Вплив бета-дефенсину-2 людини на експресію транскрипційних факторів у злоякісно трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження
Мета: дослідити вплив рекомбінантного бета-дефенсину-2 людини (hBD-2)
 на рівень експресії мРНК транскрипційних факторів (ТФ) у злоякісно
 трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження, а також
 з’ясувати можливість регуляції експресії hBD-2 через поверхневі рецеп...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Онкологія |
|---|---|
| Datum: | 2016 |
| Hauptverfasser: | , , , , , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Ukrainisch |
| Veröffentlicht: |
Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України
2016
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/145276 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Вплив бета-дефенсину-2 людини на експресію транскрипційних факторів у злоякісно трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження / І.М. Гордієнко, О.В. Журавель, Л.М. Ковалевська, М.О. Солдаткіна, Л.М. Шлапацька, В.М. Холоднюк, С.П. Сидоренко, П.В. Погрібний // Онкологія. — 2016. — Т. 18, № 4. — С. 255-261. — Бібліогр.: 19 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860064456958017536 |
|---|---|
| author | Гордієнко, І.М. Журавель, О.В. Ковалевська, Л.М. Солдаткіна, М.О. Шлапацька, Л.М. Холоднюк, В.М. Сидоренко, С.П. Погрібний, П.В. |
| author_facet | Гордієнко, І.М. Журавель, О.В. Ковалевська, Л.М. Солдаткіна, М.О. Шлапацька, Л.М. Холоднюк, В.М. Сидоренко, С.П. Погрібний, П.В. |
| citation_txt | Вплив бета-дефенсину-2 людини на експресію транскрипційних факторів у злоякісно трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження / І.М. Гордієнко, О.В. Журавель, Л.М. Ковалевська, М.О. Солдаткіна, Л.М. Шлапацька, В.М. Холоднюк, С.П. Сидоренко, П.В. Погрібний // Онкологія. — 2016. — Т. 18, № 4. — С. 255-261. — Бібліогр.: 19 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Онкологія |
| description | Мета: дослідити вплив рекомбінантного бета-дефенсину-2 людини (hBD-2)
на рівень експресії мРНК транскрипційних факторів (ТФ) у злоякісно
трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження, а також
з’ясувати можливість регуляції експресії hBD-2 через поверхневі рецептори
цих клітин. Об’єкт і методи: в експериментах in vitro були використані злоякісно трансформовані лінії клітин людини В-лімфоцитарного походження,
В-лімфобластоїдні лінії клітин та hBD-2. Визначення рівня експресії мРНК
ТФ та hBD-2 проводили за допомогою кількісної полімеразної ланцюгової реакції у режимі реального часу. Результати: у цій роботі вперше показано
вплив hBD-2 на рівень експресії мРНК ключових ТФ, необхідних для диференціювання В-лімфоцитів, причому ефект hBD-2 залежав від вихідного профілю експресії ТФ у клітинних лініях. Виявлено, що в лінії клітин BJAB бетадефенсин-2 виступає негативним регулятором ТФ IRF4 та BLIMP-1, які
функціонують як основні координатори термінальної стадії диференціювання В-лімфоцитів— стадії плазматичних клітин. Улінії клітин Raji внаслідок
дії hBD-2 відмічено зниження експресії лише одного ТФ — IRF4, в той час як
у В-лімфобластоїдній лінії клітин Т5–1 при дії hBD-2 рівень ТФ не змінювався. Виявлено, що в В-лімфоцитах рівень експресії hBD-2 може регулюватися із залученням поверхневих рецепторів: чи то негативно через BCR в клітинах Raji, чи то позитивно через CD40 рецептор у клітинах Т5–1, але не залежить від сигналювання через CD150. Висновок: показано потенційну роль
hBD-2 в регуляції експресії мРНК ТФ у злоякісно трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження, атакож можливість регуляції експресії
hBD-2 через поверхневі рецептори цих клітин.
Aim: to study the effect of recombinant human
beta-defensin-2 (hBD-2) on the level of mRNA expression of key transcription factors (TF) in malignant cell
lines of B-lymphocyte origin, and to test the involvement
of cell surface receptors in regulation of hBD-2 expression. Object and methods: malignant cell lines of B-lymphocyte origin, В-lymphoblastoid cell lines and recombinant hBD-2 have been used in experimentsin vitro. The
level of mRNA expression of TF and hBD-2 was evaluated using real-time polymerase chain reaction. Results: for the first time the effect of hBD-2 on the level
of mRNA expression of key TF required for differentiation of B-lymphocytes was demonstrated. Moreover, the
effect of hBD-2 was dependent on initial profile of TF
expression in these cell lines. It was shown that in BJAB
cell line IRF4 and BLIMP-1, the major coordinators of
terminal differentiation of B-lymphocytes to the stage of
plasma cells, were negatively regulated by hBD-2. Incubation of Raji cell line with hBD-2 resulted in decreased
expression of just one TF, IRF4, while in lymphoblastoid
Т5–1 cell line treated with hBD-2 the level of TFs remained unaltered. It was revealed that in B-lymphocytes
the level of hBD-2 expression could be regulated with
the involvement of surface receptors: negatively through
BCR in Raji cells, or positively through CD40 receptor
in Т5–1 cells, but was not dependent on CD150 signaling. Conclusion: the study highlighted a potential role of
hBD-2 in regulation of the level of mRNA expression of
TFs in malignant cell lines of B-lymphocyte origin, and
possible regulation of hBD-2 expression through surface
receptors in these cells.
|
| first_indexed | 2025-12-07T17:06:28Z |
| format | Article |
| fulltext |
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
255ОНКОЛОГИЯ • Т. 18 • № 4 • 2016 255
ВСТУП
Диференціювання В-лімфоцитів до термінально
зрілих плазматичних клітин є багатостадійним про-
цесом, який інтегрує різноманітні сигнали від фак-
торів мікрооточення й антигенів [1]. Проходження
В-клітиною будь-якої стадії диференціювання не є за-
програмованим або автоматичним. На кожному ета-
пі диференціювання, залежно від комбінації вхідних
сигналів, В-клітина опиняється перед вибором по-
дальших шляхів: проліферації, диференціювання або
апоптозу. Така інтеграція вхідних сигналів коорди-
нується мережею транскрипційних факторів (ТФ) [1,
2]. Залежно від стадії диференціювання нормальних
В-лімфоцитів експресія та функції ТФ значно від-
різняються. Наприклад, на стадії пре-В-лімфоцитів
члени родини інтерферон- регулюючих факторів
(interferon regulatory factor — IRF) — IRF4 та IRF8 —
чинять взаємодоповнюючий вплив на процеси дозрі-
вання В-лімфоцитів, індукуючи реаранжування генів
легких ланцюгів імуноглобулінів [3]. Під час антиген-
залежного диференціювання В-лімфоцитів у зародко-
вому центрі рівень експресії IRF4 та IRF8, як і їх функ-
ції, є протилежними. На стадії наївних В-лімфоцитів
рівень експресії IRF4 низький, але швидко зростає
після індукції сигналу через В-клітинний рецептор
(B-cell receptor — BCR) і досягає максимуму на ста-
дії плазмобластів, тим самим активуючи експресію
BLIMP-1 [4, 5]. Навпаки, рівень IRF8 є максималь-
ним у центробластах і знижується в центроцитах [5].
ТФ, які функціонують на кожному з етапів диференці-
ювання В-лімфоцитів, перебувають у взаємозалежній
регуляції через позитивні та негативні зворотні зв’язки.
Так, IRF8/PU.1 виступають активаторами експресії
ключового регулятора формування зародкового цен-
тру BCL6, який, у свою чергу, пригнічує транскрипцію
BLIMP-1 і IRF4 — майстер-регуляторів плазматич-
них клітин [6, 7]. Генетичні аномалії, що призводять
до злоякісної трансформації В-лімфоцитів, сприя-
ють порушенню експресії низки ТФ, зумовлюючи зу-
ВПЛИВ БЕТА-ДЕФЕНСИНУ-2
ЛЮДИНИ НА ЕКСПРЕСІЮ
ТРАНСКРИПЦІЙНИХ
ФАКТОРІВ У ЗЛОЯКІСНО
ТРАНСФОРМОВАНИХ ЛІНІЯХ
КЛІТИН В-ЛІМФОЦИТАРНОГО
ПОХОДЖЕННЯ
Мета: дослідити вплив рекомбінантного бета-дефенсину-2 людини (hBD-2)
на рівень експресії мРНК транскрипційних факторів (ТФ) у злоякісно
трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження, а також
з’ясувати можливість регуляції експресії hBD-2 через поверхневі рецептори
цих клітин. Об’єкт і методи: в експериментах in vitro були використані зло-
якісно трансформовані лінії клітин людини В-лімфоцитарного походження,
В-лімфобластоїдні лінії клітин та hBD-2. Визначення рівня експресії мРНК
ТФ та hBD-2 проводили за допомогою кількісної полімеразної ланцюгової ре-
акції у режимі реального часу. Результати: у цій роботі вперше показано
вплив hBD-2 на рівень експресії мРНК ключових ТФ, необхідних для диферен-
ціювання В-лімфоцитів, причому ефект hBD-2 залежав від вихідного профі-
лю експресії ТФ у клітинних лініях. Виявлено, що в лінії клітин BJAB бета-
дефенсин-2 виступає негативним регулятором ТФ IRF4 та BLIMP-1, які
функціонують як основні координатори термінальної стадії диференціюван-
ня В-лімфоцитів — стадії плазматичних клітин. У лінії клітин Raji внаслідок
дії hBD-2 відмічено зниження експресії лише одного ТФ — IRF4, в той час як
у В-лімфобластоїдній лінії клітин Т5–1 при дії hBD-2 рівень ТФ не змінював-
ся. Виявлено, що в В-лімфоцитах рівень експресії hBD-2 може регулювати-
ся із залученням поверхневих рецепторів: чи то негативно через BCR в кліти-
нах Raji, чи то позитивно через CD40 рецептор у клітинах Т5–1, але не за-
лежить від сигналювання через CD150. Висновок: показано потенційну роль
hBD-2 в регуляції експресії мРНК ТФ у злоякісно трансформованих лініях клі-
тин В-лімфоцитарного походження, а також можливість регуляції експресії
hBD-2 через поверхневі рецептори цих клітин.
І.М. Гордієнко
О.В. Журавель
Л.М. Ковалевська
М.О. Солдаткіна
Л.М. Шлапацька
В.М. Холоднюк
С.П. Сидоренко
П.В. Погрібний
Інститут експериментальної
патології, онкології
і радіобіології
ім. Р.Є. Кавецького
НАН України, Київ, Україна
Ключові слова:
бета-дефенсин-2 людини,
транскрипційні фактори,
лінії клітин людини
В-лімфоцитарного походження,
BCR, CD40, CD150.
ОНКОЛОГИЯ • Т. 18 • № 4 • 2016
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
256
пинку диференціювання і навіть дедиференціюван-
ня та прогресування клонів злоякісно трансформова-
них В-лімфоцитів [8]. Нерегульована експресія BCL6
та PAX5 спостерігається при дифузній великоклітин-
ній В-клітинній лімфомі з фенотипом зародкового
центру, IRF4 — при множинній мієломі, інактивація
гена PRDM1, що кодує BLIMP-1, — при дифузній ве-
ликоклітинній В-клітинній лімфомі з активованим фе-
нотипом [9]. Механізми регуляції експресії та актив-
ності ТФ на різних стадіях диференціювання в нор-
мальних та злоякісно трансформованих В-лімфоцитах
залишаються до кінця не з’ясованими. На сьогодні по-
шук факторів, які беруть участь у регуляції експресії та
активності ТФ, що контролюють процеси проліфера-
ції, диференціювання та апоптозу, є актуальним на-
прямком в експериментальній онкології.
Дефенсини людини належать до родини антимі-
кробних пептидів, що є важливою складовою сис-
теми вродженого імунітету людини. Це молекули
з молекулярною масою від 3,5 до 6,5 кДа, високим
катіонним зарядом та гідрофобними властивостя-
ми. За даними досліджень останніх років, дефен-
сини вважають мультифункціональними сполука-
ми, головними функціями яких є знешкодження
патогенних мікроорганізмів та забезпечення зв’язку
з клітинною та гуморальною ланкою набутого іму-
нітету для модуляції імунної відповіді на чужорід-
ні мікроорганізми. Такий зв’язок дефенсини здій-
снюють шляхом залучення моноцитів, дендритних
клітин та Т-клітин до місця інфекції [10, 11]. Крім
імуномодулюючої функції, дефенсини беруть участь
у процесах запалення та загоєння ран, впливають
на фертильність та онкогенез [12].
Особливий спектр активності щодо культивова-
них пухлинних клітин людини демонструє бета-де-
фенсин-2 людини (human beta-defensin-2 — hBD-2),
катіонний пептидний антибіотик, експресія якого
індукується в епітеліальних клітинах за умов запа-
лення, інфекції або загоєння ран. Так, згідно з да-
ними власних досліджень, рекомбінантний hBD-2
у концентраційно-залежний спосіб впливає на про-
ліферацію та життєздатність культивованих пухлин-
них клітин різного гістогенезу, у тому числі клітин
лімфоми Беркітта лінії Namalwa та лейкемічних
Т-клітин лінії Jurkat, а також викликає блокування
клітинного циклу, зниження показників злоякіснос-
ті клітин та зміни рівнів експресії певних маркер-
них білків [12–14]. Як і інші антимікробні пептиди
людини, рівень експресії котрих визначає функціо-
нальну активність [11], рекомбінантний hBD-2 може
викликати біологічні ефекти протилежної спрямо-
ваності залежно від концентрації в середовищі ін-
кубації клітин.
Метою цієї роботи було дослідити потен-
ційну роль hBD-2 в регуляції експресії мРНК
ТФ у злоякісно трансформованих лініях клітин
В-лімфоцитарного походження, а також можливість
регуляції експресії hBD-2 через поверхневі рецеп-
тори цих клітин.
ОБ’ЄКТ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
У дослідженнях були використані злоякісно
трансформовані лінії клітин В-лімфоцитарного
походження, у яких блок дозрівання виник на різ-
них стадіях диференціювання, а саме, лінії клітин
пре-В-лімфоцитарного лейкозу — REH, BLIN-1,
NALM-6, лінії клітин лімфоми Ходжкіна — L1236,
L428, KM-H2, лінії клітин лімфоми Беркітта —
Daudi, Ramos, Raji, BJAB та В-лімфобластоїдні лінії
клітин — MP-1, T5–1 (всі клітинні лінії люб’язно на-
дані професором E.А. Clark, Університет штату Ва-
шингтон, Сієтл, США). Лінії клітин культивували
за стандартних умов у середовищі RPMI-1640 із 10%
ембріональної телячої сироватки, 2 μM L-глутаміну
та антибіо тиками при 37 °С в атмосфері 5% СО2.
Стимуляцію ліній клітин Raji, BJAB та Т5–1 че-
рез поверхневі рецептори проводили, додаючи мо-
ноклональні антитіла (МкАТ) проти CD40 (G28–5,
надані професором E.A. Clark, Університет штату
Вашингтон, Сієтл, США) (1 мкг/мл), CD150 (ІРО-3,
Інститут експериментальної патології, онколо-
гії і радіобіології НАН України) (10 мкг/мл) та ан-
титіла кози проти BCR (Jackson ImmunoResearch
Laboratories, Inc., США) (10 мкг/мл).
Рекомбінантний hBD-2 експресовано у вигляді
злитого протеїну в бактеріях штаму E. coli BL21(DE3)
та очищено за схемою, що включала виділення
злитого протеїну GST-hBD-2 із лізату бактеріаль-
них клітин із застосуванням афінної хроматографії
на глутатіон-агарозі, розщеплення протеїну тромбі-
ном та розділення продуктів протеолізу шляхом зво-
ротнофазової хроматографії згідно з методикою [15].
Для визначення впливу hBD-2 на рівень експре-
сії мРНК ТФ лінії клітин інкубували протягом 4 год
із додаванням рекомбінантного hBD-2 у концентра-
ції 0,1 та 1 μМ у поживному середовищі RPMI-1640
без ембріональної телячої сироватки.
Сумарну РНК з ліній клітин виділяли, викорис-
товуючи TRIzol (Sigma, США) згідно з протоко-
лом виробника. 2 мкг сумарної РНК конвертували
в комплементарну ДНК (кДНК), додаючи прайме-
ри oligo(dT)18, суміш нуклеотидів (dNTP), інгібітор
РНКаз та зворотну транскриптазу M-MLV Reverse
Transcriptase (усі реактиви від Thermo Scientific,
США). Реакцію зворотної транскрипції проводи-
ли в ампліфікаторі полімеразної ланцюгової реак-
ції (ПЛР) GeneAmp PCR System 2400 (Perkin Elmer,
США) відповідно до заданої програми: 5 хв, 65 °С;
60 хв, 42 °С.
Визначення рівня експресії мРНК ТФ та hBD-2
проводили за допомогою кількісної ПЛР у режимі
реального часу. Для цього використовували 2 мкл
синтезованої кДНК, суміш (2×) SYBR Green PCR
Master Mix (Thermo Scientific, США) та суміш спе-
цифічних праймерів (прямий і зворотний, 25 рМ).
Послідовності праймерів, використаних у дослі-
дженні, наведено в таблиці. Для підбору праймерів
був використаний інтернет-ресурс Primer Design and
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
257ОНКОЛОГИЯ • Т. 18 • № 4 • 2016 257
Search Tool (http://bisearch.enzim.hu/?m=search).
Специфічність праймерів перевіряли додатково
в опції nucleotide-nucleotide alignment (blastn) в ін-
тернет-програмі BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.
gov/BLAST/). ПЛР у режимі реального часу прово-
дили в 96-лункових планшетах (Applied Biosystems,
США) на приладі Applied Biosystem 7500 Real-Time
PCR System в дублікатах для кожного гена. Для всіх
досліджуваних генів були використані такі умови
ампліфікації: 10 хв, 95 °С; 15 с, 95 °С; 40 с, 62 °С про-
тягом 40 циклів з наступним етапом дисоціації для
визначення специфічності ампліфікованого продук-
ту (95 °С, 15 с, 64 °С, 40 с, 95 °С, 15 с).
Напівкількісний відносний аналіз експре-
сії досліджуваних генів обчислювали за описаною
K.J. Livak (2008) методикою [16]. Для нормаліза-
ції результатів було обрано рівень експресії гена β2-
мікроглобуліну. Середнє для дублікатів граничне зна-
чення циклу (Сt) досліджуваного гена нормалізували
відносно Сt ендогенного контролю. Значення ΔСt
для стимульованих клітин додатково нормалізува-
ли по ΔСt для контрольних нестимульованих клі-
тин, внаслідок чого отримували ΔΔСt. Зміна екпресії
гена в певну кількість разів, порівняно з контролем,
дорівнює 2-ΔΔCt. Результати обробляли в програмі
Microsoft Excel і представляли у графічному вигляді.
РЕЗУЛЬТАТИ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ
На першому етапі роботи в злоякісно трансфор-
мованих лініях клітин В-лімфоцитарного походжен-
ня та В-лімфобластоїдних лініях клітин, трансфор-
мованих вірусом Епштейна — Барр, було визначено
профіль експресії ТФ, які характеризують різні стадії
диференціювання нормальних В-лімфоцитів: IRF4,
IRF8, PU.1, BCL6 та BLIMP-1. Серед досліджених
злоякісно трансформованих ліній клітин високий
рівень експресії IRF4 був детектований у всіх ліні-
ях клітин, що походять із лімфоми Ходжкіна (KM-
H2, L1236, L428) (рис. 1, а, IV), В-лімфобластоїдних
лініях клітин (MP-1, T5-1) та лише в одній із трьох
досліджених ліній клітин, що походять із пре-В-
лімфоцитарного лейкозу — BLIN-1 (рис. 1, а, I та II).
У всіх лініях клітин, що походять із лімфоми Бер-
кітта із блоком диференціювання на стадії зарод-
кового центру, виявлено закономірно низький рі-
вень мРНК IRF4 (рис. 1, а, III). Експресія та функ-
ції IRF4 та IRF8 у нормальних В-лімфоцитах, що
проходять диференціювання в зародковому центрі,
має взаємовиключний характер [3]. Така взаємови-
ключна експресія мРНК IRF4 та IRF8 зберігалася
у В-лімфобластоїдних лініях клітин (MP-1, T5-1),
лініях клітини лімфоми Ходжкіна та двох із чоти-
рьох досліджених лініях клітин лімфоми Беркітта —
Daudi та BJAB (рис. 1, а, б, I, IV та III). Однак в ін-
ших двох лініях клітин із лімфоми Беркітта (Ramos,
Raji) спостерігався низький рівень мРНК як IRF4,
так і IRF8 (рис. 1, а, б, ІІІ).
ТФ IRF4 та IRF8 найбільш гомологічні представ-
ники родини IRF. Як IRF4, так і IRF8 не можуть са-
мостійно взаємодіяти з ISRE-мотивом ДНК (еле-
менти інтерферон-стимульованої відповіді), тому
функціонують у тандемі з іншими білками-парт-
нерами, найчастіше це фактори родини Ets — PU.1
та Spi-B [17]. Характер експресії ТФ PU.1 у дослі-
джених лінія клітин повторював такий для IRF8,
але не для IRF4, що може свідчити про їх функ-
ціональний зв’язок як білків-партнерів (рис. 1, в).
IRF8/PU.1 комплекс сприяє підтримці фенотипу
активованих В-лімфоцитів через активацію екс-
пресії PAX5 та BCL6 і пригніченню BLIMP-1 [6].
У В-лімфобластоїдних лініях клітин (MP-1, T5-1),
де відмічено високий рівень експресії мРНК IRF4 —
репресора BCL6 — та низький рівень мРНК IRF8/
PU.1, експресія мРНК BCL6, ключового регулятора
формування зародкового центру, закономірно була
низькою (рис. 1, а–г, І). Високу експресію мРНК
BCL6 відмічено в двох із чотирьох досліджених лі-
ній клітин лімфоми Беркітта — Daudi та BJAB — по-
ряд з високою експресією мРНК IRF8/PU.1 та низь-
кою експресією IRF4 (рис. 1, а–г, ІІІ). В інших двох
лініях клітин лімфоми Беркітта — Ramos та Raji —
рівень мРНК BCL6 був нетипово низьким як для
клітин зародкового центру (рис. 1, г, І). У всіх до-
сліджених лініях пре-В-лімфобластного лейкозу
та лімфоми Ходжкіна виявлено високий рівень екс-
пресії мРНК BCL6 (рис. 1, г, ІІ та IV). Рівень експре-
сії мРНК BLIMP-1 як маркера плазматичних клі-
тин був низьким у всіх досліджених лініях клітин
(рис. 1, д). Таким чином, у злоякісно трансформо-
ваних лініях клітин В-лімфоцитарного походжен-
ня, на противагу В-лімфобластоїдним лініям клі-
тин, трансформованих вірусом Епштейна — Барр,
профіль експресії ТФ IRF4, IRF8, BCL-6, PU.1
та BLIMP-1 не завжди відповідає стадії диференці-
ювання, на якій виник блок дозрівання цих клітин.
Аберантна експресія ТФ у злоякісно трансформо-
ваних клітинах може віддзеркалювати проміжні ста-
дії диференціювання, але більш вірогідним є дерегу-
Таблиця
Праймери, використані в дослідженні
Продукт Прямий праймер
5' 3' (позиції у сиквенсі)
Зворотний праймер
5' 3'(позиції у сиквенсі)
IRF4 CCACTACCTCCTTTCCTATC CCGTTCCTTTTCAGAGTCCT
IRF8 CCAACAGATCACCGTCTAA AAGTGCAAAGTAAGGCATC
PU.1 CTTCCAGTTCTCGTCCAA GAGCTTCTTCTTCACCTTC
BCL6 CTCCGTGCCCATGTGCTTA GAGTCTGAAGGTGCCGGAAA
BLIMP-1 GCTTAATACTTGGTGACCTC GTATCTCTTCCTCCCTGGTT
β2-мікроглобулін CCGTGTGAACCATGTGACTTTGTC TGCGGCATCTTCAAACCTGCATGATC
hBD-2 GCTTGATGTCCTCCCCAGACT TAACAGGATCGCCTATACCACCA
ОНКОЛОГИЯ • Т. 18 • № 4 • 2016
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
258
ляція сигнальних каскадів, що призводить до пору-
шень координації змін транскрипційних регулонів.
Для визначення потенційної ролі hBD-2
у регуляції рівня експресії мРНК ТФ, кліти-
ни злоякісно трансформованих клітинних лі-
ній, що походять із лімфоми Беркітта (BJAB, Raji)
та В-лімфобластоїдної лінії клітин T5–1, інкубу-
вали з рекомбінантним hBD-2 у концентрації 0,1
та 1 μМ in vitro. Після цього з клітин виділяли су-
марну РНК та проводили кількісну ПЛР у режимі
реального часу щодо експресії IRF4, IRF8, BCL-6,
PU.1 та BLIMP-1. Для дослідження були обрані лі-
нії клітин BJAB та Raji, оскільки вони характеризу-
валися протилежним профілем експресії більшості
досліджених ТФ (IRF8, PU.1, BCL6), але водночас
мали однакове походження з лімфоми Беркітта. Як
контроль обрали лімфобластоїдну лінію клітин Т5–
1, де зберігалося кількісне співвідношення в експре-
сії ТФ відносно нормальних В-лімфоцитів.
У ході проведених досліджень виявлено, що ре-
комбінантний hBD-2 в концентраціях 0,1 та 1 μМ
в лінії клітин BJAB сприяв достовірному знижен-
ню експресії мРНК IRF4 у 25 та 67 разів відповідно
(рис. 2, а). hBD-2 лише в концентрації 1 μМ при-
зводив до зниження експресії мРНК IRF4 вдвічі
в лінії клітин Raji та не впливав в обох концентра-
ціях на експресію цього ТФ у В-лімфобластоїдній
лінії клітин Т5–1 (див. рис. 2, а). Достовірних змін
в експресії мРНК IRF8 під впливом hBD-2 в дослі-
джених лініях клітин не відмічено (рис. 2, б). Рівень
експресії мРНК PU.1 знижувався під дією hBD-2
у концентрації 1 μМ вдвічі в клітинній лінії BJAB,
однак не змінювався в лініях клітин Raji та Т5–1, не-
залежно від концентрації hBD-2 (рис. 2, в). hBD-2
у концентрації 1 μМ сприяв зниженню рівня мРНК
BCL6 в лінії клітин BJAB (рис. 2, г). Експресія мРНК
IRF4
0
10
20
30
40
50
60
70
80
M
P-
1
T5
-1
R
EH
BL
IN
-1
N
A
LM
-6
R
am
os
D
au
di
BJ
AB R
aj
i
KM
-
H
2
L1
23
6
L4
28
² ²² ²²² ²V
³
äí
îñ
íà
å
êñ
ïð
åñ
³ÿ
, ó
ì
.î
ä.
а
IRF8
0
5
10
15
20
25
M
P-
1
T5
-1
R
EH
BL
IN
-1
N
A
LM
-6
R
am
os
D
au
di
BJ
AB R
aj
i
KM
-
H
2
L1
23
6
L4
28
² ²² ²²² ²V
³
äí
îñ
íà
å
êñ
ïð
åñ
³ÿ
, ó
ì
.î
ä.
б
PU.1
0
5
10
15
20
25
30
35
M
P-
1
T5
-1
R
EH
BL
IN
-1
N
A
LM
-6
R
am
os
D
au
di
BJ
AB R
aj
i
KM
-
H
2
L1
23
6
L4
28
² ²² ²²² ²V
³
äí
îñ
íà
å
êñ
ïð
åñ
³ÿ
, ó
ì
.î
ä.
в
BCL6
0
5
10
15
20
25
M
P-
1
T5
-1
R
EH
BL
IN
-1
N
A
LM
-6
R
am
os
D
au
di
BJ
AB R
aj
i
KM
-
H
2
L1
23
6
L4
28
² ²² ²²² ²V
³
äí
îñ
íà
å
êñ
ïð
åñ
³ÿ
, ó
ì
.î
ä.
г
BLIMP-1
0
2
4
6
8
10
12
M
P-
1
T5
-1
R
EH
BL
IN
-1
N
A
LM
-6
R
am
os
D
au
di
BJ
AB R
aj
i
KM
-
H
2
L1
23
6
L4
28
² ²² ²²² ²V
³
äí
îñ
íà
å
êñ
ïð
åñ
³ÿ
, ó
ì
.î
ä.
д
Рис. 1. Базальний профіль експресії транскрипційних
факторів у лініях клітин В-лімфоцитарного походження:
а — IRF4, б — IRF8, в — PU.1, г — BCL6, д — BLIMP-1;
І — В-лімфобластоїдні лінії клітин трансформовані віру-
сом Епштейна — Барр, ІІ — злоякісно трансформовані
лінії клітин, що походять із пре-В-лімфобластного лей-
козу, ІІІ — лімфоми Беркітта та IV — лімфоми Ходжкі-
на. Результати кількісної ПЛР в режимі реального часу
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
259ОНКОЛОГИЯ • Т. 18 • № 4 • 2016 259
BLIMP-1 знижувалася більш ніж в 2 рази після впли-
ву hBD-2 в обох концентраціях 0,1 та 1 μМ на клі-
тинну лінію BJAB (рис. 2, д). hBD-2 не викликав
суттєвих змін в експресії BCL6 та BLIMP-1 у лініях
клітин Raji та T5-1 (рис. 2, г, д).
У цій роботі вперше показано вплив hBD-2 на рі-
вень експресії мРНК ключових ТФ, необхідних для
диференціювання В-лімфоцитів, причому ефект
бета- дефенсину-2 залежав від вихідного профілю
експресії ТФ у клітинних лініях. Виявлено, що в лі-
нії клітин BJAB hBD-2 виступає негативним регуля-
тором ТФ IRF4 та BLIMP-1, які функціонують як
основні координатори термінальної стадії диферен-
ціювання В-лімфоцитів — стадії плазматичних клі-
тин. Тобто в клітинах лінії клітин BJAB дія hBD-2
може призводити до зупинки їх диференціювання.
У лінії клітин Raji дія бета-дефенсину-2 мала наслід-
ком зниження експресії лише одного ТФ — IRF4,
в той час як у В-лімфобластоїдній лінії клітин Т5–1
при дії hBD-2 рівень ТФ не змінювався. Чому бета-
дефенсин-2 достовірно пригнічував рівень експре-
сії ТФ IRF4 та BLIMP1 тільки в лінії лімфоми Бер-
кітта BJAB? Нещодавно було показано, що синте-
тичний антимікробний пептид опосередковує свою
дію на макрофаги через TLR4, впливаючи на TRIF-
залежний сигнальний шлях, зокрема знижує рівень
фосфорилювання ТФ IRF3 [18]. За нашими дани-
ми, на поверхні лінії клітин BJAB експресований
CD180, що належить також до Toll-подібних рецеп-
торів. Тому можливо, що бета-дефенсин-2 впливає
на сигнальні шляхи В-лімфоцитів через CD180. Ця
гіпотеза заслуговує на подальші дослідження.
Треба зазначити, що в останні роки опубліко-
вано результати багатьох досліджень про здатність
дефенсинів впливати на активацію та дозріван-
ня клітин імунної системи, в тому числі дендрит-
IRF4
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
BJ
AB
h
BD
-2
0,
1
µM
BJ
AB
h
BD
-2
1
µM
R
aj
i h
BD
-2
0,
1
µM
R
aj
i h
BD
-2
1
µM
T5
-1
h
BD
-2
0,
1
µM
T5
-1
h
BD
-2
1
µM
Ðà
çè
ç
ì
³í
è
åê
ñï
ðå
ñ³
¿
* *
*
а
IRF8
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
Ðà
çè
ç
ì
³í
è
åê
ñï
ðå
ñ³
¿
BJ
AB
h
BD
-2
0,
1
µM
BJ
AB
h
BD
-2
1
µM
R
aj
i h
BD
-2
0,
1
µM
R
aj
i h
BD
-2
1
µM
T5
-1
h
BD
-2
0,
1
µM
T5
-1
h
BD
-2
1
µM
б
PU.1
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
Ðà
çè
ç
ì
³í
è
åê
ñï
ðå
ñ³
¿
BJ
AB
h
BD
-2
0,
1
µM
BJ
AB
h
BD
-2
1
µM
R
aj
i h
BD
-2
0,
1
µM
R
aj
i h
BD
-2
1
µM
T5
-1
h
BD
-2
0,
1
µM
T5
-1
h
BD
-2
1
µM
в
BÑL6
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
Ðà
çè
ç
ì
³í
è
åê
ñï
ðå
ñ³
¿
*
BJ
AB
h
BD
-2
0,
1
µM
BJ
AB
h
BD
-2
1
µM
R
aj
i h
BD
-2
0,
1
µM
R
aj
i h
BD
-2
1
µM
T5
-1
h
BD
-2
0,
1
µM
T5
-1
h
BD
-2
1
µM
г
BLIMP-1
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
Ðà
çè
ç
ì
³í
è
åê
ñï
ðå
ñ³
¿
BJ
AB
h
BD
-2
0,
1
µM
BJ
AB
h
BD
-2
1
µM
R
aj
i h
BD
-2
0,
1
µM
R
aj
i h
BD
-2
1
µM
T5
-1
h
BD
-2
0,
1
µM
T5
-1
h
BD
-2
1
µM
* *
д
Рис. 2. Вплив рекомбінантного бета-дефенсину-2 на рі-
вень експресії мРНК транскрипційних факторів у лі-
ніях клітин В-лімфоцитарного походження: а — IRF4,
б — IRF8, в — PU.1, г — BCL6, д — BLIMP-1. Результати
кількісної ПЛР у режимі реального часу. Значення рівня
експресії ТФ у лініях клітин, культивованих лише в по-
живному середовищі, прийнято за контроль і позначено
одиницею. *р < 0,05 порівняно із контролем
ОНКОЛОГИЯ • Т. 18 • № 4 • 2016
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
260
них клітин. Так, в 2016 р. опубліковано результати
дослідження щодо впливу HNP1, альфа-дефенси-
ну людини, який зберігається в азурофільних гра-
нулах нейтрофілів, на активацію плазмоцитоїдних
дендритних клітин (pDCs) [19]. Як уже встановле-
но, HNP1 здатний викликати активацію pDCs і про-
дукцію цими клітинами інтерферону альфа in vitro
та in vivo із залученням сигнальних шляхів NF-κB
та ТФ IRF1, причому в одній із досліджених клітин-
них ліній (CAL-1) дія HNP1 призводила до ядерної
транслокації ТФ IRF1. Оскільки, в наявній літера-
турі відсутні дані щодо впливу дефенсинів на екс-
пресію ТФ у лімфоцитах, наше дослідження є пер-
шим у цьому напрямку.
Друга частина роботи була сфокусована на до-
слідженні можливих шляхів регуляції експресії
hBD-2 через поверхневі рецептори CD150, CD40
та BCR у злоякісно трансформованих лініях клітин
В-лімфоцитарного походження. Лігація CD150 ре-
цептора не призводила до достовірних змін в екс-
пресії мРНК hBD-2 у трьох досліджених лініях клі-
тин (BJAB, Raji, T5-1) (рис. 3). Лігація CD40 рецеп-
тора також не впливала на рівень експресії мРНК
hBD-2 у клітинних лініях BJAB та Raji, однак в клі-
тинній лінії Т5–1 призводила до достовірного зрос-
тання рівня мРНК hBD-2 в 9 ± 2,8 раза (див. рис. 3).
Стимуляція BCR спричиняла достовірне знижен-
ня рівня експресії мРНК hBD-2 у 2,5 ± 0,08 раза
в клітинній лінії Raji, але не в лініях клітин BJAB
та T5–1 (див. рис. 3). Таким чином, встановлено,
що CD40 рецептор виступає позивним регулято-
ром експресії hBD-2 у В-лімфобластоїдній лінії клі-
тин Т5–1, але не в злоякісно трансформованих ліні-
ях клітин, що походять із лімфоми Беркітта (BJAB
та Raji). Водночас CD150 не залучений до регуляції
експресії hBD-2, а BCR негативно регулює експре-
сію мРНК hBD-2 в лінії клітин Raji.
У нашому попередньому дослідженні, яке було
проведене на клітинах лінії Namalwa (лімфоми Бер-
кітта) та лейкемічних Т-клітинах лінії Jurkat, із за-
стосуванням напівкількісної ПЛР зі зворотною
транскрипцією, встановлено, що зазначені клі-
тини на відносно невисокому рівні експресують
мРНК бета-дефенсину-1–3 людини [13]. Резуль-
тати дослідження, проведеного методом кількіс-
ної ПЛР у режимі реального часу, також свідчать
про наявність базової невисокої експресії hBD-2
у клітинах В-лімфоцитарного походження. Крім
того, в нашому дослідженні вперше виявлено, що
в В-лімфоцитах експресія hBD-2 може регулювати-
ся із залученням поверхневих рецепторів — чи то не-
гативно через BCR в клітинах Raji, чи то позитив-
но через CD40 рецептор у клітинах Т5–1. Подальші
дослідження допоможуть встановити, яку функці-
ональну роль може відігравати регуляція експресії
бета-дефенсину людини із залученням поверхневих
рецепторів В-лімфоцитів.
Роботу виконано в рамках цільової програми на-
укових досліджень ВБФМБ НАН України «Функці-
ональна геноміка і метаболоміка в системній біоло-
гії» (номер державної реєстрації теми 0112U002194;
2012–2016 рр.).
СПИСОК ВИКОРИСТАНОЇ ЛІТЕРАТУРИ
1. Matthias P, Rolink AG. Transcriptional networks in develo-
ping and mature B cells. Nat Rev Immunol 2005; 5: 497–508.
2. Goodnow CC, Vinuesa CG, Randall KL, et al. Control sys-
tems and decision making for antibody production. Nat Immu-
nol 2010; 11: 681–8.
3. Shukla V, Lu R. IRF4 and IRF8: Governing the virtues of
B lymphocytes. Front Biol 2014; 9: 269–82.
4. Ochiai K, Maienschein-Cline M, Simonetti G, et al. Tran-
scriptional regulation of germinal center B and plasma cell fates by
dynamical control of IRF4. Immunity 2013; 38: 918–29.
5. Xu H, Chaudhri VK, Wu Z, et al. Regulation of bifurcating B
cell trajectories by mutual antagonism between transcription fac-
tors IRF4 and IRF8. Nat Immunol 2015; 16: 1274–81.
6. Carotta S, Willis SN, Hasbold J, et al. The transcription fac-
tors IRF8 and PU.1 negatively regulate plasma cell differentiation.
J Exp Med 2014; 211: 2169–81.
7. Minnich M, Tagoh H, Bonelt P, et al. Multifunctional role
of the transcription factor Blimp-1 in coordinating plasma cell dif-
ferentiation. Nat Immunol 2016; 17: 331–43.
8. Shaffer AL, Rosenwald A, Staudt LM. Lymphoid malig-
nancies: the dark side of B-cell differentiation. Nat Rev Immu-
nol 2002; 2: 920–32.
9. Shaffer AL, 3-rd, Young RM, Staudt LM. Pathogenesis of
human B cell lymphomas. Annu Rev Immunol 2012; 30: 565–610.
10. He Y, Zhang J, Donahue C, et al. Skin-derived dendrit-
ic cells induce potent CD8(+) T cell immunity in recombinant
lentivector-mediated genetic immunization. Immunity 2006; 24:
643–56.
11. Semple F, Dorin JR. Beta-defensins: multifunctional mod-
ulators of infection, inflammation and more? J Innate Immun
2012; 4: 337–48.
12. Zhuravel E, Shestakova T, Efanova O, et al. Human beta-
defensin-2 controls cell cycle in malignant epithelial cells: in vitro
study. Exp Oncol 2011; 33: 114–20.
13. Gerastchenko OL, Zhuravel EV, Soldatkina MA, Pogreb-
noy PV. Expression of human beta-defensins-1–4 mRNA in Na-
malwa and Jurkat cells. Vistnyk Kyiv Univ 2013; 2: 48–50.
14. Zhuravel OV, Gerastchenko OL, Khetsuriani MR, et al.
Expression of human beta-defensins-1–4 in thyroid cancer cells
hBD-2
0
2
4
6
8
10
12
14
CD150
BJAB
CD40 BCR CD150
Raji
CD40 BCR CD150
T5-1
CD40 BCR
Ðà
çè
ç
ì
³í
è
åê
ñï
ðå
ñ³
¿ *
*
Рис. 3. Регуляція експресії hBD-2 через поверхневі ре-
цептори в лініях клітин В-лімфоцитарного походження.
Результати кількісної ПЛР у режимі реального часу. Зна-
чення рівня експресії hBD-2 у лініях клітин, культивова-
них лише в поживному середовищі, прийнято за контроль
і позначено одиницею. *р < 0,05 порівняно із контролем
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
261ОНКОЛОГИЯ • Т. 18 • № 4 • 2016 261
and new insight on biologic activity of hBD-2 in vitro. Exp On-
col 2014; 36: 174–8.
15. Pogribnoy PV, Lisovsky IL, Markeeva NA, et al. Produсtion
of recombinant of hBD-2 — human antimicrobial peptide ex-
pressed in cervical and vulval cancer. Exp Oncol 2003; 25 (1): 36–9.
16. Schmittgen TD, Livak KJ. Analyzing real-time PCR data
by the comparative C(T) method. Nat Protoc 2008; 3: 1101–8.
17. Tamura T, Yanai H, Savitsky D, et al. The IRF family tran-
scription factors in immunity and oncogenesis. Ann Rev Immu-
nol 2008; 26: 535–84.
18. Shim DW, Heo KH, Kim YK, et al. Anti-inflammato-
ry action of an antimicrobial model peptide that suppresses the
TRIF-dependent signaling pathway via inhibition of Toll-like re-
ceptor 4 endocytosis in lipopolysaccharide-stimulated macro-
phages. PLoS One 2015; 10(5): e0126871. doi: 10.1371/journal.
pone.0126871. eCollection 2015.
19. Wang F, Qiao L, Lv X, et al. Alarmin human alpha defen-
sin HNP1 activates plasmacytoid dendritic cells by triggering NF-
kappaB and IRF1 signaling pathways. Cytokine 2016; 83: 53–60.
EFFECT OF HUMAN BETA-DEFENSIN-2
ON EXPRESSION OF TRANSCRIPTION
FACTORS IN MALIGNANT CELL LINES
OF B-LYMPHOCYTE ORIGIN
I.M. Gordiienko, O.V. Zhuravel, L.M. Kovalevska,
M.O. Soldatkina, L.M. Shlapatska,
V.M. Kholodniuk, S.P. Sidorenko, P.V. Pogrebnoy
Summary. Aim: to study the effect of recombinant human
beta-defensin-2 (hBD-2) on the level of mRNA expres-
sion of key transcription factors (TF) in malignant cell
lines of B-lymphocyte origin, and to test the involvement
of cell surface receptors in regulation of hBD-2 expres-
sion. Object and methods: malignant cell lines of B-lym-
phocyte origin, В-lymphoblastoid cell lines and recombi-
nant hBD-2 have been used in experiments in vitro. The
level of mRNA expression of TF and hBD-2 was eval-
uated using real-time polymerase chain reaction. Re-
sults: for the first time the effect of hBD-2 on the level
of mRNA expression of key TF required for differentia-
tion of B-lymphocytes was demonstrated. Moreover, the
effect of hBD-2 was dependent on initial profile of TF
expression in these cell lines. It was shown that in BJAB
cell line IRF4 and BLIMP-1, the major coordinators of
terminal differentiation of B-lymphocytes to the stage of
plasma cells, were negatively regulated by hBD-2. Incu-
bation of Raji cell line with hBD-2 resulted in decreased
expression of just one TF, IRF4, while in lymphoblastoid
Т5–1 cell line treated with hBD-2 the level of TFs re-
mained unaltered. It was revealed that in B-lymphocytes
the level of hBD-2 expression could be regulated with
the involvement of surface receptors: nega tively through
BCR in Raji cells, or positively through CD40 receptor
in Т5–1 cells, but was not dependent on CD150 signal-
ing. Conclusion: the study highlighted a potential role of
hBD-2 in regulation of the level of mRNA expression of
TFs in malignant cell lines of B-lymphocyte origin, and
possible regulation of hBD-2 expression through surface
receptors in these cells.
Key Words: human beta-defensin-2, transcription
factors, human cell lines of B-lymphocyte origin,
BCR, CD40, CD150.
Адреса для листування:
Гордієнко І.М.
03022, Київ, вул. Васильківська, 45
Інститут експериментальної патології, онкології
і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України
E-mail: hordiyenko24@mail.ru
Одержано: 11.11.2016
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-145276 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 1562-1774 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T17:06:28Z |
| publishDate | 2016 |
| publisher | Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Гордієнко, І.М. Журавель, О.В. Ковалевська, Л.М. Солдаткіна, М.О. Шлапацька, Л.М. Холоднюк, В.М. Сидоренко, С.П. Погрібний, П.В. 2019-01-20T08:57:01Z 2019-01-20T08:57:01Z 2016 Вплив бета-дефенсину-2 людини на експресію транскрипційних факторів у злоякісно трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження / І.М. Гордієнко, О.В. Журавель, Л.М. Ковалевська, М.О. Солдаткіна, Л.М. Шлапацька, В.М. Холоднюк, С.П. Сидоренко, П.В. Погрібний // Онкологія. — 2016. — Т. 18, № 4. — С. 255-261. — Бібліогр.: 19 назв. — укр. 1562-1774 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/145276 Мета: дослідити вплив рекомбінантного бета-дефенсину-2 людини (hBD-2)
 на рівень експресії мРНК транскрипційних факторів (ТФ) у злоякісно
 трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження, а також
 з’ясувати можливість регуляції експресії hBD-2 через поверхневі рецептори
 цих клітин. Об’єкт і методи: в експериментах in vitro були використані злоякісно трансформовані лінії клітин людини В-лімфоцитарного походження,
 В-лімфобластоїдні лінії клітин та hBD-2. Визначення рівня експресії мРНК
 ТФ та hBD-2 проводили за допомогою кількісної полімеразної ланцюгової реакції у режимі реального часу. Результати: у цій роботі вперше показано
 вплив hBD-2 на рівень експресії мРНК ключових ТФ, необхідних для диференціювання В-лімфоцитів, причому ефект hBD-2 залежав від вихідного профілю експресії ТФ у клітинних лініях. Виявлено, що в лінії клітин BJAB бетадефенсин-2 виступає негативним регулятором ТФ IRF4 та BLIMP-1, які
 функціонують як основні координатори термінальної стадії диференціювання В-лімфоцитів— стадії плазматичних клітин. Улінії клітин Raji внаслідок
 дії hBD-2 відмічено зниження експресії лише одного ТФ — IRF4, в той час як
 у В-лімфобластоїдній лінії клітин Т5–1 при дії hBD-2 рівень ТФ не змінювався. Виявлено, що в В-лімфоцитах рівень експресії hBD-2 може регулюватися із залученням поверхневих рецепторів: чи то негативно через BCR в клітинах Raji, чи то позитивно через CD40 рецептор у клітинах Т5–1, але не залежить від сигналювання через CD150. Висновок: показано потенційну роль
 hBD-2 в регуляції експресії мРНК ТФ у злоякісно трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження, атакож можливість регуляції експресії
 hBD-2 через поверхневі рецептори цих клітин. Aim: to study the effect of recombinant human
 beta-defensin-2 (hBD-2) on the level of mRNA expression of key transcription factors (TF) in malignant cell
 lines of B-lymphocyte origin, and to test the involvement
 of cell surface receptors in regulation of hBD-2 expression. Object and methods: malignant cell lines of B-lymphocyte origin, В-lymphoblastoid cell lines and recombinant hBD-2 have been used in experimentsin vitro. The
 level of mRNA expression of TF and hBD-2 was evaluated using real-time polymerase chain reaction. Results: for the first time the effect of hBD-2 on the level
 of mRNA expression of key TF required for differentiation of B-lymphocytes was demonstrated. Moreover, the
 effect of hBD-2 was dependent on initial profile of TF
 expression in these cell lines. It was shown that in BJAB
 cell line IRF4 and BLIMP-1, the major coordinators of
 terminal differentiation of B-lymphocytes to the stage of
 plasma cells, were negatively regulated by hBD-2. Incubation of Raji cell line with hBD-2 resulted in decreased
 expression of just one TF, IRF4, while in lymphoblastoid
 Т5–1 cell line treated with hBD-2 the level of TFs remained unaltered. It was revealed that in B-lymphocytes
 the level of hBD-2 expression could be regulated with
 the involvement of surface receptors: negatively through
 BCR in Raji cells, or positively through CD40 receptor
 in Т5–1 cells, but was not dependent on CD150 signaling. Conclusion: the study highlighted a potential role of
 hBD-2 in regulation of the level of mRNA expression of
 TFs in malignant cell lines of B-lymphocyte origin, and
 possible regulation of hBD-2 expression through surface
 receptors in these cells. uk Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України Онкологія Оригинальные исследования Вплив бета-дефенсину-2 людини на експресію транскрипційних факторів у злоякісно трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження Effect of human beta-defensin-2 on expression of transcription factors in malignant cell lines of B-lymphocyte origin Article published earlier |
| spellingShingle | Вплив бета-дефенсину-2 людини на експресію транскрипційних факторів у злоякісно трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження Гордієнко, І.М. Журавель, О.В. Ковалевська, Л.М. Солдаткіна, М.О. Шлапацька, Л.М. Холоднюк, В.М. Сидоренко, С.П. Погрібний, П.В. Оригинальные исследования |
| title | Вплив бета-дефенсину-2 людини на експресію транскрипційних факторів у злоякісно трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження |
| title_alt | Effect of human beta-defensin-2 on expression of transcription factors in malignant cell lines of B-lymphocyte origin |
| title_full | Вплив бета-дефенсину-2 людини на експресію транскрипційних факторів у злоякісно трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження |
| title_fullStr | Вплив бета-дефенсину-2 людини на експресію транскрипційних факторів у злоякісно трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження |
| title_full_unstemmed | Вплив бета-дефенсину-2 людини на експресію транскрипційних факторів у злоякісно трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження |
| title_short | Вплив бета-дефенсину-2 людини на експресію транскрипційних факторів у злоякісно трансформованих лініях клітин В-лімфоцитарного походження |
| title_sort | вплив бета-дефенсину-2 людини на експресію транскрипційних факторів у злоякісно трансформованих лініях клітин в-лімфоцитарного походження |
| topic | Оригинальные исследования |
| topic_facet | Оригинальные исследования |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/145276 |
| work_keys_str_mv | AT gordíênkoím vplivbetadefensinu2lûdininaekspresíûtranskripcíinihfaktorívuzloâkísnotransformovanihlíníâhklítinvlímfocitarnogopohodžennâ AT žuravelʹov vplivbetadefensinu2lûdininaekspresíûtranskripcíinihfaktorívuzloâkísnotransformovanihlíníâhklítinvlímfocitarnogopohodžennâ AT kovalevsʹkalm vplivbetadefensinu2lûdininaekspresíûtranskripcíinihfaktorívuzloâkísnotransformovanihlíníâhklítinvlímfocitarnogopohodžennâ AT soldatkínamo vplivbetadefensinu2lûdininaekspresíûtranskripcíinihfaktorívuzloâkísnotransformovanihlíníâhklítinvlímfocitarnogopohodžennâ AT šlapacʹkalm vplivbetadefensinu2lûdininaekspresíûtranskripcíinihfaktorívuzloâkísnotransformovanihlíníâhklítinvlímfocitarnogopohodžennâ AT holodnûkvm vplivbetadefensinu2lûdininaekspresíûtranskripcíinihfaktorívuzloâkísnotransformovanihlíníâhklítinvlímfocitarnogopohodžennâ AT sidorenkosp vplivbetadefensinu2lûdininaekspresíûtranskripcíinihfaktorívuzloâkísnotransformovanihlíníâhklítinvlímfocitarnogopohodžennâ AT pogríbniipv vplivbetadefensinu2lûdininaekspresíûtranskripcíinihfaktorívuzloâkísnotransformovanihlíníâhklítinvlímfocitarnogopohodžennâ AT gordíênkoím effectofhumanbetadefensin2onexpressionoftranscriptionfactorsinmalignantcelllinesofblymphocyteorigin AT žuravelʹov effectofhumanbetadefensin2onexpressionoftranscriptionfactorsinmalignantcelllinesofblymphocyteorigin AT kovalevsʹkalm effectofhumanbetadefensin2onexpressionoftranscriptionfactorsinmalignantcelllinesofblymphocyteorigin AT soldatkínamo effectofhumanbetadefensin2onexpressionoftranscriptionfactorsinmalignantcelllinesofblymphocyteorigin AT šlapacʹkalm effectofhumanbetadefensin2onexpressionoftranscriptionfactorsinmalignantcelllinesofblymphocyteorigin AT holodnûkvm effectofhumanbetadefensin2onexpressionoftranscriptionfactorsinmalignantcelllinesofblymphocyteorigin AT sidorenkosp effectofhumanbetadefensin2onexpressionoftranscriptionfactorsinmalignantcelllinesofblymphocyteorigin AT pogríbniipv effectofhumanbetadefensin2onexpressionoftranscriptionfactorsinmalignantcelllinesofblymphocyteorigin |