Взаємозв'язок супероксид- та no-генеруючої активності нейтрофілів хворих на рак прямої кишки з клінічними характеристиками та вплив на віддалені результати комбінованого лікування
Нейтрофіли (Н) беруть участь у процесах формування і розвитку пухлини, стосовно якої вони можуть проявляти як про-, так і протипухлинну
 активність залежно від функціонального стану та етапу розвитку новоутворення. Ключового значення в регресії пухлин надають супероксидним
 радикалам...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Онкологія |
|---|---|
| Datum: | 2016 |
| Hauptverfasser: | , , , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Ukrainisch |
| Veröffentlicht: |
Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України
2016
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/145277 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Взаємозв'язок супероксид- та no-генеруючої активності нейтрофілів хворих на рак прямої кишки з клінічними характеристиками та вплив на віддалені результати комбінованого лікування / А.П. Бурлака, І.І. Ганусевич, В.В. Голотюк, А.В. Вовк, С.М. Лукін, С.В. Вірко // Онкологія. — 2016. — Т. 18, № 4. — С. 294-299. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860086901975810048 |
|---|---|
| author | Бурлака, А.П. Ганусевич, І.І. Голотюк, В.В. Вовк, А.В. Лукін, С.М. Вірко, С.В. |
| author_facet | Бурлака, А.П. Ганусевич, І.І. Голотюк, В.В. Вовк, А.В. Лукін, С.М. Вірко, С.В. |
| citation_txt | Взаємозв'язок супероксид- та no-генеруючої активності нейтрофілів хворих на рак прямої кишки з клінічними характеристиками та вплив на віддалені результати комбінованого лікування / А.П. Бурлака, І.І. Ганусевич, В.В. Голотюк, А.В. Вовк, С.М. Лукін, С.В. Вірко // Онкологія. — 2016. — Т. 18, № 4. — С. 294-299. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Онкологія |
| description | Нейтрофіли (Н) беруть участь у процесах формування і розвитку пухлини, стосовно якої вони можуть проявляти як про-, так і протипухлинну
активність залежно від функціонального стану та етапу розвитку новоутворення. Ключового значення в регресії пухлин надають супероксидним
радикалам (СР) та оксиду азоту (NO), які продукуються в тому числі Н.
Мета: дослідити особливості редокс-стану Н крові хворих на рак прямої
кишки (РПК) в умовах неоад’ювантної променевої терапії (НПТ) радіомодифікацією із застосуванням субстрату для біосинтезу NO та зв’язок цих
параметрів із виживаністю пацієнтів. Об’єкт і методи: досліджено Н крові 59 хворих на РПК ІІ–ІІІ (Т2–3N0–2M0) стадії, які отримали доопераційний курс променевої терапії (І група), НПТ з потенціюванням тегафуром (ІІ група) і НПТ на фоні полірадіомодифікації (ІІІ група) з подальшим
хірургічним лікуванням через 4–5 тиж. Дослідження супероксид-генеруючої
активності Н проводили методом електронного парамагнітного резонансу,
NO-генеруючої активності — за допомогою технології Spin Traps. Результати: розвиток РПК супроводжується підвищенням у хворих супероксидта NO-генеруючої активності Н відповідно в 1,5 і 4,3 раза. Виявлено пряму
залежність активності НАДФ∙Н-оксидази Н від розміру пухлини (r = 0,54;
p < 0,01), а іNOS — від типу росту пухлини та метастатичного ураження
регіонарних лімфовузлів (відповідно r = 0,58; p < 0,05; r = 0,49; p < 0,05). Середнє значення активності НАДФ·Н-оксидази Н після НПТ у хворих, які пережили 3-річний період без рецидивів,— 0,23 ± 0,02 нМ/105 клітин∙хв; у яких
виникли місцеві рецидиви — 0,41 ± 0,03 (p < 0,001), а у випадках наявності віддалених метастазів — 0,53 ± 0,04 (p < 0,001). Прогностичне значення стосовно виникнення рецидивів і метастазів у хворих на РПК, які отримали комбіноване лікування, має показник активності цього ферменту після останньої фракції НПТ, при цьому значення швидкості генерування СР <
0,31 нМ/105 клітин∙хв є сприятливим прогностичним чинником, а більш високі показники — фактором негативного прогнозу. Висновки: застосування комплексу полірадіомодифікації з препаратом L-аргініну упродовж курсу НПТ зумовлює підвищення рівнів супероксид- та NO-генеруючої активності Н. Високі показники активності НАДФ·Н-оксидази Н є фактором
негативного прогнозу виживаності хворих за умов комбінованого лікування.
Neutrophils (N) are involved in processes of formation and development of tumor, and towards
they can exhibit both pro- and anti-tumor activity depending on the functional status and stage of neoplasm
development. A crucial importance for tumor regression
belongs to superoxide radicals (SR) and nitrogen oxide
(NO), produced also by N. Aim: to explore features of redox state of N in blood of patients with colorectal cancer
(CRC) under conditions of neoadjuvant radiation therapy with radiomodification (using substrate for biosynthesis of NO) and the correlation of these parameters
and survival of patients. Object and methods: N of blood
of 59 patients with CRC stages II–III (Т2–3N0–2M0)
were investigated. These patients received preoperative
radiotherapy (NRT) (I group), NRT with tegafur potentiation (II group) and NRT on the background of polyradiomodification (III group), followed by a surgery after 4–5 weeks. Superoxide-generating activity of N was
investigated using EPR method, and NO-generating activity — using spin trapping technique. Results: development of CRC is accompanied by an increase in superoxide- and NO-generating activity of N 1,5 and 4,3 times,
respectively. A direct dependence of activity of NADP∙Hoxidase of N on the tumor size (r = 0.54; p <0,01) and
of iNOS — on the type of tumor growth and metastatic
lesion of regional lymph nodes (r = 0.58; p < 0.05; r =
0.49; p < 0.05, respectively) have been revealed. The
average value of activity of NADP∙H-oxidase of N after
NRT in patients, who have survived 3-year period without
recurrence , was 0.23 ± 0.02 nm/105 cells ∙ min; in patients with local R — 0.41±0.03 (p < 0.001); in the cases
with distant metastases — 0.53 ± 0.04 (p < 0.001). Index of activity of this enzyme after the last NRT fraction
has prognostic significance concerning the occurrence of
recurrence and metastases in patients with CRC, who
received the combined treatment. Moreover, the value of
SR generation rate < 0.31 nm/105 cells∙min is a favorable prognostic factor, while the higher value is a factor
of negative prognosis. Conclusions: the use of complex of
polyradiomodification with a preparation of L-arginine
during NRT course causes an increase in levels of superoxide- and NO-generating of activity of N. High rate of
activity of NADP∙H-oxidase of N is a factor of negative
prognosis of survival of patients under conditions of combined treatment
|
| first_indexed | 2025-12-07T17:20:26Z |
| format | Article |
| fulltext |
ОНКОЛОГИЯ • Т. 18 • № 4 • 2016
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
294
ВСТУП
Нейтрофіли (Н) є неодмінними учасниками
процесу формування і розвитку пухлини, стосов-
но якої вони можуть проявляти як про-, так і про-
типухлинну активність залежно від їх функціональ-
ного стану та етапу розвитку новоутворення [1–7].
Вони першими мігрують із периферичного крово-
току до пухлини на ранніх етапах її формування,
посилено інфільтрують вогнища пухлинного рос-
ту і в подальшому функціонують як активні ком-
поненти пухлинної строми. Скупчуючись у зонах
найбільш інтенсивного пухлинного росту, Н мають
здатність інгібувати поверхневу дифузію пухлинних
клітин (ПК) [8, 9]. Вони здатні до фагоцитозу і без-
посередньої цитотоксичності щодо ПК шляхом ак-
тивації секреторної дегрануляції та респіраторно-
го вибуху. При цьому ключового значення в регре-
сії пухлин надають супероксидним радикалам (СР)
та оксиду азоту (NO) [2].
Разом з цим є роботи, які свідчать, що цитоток-
сичний потенціал Н може сприяти прогресуванню
пухлини, посилюючи процеси мутагенезу, неоангіо-
ВЗАЄМОЗВ’ЯЗОК СУПЕРОКСИД-
ТА NO-ГЕНЕРУЮЧОЇ АКТИВНОСТІ
НЕЙТРОФІЛІВ ХВОРИХ НА РАК
ПРЯМОЇ КИШКИ З КЛІНІЧНИМИ
ХАРАКТЕРИСТИКАМИ ТА ВПЛИВ
НА ВІДДАЛЕНІ РЕЗУЛЬТАТИ
КОМБІНОВАНОГО ЛІКУВАННЯ
Нейтрофіли (Н) беруть участь у процесах формування і розвитку пухли-
ни, стосовно якої вони можуть проявляти як про-, так і протипухлинну
активність залежно від функціонального стану та етапу розвитку ново-
утворення. Ключового значення в регресії пухлин надають супероксидним
радикалам (СР) та оксиду азоту (NO), які продукуються в тому числі Н.
Мета: дослідити особливості редокс-стану Н крові хворих на рак прямої
кишки (РПК) в умовах неоад’ювантної променевої терапії (НПТ) радіомо-
дифікацією із застосуванням субстрату для біосинтезу NO та зв’язок цих
параметрів із виживаністю пацієнтів. Об’єкт і методи: досліджено Н кро-
ві 59 хворих на РПК ІІ–ІІІ (Т2–3N0–2M0) стадії, які отримали доопера-
ційний курс променевої терапії (І група), НПТ з потенціюванням тегафу-
ром (ІІ група) і НПТ на фоні полірадіомодифікації (ІІІ група) з подальшим
хірургічним лікуванням через 4–5 тиж. Дослідження супероксид-генеруючої
активності Н проводили методом електронного парамагнітного резонансу,
NO-генеруючої активності — за допомогою технології Spin Traps. Резуль-
тати: розвиток РПК супроводжується підвищенням у хворих супероксид-
та NO-генеруючої активності Н відповідно в 1,5 і 4,3 раза. Виявлено пряму
залежність активності НАДФ∙Н-оксидази Н від розміру пухлини (r = 0,54;
p < 0,01), а іNOS — від типу росту пухлини та метастатичного ураження
регіонарних лімфовузлів (відповідно r = 0,58; p < 0,05; r = 0,49; p < 0,05). Се-
реднє значення активності НАДФ∙Н-оксидази Н після НПТ у хворих, які пе-
режили 3-річний період без рецидивів, — 0,23 ± 0,02 нМ/105 клітин∙хв; у яких
виникли місцеві рецидиви — 0,41 ± 0,03 (p < 0,001), а у випадках наявнос-
ті віддалених метастазів — 0,53 ± 0,04 (p < 0,001). Прогностичне значен-
ня стосовно виникнення рецидивів і метастазів у хворих на РПК, які отри-
мали комбіноване лікування, має показник активності цього ферменту піс-
ля останньої фракції НПТ, при цьому значення швидкості генерування СР <
0,31 нМ/105 клітин∙хв є сприятливим прогностичним чинником, а більш ви-
сокі показники — фактором негативного прогнозу. Висновки: застосуван-
ня комплексу полірадіо модифікації з препаратом L-аргініну упродовж кур-
су НПТ зумовлює підвищення рівнів супероксид- та NO-генеруючої актив-
ності Н. Високі показники активності НАДФ∙Н-оксидази Н є фактором
негативного прогнозу виживаності хворих за умов комбінованого лікування.
А.П. Бурлака1
І.І. Ганусевич1
В.В. Голотюк2
А.В. Вовк1
С.М. Лукін1
С.В. Вірко3
1Інститут експериментальної
патології, онкології
і радіобіології
ім. Р.Є. Кавецького
НАН України, Київ
2Івано-Франківський
Національний медичний
університет,
Івано-Франківськ, Україна
3Інститут фізики
напівпровідників
ім. В.Є. Лашкарьова
НАН України, Київ
Ключові слова: рак прямої
кишки, редокс-стан
нейтрофілів, ефективність
лікування.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
295ОНКОЛОГИЯ • Т. 18 • № 4 • 2016 295
генезу та метастазування [5]. Зокрема, фактор не-
крозу пухлини (TNF)-α Н в умовах хронічного запа-
лення створює сприятливі умови для ініціації розви-
тку пухлини; матриксні металопротеїнази-9 та -13,
які секретуються інфільтруючими пухлину Н, сти-
мулюють неоангіогенез та ремоделюють міжклітин-
ний матрикс, сприяючи росту і метастазуванню пух-
лини [2, 6]. СР та NO, які продукуються Н, мають
канцерогенний потенціал, збільшуючи кількість му-
тацій у клітинах через пошкодження ДНК, мемб-
ран, вплив на концентрацію внутрішньоклітинного
кальцію [10]. Слід зазначити, що пропухлинна дія Н
проявляється найчастіше на більш пізніх термінах
росту пухлини [3, 4], а факторами, які визначають
ефекти СР та NO на ПК, є їх концентрація та висо-
ка реакційна здатність [1, 7, 11].
Мета: вивчити особливості редокс-стану Н кро-
ві хворих на рак прямої кишки (РПК) в умовах по-
лірадіомодифікації із застосуванням субстрату для
біосинтезу NO та зв’язок цих параметрів із вижи-
ваністю хворих.
ОБ’ЄКТ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
Досліджено Н крові 59 хворих (середній вік
61,8 ± 1,1 року) на РПК ІІ–ІІІ стадії, які перебува-
ли на лікуванні в Івано-Франківському обласно-
му клінічному онкологічному диспансері. У 41 па-
цієнта діагностовано ІІ стадію захворювання (Т3–
4N0M0), у 18 — ІІІ (Т2–4N1–2M0). У всіх пацієнтів
була верифікована аденокарцинома різного ступе-
ня диференціювання. Діагноз, стадію захворюван-
ня та наявність метастазів встановлювали відповід-
но до вимог доказової медицини (у ході відповідних
клініко-інструментальних обстежень, морфологіч-
но). Дослідження виконували згідно з принципами
проведення біомедичних досліджень, що викладені
в Гельсінській декларації Всесвітньої медичної асо-
ціації, за інформованою згодою пацієнтів.
І група — 22 пацієнти, що отримали курс
неоад’ювантної променевої терапії (НПТ) на ді-
лянку пухлини без застосування радіомодифікато-
рів (20 сеансів фракціями по 2 Гр до сумарної вог-
нищевої дози 38–40 Гр) з наступним хірургічним
лікуванням. 18 хворих ІІ групи на фоні аналогіч-
ного курсу НПТ отримували неоад’ювантну хіміо-
променеву терапію (НХПТ), тегафур із розрахун-
ку 800 мг/добу за 2 прийоми per os (зранку та ввече-
рі) при масі тіла до 70 кг або 1200 мг за 3 прийоми
при масі тіла > 70 кг, щодня упродовж усього курсу
НПТ. 19 пацієнтам ІІІ групи, окрім тегафуру як ком-
понента полірадіомодифікації під час НХПТ, дове-
нозно інфузійно за 1 год до сеансу променевої тера-
пії (ПТ) вводили препарат L-аргініну в дозі 100 мл
(100 мл містять 4,2 г аргініну гідрохлориду; у 100 мл
міститься 20 ммоль аргініну та 20 ммоль хлоридів).
Через 4–6 тиж після останнього сеансу НПТ паці-
єнтам всіх груп були виконані радикальні хірургіч-
ні втручання в обсязі передньої резекції, черевно-
анальної резекції чи черевно-промежинної екстир-
пації прямої кишки. Ад’ювантну хіміотерапію згідно
з режимами FOLFOX/FOLFIRI призначали хворим
з III стадією патологічного процесу, у разі вростання
пухлини в сусідні органи, а також при ступенях ди-
ференціації G3–4. У разі III стадії ад’ювантну хіміоте-
рапію призначали, враховуючи негативні прогнос-
тичні фактори: кишкову непрохідність, перфорацію
кишки, інвазію в кровоносні та лімфатичні суди-
ни, периневральну інвазію, позитивні краї резекції.
Н виділяли з венозної крові на розчині трилону Б
(3%) за стандартною методикою на градієнті щіль-
ності фікол/натрію амідотризоат [12]. Досліджен-
ня О2
.--генеруючої активності НАДФ·Н-оксидази
Н проводили методом електронного парамагнітно-
го резонансу з використанням спінового уловлюва-
ча 1-гідрокси-2,2,6,6-тетраметил-4-оксипіперидину
при кімнатній температурі. Визначення NO, генеро-
ваного iNOS Н, виконували методом електронного
парамагнітного резонансу та технології Spin Traps
при температурі 77 К. Як спіновий уловлювач засто-
совували діетилдитіокарбамат «Sigma» [13].
О2
.--генеруючу активність НАДФ·Н-оксидази
та швидкість генерування NO індуцибельною NO-
синтазою (iNOS) визначали на етапі встановлення
діагнозу, після 1-го та 20-го сеансів НПТ і перед опе-
рацією. Контролем слугували показники 20 прак-
тично здорових людей (11 чоловіків, 9 жінок віком
50–58 років).
Виживаність хворих аналізували за методом Ка-
плана — Мейєра, для парних порівнянь використо-
вували log-rank критерій [14]. Статистичний аналіз
проводили з використанням прикладних ліцензій-
них програм GraphPadPrism 6 та Origin 7.0. Різницю
між показниками вважали достовірною при р < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТИ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ
При злоякісному пухлинному рості активація
Н реалізується за умов утворення функціональ-
ної НАДФ·Н-оксидази, яка після взаємодії ци-
тозольних компонентів з мембранним флавоци-
тохромом b558 продукує та переносить електрони
на молекулярний кисень з утворенням CP. Ней-
трофільні гранулоцити крові експресують так зва-
ну фагоцитарну форму НАДФ·Н-оксидази, яка має
деякі структурні відмінності порівняно з нефаго-
цитарною НАДФ·Н-оксидазою тромбоцитів. Зо-
крема, каталітична суб одиниця ферменту gp91phox
утворює мембранозв’язаний комплекс з субодини-
цею gp22phox, формуючи флавоцитохром b558, а крім
цитозольних субодиниць р47phox, р67phox і Rac, при-
таманних для тромбоцитів, для активації фагоци-
тарної НАДФ·Н-оксидази необхідна транслока-
ція до мембранного комплексу субодиниці р40phox.
При цьому генерування СР НАДФ·Н-оксидазою Н
ініціюється прозапальними цитокінами (GM-CSF,
IL-8), впливаючи на рівень G-білка або через акти-
вацію b558 [7, 13].
При дослідженні активності НАДФ·Н-оксидази
та iNOS Н у хворих на РПК до початку лікування ви-
ОНКОЛОГИЯ • Т. 18 • № 4 • 2016
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
296
явлено достовірне зростання швидкості генеруван-
ня СР порівняно зі донорами (табл. 1).
Таблиця 1
Показники редокс-стану Н крові у донорів і хворих на РПК
Групи хворих
Показники редокс-стану Н
Активність
НАДФ∙Н-оксидази
(нМ/105 клітин∙хв)
Активність iNOS
(нМ/105 клітин∙хв)
М ± m М ± m
Умовно здорові
донори (n = 20) 0,22 ± 0,03 0,09 ± 0,02
Хворі на РПК (n = 59) 0,34 ± 0,01
(р = 0,001)
0,39 ± 0,02
(р < 0,001)
Аналіз швидкості генерування СР Н крові залеж-
но від клініко-патологічних характеристик хворих
на РПК показав здебільшого неспецифічний харак-
тер її підвищення. Фактором, який достовірно впли-
вав на активність НАДФ·Н-оксидази Н, був розмір
пухлини (пряма кореляція: r = 0,54; p < 0,01) (табл. 2).
Що стосується активності iNOS Н, статистичний
аналіз виявив 2 фактори, які у хворих на РПК досто-
вірно впливають на її рівень (див. табл. 2). Зокрема,
у випадках пухлин з ендофітною та змішаною фор-
мами росту порівняно з екзофітною, а також у разі
метастатичного ураження лімфатичних вузлів NO-
генеруюча активність ферменту підвищувалася від-
повідно на 26% (пряма кореляція: r = 0,58; р < 0,05)
та 25% (пряма кореляція: r = 0,49; р < 0,05).
Таблиця 2
Показники редокс-стану Н крові залежно
від клініко-патологічних характеристик хворих на РПК
Фактор
Показники редокс-стану Н
Активність
НАДФ∙Н-оксидази
(нМ/105 клітин∙хв)
Активність iNOS
(нМ/105 клітин∙хв)
М ± m М ± m
Стать:
чоловіки (n = 31)
жінки (n = 28)
0,35 ± 0,02
0,32 ± 0,02
(р = 0,343)
0,41 ± 0,03
0,37 ± 0,02
(р = 0,223)
Вікова група:
≤ 60 років (n = 24)
> 60 років (n = 35)
0,34 ± 0,02
0,33 ± 0,02
(р = 0,908)
0,41 ± 0,03
0,38 ± 0,02
(р = 0,401)
Тип росту:
екзофітна (n = 27)
змішана і ендофітна
форми (n = 32)
0,34 ± 0,02
0,33 ± 0,02
(р = 0,852)
0,34 ± 0,03
0,43 ± 0,02
(р = 0,011)
Ступінь диференціювання:
G1–2 (n = 49)
G3 (n = 10)
0,34 ± 0,02
0,33 ± 0,04
(р = 0,924)
0,39 ± 0,02
0,37 ± 0,05
(р = 0,663)
Глибина інвазії:
Т1–2 (n = 15)
Т3–4 (n = 44)
0,32 ± 0,03
0,34 ± 0,02
(p = 0,580)
0,35 ± 0,03
0,41 ± 0,02
(p = 0,215)
Розмір пухлини:
≤ 5 см (n = 17)
> 5 см (n = 42)
0,31 ± 0,03
0,39 ± 0,02
(p = 0,027)
0,37 ± 0,04
0,40 ± 0,02
(p = 0,581)
Регіонарні лімфовузли:
N0 (n = 41)
N1–2 (n = 18)
0,33 ± 0,02
0,36 ± 0,03
(p = 0,339)
0,36 ± 0,02
0,45 ± 0,03
(p = 0,017)
Стенозування кишки:
є (n = 35)
немає (n = 24)
0,32 ± 0,02
0,34 ± 0,03
(p = 0,389)
0,36 ± 0,03
0,41 ± 0,02
(p = 0,130)
У хворих дослідних груп рівні активності
НАДФ·Н-оксидази Н на етапі до лікування між со-
бою вірогідно не відрізнялися (рис. 1, а). Через добу
після 1-го сеансу ПТ у хворих І та ІІ груп активність
ферменту достовірно знижувалася. У подальшо-
му, поступово зростаючи, на етапі перед операцією
в обох групах вона була близькою до показника до лі-
кування, не відрізняючись достовірно від нього. На-
впаки, у IІІ групі активність НАДФ·Н-оксидази піс-
ля 1-го сеансу ПТ різко зростала (у 2,2 раза, до 0,69 ±
0,06 нМ/105 клітин·хв; р < 0,001), після 19–20-го се-
ансу знижувалася, при цьому залишаючись віро-
гідно вищою за показник до лікування (р = 0,037).
На передопераційному етапі активність ферменту
достовірно не відрізнялася від вихідного рівня. Через
1 міс після хірургічного лікування у І, ІІ і IІІ групах
хворих активність НАДФ·Н-оксидази Н була ниж-
чою відповідно на 33; 31 та 25%, ніж на етапі вста-
новлення діагнозу, при цьому у пацієнтів І та ІІ груп
ця різниця була статистично достовірною.
Таким чином, вплив НПТ та хірургічного ліку-
вання у хворих І–ІІ груп проявлявся у транзиторно-
му зниженні супероксид-генеруючої активності Н.
У хворих ІІІ групи застосування полірадіомодифіка-
ції під час ПТ зумовлювало підвищення активності
НАДФ·Н-оксидази Н, хоча через 1 міс після хірур-
гічного лікування статистично значущої відміннос-
ті зазначеного показника порівняно з пацієнтами ІІ
та ІІІ груп не виявлено.
Ãðóïà ²
Ãðóïà ²²
Ãðóïà ²²²
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1 2 3 4 5
íÌ
/1
05 ê
ë³
òè
í·
õâ
а
Ãðóïà ²
Ãðóïà ²²
Ãðóïà ²²²
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1 2 3 4 5
íÌ
/1
05 ê
ë³
òè
í·
õâ
б
Рис. 1. Рівні генерування СР (а) та NO (б): 1 — до ліку-
вання; 2 — після 1-го сеансу НПТ; 3 — після 20 сеансів
НПТ; 4 — перед операцією; 5 — через 1 міс після операції.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
297ОНКОЛОГИЯ • Т. 18 • № 4 • 2016 297
Показники активності iNOS у хворих І і ІІ груп,
не відрізняючись вірогідно між собою до початку лі-
кування, через 1 добу після 1-го сеансу ПТ незначно
та недостовірно зростали, в подальшому залишалися
на практично такому самому рівні без особливої ди-
наміки (рис. 1, б). Натомість, у хворих IІІ групи ак-
тивність iNOS підвищувалася упродовж всього курсу
ПТ, перевищуючи вихідне значення після 19–20-го
сеансу майже вдвічі (р < 0,001). Через місяць після
операції в І, ІІ і IІІ групах хворих NO-генеруюча ак-
тивність iNOS була нижчою, ніж на етапі встанов-
лення діагнозу, проте статистично достовірно —
лише у пацієнтів І групи.
Отримані дані вказують, що НПТ і НХПТ самі
по собі мало впливають на процеси генерування
NO. На фоні полірадіомодифікації з препаратом
L-аргініну рівень продукції NO очікувано зростає,
причому підвищення активності iNOS у цьому ви-
падку спостерігається і через 4–5 тиж після закін-
чення ПТ.
Аналіз результатів 3-річного спостереження па-
цієнтів досліджених груп показав, що прогностичне
значення стосовно виникнення рецидивів і метаста-
зів у хворих на РПК, які отримали комбіноване ліку-
вання, має показник активності НАДФ·Н-оксидази
Н після останньої фракції ПТ. Ретроспективно вста-
новлено, що середнє значення активності цього
ферменту після 19–20-го сеансу ПТ у пацієнтів, які
пережили 3-річний період без рецидивів, станови-
ло 0,23 ± 0,02 нМ/105 клітин·хв; у хворих із місце-
вими рецидивами — 0,41 ± 0,03 (р < 0,001), а у ви-
падках наявності віддалених метастазів — 0,53 ±
0,04 (р < 0,001). На основі ROC-аналізу встанов-
лено, що межа розподілу між умовно «сприятли-
вим» та «несприятливим» рівнями швидкості ге-
нерування СР ізольованими Н крові становить
0,31 нМ/105 клітин·хв. Зокрема, значення швидко-
сті генерування СР < 0,31 нМ/105 клітин·хв можна
вважати сприятливим прогностичним фактором,
який свідчить про високу чутливість до застосова-
ного комбінованого лікування і дозволяє спрогно-
зувати більш високі показники виживаності хворих.
Фактором негативного прогнозу за умов аналогіч-
ного лікування є показник > 0,31 нМ/105 клітин·хв,
що є додатковим чинником на користь застосування
ад’ювантних курсів системної поліхіміотерапії [15].
Запропонована оцінка прогнозу ризику прогресу-
вання РПК справджується незалежно від методу
НТП, на що вказує порівняння показників загаль-
ної 3-річної виживаності хворих у межах кожної до-
слідної групи (рис. 2).
Широкий спектр фізіологічної активності Н зу-
мовлює їх суттєвий вплив як агентів стримування
пухлинного росту [2, 7]. Зокрема, паракринний ви-
кид ними цитокінів TNF-α, IL-1β, -2,-4, -12, INF-γ
супроводжується інактивацією ПК, виділені цито-
кіни залучають у зону розвитку пухлини і активу-
ють супероксид- та NO-генеруючу активність ма-
крофагів, природніх кілерів, дендритних клітин, Т-
і В-лімфоцитів. Окрім того, СР, NO і хемокіни Н
мають здатність гальмувати ангіогенез у пухлині й
активувати Т-хелпери 1-го і 2-го типів, викликаю-
чи зсув балансу між гуморальними і клітинно-опо-
середкованими реакціями [1, 8].
І група
ІІ група
ІІІ група
Рис. 2. 3-Річна загальна виживаність хворих на РПК залеж-
но від генеруючої активності Н після 20-го сеансу НПТ:
1 — < 0,31 нМ/105 клітин·хв; 2 — > 0,31 нМ/105 клітин·хв.
Оцінка виживаності за Капланом — Мейєром, log-rank
тест при порівнянні загальної виживаності р = 0,011 (I гру-
па); р = 0,036 (II група); р = 0,047 (III група)
ОНКОЛОГИЯ • Т. 18 • № 4 • 2016
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
298
Активні форми кисню і NO, які синтезують фер-
ментні системи Н, здійснюють безпосередню де-
струкцію чужорідних агентів і ПК. Вони генеру-
ються при активації комплексу функціональної
НАДФ·Н-оксидази шляхом взаємодії цитозольних
компонентів (р47phox, р67phox, р40phox та Rac2) з мемб-
ранним флавоцитохромом b558 (gр91phox та р22phox) [7].
Супероксид-аніон, що генерується НАДФ·Н-
оксидазою, є вихідним продуктом для утворення
цілого спектра активних форм кисню, включаючи
похідні азоту і галогенів, зокрема гіпохлорну кис-
лоту. Остання викликає швидкий лізис ПК і утво-
рює хлораміни, які володіють імуностимулюючи-
ми властивостями [1]. іNOS Н після їх адекватної
стимуляції прозапальними цитокінами (GM-CSF,
IL-8) має здатність підтримувати високу концен-
трацію NO у навколишньому середовищі упродовж
36–94 год, що дозволяє здійснювати як пряму цито-
літичну дію на клітини, так і брати участь в індукції
механізмів апоптозу [10, 11]. Активні форми кисню,
які продукуються Н, можуть також активувати інгі-
бітори протеїнкіназ, що, як і дія протеаз гранул Н,
призводить до елімінації ПК.
ВИСНОВКИ
1. Розвиток РПК супроводжується підвищенням
супероксид- та NO-генеруючої активності Н відпо-
відно в 1,5 і 4,3 раза.
2. Встановлено пряму залежність активності
НАДФ·Н-оксидази Н від розміру пухлини, а іNOS —
від типу росту пухлин та метастатичного ураження
регіонарних лімфовузлів.
3. Застосування комплексу полірадіомоди-
фікації з препаратом L-аргініну упродовж кур-
су НПТ зумовлює підвищення рівнів О2
.-- та NO-
генеруючої активності Н порівняно з іншими
групами хворих.
4. Показник швидкості генерування СР Н
< 0,31 нМ/105 клітин·хв вважають сприятливим
прогностичним фактором, який свідчить про ви-
соку чутливість до застосованого лікування і дозво-
ляє спрогнозувати більш високі показники вижива-
ності хворих. Високі показники НАДФ·Н-оксидази
є фактором негативного прогнозу за умов комбіно-
ваного лікування.
Роботу виконано у рамках цільової програми на-
укових досліджень ВБФМБ НАН України «Функці-
ональна геноміка і метаболоміка в системній біоло-
гії» (номер державної реєстрації теми 0112U002193;
2012–2016 рр.).
СПИСОК ВИКОРИСТАНОЇ ЛІТЕРАТУРИ
1. Мальцева ВН, Сафронова ВГ. Неоднозначность роли
нейтрофила в генезе опухоли. Цитология 2009; 6: 467–74.
2. Gregory AD, Houghton AM. Tumor-associated neu-
trophils: new targets for cancer therapy. Cancer Res 2011; 71:
2411–6.
3. Klink M, Jastrzembska K, Nowak M, et al. Ovarian cancer
cells modulate human blood neutrophils response to activation in
vitro. Scand J Immunol 2008; 68: 328–36.
4. Wislez M, Antoine M, Rabbe N, et al. Neutrophils promote
aerogenous spread of lung adenocarcinoma with bronchioloal-
veolar carcinoma features. Clin Cancer Res 2007; 13: 3518–27.
5. Knaapen AM, Gungor N, Schins RPF, et al. Neutrophils and
respiratory tract DNA damage and mutagenesis: a review. Muta-
genesis 2006; 21: 225–36.
6. Nozawa H, Chiu Ch, Hanahan D. Infiltrating neutrophils
mediate the initial angiogenic switch in a mouse of multistage car-
cinogenesis. Proc Nat Acad Sci USA 2006; 103: 12493–8.
7. Бурлака АП, Сидорик ЕП. Редоксзависимые молекулы
в механизмах опухолевого процесса. К: Наукова думка, 2014.
255 с.
8. Granot Z, Henke E, Comen E, et al. Tumor entrained neu-
trophils inhibit seeding in the premetastatic lung. Cancer Cell
2011; 20: 300–14.
9. Bru A, Albertos S, Lopez Garcya-Asenjo JA, et al. Pinning
of tumoral growth by enhancement of the immune response. Phys
Rev Lett 2004; 92 (23): 238101.
10. Grimm EA, Sikora AG, Ekmekcioglu S. Molecular path-
ways: inflammation-associated nitric-oxide production as a can-
cer-supporting redox mechanism and a potential therapeutic tar-
get. Clin Cancer Res 2013; 20: 5557–63.
11. Choudhari SK, ChaudharyM, Bagde S, et al. Nitric oxide
and cancer: a review. World J Surg Oncol 2013; 11: 118.
12. Ковальчук ЛВ, Игнатьева ГА, Ганковская ЛВ. Иммуно-
логия, практикум. М: ГЭОТАР-Медиа, 2010. 194 с.
13. Бурлака АП, Голотюк ВВ, Вовк АВ та ін. Вплив О2
.-
та NO-генеруючої активності нейтрофілів на ефективність
неоад’ювантної променевої терапії у хворих на рак прямої
кишки. Онкология 2015; 4: 253–7.
14. Kaplan EL, Meier P. Nonparametric estimation from in-
complete observations. J Amer Stat Ass 1958; 53: 457–81.
15. Голотюк ВВ, Бурлака АП. Патент на корисну модель
№ 102389 UA: «Спосіб прогнозування ефективності комбі-
нованого лікування хворих на рак прямої кишки із враху-
ванням супероксид-генеруючої активності нейтрофільних
гранулоцитів».
CORRELATION BETWEEN SUPEROXIDE-
AND NO-GENERATING ACTIVITY
OF NEUTROPHILS OF PATIENTS
WITH COLORECTAL CANCER
AND CLINICAL CHARACTERISTICS
AND IMPACT ON THE LONG-TERM
RESULTS OF COMBINED TREATMENT
A.P. Burlaka, І.I. Ganusevich, V.V. Golotiuk,
A.V. Vovk, S.M. Lukin, C.V. Virko
Summary. Neutrophils (N) are involved in process-
es of formation and development of tumor, and towards
they can exhibit both pro- and anti-tumor activity de-
pending on the functional status and stage of neoplasm
development. A crucial importance for tumor regression
belongs to superoxide radicals (SR) and nitrogen oxide
(NO), produced also by N. Aim: to explore features of re-
dox state of N in blood of patients with colorectal cancer
(CRC) under conditions of neoadjuvant radiation ther-
apy with radiomodification (using substrate for biosyn-
thesis of NO) and the correlation of these parameters
and survival of patients. Object and methods: N of blood
of 59 patients with CRC stages II–III (Т2–3N0–2M0)
were investigated. These patients received preoperative
radiotherapy (NRT) (I group), NRT with tegafur poten-
tiation (II group) and NRT on the background of poly-
radiomodification (III group), followed by a surgery af-
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
299ОНКОЛОГИЯ • Т. 18 • № 4 • 2016 299
ter 4–5 weeks. Superoxide-generating activity of N was
investigated using EPR method, and NO-generating ac-
tivity — using spin trapping technique. Results: develop-
ment of CRC is accompanied by an increase in superox-
ide- and NO-generating activity of N 1,5 and 4,3 times,
respectively. A direct dependence of activity of NADP∙H-
oxidase of N on the tumor size (r = 0.54; p <0,01) and
of iNOS — on the type of tumor growth and metastatic
lesion of regional lymph nodes (r = 0.58; p < 0.05; r =
0.49; p < 0.05, respectively) have been revealed. The
average value of activity of NADP∙H-oxidase of N after
NRT in patients, who have survived 3-year period without
recurrence , was 0.23 ± 0.02 nm/105 cells ∙ min; in pa-
tients with local R — 0.41±0.03 (p < 0.001); in the cases
with distant metastases — 0.53 ± 0.04 (p < 0.001). In-
dex of activity of this enzyme after the last NRT fraction
has prognostic significance concerning the occurrence of
recurrence and metastases in patients with CRC, who
received the combined treatment. Moreover, the value of
SR generation rate < 0.31 nm/105 cells∙min is a favor-
able prognostic factor, while the higher value is a factor
of negative prognosis. Conclusions: the use of complex of
polyradiomodification with a preparation of L-arginine
during NRT course causes an increase in levels of super-
oxide- and NO-generating of activity of N. High rate of
activity of NADP∙H-oxidase of N is a factor of negative
prognosis of survival of patients under conditions of com-
bined treatment.
Key Words: colorectal cancer, redox state of
neutrophils, effectiveness of treatment.
Адреса для листування:
Бурлака А.П.
03022, Київ, вул. Васильківська, 45
Інститут експериментальної патології,
онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького
НАН України
E-mail: apburlaka@gmail.com
Одержано: 16.11.2016
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-145277 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 1562-1774 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T17:20:26Z |
| publishDate | 2016 |
| publisher | Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Бурлака, А.П. Ганусевич, І.І. Голотюк, В.В. Вовк, А.В. Лукін, С.М. Вірко, С.В. 2019-01-20T08:57:55Z 2019-01-20T08:57:55Z 2016 Взаємозв'язок супероксид- та no-генеруючої активності нейтрофілів хворих на рак прямої кишки з клінічними характеристиками та вплив на віддалені результати комбінованого лікування / А.П. Бурлака, І.І. Ганусевич, В.В. Голотюк, А.В. Вовк, С.М. Лукін, С.В. Вірко // Онкологія. — 2016. — Т. 18, № 4. — С. 294-299. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. 1562-1774 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/145277 Нейтрофіли (Н) беруть участь у процесах формування і розвитку пухлини, стосовно якої вони можуть проявляти як про-, так і протипухлинну
 активність залежно від функціонального стану та етапу розвитку новоутворення. Ключового значення в регресії пухлин надають супероксидним
 радикалам (СР) та оксиду азоту (NO), які продукуються в тому числі Н.
 Мета: дослідити особливості редокс-стану Н крові хворих на рак прямої
 кишки (РПК) в умовах неоад’ювантної променевої терапії (НПТ) радіомодифікацією із застосуванням субстрату для біосинтезу NO та зв’язок цих
 параметрів із виживаністю пацієнтів. Об’єкт і методи: досліджено Н крові 59 хворих на РПК ІІ–ІІІ (Т2–3N0–2M0) стадії, які отримали доопераційний курс променевої терапії (І група), НПТ з потенціюванням тегафуром (ІІ група) і НПТ на фоні полірадіомодифікації (ІІІ група) з подальшим
 хірургічним лікуванням через 4–5 тиж. Дослідження супероксид-генеруючої
 активності Н проводили методом електронного парамагнітного резонансу,
 NO-генеруючої активності — за допомогою технології Spin Traps. Результати: розвиток РПК супроводжується підвищенням у хворих супероксидта NO-генеруючої активності Н відповідно в 1,5 і 4,3 раза. Виявлено пряму
 залежність активності НАДФ∙Н-оксидази Н від розміру пухлини (r = 0,54;
 p < 0,01), а іNOS — від типу росту пухлини та метастатичного ураження
 регіонарних лімфовузлів (відповідно r = 0,58; p < 0,05; r = 0,49; p < 0,05). Середнє значення активності НАДФ·Н-оксидази Н після НПТ у хворих, які пережили 3-річний період без рецидивів,— 0,23 ± 0,02 нМ/105 клітин∙хв; у яких
 виникли місцеві рецидиви — 0,41 ± 0,03 (p < 0,001), а у випадках наявності віддалених метастазів — 0,53 ± 0,04 (p < 0,001). Прогностичне значення стосовно виникнення рецидивів і метастазів у хворих на РПК, які отримали комбіноване лікування, має показник активності цього ферменту після останньої фракції НПТ, при цьому значення швидкості генерування СР <
 0,31 нМ/105 клітин∙хв є сприятливим прогностичним чинником, а більш високі показники — фактором негативного прогнозу. Висновки: застосування комплексу полірадіомодифікації з препаратом L-аргініну упродовж курсу НПТ зумовлює підвищення рівнів супероксид- та NO-генеруючої активності Н. Високі показники активності НАДФ·Н-оксидази Н є фактором
 негативного прогнозу виживаності хворих за умов комбінованого лікування. Neutrophils (N) are involved in processes of formation and development of tumor, and towards
 they can exhibit both pro- and anti-tumor activity depending on the functional status and stage of neoplasm
 development. A crucial importance for tumor regression
 belongs to superoxide radicals (SR) and nitrogen oxide
 (NO), produced also by N. Aim: to explore features of redox state of N in blood of patients with colorectal cancer
 (CRC) under conditions of neoadjuvant radiation therapy with radiomodification (using substrate for biosynthesis of NO) and the correlation of these parameters
 and survival of patients. Object and methods: N of blood
 of 59 patients with CRC stages II–III (Т2–3N0–2M0)
 were investigated. These patients received preoperative
 radiotherapy (NRT) (I group), NRT with tegafur potentiation (II group) and NRT on the background of polyradiomodification (III group), followed by a surgery after 4–5 weeks. Superoxide-generating activity of N was
 investigated using EPR method, and NO-generating activity — using spin trapping technique. Results: development of CRC is accompanied by an increase in superoxide- and NO-generating activity of N 1,5 and 4,3 times,
 respectively. A direct dependence of activity of NADP∙Hoxidase of N on the tumor size (r = 0.54; p <0,01) and
 of iNOS — on the type of tumor growth and metastatic
 lesion of regional lymph nodes (r = 0.58; p < 0.05; r =
 0.49; p < 0.05, respectively) have been revealed. The
 average value of activity of NADP∙H-oxidase of N after
 NRT in patients, who have survived 3-year period without
 recurrence , was 0.23 ± 0.02 nm/105 cells ∙ min; in patients with local R — 0.41±0.03 (p < 0.001); in the cases
 with distant metastases — 0.53 ± 0.04 (p < 0.001). Index of activity of this enzyme after the last NRT fraction
 has prognostic significance concerning the occurrence of
 recurrence and metastases in patients with CRC, who
 received the combined treatment. Moreover, the value of
 SR generation rate < 0.31 nm/105 cells∙min is a favorable prognostic factor, while the higher value is a factor
 of negative prognosis. Conclusions: the use of complex of
 polyradiomodification with a preparation of L-arginine
 during NRT course causes an increase in levels of superoxide- and NO-generating of activity of N. High rate of
 activity of NADP∙H-oxidase of N is a factor of negative
 prognosis of survival of patients under conditions of combined treatment uk Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України Онкологія Оригинальные исследования Взаємозв'язок супероксид- та no-генеруючої активності нейтрофілів хворих на рак прямої кишки з клінічними характеристиками та вплив на віддалені результати комбінованого лікування Correlation between superoxideand no-generating activity of neutrophils of patients with colorectal cancer and clinical characteristics and impact on the long-term results of combined treatment Article published earlier |
| spellingShingle | Взаємозв'язок супероксид- та no-генеруючої активності нейтрофілів хворих на рак прямої кишки з клінічними характеристиками та вплив на віддалені результати комбінованого лікування Бурлака, А.П. Ганусевич, І.І. Голотюк, В.В. Вовк, А.В. Лукін, С.М. Вірко, С.В. Оригинальные исследования |
| title | Взаємозв'язок супероксид- та no-генеруючої активності нейтрофілів хворих на рак прямої кишки з клінічними характеристиками та вплив на віддалені результати комбінованого лікування |
| title_alt | Correlation between superoxideand no-generating activity of neutrophils of patients with colorectal cancer and clinical characteristics and impact on the long-term results of combined treatment |
| title_full | Взаємозв'язок супероксид- та no-генеруючої активності нейтрофілів хворих на рак прямої кишки з клінічними характеристиками та вплив на віддалені результати комбінованого лікування |
| title_fullStr | Взаємозв'язок супероксид- та no-генеруючої активності нейтрофілів хворих на рак прямої кишки з клінічними характеристиками та вплив на віддалені результати комбінованого лікування |
| title_full_unstemmed | Взаємозв'язок супероксид- та no-генеруючої активності нейтрофілів хворих на рак прямої кишки з клінічними характеристиками та вплив на віддалені результати комбінованого лікування |
| title_short | Взаємозв'язок супероксид- та no-генеруючої активності нейтрофілів хворих на рак прямої кишки з клінічними характеристиками та вплив на віддалені результати комбінованого лікування |
| title_sort | взаємозв'язок супероксид- та no-генеруючої активності нейтрофілів хворих на рак прямої кишки з клінічними характеристиками та вплив на віддалені результати комбінованого лікування |
| topic | Оригинальные исследования |
| topic_facet | Оригинальные исследования |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/145277 |
| work_keys_str_mv | AT burlakaap vzaêmozvâzoksuperoksidtanogeneruûčoíaktivnostíneitrofílívhvorihnarakprâmoíkiškizklíníčnimiharakteristikamitavplivnavíddalenírezulʹtatikombínovanogolíkuvannâ AT ganusevičíí vzaêmozvâzoksuperoksidtanogeneruûčoíaktivnostíneitrofílívhvorihnarakprâmoíkiškizklíníčnimiharakteristikamitavplivnavíddalenírezulʹtatikombínovanogolíkuvannâ AT golotûkvv vzaêmozvâzoksuperoksidtanogeneruûčoíaktivnostíneitrofílívhvorihnarakprâmoíkiškizklíníčnimiharakteristikamitavplivnavíddalenírezulʹtatikombínovanogolíkuvannâ AT vovkav vzaêmozvâzoksuperoksidtanogeneruûčoíaktivnostíneitrofílívhvorihnarakprâmoíkiškizklíníčnimiharakteristikamitavplivnavíddalenírezulʹtatikombínovanogolíkuvannâ AT lukínsm vzaêmozvâzoksuperoksidtanogeneruûčoíaktivnostíneitrofílívhvorihnarakprâmoíkiškizklíníčnimiharakteristikamitavplivnavíddalenírezulʹtatikombínovanogolíkuvannâ AT vírkosv vzaêmozvâzoksuperoksidtanogeneruûčoíaktivnostíneitrofílívhvorihnarakprâmoíkiškizklíníčnimiharakteristikamitavplivnavíddalenírezulʹtatikombínovanogolíkuvannâ AT burlakaap correlationbetweensuperoxideandnogeneratingactivityofneutrophilsofpatientswithcolorectalcancerandclinicalcharacteristicsandimpactonthelongtermresultsofcombinedtreatment AT ganusevičíí correlationbetweensuperoxideandnogeneratingactivityofneutrophilsofpatientswithcolorectalcancerandclinicalcharacteristicsandimpactonthelongtermresultsofcombinedtreatment AT golotûkvv correlationbetweensuperoxideandnogeneratingactivityofneutrophilsofpatientswithcolorectalcancerandclinicalcharacteristicsandimpactonthelongtermresultsofcombinedtreatment AT vovkav correlationbetweensuperoxideandnogeneratingactivityofneutrophilsofpatientswithcolorectalcancerandclinicalcharacteristicsandimpactonthelongtermresultsofcombinedtreatment AT lukínsm correlationbetweensuperoxideandnogeneratingactivityofneutrophilsofpatientswithcolorectalcancerandclinicalcharacteristicsandimpactonthelongtermresultsofcombinedtreatment AT vírkosv correlationbetweensuperoxideandnogeneratingactivityofneutrophilsofpatientswithcolorectalcancerandclinicalcharacteristicsandimpactonthelongtermresultsofcombinedtreatment |