Імплантація кріоконсервованих фрагментів плаценти людини відновлює прооксидантно-антиоксидантний баланс у експериментальних тварин пізнього онтогенезу
У результаті проведених досліджень було показано, що у щурів пізнього онтогенезу стан балансу про- та антиоксидантної системи сироватки крові, печінки та гонад порушено в бік прооксидантних процесів. Проте імплантація піддослідним тваринам кріоконсервованих фрагментів плаценти людини дозволяє підв...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Дата: | 2017 |
| Автори: | , , , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Ukrainian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2017
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/139896 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Імплантація кріоконсервованих фрагментів плаценти людини відновлює прооксидантно-антиоксидантний баланс у експериментальних тварин пізнього онтогенезу / О.С. Прокопюк, В.Ю. Прокопюк, Н.М. Пасієшвілі, В.В. Чижевський, В.Ю. Трифонов, В.Г. Карпенко, О.О. Логінова // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2017. — Т. 27, № 1. — С. 61–70. — Бібліогр.: 16 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-139896 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Прокопюк, О.С. Прокопюк, В.Ю. Пасієшвілі, Н.М. Чижевський, В.В. Трифонов, В.Ю. Карпенко, В.Г. Логінова, О.О. 2018-06-21T13:16:55Z 2018-06-21T13:16:55Z 2017 Імплантація кріоконсервованих фрагментів плаценти людини відновлює прооксидантно-антиоксидантний баланс у експериментальних тварин пізнього онтогенезу / О.С. Прокопюк, В.Ю. Прокопюк, Н.М. Пасієшвілі, В.В. Чижевський, В.Ю. Трифонов, В.Г. Карпенко, О.О. Логінова // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2017. — Т. 27, № 1. — С. 61–70. — Бібліогр.: 16 назв. — укр. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/139896 618.46:57.086.13:577.121.7:57.084-089.6 7123 У результаті проведених досліджень було показано, що у щурів пізнього онтогенезу стан балансу про- та антиоксидантної системи сироватки крові, печінки та гонад порушено в бік прооксидантних процесів. Проте імплантація піддослідним тваринам кріоконсервованих фрагментів плаценти людини дозволяє підвищити активність ендогенної антиоксидантної системи та сприяє корекції патологічних змін, пов'язаних зі старінням. Аналіз отриманих даних свідчить, що відновлювальні процеси відбуваються переважно на клітинному та органному рівнях. Застосування кріоконсервованих фрагментів плаценти в похилому віці забезпечує поступову різновекторну корекцію сенильно-інволютивних змін, у саногенезі яких підвищення активності ендогенної антиоксидантної системи обґрунтовує перспективність створення профілактичнотерапевтичних програм геріатричної патології. В результате проведенных исследований было показано, что у животных позднего онтогенеза состояние баланса про- и антиоксидантной системы сыворотки крови, печени и гонад нарушено в сторону прооксидантных процессов. Однако имплантация подопытным животным криоконсервированных фрагментов плаценты позволяет повысить активность эндогенной антиоксидантной системы и способствует коррекции патологических изменений, связанных со старением. Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что восстановительные процессы происходят как на клеточном, так и на организменном уровне. Применение криоконсервированных фрагментов плаценты в пожилом возрасте обеспечивает постепенную разновекторную коррекцию сенильно-инволютивных изменений, в саногенезе которых увеличение активности эндогенной антиоксидантной системы обосновывает перспективность создания профилактико-терапевтических программ для лечения гериатрической патологии. The studies have shown that animals of late ontogeny had the misbalance in prooxidative-antioxidative system of blood serum, liver and gonads with shift to the prooxidant activity. Nevertheless, the implantation of cryopreserved human placenta fragments to experimental animals increased the activity of endogenous antioxidant system and contributed to the correction of pathological changes associated with aging. Analysis of the findings indicated that the restoration processes occurred both at cell and organism levels. The use of cryopreserved placental fragments in pre-senile age led to a gradual diverse correction of senile involutions, and an increased activity of endogenous antioxidant system during their sanogenesis substantiated the perspective of preventive and therapeutic protocols to treat geriatric pathologies. uk Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Імплантація кріоконсервованих фрагментів плаценти людини відновлює прооксидантно-антиоксидантний баланс у експериментальних тварин пізнього онтогенезу Implantation of cryopreserved human placental fragments restores prooxidant-antioxidant balance in experimental animals of late ontogeny Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Імплантація кріоконсервованих фрагментів плаценти людини відновлює прооксидантно-антиоксидантний баланс у експериментальних тварин пізнього онтогенезу |
| spellingShingle |
Імплантація кріоконсервованих фрагментів плаценти людини відновлює прооксидантно-антиоксидантний баланс у експериментальних тварин пізнього онтогенезу Прокопюк, О.С. Прокопюк, В.Ю. Пасієшвілі, Н.М. Чижевський, В.В. Трифонов, В.Ю. Карпенко, В.Г. Логінова, О.О. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| title_short |
Імплантація кріоконсервованих фрагментів плаценти людини відновлює прооксидантно-антиоксидантний баланс у експериментальних тварин пізнього онтогенезу |
| title_full |
Імплантація кріоконсервованих фрагментів плаценти людини відновлює прооксидантно-антиоксидантний баланс у експериментальних тварин пізнього онтогенезу |
| title_fullStr |
Імплантація кріоконсервованих фрагментів плаценти людини відновлює прооксидантно-антиоксидантний баланс у експериментальних тварин пізнього онтогенезу |
| title_full_unstemmed |
Імплантація кріоконсервованих фрагментів плаценти людини відновлює прооксидантно-антиоксидантний баланс у експериментальних тварин пізнього онтогенезу |
| title_sort |
імплантація кріоконсервованих фрагментів плаценти людини відновлює прооксидантно-антиоксидантний баланс у експериментальних тварин пізнього онтогенезу |
| author |
Прокопюк, О.С. Прокопюк, В.Ю. Пасієшвілі, Н.М. Чижевський, В.В. Трифонов, В.Ю. Карпенко, В.Г. Логінова, О.О. |
| author_facet |
Прокопюк, О.С. Прокопюк, В.Ю. Пасієшвілі, Н.М. Чижевський, В.В. Трифонов, В.Ю. Карпенко, В.Г. Логінова, О.О. |
| topic |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| topic_facet |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| publishDate |
2017 |
| language |
Ukrainian |
| container_title |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Implantation of cryopreserved human placental fragments restores prooxidant-antioxidant balance in experimental animals of late ontogeny |
| description |
У результаті проведених досліджень було показано, що у щурів пізнього онтогенезу стан балансу про- та
антиоксидантної системи сироватки крові, печінки та гонад порушено в бік прооксидантних процесів. Проте імплантація
піддослідним тваринам кріоконсервованих фрагментів плаценти людини дозволяє підвищити активність ендогенної
антиоксидантної системи та сприяє корекції патологічних змін, пов'язаних зі старінням. Аналіз отриманих даних свідчить,
що відновлювальні процеси відбуваються переважно на клітинному та органному рівнях. Застосування кріоконсервованих
фрагментів плаценти в похилому віці забезпечує поступову різновекторну корекцію сенильно-інволютивних змін, у саногенезі
яких підвищення активності ендогенної антиоксидантної системи обґрунтовує перспективність створення профілактичнотерапевтичних
програм геріатричної патології.
В результате проведенных исследований было показано, что у животных позднего онтогенеза состояние
баланса про- и антиоксидантной системы сыворотки крови, печени и гонад нарушено в сторону прооксидантных процессов.
Однако имплантация подопытным животным криоконсервированных фрагментов плаценты позволяет повысить активность
эндогенной антиоксидантной системы и способствует коррекции патологических изменений, связанных со старением.
Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что восстановительные процессы происходят как на клеточном,
так и на организменном уровне. Применение криоконсервированных фрагментов плаценты в пожилом возрасте обеспечивает
постепенную разновекторную коррекцию сенильно-инволютивных изменений, в саногенезе которых увеличение
активности эндогенной антиоксидантной системы обосновывает перспективность создания профилактико-терапевтических
программ для лечения гериатрической патологии.
The studies have shown that animals of late ontogeny had the misbalance in prooxidative-antioxidative system of
blood serum, liver and gonads with shift to the prooxidant activity. Nevertheless, the implantation of cryopreserved human placenta
fragments to experimental animals increased the activity of endogenous antioxidant system and contributed to the correction of
pathological changes associated with aging. Analysis of the findings indicated that the restoration processes occurred both at cell
and organism levels. The use of cryopreserved placental fragments in pre-senile age led to a gradual diverse correction of senile
involutions, and an increased activity of endogenous antioxidant system during their sanogenesis substantiated the perspective of
preventive and therapeutic protocols to treat geriatric pathologies.
|
| issn |
0233-7673 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/139896 |
| citation_txt |
Імплантація кріоконсервованих фрагментів плаценти людини відновлює прооксидантно-антиоксидантний баланс у експериментальних тварин пізнього онтогенезу / О.С. Прокопюк, В.Ю. Прокопюк, Н.М. Пасієшвілі, В.В. Чижевський, В.Ю. Трифонов, В.Г. Карпенко, О.О. Логінова // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2017. — Т. 27, № 1. — С. 61–70. — Бібліогр.: 16 назв. — укр. |
| work_keys_str_mv |
AT prokopûkos ímplantacíâkríokonservovanihfragmentívplacentilûdinivídnovlûêprooksidantnoantioksidantniibalansueksperimentalʹnihtvarinpíznʹogoontogenezu AT prokopûkvû ímplantacíâkríokonservovanihfragmentívplacentilûdinivídnovlûêprooksidantnoantioksidantniibalansueksperimentalʹnihtvarinpíznʹogoontogenezu AT pasíêšvílínm ímplantacíâkríokonservovanihfragmentívplacentilûdinivídnovlûêprooksidantnoantioksidantniibalansueksperimentalʹnihtvarinpíznʹogoontogenezu AT čiževsʹkiivv ímplantacíâkríokonservovanihfragmentívplacentilûdinivídnovlûêprooksidantnoantioksidantniibalansueksperimentalʹnihtvarinpíznʹogoontogenezu AT trifonovvû ímplantacíâkríokonservovanihfragmentívplacentilûdinivídnovlûêprooksidantnoantioksidantniibalansueksperimentalʹnihtvarinpíznʹogoontogenezu AT karpenkovg ímplantacíâkríokonservovanihfragmentívplacentilûdinivídnovlûêprooksidantnoantioksidantniibalansueksperimentalʹnihtvarinpíznʹogoontogenezu AT logínovaoo ímplantacíâkríokonservovanihfragmentívplacentilûdinivídnovlûêprooksidantnoantioksidantniibalansueksperimentalʹnihtvarinpíznʹogoontogenezu AT prokopûkos implantationofcryopreservedhumanplacentalfragmentsrestoresprooxidantantioxidantbalanceinexperimentalanimalsoflateontogeny AT prokopûkvû implantationofcryopreservedhumanplacentalfragmentsrestoresprooxidantantioxidantbalanceinexperimentalanimalsoflateontogeny AT pasíêšvílínm implantationofcryopreservedhumanplacentalfragmentsrestoresprooxidantantioxidantbalanceinexperimentalanimalsoflateontogeny AT čiževsʹkiivv implantationofcryopreservedhumanplacentalfragmentsrestoresprooxidantantioxidantbalanceinexperimentalanimalsoflateontogeny AT trifonovvû implantationofcryopreservedhumanplacentalfragmentsrestoresprooxidantantioxidantbalanceinexperimentalanimalsoflateontogeny AT karpenkovg implantationofcryopreservedhumanplacentalfragmentsrestoresprooxidantantioxidantbalanceinexperimentalanimalsoflateontogeny AT logínovaoo implantationofcryopreservedhumanplacentalfragmentsrestoresprooxidantantioxidantbalanceinexperimentalanimalsoflateontogeny |
| first_indexed |
2025-11-26T21:32:42Z |
| last_indexed |
2025-11-26T21:32:42Z |
| _version_ |
1850777377375780864 |
| fulltext |
УДК 618.46:57.086.13:577.121.7:57.084-089.6 7123
О.С. Прокопюк1, В.Ю. Прокопюк1*, Н.М. Пасієшвілі3,
В.В. Чижевський2, В.Ю. Трифонов4, В.Г. Карпенко5, О.О. Логінова5
Імплантація кріоконсервованих фрагментів плаценти людини
відновлює прооксидантно-антиоксидантний баланс
у експериментальних тварин пізнього онтогенезу
UDC 618.46:57.086.13:577.121.7:57.084-089.6 7123
O.S. Prokopyuk1, V.Yu. Prokopyuk1*, N.M. Pasieshvili3,
V.V. Chyzhevskiy2, V.Yu. Trifonov4, V.G. Karpenko5, O.O. Loginova5
Implantation of Cryopreserved Human Placental Fragments
Restores Prooxidant-Antioxidant Balance in Experimental
Animals of Late Ontogeny
Реферат: У результаті проведених досліджень було показано, що у щурів пізнього онтогенезу стан балансу про- та
антиоксидантної системи сироватки крові, печінки та гонад порушено в бік прооксидантних процесів. Проте імплантація
піддослідним тваринам кріоконсервованих фрагментів плаценти людини дозволяє підвищити активність ендогенної
антиоксидантної системи та сприяє корекції патологічних змін, пов'язаних зі старінням. Аналіз отриманих даних свідчить,
що відновлювальні процеси відбуваються переважно на клітинному та органному рівнях. Застосування кріоконсервованих
фрагментів плаценти в похилому віці забезпечує поступову різновекторну корекцію сенильно-інволютивних змін, у саногенезі
яких підвищення активності ендогенної антиоксидантної системи обґрунтовує перспективність створення профілактично-
терапевтичних програм геріатричної патології.
Ключові слова: кріоконсервовані біооб'єкти плацентарного походження, про- та антиоксидантна система організму,
старіння, геріатрія.
Реферат: В результате проведенных исследований было показано, что у животных позднего онтогенеза состояние
баланса про- и антиоксидантной системы сыворотки крови, печени и гонад нарушено в сторону прооксидантных процессов.
Однако имплантация подопытным животным криоконсервированных фрагментов плаценты позволяет повысить активность
эндогенной антиоксидантной системы и способствует коррекции патологических изменений, связанных со старением.
Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что восстановительные процессы происходят как на клеточном,
так и на организменном уровне. Применение криоконсервированных фрагментов плаценты в пожилом возрасте обеспе-
чивает постепенную разновекторную коррекцию сенильно-инволютивных изменений, в саногенезе которых увеличение
активности эндогенной антиоксидантной системы обосновывает перспективность создания профилактико-терапевтических
программ для лечения гериатрической патологии.
Ключевые слова: криоконсервированные биообъекты плацентарного происхождения, про- и антиоксидантная система,
старение, гериатрия.
Abstract: The studies have shown that animals of late ontogeny had the misbalance in prooxidative-antioxidative system of
blood serum, liver and gonads with shift to the prooxidant activity. Nevertheless, the implantation of cryopreserved human placenta
fragments to experimental animals increased the activity of endogenous antioxidant system and contributed to the correction of
pathological changes associated with aging. Analysis of the findings indicated that the restoration processes occurred both at cell
and organism levels. The use of cryopreserved placental fragments in pre-senile age led to a gradual diverse correction of senile
involutions, and an increased activity of endogenous antioxidant system during their sanogenesis substantiated the perspective of
preventive and therapeutic protocols to treat geriatric pathologies.
Key words: cryopreservation bioobjects of placental origin, pro- and antioxidant system, aging, geriatrics.
*Автор, якому необхідно надсилати кореспонденцію:
вул. Переяславська, 23, м. Харків, Україна 61016;
тел.: (+38 057) 373-74-35, факс: (+38 057) 373-59-52,
електронна пошта: cryo@online.kharkov.ua
*To whom correspondence should be addressed:
23, Pereyaslavska str., Kharkiv, Ukraine 61016;
tel.: +380 57 373 7435, fax: +380 57 373 5952,
e-mail: cryo@online.kharkov.ua
1Department of Cryobiology of Reproduction System, Institute for
Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Acad-
emy of Sciences of Ukraine, Kharkiv, Ukraine
2Low Temperature Bank of Biological Objects, Institute for Prob-
lems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy
of Sciences of Ukraine, Kharkiv, Ukraine
3Kharkiv Regional Clinical Perinatal Center, Kharkiv, Ukraine
4Interdepartmental Scientific Center for Cryobiology and Cryome-
dicine of the National Academy of Sciences, Academy of Medical
Sciences, Ministry of Health Care of Ukraine, Kharkiv, Ukraine
5Kharkiv Medical Academy of Postgraduate Education of Ukraine,
Kharkiv, Ukraine
1Відділ кріобіології систем репродукції, Інститут проблем кріо-
біології і кріомедицини НАН України, м. Харків
2Сектор «Низькотемпературний банк біологічних об’єктів», Інсти-
тут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України, м. Харків
3КЗОЗ «Харківський обласний клінічний перинатальний центр»
4ДП «Міжвідомчий науковий центр кріобіології і кріомедицини
НАН, АМН, МОЗ України»
5Харківська медична академія післядипломної освіти МОЗ
України
Надійшла 05.10.2015
Прийнята до друку 07.12.2016
Received October, 05, 2015
Accepted December, 07, 2016
оригінальне дослідження research article
Probl Cryobiol Cryomed 2017; 27(1): 61–70
https://doi.org/10.15407/cryo27.01.061
This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0),
which permits unrestricted reuse, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.
© 2017 O.S. Prokopyuk et al., Published by the Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
За даними ВОЗ демографічна ситуація в Європі
характеризується суттєвим збільшенням кількості
людей похилого віку. Бажання подовжити активне
життя, зберегти працездатність, фізичну, творчу та
сексуальну активність, репродуктивну функцію, а
також знизити важкість перебігу хвороб, пов’язаних
зі старінням зумовлює розвиток нових медичних
технологій у галузі геріатрії [9]. Складність пато-
генезу сенильно-інволютивних процесів і комор-
бідність геріатричної патології є причинами багато-
компонентного фармакологічного навантаження на
організм людини в процесі лікування, що призводить
до негативних наслідків [8]. Боротьба зі старінням,
як з еволюційно обумовленим процесом, не може
мати позитивного ефекту при використанні фарма-
кологічних засобів. Тому актуальним є пошук нових
системних геропротекторів природного походження
з мультикомпонентною дією [1, 8, 9].
На нашу думку, цим вимогам відповідає клі-
тинно-тканинна терапія, що ґрунтується на вико-
ристанні біооб’єктів раннього онтогенезу, серед
яких помітну біологічну дію мають біопрепарати
плацентарного походження [7, 15, 16]. Ця дія обумов-
лена властивостями плаценти як структури, яка
бере участь у системо- й органогенезі, пренаталь-
ному розвитку організму в цілому, а також його
захисті від ушкоджуючих факторів [15].
Потенційна здатність плацентарних структур
активізувати та відновлювати біологічні процеси в
клітинах і тканинах при імплантації [1, 8, 16] виз-
начає перспективи їх використання для корекції
дистрофічних процесів і репарації морфофункціо-
нальних ушкоджень, які розвиваються в організмі
з віком.
На основі результатів попередніх досліджень
нами було зроблено висновок, що серед кріоконсер-
вованих біооб’єктів плацентарного походження для
корекції патологічних порушень, пов’язаних зі
старінням, найбільш ефективними та безпечними
є фрагменти плаценти [14]. Механізмам саноге-
незу при використанні похідних фрагментів пла-
центи у пізньому онтогенезі присвячено значну
кількість досліджень, проте визначення впливу
плацентарної терапії на стан прооксидантно-анти-
оксидантного балансу в організмі старіючої люди-
ни, залишається актуальною науково-практичною
задачею [1, 15, 16].
Відомо, що в патогенезі сенильно-інволютивних
змін суттєву роль відіграють активні форми кисню
та вільні радикали. Численні дані щодо негативного
впливу окислювального стресу під час старіння
організму були узагальнені у вільнорадикальну
теорію старіння. Типовим результатом впливу
активних форм кисню є окислені білки, які утво-
рюються та накопичуються внаслідок метабо-
лічних процесів у клітинах організму. Механізми
The current European demography is characterized
by a significant increase in numbers of elderly people.
The development of novel medical approaches in
geriatrics is driven by peoples’ desire to prolong the
active life, keeping the performance, physical, creative
and sexual activities, reproductive function, and reducing
the severity of the diseases, associated with aging [8].
Due to severe pathogenesis of senile involutions and
comorbidity of a geriatric pathology any treatment will
be associated with multi-component pharmacological
loading on a human organism, and as a consequence
will result in negative drug aggression [6]. The fight
against aging as a naturally preconditioned process can
not acquire any positive effect if the pharmaceutical
products will be applied. That is why the screening for
novel system-level geroprotective agents of natural
origin with a multi-component effect is vitally impor-
tant [1, 6, 8].
We believe that these requirements are fitting with
cell-tissue therapy involving the biological objects of
early ontogenesis, for example biological products of
placental origin with strong biological effects [4, 14,
16]. These are provided by placenta features as the
structure, involved into system and organogenesis,
prenatal development of an organism in general as well
as in its protection against damaging factors [14].
The potential ability of placental structures to acti-
vate and restore biological processes in cells and tissues
following implantation [1, 6, 15] determines the pro-
spects of their use to correct degenerative changes as
well as structural damages, which are usually deve-
loping during ageing.
Previously we have found that among cryopre-
served biological objects of placental origin the placental
fragments were the most effective and safe products
during treatment of pathological disorders associated
with aging [13]. Many researches are conducted to
study the sanogenesis mechanisms arising following
application of the cryopreserved placental fragments
(CPF) in late ontogenesis, nevertheless assessing how
placental therapy acts in terms of prooxidant-antioxi-
dant balance in aging human body is still relevant both
as scientific or applied task [1, 14, 16].
It is known that the pathogenesis of senile involutive
changes is associated with severe activity of reactive
oxygen species and free radicals. Numerous data on
negative effects of oxidative stress during aging are
combined in a comprehensive free radical theory of
aging. Typical products of reactive oxygen species
activity are oxidized proteins, usually formed and accu-
mulated as a result of metabolic processes in cells.
Reparative mechanisms can not identify and neutralize
all these proteins, and with ageing their effectiveness
diminishes due to a reduced activity of proteases. If
the modified proteins become the part of cell mem-
brane, a threat to the integrity of cells and their orga-
62 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 27, №/issue 1, 2017
репарації не завжди можуть ідентифікувати та
знешкодити такі білки, оскільки з віком їх ефек-
тивність зменшується за рахунок зниження актив-
ності протеаз. У випадках, коли змінені білки стають
частиною клітинної мембрани, може виникнути
загроза для цілісності клітини та її органел. Уш-
коджені білки накопичуються в організмі людей
похилого віку і є складовою патогенезу катаракти,
хвороб Альцгеймера, Паркінсона тощо [1, 8, 9].
Визначення впливу кріоконсервованих фрагментів
плаценти (КФП) на процеси вільнорадикального
окислення (ВРО) й активність антиоксидантної
системи (АОС) у пізньому онтогенезі обумовлює
патогенетичну спрямованість та ефективність
плацентарної терапії геріатричної патології [16].
Метою даної роботи було вивчення стану проок-
сидантно-антиоксидантного балансу у тканинах
печінки, статевих залоз та крові 18-місячних щурів
після імплантації кріоконсервованих фрагментів
плаценти людини.
Матеріали та методи
Плаценту після фізіологічних пологів отриму-
вали від породіль із їх попередньої інформованої
згоди. Кріоконсервовані фрагменти плаценти лю-
дини отримували і кріоконсервували відповідно до
раніше розробленої методики [12, 14]. Дана мето-
дика передбачала асептичність технології, викорис-
тання в експерименті переважно синцитіохоріаль-
ної частини плаценти, максимальне звільнення
фрагментів плаценти від клітин крові, фібриноїду,
децидуальної оболонки та елементів, які не нале-
жать до ворсин плаценти, проте можуть бути отри-
мані разом з ними. У якості кріоконсерванта засто-
совували суміш розчинів гідроксиетилкрохмалю
та диметилсульфоксиду, заморожували фрагмен-
ти за двоетапною програмою з застосуванням іні-
ціації кристалоутворення та зберігали в кріобанку
при –196°С. Термін від отримання плаценти до
занурення КФП в азот не перевищував 8 годин. Роз-
морожували КФП стандартним методом на водя-
ній бані за температури 41°С до появи рідкої фази
[11].
В експерименті використовували 5- та 18-місяч-
них самців і самиць щурів лінії Вістар, яких розді-
лили на групи: 1 – 18-місячні самиці з імплантацією
КФП; 2 – 18-місячні хибнооперовані самиці; 3 –
18-місячні самці з імплантацією КФП; 4 – 18-місячні
хибнооперовані самці; 5 – 5-місячні самці; 6 –
5-місячні самиці. У групах спостереження (1 та 3)
було використано по 20, а у групах порівняння (2,
4–6) – по 15 тварин. Імплантацію здійснювали під
інфільтраційною анестезією 1,0 мл 0,25%-го розчи-
ну новокаїну. На зовнішній ділянці правого стегна
робили розріз довжиною 1 см та формували під-
шкірну кишеню, у якій розташовували КФП, після
nelles may appear. The damaged proteins are accu-
mulated in the body of the elderly people contribute to
the pathogenesis of cataract, Alzheimer’s, Parkinson’s
diseases, etc. [1, 6, 8]. Examining the influence of CPF
on the processes of free radical oxidation (FRO) and
activity of antioxidant system (AOS) in late ontogeny
specifies a pathogenic focus and efficiency of placental
therapy to treat a geriatric pathology [16].
This research aim was to study the state of prooxi-
dant-antioxidant balance in tissues of liver, gonads and
blood in 18-month-old rats after implantation of cryo-
preserved human placental fragments.
Materials and methods
Placenta was obtained after physiological labors
from women with their preliminary informed consent.
The fragments of human placenta were obtained and
cryopreserved according to the previously developed
method [11, 13]. This technique is aseptic, utilizes
mainly syncytio-chorial part of the placenta, provides
the maximum release of placental fragments of blood
cells, fibrinoid, decidual membrane and the elements
which are not referred to the placenta villi, but can be
derived together. As a cryopreservative we have used
the mixture of the hydroxyethyl starch and dimethyl
sulfoxide solutions, the fragments were frozen by two-
step program with initiation of crystal formation and
stored in the cryobank at –196°C. The term from the
moment of placenta deriving to the plunging of CPF
into liquid nitrogen did not exceed 8 hrs. The CPF were
thawed by standard method in a water bath at a tempe-
rature of 41°C up to a liquid phase appearance [10].
In the experiment we have used 5- and 18-month-
old male and female Wistar rats, which were divided
into following groups: 1 – 18-month-old females with
implanted CPF; 2 – 18-month-old sham-operated
females; 3 – 18-month-old males with implanted CPF;
4 – 18-month-old sham-operated males; 5 – 5-month-
old males; 6 – 5-month-old females. In observation
groups (1 and 3) 20 animals were used and the compa-
rison groups (2, 4–6) comprised 15 animals. Implan-
tation was performed under infiltration anesthesia with
1.0 ml of 0.25% Novocaine solution. The outer section
of right thigh was cut with 1 cm length and a subcuta-
neous pocket was formed wherein CPF were placed,
afterwards the incision was catgut sutured. Sham-
operated animals from the comparison groups (2 and
4) were subjected to a similar intervention, but with-
out implanting the CPF. The doses were calcula-
ted by the method from pre-clinical study of geriatric
drugs [15].
Examining the impact of CPF on animals of late
ontogenesis was performed with special emphasis on
the peculiarities of the organism, mostly changed during
aging and reflected its dynamics, as well as signifi-
cantly affected the life quality in elderly age. The tests
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 27, №/issue 1, 2017
63
цього розріз ушивали кетгутом. Хибнооперованим
тваринам у групах порівняння (2 та 4) проводили
аналогічне втручання, але без імплантації КФП.
Дози препаратів розраховували за методикою док-
лінічного вивчення геріатричних препаратів [2].
Під час визначення впливу КФП на організм
тварин пізнього онтогенезу звертали увагу на ті
особливості організму, які, перш за все, змінюють-
ся у процесі старіння, віддзеркалюють його дина-
міку та суттєво впливають на якість життя в похи-
лому віці. Для дослідження обрали кров, печінку
та статеву систему (гонади). Оцінювали стан про-
та антиоксидантної систем у органах і сироватці
крові.
Усі процедури з дослідними щурами виконували
керуючись міжнародними правилами та нормами.
Експерименти на тваринах проводили відповідно
до «Загальних принципів експериментів на твари-
нах», ухвалених VI Національним конгресом із
біоетики (Київ, 2016) та узгоджених із положення-
ми «Європейської конвенції про захист хребетних
тварин, які використовуються для експеримен-
тальних та інших наукових цілей» (Страсбург, 1986).
Протоколи експериментів були затверджені комі-
тетом з біоетики Інституту проблем кріобіології і
кріомедицини НАН України (протокол №2 від
03.06.2013).
Вимірювання вмісту гідроперекисів ліпідів у мік-
росомах печінки проводили за методом H. Ohkawa
[10], а у плазмі крові – за методом T. Asakawa [5].
Вміст гідроперекисів ліпідів у мітохондріях печінки
визначали в екстрагованих за Фолчем загальних
ліпідах [10]. Спектр поглинання забарвленого про-
дукту реєстрували на двопроменевому спектро-
фотометрі «Specord UV VIS» («Solar», Білорусь)
та вимірювали різницю екстинкцій при λ = 535 і
520 нм. Вміст гідроперекисів ліпідів розраховували
в еквівалентній кількості малонового диальдегіду
(МДА), коефіцієнт молярної екстинкції приймали
рівним 1,56 × 105 М–1·см–1 на 1 мг білка мікросом,
1 мл плазми крові або 1 мг загальних ліпідів міто-
хондрій.
Вимірювання швидкості накопичення МДА при
перекисному окисленні ліпідів (ПОЛ) проводили у
гомогенатах тканин, ізольованих мітохондріях і
мікросомах. Для вимірювання швидкості накопи-
чення МДА при спонтанному ПОЛ до 1,8 мл інкуба-
ційного середовища, яке містить 100 мМ трис-HCl
буфер (pH 7,4), додавали 0,2 мл гомогенату дослід-
жуваної тканини. У випадку аскорбат-індукованого
ПОЛ середовище додатково містило 0,5 мМ аскор-
бат, а аскорбат-ADP-Fe2+-індукованого ПОЛ –
0,5 мМ аскорбат, 4 мМ ADP, 12 мкМ солі Мора.
При дослідженні інтенсивності ПОЛ в ізольованих
мітохондріях і мікросомах, окрім наведених вище,
використовували середовище, яке містило 100 мМ
were performed in blood, liver and reproductive system
(gonads). The state of pro- and antioxidant systems in
organs and blood serum were evaluated.
All the procedures in experimental rats were perfor-
med according the international regulations, in particular
in compliance with to the General Principles of Expe-
riments in Animals, approved by the 6th National Cong-
ress in Bioethics (Kyiv, 2016) and the statements of
the European Convention for the Protection of Verteb-
rate Animals Used for Experimental and Other Scien-
tific Purposes (Strasbourg, 1986). Protocols of the ex-
periments were approved by the Committee in Bioethics
of the Institute for Problems of Cryobiology and Cryo-
medicine (Protocol №2, dated of June 03, 2013).
Lipid hydroperoxides content in liver microso-
mes were measured as reported by H. Ohkawa [9]
and those in plasma were assessed by the method of
T. Asakawa [2]. The content of lipid hydroperoxides
in liver mitochondria was determined by Folch extrac-
tion procedure [9]. The absorption spectrum of the
stained product was recorded with the double-beam
spectrophotometer Specord UV VIS (Solar, Belarus)
and an extinction difference was measured at λ = 535
and 520 nm. The content of lipid hydroperoxides was
calculated as the equivalent amount of malondialdehyde
(MDA), assuming the molar extinction coefficient equal
to 1.56 × 105 M–1·cm–1 per 1 mg microsomal protein,
1 ml of plasma or 1 mg total lipids of mitochondria.
Rate of MDA accumulation during lipid peroxi-
dation (LPO) was measured in homogenates of tissues,
isolated mitochondria and microsomes. To measure the
accumulation rate of MDA during spontaneous li-
pid peroxidation the incubation medium of 1.8 ml,
containing 100 mM Tris-HCl buffer (pH 7.4), was
supplemented with 0.2 ml homogenate of the studied
tissue. In ascorbate-induced LPO the medium addi-
tionally contained 0.5 mM ascorbate, and in case of
ascorbate-ADP-Fe2+-induced LPO the additives were
0.5 mM ascorbate, 4 mM ADP and 12 µM Mohr’s salt.
When investigating the LPO intensity in isolated mito-
chondria and microsomes, in addition to the above, we
used the medium that contained 100 mM Tris-HCl
buffer (pH 7.4), 1 mM NADPH, 4 mM ADP, 12 µM
Mohr’s salt. The method of G.I. Klebanov [3] was used
to find the content of MDA. Herewith the absorption
spectrum of TBA-reactive substances was recorded
with the double-beam spectrophotometer Specord UV
VIS (Solar), the extinction difference was measured
at 535 nm and 580 nm and the amount of MDA was
calculated, assuming the extinction coefficient equal
to 1.56 × 105 M–1·cm–1.
Catalase activity was measured in post-mitochond-
rial fraction of liver homogenate and red blood cells with
spectrophotometric method at λ = 240 nm [7] in 10 mM
K+-phosphate buffer (pH 7.4) with 0.1 mM EDTA,
15 mM H2O2 (37°C).
64 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 27, №/issue 1, 2017
трис-HCl буфер (pH 7,4), 1 мМ NADPH, 4 мМ ADP,
12 мкМ солі Мора. За методом Г.И. Клебанова
[3] визначали вміст МДА. При цьому записували
спектр поглинання ТБК-активних продуктів на
двопроменевому спектрофотометрі «Specord UV
VIS» («Solar»), вимірювали різницю екстинкції при
довжині хвиль 535 і 580 нм і розраховували кіль-
кість МДА, приймаючи коефіцієнт екстинкції рів-
ним 1,56 × 105 М–1·см–1.
Каталазну активність визначали в постмітохонд-
ріальній фракції гомогенату печінки та еритроцитах
спектрофотометричним методом при λ = 240 нм
[4] у 10 мМ К+-фосфатному буфері (рН 7,4) з
0,1 мМ ЕДТА, 15 мМ Н2О2 (37°С).
Глутатіон-S-трансферазну активність вимірю-
вали в мітохондріях, мікросомах і постмітохонд-
ріальній фракції гомогенату печінки спектрофото-
метричним методом при λ = 340 нм [4, 5] у сере-
довищі, яке містило 0,1 М К+-фосфатний буфер
(рН 6,5), 1 мкМ 1-хлор-2,4-динітробензол, 5 мМ
GSН, 0,2% тритон Х-100 (37°С). Активність розра-
ховували з використанням коефіцієнта молярної
екстинкції 9,6 × 103 М–1·см–1.
Глутатіонредуктазну активність у постміто-
хондріальній фракції печінки вимірювали спектро-
фотометричним методом за зменшенням рівня
NADPH [4, 5] у середовищі, яке містило 50 мМ
К+-фосфатний буфер (рН 7,4), 1 мМ ЕДТА, 0,16 мМ
NADPH, 1 мМ GSSG та 0,2% тритон Х-100 за тем-
ператури 37°С. Активність визначали в наномолях
NADPH/хв·мг білка з використанням коефіцієнта
молярної екстинкції 6,22 × 103 М–1·см–1.
Вміст церулоплазміну (ЦП) визначали у плазмі
крові з використанням середовища, яке містило
0,1 М ацетатного буфера (рН 5,5) і 0,1% парафені-
лендіаміну [10]. Плазму крові додавали в кількості
0,02 мл на 2 мл реакційного середовища. Тривалість
інкубації склала годину за температури 37°С. Реак-
цію зупиняли додаванням 0,01% азиду натрію.
Коефіцієнт поглинання в зразках при λ = 530 нм,
вміст ЦП визначали в наномолях на мілілітр плаз-
ми крові, використовуючи коефіцієнт перерахун-
ку 5,83.
Вміст шиффових основ (ШО) у гомогенатах тка-
нин і мітохондріях печінки вимірювали флуо-
риметричним методом після їх екстракції (хло-
роформом і метанолом у співвідношенні 1:2) з
суспензії органел. Дані представляли у відносних
одиницях, приймаючи інтенсивність флуорес-
ценції 1 мкг хінінсульфату в 1 мл 0,1 N H2SO4 за
1950 од. [13].
Глутатіонпероксидазну (ГП) активність виз-
начали в гомогенатах, цитозолі, мітохондріях тка-
нин, еритроцитах, плазмі та сироватці крові спект-
рофотометрично при λ = 340 нм за методом
D.E. Paglia в нашій модифікації [10] у 50 мМ К+,
Glutathione-S-transferase activity was measured
in mitochondria, microsomes and liver homogenate
post-mitochondrial fraction with spectrophotometric
method at λ = 340 nm [4, 5] in the medium with 0.1 M
K+-phosphate buffer (pH 6.5), 1 µM 1-chloro-2.4-
dinitrobenzene, 5 mM GSH and 0.2% Triton X-100
(37°C). The activity was calculated using a molar ex-
tinction coefficient of 9.6×103 M–1·cm–1.
Glutathione reductase activity in post-mitochond-
rial fraction of liver was measured spectrophoto-
metrically by decreasing of level of NADPH [2, 7] in
the medium that contained 50 mM K+-phosphate
buffer (pH 7.4), 1 mM EDTA, 0.16 mM NADPH,
1 mM GSSG and 0.2 Triton X-100 at 37°C. The acti-
vity was measured in nmol of NADPH/min×mg of
protein using a molar extinction coefficient of 6.22×
×103 M–1·cm–1.
The content of ceruloplasmin (CP) was examined
in plasma using the medium that contained 0.1 M
acetate buffer (pH 5.5) and 0.1% paraphenylenedia-
mine [9]. Blood plasma was added in an amount of
0.02 ml per 2 ml of reaction medium. The duration of
incubation was an hour at 37°C. The reaction was
stopped by adding 0.01% sodium azide. The absorption
coefficient in samples at λ = 530 nm, the CP content
was measured in nmol/ml of blood plasma using a
conversion factor of 5.83.
The content of Schiff bases (SB) in homogenates
of tissues and liver mitochondria was measured by flow
cytometry after their extraction (chloroform and me-
thanol in the 1: 2 ratio) from the suspension of orga-
nelles. The data are presented in relative units, assu-
ming the fluorescence intensity of 1 mg quinine sulfate
in 1 ml of 0.1 N H2SO4 for 1950 units [12].
Glutathione peroxidase (GP) activity was deter-
mined in homogenates, cytosol, mitochondria of tis-
sues, red blood cells, plasma and blood serum spe-
ctrophotometrically at λ = 340 nm by the method of
D.E. Paglia in our own modification [9] in 50 mM
K+, Na+-phosphate buffer (pH 7.4) containing 1 mM
EDTA, 0.15 mM NADPH, 1 unit of glutathione yeast,
0.2% Triton X-100 and 3 mM sodium azide to inhi-
bit catalase. Cumene hydroperoxide was added at
37°C in a concentration of 1.2 mM and hydrogen pe-
roxide at 0.4 mM. The activity was expressed as
nmol NADPH /min per mg of protein or ml of serum,
taking into account the molar extinction coefficient
6.22×103 M–1·cm–1.
In this research we used the following reagents:
NADPH, GSH, GSSG, Tris(oxymethyl) aminomethane,
adrenaline, human serum albumin, mannite (Reanal,
Hungary); Triton X-100 (Ferak, Germany); cumene
hydroperoxide, KH2PO4, sodium azide (Merk, Germa-
ny); glutathione reductase, CaCl2, Na2HPO4, NaHCO3
(Sigma, USA); nitrotetrazolium blue (Chemapol,
Czech Republic), xanthine oxidase (Serva, USA);
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 27, №/issue 1, 2017
65
Na+-фосфатному буфері (рН 7,4), який містив 1 мМ
ЕДТА, 0,15 мМ NADPH, 1 од. глутатіонредукта-
зи дріжджів, 0,2% тритон Х-100 і 3 мМ азиду нат-
рію для інгібування каталази. Гідроперекис ку-
молу додавали за температури 37°С у концентрації
1,2 мМ, перекис водню – 0,4 мМ. Активність вира-
жали в наномолях NADPH/хв на 1 мг білка або
1 мл сироватки з урахуванням коефіцієнта моляр-
ної екстинкції 6,22 ×103 М–1·см–1.
У роботі використовували такі реактиви:
NADPH, GSH, GSSG, трис(оксиметил)аміноме-
тан, адреналін, людський сироватковий альбу-
мін, манніт («Reanal», Угорщина); тритон X-100
(«Ferak», Німеччина); гідроперекис кумолу,
KH2PO4, азид натрію («Merk», Німеччина); глута-
тіонредуктазу, CaCl2, Na2HPO4, NaHCO3 («Sigma»,
США); нітротетразолій синій («Chemapol», Чехія),
ксантиноксидаза («Serva», США); α-токоферол
(«ICN», США), а також реактиви вітчизняного
виробництва кваліфікації «чда», «хч» та «осч».
Для перевірки статистичної значущості різниці
між виборками застосовували критерій Стьюден-
та. Для статистичних розрахунків та обробки да-
них використовували комп’ютерну програму «Stat-
graphics V 2.1» («Statpoin Technologies Inc.», США).
Результати та обговорення
Відповідно до вільнорадикальної теорії старіння
з віком суттєво змінюється інтенсивність процесів
ВРО та функціональна активність АОС. Водночас
наявні дані щодо впливу біопрепаратів плацен-
α-tocopherol (ICN, USA) and reagents of home pro-
duction graded as ‘pure for analysis’, ‘chemically pure’
and ‘extra pure’.
To check the statistical significance of the diffe-
rences between the samples the Student test was used.
For statistical calculations and data processing we
used the software Statgraphics V 2.1 (Statpoin Tech-
nologies Inc., USA).
Results and discussion
The free radical theory of aging supposes that the
FRO intensity and functional activity of AOS undergo
significant changes with age. At the same time,
available data on the impact of biological products of
placental origin stipulated the need of studying the effect
of CPF on FRO/AOS in the late ontogenesis. The
decisive role here was played by the features of the
course and regulation of FRO in various systems and
levels of organization. Our findings could be used not
only to report the changes, but to describe the mecha-
nisms and levels of regulatory action as well.
In particular, the investigation of the indices of pro-
oxidant system in serum of experimental rats (Fig. 1)
revealed that the content of lipid hydroperoxides in all
the studied groups almost did not differed. The intensity
of ascorbate-induced LPO in elderly females was
increased significantly, after the implantation of CPF
this value declined slightly, but did not reach the level
of young animals. For aged males the ascorbate-
induced LPO was significantly different from that of
young animals regardless of the type of treatment.
Рис. 1. Вміст гідроперекисів ліпідів (A) та інтенсивність аскорбат-Fe2+-індукованого ПОЛ (B) у сироватці крові
молодих та старих щурів у контролі та після введення КФП: 1 – старі самиці з імплантацією КФП; 2 – старі
хибнооперовані самиці; 3 – старі самці з імплантацією КФП; 4 – старі хибнооперовані самці; 5 – молоді самці; 6 –
молоді самиці. Статистично значуща різниця показників молодих (*) та старих тварин (#), p < 0,05.
Fig. 1. Content of lipid hydroperoxides (A) and intensity of ascorbate-Fe2+-induced lipid peroxidation (B) in blood serum
of young and aged rats in control and with introduction of CPF: 1 – aged females with implanted CPF, 2 – sham-
operated aged females; 3 – aged males with implanted CPF; 4 – sham-operated aged males; 5 – young males; 6 –
young females. Statistically significant difference of the indices in the groups of young (*) and aged (#) animals, p < 0.05.
Гі
др
оп
ер
ик
ис
и
лі
пі
ді
в,
н
м
ол
ь
М
ДА
/м
л
си
ро
ва
тк
и
Li
pi
d
hy
dr
op
er
ox
id
es
, n
m
ol
M
D
A/
m
l
of
s
er
um
Групи тварин
Groups of animals
Ін
те
нс
ив
ні
ст
ь
ас
ко
рб
ат
-ін
ду
ко
ва
но
го
П
О
Л
нм
ол
ь
М
ДА
/м
л
си
ро
ва
тк
и
за
2
0
хв
In
te
ns
ity
o
f a
sc
or
ba
te
-in
du
ce
d
LP
O
n
m
ol
M
D
A/
m
l o
f s
er
um
fo
r 2
0
m
in
Групи тварин
Groups of animals
0
1
2
3
4
1 2 3 4 5 6
0
2
4
6
8
10
12
1 2 3 4 5 6
A B
*
**
*
66 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 27, №/issue 1, 2017
#
Study of AOS activity in rats of the experimental
groups showed that GP activity and the content of
enzymatically active CP in serum significantly declined
with aging. After administration of CP these values
significantly increased, but did not reach the counts of
young animals (Fig. 2).
During studying the indices of prooxidant system
in liver of experimental animals we revealed that
primary products of LPO (lipid hydroperoxides) and
the final products of LPO (SB) were strongly elevated
with age. Application of CPF led to insignificant de-
crease (p > 0.05) of the levels of lipid hydroperoxides
and significant one in SB (Table 1).
Investigation of activity of antioxidant enzymes
in liver post-nuclear fraction of the studied groups
revealed a significantly decreased activity of catalase,
GP and glutathione reductase in late ontogeny ani-
mals. The revealed rise in free radical activity toge-
ther with reducing antioxidant potential could explain
the injury of membranes of hepatocytes, hypoxia of
liver and its changes in its structure. During intro-
duction of CPF to aged rats we observed the resto-
ration of the AOS response almost to the level of
young animals (Table 2).
Analysis of the obtained indices of prooxidant sys-
tem in the gonads (ovaries and testes) of the animals
had shown that there were virtually no differences in
the amount of lipid hydroperoxides in all the groups of
тарного походження обумо-
вили актуальність дослід-
ження дії КФП на ВРО/АОС
у період пізнього онтогенезу.
Вирішальну роль відіграють
особливості перебігу та ре-
гуляції ВРО у різних системах
і рівнях організації. На основі
отриманих даних можна не
тільки констатувати виявлені
зміни, а й описати механізми
та рівні регуляторної дії.
Так, під час дослідження
показників прооксидантної сис-
теми у сироватці експеримен-
тальних щурів (рис. 1) вияв-
лено, що вміст гідроперекисів
ліпідів в усіх досліджуваних
групах майже не відрізнявся.
Інтенсивність аскорбат-інду-
кованого ПОЛ у самиць стар-
шого віку вірогідно підвищува-
лася, після імплантації КФП
цей показник незначно знижу-
вався, але не досягав рівня мо-
лодих тварин. У старих самців
рівень аскорбат-індуковано-
го ПОЛ значуще відрізнявся
Таблиця 1. Вміст гідроперекисів ліпідів та Шифових основ у пост'ядерній
фракції гомогенатів печінки та статевих залозах молодих та старих щурів
Table 1. Content of lipid hydroperoxides and Schiff bases of post-nuclear
fraction bases in homogenates of liver and gonads of young and aged rats
Примітки: * – різниця значуща порівняно з групами молодих тварин, p < 0,05; & –
різниця значуща порівняно з групами старих тварин, p < 0,05; # – різниця значуща
порівняно з показниками в групах старих тварин, p < 0,1.
Note: * – significant of difference with indices in groups of young animals, p < 0.05; & –
significant of difference in the groups of aged animals, p < 0.05; # – significant of
difference with indices in groups of aged animals, p < 0.1.
від показників молодих тварин незалежно від ліку-
вання.
Під час вивчення активності АОС щурів дос-
ліджуваних груп було виявлено, що зі старінням
значущо зменшувалися активність ГП і вміст
ферментативно активного ЦП у сироватці кро-
ві. Після введення КФП ці показники вірогідно
зростали, але не досягали рівня молодих тварин
(рис. 2).
При дослідженні показників прооксидантної
системи в печінці експериментальних тварин вияв-
лено, що рівень первинних продуктів ПОЛ (гідро-
перекиси ліпідів) і кінцевих продуктів ПОЛ (ШО) з
віком значуще збільшувався. Застосування КФП
призводило до незначного зниження (р > 0,05) рівнів
гідроперекисів ліпідів і значущого – ШО (табл. 1).
При визначенні активності антиоксидантних
ферментів у пост’ядерній фракції печінки досліджу-
ваних груп встановлено, що активність каталази,
ГП та глутатіонредуктази у тварин пізнього онто-
генезу значущо зменшувалася. Показники глутатіон
трансферази не змінювалися. Виявленим зростан-
ням вільнорадикальної активності при зменшенні
антиоксидантного потенціалу пояснюється ушкод-
ження мембран гепатоцитів, гіпоксія печінки, її
деструктурізація. На фоні введення старим щурам
КФП спостерігалося відновлення активності АОС
практично до рівня молодих тварин (табл. 2).
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 27, №/issue 1, 2017
67
ипурГ
ниравт
fospuorG
slamina
ьломн,відіпілисикерепордіГ
иктаворислм/АДМ
,sedixorepordyhdipiL
mureslm/ADMlomn
аклібгм/.до.му,ОШ
nietorpstinu.bra,BS
акнічеП
reviL
изолазіветатС
sdanoG
акнічеП
reviL
изолазіветатС
sdanoG
1 470,0±897,0 92,0±80,2 *45,1±95,31 &, 57,1±78,71
2 *550,0±298,0 35,0±64,2 *52,1±39,71 89,1±80,02
3 450,0±908,0 43,0±60,2 33,1±25,41 # 63,1±58,51 #
4 *640,0±898,0 34,0±34,2 *25,1±13,71 *28,1±98,91
5 440,0±857,0 92,0±16,1 32,0±08,21 17,0±45,51
6 230,0±947,0 61,0±84,1 31,0±10,21 70,0±59,61
Результати аналізу отриманих показників проок-
сидантної системи у статевих залозах (сім’яниках
та яєчниках) тварин показали, що рівень гідро-
перекисів ліпідів майже не відрізнявся в усіх групах
animals. At the same time, the level of SB in the group
of rats of late ontogeny males was significantly higher
and after the application of CPF it was lowered to the
level of young animals (see Table 1).
Рис. 2. Se-залежна глутатіонпероксидазна активність (А) та вміст ферментативно-активного церулоплазміну (B)
в сироватці крові молодих та старих щурів у контролі та при дії КФП: 1 – старі самиці з імплантацією КФП; 2 – старі
хибнооперовані самиці; 3 – старі самці з імплантацією КФП; 4 – старі хибнооперовані самці; 5 – молоді самці; 6 –
молоді самиці. Статистично значуща різниця показників із групами молодих (*) та старих (#) тварин, p < 0,05.
Fig. 2. Se-dependent glutathione peroxidase activity (A) and content of enzymatically-active ceruloplasmin (B) in serum
of young and aged rats in the control and under the effect of CPF: 1 – aged female implanted with CPF; 2 – sham-
operated aged females; 3 – aged males implanted with CPF; 4 – sham-operated aged males; 5 – young males; 6 –
young females. Statistically significant difference of the indices in the groups of young (*) and aged (#) animals, p < 0.05.
Гл
ут
ат
іо
нп
ер
ок
си
да
за
,
нм
ол
ь
N
AD
PH
/х
в/
м
л
си
ро
ва
тк
и
G
lu
ta
th
io
ne
p
er
ox
id
as
e,
n
m
ol
M
D
A/
m
l
of
s
er
um
Групи тварин
Groups of animals
Ц
ер
ул
оп
ла
зм
ін
, н
мо
ль
/м
л
си
ро
ва
тк
и
C
er
ul
op
la
sm
in
,n
m
ol
M
D
A
/m
l
of
s
er
um
Групи тварин
Groups of animals
Таблиця 2. Активність антиоксидантних ферментів у пост'ядерній фракції клітин печінки
та статевих залоз тварин у групах спостереження
Table 2. Activity of antioxidant enzymes in post-nuclear fraction of cells of liver
and gonads of animals in the observation group
Примітки: * – різниця значуща порівняно з групами молодих тварин, p < 0,05; & – різниця значуща порівняно з групами старих
тварин, p < 0,05; # – різниця значуща порівняно з показниками в групах старих тварин, p < 0,1.
Note: * – significant of difference with indices in groups of young animals, p < 0.05; & – significant of difference in the groups of aged
animals, p < 0.05; # – significant of difference with indices in groups of aged animals, p < 0.1.
0
200
400
600
800
1000
1 2 3 4 5 6
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
1 2 3 4 5 6
B
* *
* *
* *
68 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 27, №/issue 1, 2017
# #
##
A
ипурГ
ниравт
spuorG
fo
slamina
Ньломкм,азалатаK 2О2 вх/ × гм
акліб
ataC ,esal µ Нlom 2О2 nim/ × mg
nietorp
вх/HPDANьломн,ПГ × аклібгм
nim/HPDANlomn,PG × nietorp
,азарефснартSноітатулГ
ьломн HPDAN вх/ × аклібгм
,esarefsnarTSenoihtatulG
lomn HPDAN nim/ × gm
nietorp
ьломн,азаткудерноітатулГ
вх/HPDAN × аклібгм
,esatcudeRenoihtatulG
nim/HPDANlomn × gm
nietorp
акнічеП
reviL
изолазіветатС
sdanoG
акнічеП
reviL
изолазіветатС
sdanoG
акнічеП
reviL
іветатС
изолаз
sdanoG
акнічеП
reviL
іветатС
изолаз
sdanoG
1 86,41±8,914 & 87,31±7,983 & 7,61±4,722 & 2,11±7,522 & 9,89±2,057 5,41±0,057 4,3±4,69 # *2,2±5,39
2 *5,71±3,123 *5,81±4,133 *1,22±0,941 *7,32±0,771 3,62±7,417 1,22±6,917 *0,9±2,87 1,9±2,88
3 98,61±2,224 & 09,51±2,283 & 8,41±4,912 & 8,11±9,712 & 9,85±2,647 5,81±2,657 9,3±4,29 1,4±8,29
4 *2,31±3,923 *2,41±2,113 *8,31±0,871 *1,81±5,681 2,72±3,637 9,32±5,037 3,7±5,48 7,8±6,58
5 2,01±4,783 3,8±4,293 6,6±6,822 5,7±6,032 1,21±9,967 2,11±8,767 1,3±3,79 1,2±4,89
6 4,31±0,093 1,11±6,193 5,4±6,832 5,6±4,332 9,21±0,557 9,11±2,957 1,4±9,301 3,3±6,001
тварин. У той самий час рівень ШО у групі самців
пізнього онтогенезу був значущо вищим, а після
застосування КФП знижувався до рівня молодих
тварин (див. табл. 1).
При визначенні активності антиоксидантних
ферментів у пост’ядерній фракції клітин статевих
залоз досліджуваних груп суттєвого коливання ак-
тивності глутатіонредуктази не виявлено. Актив-
ність каталази, ГП та глутатіонтрансферази у тва-
рин пізнього онтогенезу значущо зменшувалася, а
після застосування КФП відновлювалася прак-
тично до рівня контрольної групи тварин (табл. 2).
Змін активності глутатіонтранферази не виявлено
в жодному випадку, деякі зміни глутатіонредуктази
спостерігали у самиць, але вони були менш значу-
щими.
Таким чином, при дослідженні показників про-
та антиоксидантної систем у сироватці крові, печін-
ці та статевих залозах виявлено, що з віком спосте-
рігається активація прооксидантних процесів, а після
застосування КФП відновлюється активність ос-
новних антиоксидантних ферментів. Цей факт
узгоджується з літературними даними [16]. Більш
виражений ефект спостерігається у самців, що
пояснюється рівномірним функціонуванням стате-
вої та інших систем, а також більш короткою трива-
лістю життя. У самиць із віком активність статевої
системи різко падає, та її неможливо відновити у
зв’язку з закінченням фолікулярного резерву [6].
Висновки
У результаті проведеного дослідження вияв-
лено, що з віком спостерігається активація проокси-
дантних процесів у сироватці крові, печінці та
статевих залозах, особливо у самців. Застосування
препаратів плаценти дозволяє нормалізувати про-
та антиоксидантний баланс в організмі за рахунок
активації каталази, пероксидази, церулоплазміну.
Виявлене підвищення активності антиоксидант-
ної системи під час застосування КФП можна виз-
нати складовою механізму різновекторної корекції
сенильно-інволютивних змін. Це дає змогу у май-
бутньому створювати терапевтичні програми ге-
ріатричної патології з використанням кріоконсер-
вованих плацентарних структур. У подальшому
планується вивчення механізмів впливу КФП на
організм тварин різного віку.
Assessment of antioxidant enzymes activity in post-
nuclear fraction of gonadal cells in the studied groups
revealed no significant fluctuations in the activity of
glutathione reductase. The activity of catalase, gluta-
thione transferase and GP in late ontogeny animals
was significantly reduced and after application of CPF
it recovered almost to the level of the control group
animals (Table 2). No changes of glutathione trans-
ferase were found in any case, some changes in gluta-
thione reductase were observed in females, but the
difference was statistically insignificant.
Thus, the study of indices of pro- and antioxidant
systems in serum, liver and gonads revealed that ageing
is accompanied with an activation of oxidative pro-
cesses and applying of CPF resulted in restoration of
activity of major antioxidant enzymes, that agreed with
the reports on placental stem cells [16]. A more pro-
nounced effect was observed in males, that could be
explained by a uniform function of reproductive and
other systems, as well as a shorter life span. Aging
females suffer from a drop in reproductive system ac-
tivity, and this can not be restored due to the exhausted
follicular reserve [3].
Conclusions
The performed study enabled to reveal an age-
dependent activation of pro- and antioxidant processes
in blood serum, liver and gonads, especially in males.
The application of placental preparations allowed to
improve the pro-/antioxidant balance in an organism
through the activation of catalase, peroxidase and
ceruloplasmin.
The revealed increased activity of antioxidant sys-
tem after application of CPF could be considered as a
part of the mechanism of versatile correction of senile
involutive changes. This allows the future creation of
the protocols to treat the geriatric pathologies using
the cryopreserved placental structures. We are plan-
ning to study the mechanisms of CPF effect on animals
of various ages.
Література
1. Анисимов В.Н. Молекулярные и физиологические меха-
низмы старения: 2-е издание, перераб. и доп. – СПб.: Наука,
2008. – 481 c.
2. Доклінічні дослідження лікарських засобів: Методичні реко-
мендації / За ред. О.В. Стефанова. – К.: Авіцена, 2001. –
528 с.
References
1. Anisimov V.N. Molecular and physiological mechanisms of aging:
2nd edition, revised and enlarged. Saint-Petersburg. Nauka; 2008.
2. Asakawa T., Matsushita S. Coloring condition of thiobarbituric
acid test for detecting lipid hydroperoxides. Lipids 1980; 15(3):
137–140.
3. Farhat M.Y., Lavigne M.C., Ramwell P.W. The vascular protective
effects of estrogen. FASEB J 1996; 10 (5): 615–624.
4. Jonathan R.C., Saltzman B.M., Yanke A.B., Cole B.J. Derived
products in sports medicine: basic science, early results, and
potential clinical applications. Am J Sports Med 2016; 44(9):
2425–2434.
5. Klebanov G.I., Babenkova I.V., Teselkin Yu.O. et al. Assessment
of antioxidant activity of blood plasma. Laboratornoye Delo 1988;
(5): 59–62.
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 27, №/issue 1, 2017
69
3. Клебанов Г.И., Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О. Оценка
антиокислительной активности плазмы крови // Лабора-
торное дело. – 1988. – №5. – С. 59–62.
4. Ланкин В.З., Гуревич С.М. Ингибирование переокисления
липидов и детоксикация липоперекисей защитными фер-
ментными системами (супероксид-дисмутаза, глутатион-
пероксидаза и глутатион-редуктаза) при эксперимен-
тальном злокачественном росте // Доклады АН СССР. –
1976. – Т. 226, №3. – С. 705–708.
5. Asakawa T., Matsushita S. Coloring condition of thiobarbituric
acid test for detecting lipid hydroperoxides // Lipids. – 1980. –
Vol. 15, №3. – P. 137–140.
6. Farhat M.Y., Lavigne M.C., Ramwell P.W. The vascular protec-
tive effects of estrogen // FASEB J. – 1996. – Vol. 10, №5. –
P. 615–624.
7. Jonathan R.C., Saltzman B.M., Yanke A.B., Cole B.J. Derived
products in sports medicine: basic science, early results, and
potential clinical applications // Am. J. Sports Med. – 2016. –
Vol. 44, №9. – Р. 2425–2434.
8. Kumara S., Lombardb D.B. Finding Ponce de Leon's pill: chal-
lenges in screening for anti-aging molecules // F1000Rev. –
2016. – 06.
9. Lopez-Otin C., Blasco M.A., Partridge L. et al. The hallmarks of
aging // Cell. – 2013. – Vol. 153, №6 – P. 1194–1217.
10.Ohkawa H., Ohahi N., Jadi K. Assay for lipid peroxides in ani-
mal tissues by thiobarbituric acid reaction // Anal. Biochem. –
1979. – Vol. 95, №2. – P. 351–358.
11.Pogozhykh D., Pogozhykh O., Mueller T., Prokopyuk O. Influence
of factors of cryopreservation and hypothermic storage on
survival and functional parameters of multipotent stromal cells
of placental origin // PLoS One. – 2015. – Vol.10, № 10. – P. 1–25.
12.Prokopyuk V. Yu., Prokopyuk O.S., Musatova I.B. et. al. Safety
of placental, umbilical cord and fetal membrane explants after
cryopreservation // Cell and Organ Transplantology. – 2015. –
Vol. 3, №1. – P. 34–38.
13.Ravin H.A. Rapid test for hepatolenticular degeneration //
Lancet. – 1956. – Vol. 1. – P. 7267–7271.
14.Schevchenko N.O., Somova K.V., Prokopyuk V.Yu. et al. Dyna-
mics of activity and duration of functioning of cryopreserved
cryoextract, placental cells and fragments in the organism of
experimental animals // Morphologia. – 2016. – Vol. 10, №2. –
P. 93–98.
15. Silini A.R., Parolini O., Cargnoni A., Magatti M. et al. The long
path of human placenta, and its derivatives, in regenerative
medicine // Front. Bioeng. Biotechnol. – 2015. – Vol. 19, №3. –
P. 162.
16.Xie C., Jin J., Lv X., Tao J. et al. Antiaging effect of transplanted
amniotic membrane mesenchymal stem cells in a premature
aging model of Bmi-1 deficiency // Sci. Rep. – 2015. – Vol. 5. –
P. 13975.
6. Kumara S., Lombardb D.B. Finding Ponce de Leon's pill: challen-
ges in screening for anti-aging molecules. F1000Rev 2016; 06.
7. Lankin V.Z., Gurevich S.M. Inhibition of lipid peroxidation and
detoxification of lipid peroxides with protective enzyme systems
(superoxide dismutase, glutathione peroxidase and glutathione
reductase) in experimental malignant growth. Reports of Academy
of Sciences of USSR 1976; 226(3): 705–708.
8. Lopez-Otin C., Blasco M.A., Partridge L. et al. The hallmarks of
aging. Cell 2013; 153(6): 1194–1217.
9. Ohkawa H., Ohahi N., Jadi R. Assay for lipid peroxides in animal
tissues by thiobarbituric acid reaction. Anal Biochem 1979; 95(2):
351–358.
10.Pogozhykh D., Prokopyuk V., Pogozhykh O. et al. Influence of
factors of cryopreservation and hypothermic storage on survival
and functional parameters of multipotent stromal cells of placental
origin. PLoS One 2015; 10(10): 1–25.
11.Prokopyuk V.Yu., Prokopyuk O.S., Musatova I.B. et al. Safety of
placental, umbilical cord and fetal membrane explants after
cryopreservation. Cell and Organ Transplantology 2015; 3(1):
34–38.
12.Ravin H.A. Rapid test for hepatolenticular degeneration. Lancet
1956; 1: 7267–7271.
13.Schevchenko N.O., Somova K.V., Prokopyuk V.Yu. et al. Dyna-
mics of activity and duration of functioning of cryopreserved
cryoextract, placental cells and fragments in the organism of
experimental animals. Morphologia 2016; 10(2): 93–98.
14.Silini A.R., Cargnoni A., Magatti M. et al. The long path of human
placenta, and its derivatives, in regenerative medicine. Front
Bioeng Biotechnol 2015; 19(3): 162.
15.Stefanov O.V., editor. Preclinical trials of medicines [guidelines].
Kyiv: Avitsena; 2001.
16.Xie C. Jin J., Lv X. et al. Antiaging effect of transplanted amniotic
membrane mesenchymal stem cells in a premature aging mo-
del of Bmi-1 deficiency. Sci Rep 2015; 5: 13975.
70 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 27, №/issue 1, 2017
|