8tkletokexvivo |
| first_indexed |
2025-12-07T18:32:47Z |
| last_indexed |
2025-12-07T18:32:47Z |
| _version_ |
1850875437007241216 |