Дослідження вмісту ефекторних клітин у периферичній крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності
Мета: дослідити зміни субпопуляційного складу лімфоцитів периферичної крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності до оперативного втручання. Об’єкт і методи: матеріалом для дослідження слугувала периферична кров нейроонкологічних хворих (41 зразок) та умовно здорових осіб (9...
Saved in:
| Published in: | Онкологія |
|---|---|
| Date: | 2018 |
| Main Authors: | , |
| Format: | Article |
| Language: | Ukrainian |
| Published: |
Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України
2018
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/145581 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Дослідження вмісту ефекторних клітин у периферичній крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності / Л.М. Бєльська, М.І. Лісяний // Онкологія. — 2018. — Т. 20, № 3. — С. 212-217. — Бібліогр.: 29 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-145581 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Бєльська, Л.М. Лісяний, М.І. 2019-01-24T08:49:09Z 2019-01-24T08:49:09Z 2018 Дослідження вмісту ефекторних клітин у периферичній крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності / Л.М. Бєльська, М.І. Лісяний // Онкологія. — 2018. — Т. 20, № 3. — С. 212-217. — Бібліогр.: 29 назв. — укр. 1562-1774 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/145581 Мета: дослідити зміни субпопуляційного складу лімфоцитів периферичної крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності до оперативного втручання. Об’єкт і методи: матеріалом для дослідження слугувала периферична кров нейроонкологічних хворих (41 зразок) та умовно здорових осіб (9 зразків). Кількісний склад субпопуляцій лімфоцитів периферичної крові визначали на проточному цитофлюориметрі «FC-500» («Beckman Coulter», США) з використанням подвійних комбінацій моноклональних антитіл («Beckman Coulter», США). Статистичну обробку результатів проводили за допомогою програми Microsoft Excel із визначенням середнього арифметичного і стандартного статистичного відхилення (m ± δ) та t-критерію Стьюдента. Результати : для хворих із пухлинами головного мозку різного гістогенезу характерне зниження в периферичній крові вмісту основних ефекторів клітинної ланки імунітету — цитотоксичних лімфоцитів (ЦТЛ), натуральних кілерних клітин (НКК) та натуральних кілерних Т-клітин (НКTК). У хворих з доброякісним перебігом гліом (І–ІІ ступінь анаплазії) визначали незначне зменшення кількості ЦТЛ, НКТК та НKК порівняно з відповідними показниками умовно здорових осіб. Злоякісний перебіг гліом (ІІІ–ІV ступінь анаплазії) супроводжувався статистично достовірним (р < 0,05) зменшенням вмісту клітин названих субпопуляцій порівняно з показниками не лише умовно здорових осіб, а й пацієнтів з гліомами І–ІІ ступеня анаплазії, а також підвищенням вмісту лімфоцитів, які експресують маркер апоптозу (CD95⁺). Висновок: аналіз субпопуляційного складу лімфоцитів периферичної крові хворих із пухлинами головного мозку свідчить про розвиток виражених порушень у клітинній ланці протипухлинного імунітету (як вродженого, так і адаптивного) у пацієнтів зі злоякісним перебігом гліом (ІІІ–ІV ступінь анаплазії). Aim: to investigate the changes in the subpopulation composition of peripheral blood lymphocytes in patients with gliomas of varying degrees of malignancy before surgery. Object and Methods: samples the peripheral blood of neuronecological patients (41 samples) and conditionally healthy persons (9 samples) were examined. Quantitative composition of subpopulations of lymphocytes was studied on a flow cytofluorometer «FC-500» («Beckman Coulter», USА) using dual monoclonal antibody combinations («Beckman Coulter», USA). Statistical processing of the results was carried out with the help of the Microsoft Excel program with the determination of the mean arithmetic and standard statistical deviation (m ± δ) and Student’s t-criterion. Results: contents of the main effector cells of the immune system — cytotoxic lymphocytes (CTL), natural killer cells (NKCs) and natural killer T cells (NSCTs) was found in peripheral blood of patients with brain tumors of different histogenesis. In patients with gliomas I–II degree of anaplasia, a slight decrease in the number of CTL, NSCLC and NSC was determined in comparison with the corresponding indices of conditionally healthy persons. Malignant gliomas (III–IV degree of anaplasia) was accompanied by a statistically significant (p < 0.05) decrease in the content of cells of these subpopulations compared with those of not only conditionally healthy persons, but also patients with gliomas of the I–II degree of anaplasia, as well as an increase in the content of lymphocytes, expressing an apoptosis marker (CD95⁺). Conclusion: the analysis of the subpopulation composition of peripheral blood lymphocytes in patients with brain tumors suggests the development of marked violations in cellular antitumor immunity (both congenital and adaptive) in patients with malignant flow of gliomas (III–IV degree of anaplasia). uk Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України Онкологія Оригинальные исследования Дослідження вмісту ефекторних клітин у периферичній крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності Іnvestigation of the content of effector cells in peripheral blood of patients with gliomas of different degrees of malignancy Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Дослідження вмісту ефекторних клітин у периферичній крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності |
| spellingShingle |
Дослідження вмісту ефекторних клітин у периферичній крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності Бєльська, Л.М. Лісяний, М.І. Оригинальные исследования |
| title_short |
Дослідження вмісту ефекторних клітин у периферичній крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності |
| title_full |
Дослідження вмісту ефекторних клітин у периферичній крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності |
| title_fullStr |
Дослідження вмісту ефекторних клітин у периферичній крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності |
| title_full_unstemmed |
Дослідження вмісту ефекторних клітин у периферичній крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності |
| title_sort |
дослідження вмісту ефекторних клітин у периферичній крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності |
| author |
Бєльська, Л.М. Лісяний, М.І. |
| author_facet |
Бєльська, Л.М. Лісяний, М.І. |
| topic |
Оригинальные исследования |
| topic_facet |
Оригинальные исследования |
| publishDate |
2018 |
| language |
Ukrainian |
| container_title |
Онкологія |
| publisher |
Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Іnvestigation of the content of effector cells in peripheral blood of patients with gliomas of different degrees of malignancy |
| description |
Мета:
дослідити зміни субпопуляційного складу лімфоцитів периферичної крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності до оперативного
втручання.
Об’єкт і методи:
матеріалом для дослідження слугувала периферична кров нейроонкологічних хворих (41
зразок) та умовно здорових осіб
(9 зразків). Кількісний склад субпопуляцій лімфоцитів периферичної крові
визначали на проточному цитофлюориметрі «FC-500» («Beckman Coulter»,
США) з використанням подвійних комбінацій моноклональних антитіл
(«Beckman Coulter», США). Статистичну обробку результатів проводили
за допомогою програми Microsoft Excel із визначенням середнього арифметичного і стандартного статистичного відхилення (m ± δ) та t-критерію
Стьюдента.
Результати
: для хворих із пухлинами головного мозку різного гістогенезу характерне зниження в периферичній крові вмісту основних ефекторів клітинної ланки імунітету — цитотоксичних лімфоцитів (ЦТЛ), натуральних кілерних клітин (НКК) та натуральних кілерних
Т-клітин (НКTК). У хворих з доброякісним перебігом гліом (І–ІІ ступінь
анаплазії) визначали незначне зменшення кількості ЦТЛ, НКТК та НKК
порівняно з відповідними показниками умовно здорових осіб. Злоякісний перебіг гліом (ІІІ–ІV ступінь анаплазії) супроводжувався статистично достовірним (р < 0,05) зменшенням вмісту клітин названих субпопуляцій порівняно з показниками не лише умовно здорових осіб, а й пацієнтів з гліомами І–ІІ ступеня анаплазії, а
також підвищенням вмісту лімфоцитів,
які експресують маркер апоптозу (CD95⁺).
Висновок:
аналіз субпопуляційного складу лімфоцитів периферичної крові хворих із пухлинами головного
мозку свідчить про розвиток виражених порушень у клітинній ланці протипухлинного імунітету (як вродженого, так і адаптивного) у пацієнтів
зі злоякісним перебігом гліом (ІІІ–ІV ступінь анаплазії).
Aim: to investigate the changes in the subpopulation composition of peripheral blood lymphocytes
in patients with gliomas of varying degrees of malignancy before surgery.
Object and Methods:
samples the peripheral blood of neuronecological patients (41
samples)
and conditionally healthy persons (9
samples) were examined. Quantitative composition of subpopulations of
lymphocytes was studied on a flow cytofluorometer «FC-500» («Beckman Coulter», USА) using dual monoclonal
antibody combinations («Beckman Coulter», USA). Statistical processing of
the results was carried out with the
help of the Microsoft Excel program with the determination of the mean arithmetic and standard statistical deviation (m ± δ) and Student’s t-criterion.
Results:
contents of the main effector cells of the immune system —
cytotoxic lymphocytes (CTL), natural killer cells (NKCs) and natural killer T cells (NSCTs) was found in peripheral blood of patients with brain tumors of different histogenesis. In patients with gliomas I–II degree of anaplasia, a slight decrease in the number of CTL, NSCLC
and NSC was determined in comparison with the corresponding indices of conditionally healthy persons. Malignant gliomas (III–IV degree of anaplasia) was accompanied by a statistically significant (p < 0.05) decrease
in the content of cells of these subpopulations compared
with those of not only conditionally healthy persons, but
also patients with gliomas of the I–II degree of anaplasia, as well as an increase in the content of lymphocytes,
expressing an apoptosis marker (CD95⁺).
Conclusion:
the analysis of the subpopulation composition of peripheral
blood lymphocytes in patients with brain tumors suggests
the development of marked violations in cellular antitumor
immunity (both congenital and adaptive) in patients with
malignant flow of gliomas (III–IV degree of anaplasia).
|
| issn |
1562-1774 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/145581 |
| citation_txt |
Дослідження вмісту ефекторних клітин у периферичній крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності / Л.М. Бєльська, М.І. Лісяний // Онкологія. — 2018. — Т. 20, № 3. — С. 212-217. — Бібліогр.: 29 назв. — укр. |
| work_keys_str_mv |
AT bêlʹsʹkalm doslídžennâvmístuefektornihklítinuperiferičníikrovíhvorihzglíomamiríznogostupenâzloâkísností AT lísâniimí doslídžennâvmístuefektornihklítinuperiferičníikrovíhvorihzglíomamiríznogostupenâzloâkísností AT bêlʹsʹkalm ínvestigationofthecontentofeffectorcellsinperipheralbloodofpatientswithgliomasofdifferentdegreesofmalignancy AT lísâniimí ínvestigationofthecontentofeffectorcellsinperipheralbloodofpatientswithgliomasofdifferentdegreesofmalignancy |
| first_indexed |
2025-11-27T02:27:13Z |
| last_indexed |
2025-11-27T02:27:13Z |
| _version_ |
1850794153699442688 |
| fulltext |
ОНКОЛОГИЯ • Т. 20 • № 3 • 2018
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
212
Розвиток пухлин центральної нервової систе-
ми (ЦНС) асоціюється зі змінами в імунній сис-
темі, зокрема зі значною імуносупресією за раху-
нок лімфопенії, пригніченням проліферативної
активності лімфоцитів, зниженням експресії ан-
тигенів головного комплексу гістосумісності І кла-
су на моноцитах, переважанням протизапальних
цитокінів Т-хелперів 2-го типу (Th2) тощо [1–3].
Протягом певного часу велика увага дослідників
зосереджена на вивченні у пацієнтів із пухлина-
ми ЦНС ефекторних клітин, зокрема цитотоксич-
них Т-лімфоцитів (ЦТЛ), натуральних кілерних
клітин (НКК) та натуральних кілерних Т-клітин
(НКTК), які відіграють провідну роль у протипух-
линному імунітеті.
Потенціал НКК як ефекторів протипухлинно-
го імунітету у хворих із пухлинами головного мозку
був продемонстрований у дослідженнях in vitro [4]
та in vivo [5–7]. Цитотоксичний вплив НKК на пух-
линні клітини реалізується декількома шляхами,
основним з яких є перфорин-гранзимовий. З ін-
шого боку, НКК конститутивно експресують на по-
верхні CD95-ліганд і TNFα (tumor necrosis factor),
які зв’язуються з рецепторами на клітинах-міше-
нях та індукують процес апоптозу. НKК можуть
взаємодіяти з Fc-фрагментом антитіл через рецеп-
тор FcγRIII (CD16) та брати участь в антитілоза-
лежному кілінгу клітин-мішеней [8]. Крім того,
НKК секретують цитокіни (наприклад інтерфе-
рон (IFN)-γ) і хемокіни, які мають імуномодулю-
ючі ефекти, такі як праймування клітинних реак-
цій Т-хелперів 1-го типу (Th1) і класична поляри-
зація макрофагів M1.
При різних типах онкологічних захворювань
зменшення кількості та зниження активності НKК
може слугувати прогностичним критерієм метаста-
зування, зниження відповіді на лікування, загальної
виживаності хворих онкологічного профілю [9–11].
Внутрішньовенне або внутрішньочерепне введення
необроблених аутологічних НКК у хворих із реци-
дивуючою злоякісною гліомою зумовлювало у 45%
пацієнтів регрес пухлини [12].
ДОСЛІДЖЕННЯ ВМІСТУ
ЕФЕКТОРНИХ КЛІТИН
У ПЕРИФЕРИЧНІЙ КРОВІ ХВОРИХ
З ГЛІОМАМИ РІЗНОГО СТУПЕНЯ
ЗЛОЯКІСНОСТІ
Мета: дослідити зміни субпопуляційного складу лімфоцитів периферич-
ної крові хворих з гліомами різного ступеня злоякісності до оперативного
втручання. Об’єкт і методи: матеріалом для дослідження слугувала пери-
ферична кров нейроонкологічних хворих (41 зразок) та умовно здорових осіб
(9 зразків). Кількісний склад субпопуляцій лімфоцитів периферичної крові
визначали на проточному цитофлюориметрі «FC-500» («Beckman Coulter»,
США) з використанням подвійних комбінацій моноклональних антитіл
(«Beckman Coulter», США). Статистичну обробку результатів проводили
за допомогою програми Microsoft Excel із визначенням середнього арифме-
тичного і стандартного статистичного відхилення (m ± δ) та t-критерію
Стьюдента. Результати: для хворих із пухлинами головного мозку різно-
го гістогенезу характерне зниження в периферичній крові вмісту основ-
них ефекторів клітинної ланки імунітету — цитотоксичних лімфоци-
тів (ЦТЛ), натуральних кілерних клітин (НКК) та натуральних кілерних
Т-клітин (НКTК). У хворих з доброякісним перебігом гліом (І–ІІ ступінь
анаплазії) визначали незначне зменшення кількості ЦТЛ, НКТК та НKК
порівняно з відповідними показниками умовно здорових осіб. Злоякісний пе-
ребіг гліом (ІІІ–ІV ступінь анаплазії) супроводжувався статистично до-
стовірним (р < 0,05) зменшенням вмісту клітин названих субпопуляцій по-
рівняно з показниками не лише умовно здорових осіб, а й пацієнтів з гліо-
мами І–ІІ ступеня анаплазії, а також підвищенням вмісту лімфоцитів,
які експресують маркер апоптозу (CD95+). Висновок: аналіз субпопуляцій-
ного складу лімфоцитів периферичної крові хворих із пухлинами головного
мозку свідчить про розвиток виражених порушень у клітинній ланці про-
типухлинного імунітету (як вродженого, так і адаптивного) у пацієнтів
зі злоякісним перебігом гліом (ІІІ–ІV ступінь анаплазії).
Л.М. Бєльська
М.І. Лісяний
ДУ «Iнститут нейрохірургії
ім. акад. А.П. Ромоданова
НАМН України», Київ, Україна
Ключові слова: гліома, ступінь
злоякісності, периферична кров,
ефектори протипухлинного
імунітету, лімфоцити,
фенотип.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
213ОНКОЛОГИЯ • Т. 20 • № 3 • 2018 213
Інша популяція ефекторних клітин імунної сис-
теми — НKTК. Ці клітини експресують маркери
НKК (CD16, CD56, CD161), Т-клітинні диферен-
ціювальні антигени (CD3, CD4, CD8), Т-клітинний
рецептор (TCRαβ). Залежно від типу НKTК секре-
тують цитокіни Т-хелперів (Th1 або Th2) і беруть
участь у про- або протипухлинній імунній відпо-
віді. НKTК І типу можуть стимулювати протипух-
линну імунну відповідь за рахунок швидкої секре-
ції IFN-γ та відігравати роль стимуляторів актив-
ності інших клітин. Продукований цими клітинами
IFN-γ, з одного боку, стимулює дозрівання дендрит-
них клітин, з другого — активізує макрофаги та CD8+
Т-лімфоцити. Зрілі дендритні клітини продукують
інтерлейкін (IL)-12, що стимулює подальшу про-
дукцію IFN-γ та IL-2 НKTК І типу; в свою чергу
дані цитокіни активують НKК, CD8+ Т-лімфоцити
та макрофаги М1. Активовані лімфоцити виклика-
ють лізис пухлинних клітин за рахунок різних ме-
ханізмів, у тому числі продукції перфорину, гранзи-
мів, окису азоту та FasL [13]. Описано, що актива-
ція НKТК І типу за допомогою гліколіпіду α-GalCer
(α-Galactosylceramide) призводить до активації НKК
і Т-клітин, індукує виражену протипухлинну імун-
ну відповідь як щодо трансплантованих і хімічно
індукованих, так і спонтанних пухлин [14]. На різ-
них експериментальних моделях пухлинного рос-
ту продемонстрована антиметастатична активність
НKTК І типу, активованих α-GalCer [15, 16]. У хво-
рих із солідними пухлинами встановлено зниження
НKTК І типу в периферичній крові [14].
НKTК ІІ типу виявляють супресорний вплив
на НKTК І типу та CD8+ пухлиноспецифіч-
ні Т-лімфоцити, що пов’язано з підвищенням
рівня IL-13 і трансформуючого фактора росту
бета (TGFβ) та кількості CD11b+Gr1+ мієлоїдних
супресорних клітин [15, 16]. Супресорна активність
НKTК ІІ типу продемонстрована в дослідженнях
з використанням різних експериментальних мо-
делей пухлин [17, 18].
Іншими ефекторами адаптивного імунітету,
що чинять цитотоксичну дію щодо пухлинних клі-
тин, є ЦТЛ СD3+CD8+, які реалізують свої функції
при взаємодії з пухлиноспецифічними антигена-
ми, експресованими на цитоплазматичній мембра-
ні злоякісних клітин сумісно з молекулами голов-
ного комплексу гістосумісності («подвійне розпіз-
навання») [19]. Цитотоксичний вплив на пухлинні
клітини вони здійснюють шляхом класичного пер-
форин-гранзимового механізму контактного ци-
толізу, індукують Fas-залежний апоптоз пухлин-
них клітин. У дослідженнях показано, що фактори,
які секретуються активованими ЦТЛ, викликають
апоптоз клітин перевивних ліній гліобластом [20].
Введення алореактивних ЦТЛ та ІЛ-2 хворим із ре-
цидивуючою злоякісною гліомою збільшує трива-
лість безрецидивного періоду захворювання до 28–
30 міс [21]. Зміни в кількісному і субпопуляційному
складі ЦТЛ виявлено при широкому спектрі онко-
логічних захворювань. Зниження вмісту CD3+CD8+
Т-клітин і синтез цією субпопуляцією перфорину
в периферичній крові корелює з поганим прогно-
зом у хворих на рак легені [22]. Низька щільність
інфільтрації CD8+ T-лімфоцитами первинної пух-
лини раку шлунка асоціюється з несприятливим
прогнозом [23].
Проте, незважаючи на досить тривале вивчення
ролі різних субпопуляцій ефекторних імунних клі-
тин в експериментальних дослідженнях та у паці-
єнтів з різною онкопатологією, вміст НKК, НKТК
та ЦТЛ у хворих з гліомами різного ступеня зло-
якісності досліджено недостатньо.
Мета роботи — дослідити вміст НKК, НKТК
та ЦТЛ у периферичній крові хворих з гліомами
різного ступеня злоякісності до оперативного втру-
чання.
ОБ’ЄКТ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
Матеріалом для дослідження слугувала перифе-
рична кров нейроонкологічних хворих (41 зразок)
та умовно здорових осіб (9 зразків). Гістологічну
діагностику пухлин на біопсійному матеріалі здій-
снювали у відділі нейропатоморфології ДУ «Інсти-
тут нейрохірургії ім. акад. А.П. Ромоданова НАМН
України» згідно з останньою Міжнародною класи-
фікацією ВООЗ пухлин ЦНС (2016). Кількість паці-
єнтів із пухлинами ЦНС: атипічні менінгіоми — 5,
аденоми гіпофізу — 3; гліоми різного ступеня зло-
якісності: фібрилярно-протоплазматичні — 4 (І–
ІІ ступінь), анапластичні астроцитоми — 11 та ана-
пластичні олігодендрогліоми — 6 (ІІІ ступінь), гліо-
бластоми — 12 (ІV ступінь). Периферичну кров
нейроонкологічних хворих отримано до проведен-
ня оперативного втручання. Усі пацієнти були поін-
формовані про проведення обстеження і дали пись-
мову згоду на використання їхнього біологічного ма-
теріалу в наукових цілях.
Кількісний склад субпопуляцій лімфоцитів пе-
риферичної крові визначали на проточному цито-
флюориметрі «FC-500» («Beckman Coulter», США)
за програмою Cytomics CXP Software з використан-
ням подвійних комбінацій моноклональних антитіл
(«Beckman Coulter», США). Оцінювали такі показ-
ники, як: загальна кількість Т-лімфоцитів (СD3+),
кількість клітин з маркерами СD4+, СD8+, СD16+,
ЦТЛ (CD3+CD8+), НKTК (CD3+CD16+CD56+),
НKК (CD3−CD16+CD56+), а також вміст лімфоци-
тів, які несуть маркерний антиген апоптозу (СD95+).
Постановку реакції кількісного визначення субпо-
пуляцій лімфоцитів за допомогою моноклональних
антитіл проводили згідно з інструкціями виробни-
ків антитіл і медичними рекомендаціями для робо-
ти з цільною кров’ю [24].
Статистичну обробку результатів дослідження
проводили за допомогою комп’ютерної програми
Microsoft Excel із визначенням середнього арифме-
тичного і стандартного статистичного відхилення
(m ± δ) та t-критерію Стьюдента.
ОНКОЛОГИЯ • Т. 20 • № 3 • 2018
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
214
РЕЗУЛЬТАТИ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ
У хворих із пухлинами ЦНС різного ступеня зло-
якісності до оперативного втручання визначали пев-
ні зміни кількості лейкоцитів, а також відмінності
в кількісному та фенотиповому складі лімфоцитів.
Відмічали збільшення загальної кількості лейкоци-
тів (в 1,4 раза) та статистично вірогідне зменшення
відносного вмісту лімфоцитів (р < 0,05) (табл. 1).
Таблиця 1
Субпопуляційний склад лімфоцитів периферичної крові хворих
із пухлинами ЦНС
Показники
Хворі з пух-
линами ЦНС
(n = 41)
Умовно здорові
особи
(n = 9)
Лейкоцити, •109/л 7,82 ± 2,95 5,71 ± 0,52
Лімфоцити, % 19,45 ± 11,021 33,76 ± 2,04
Лімфоцити, •109/л 2,08 ± 0,70 1,92 ± 0,18
Субпопуляційний склад лімфоцитів
CD3+, % 66,73 ± 9,10 65,78 ± 1,63
CD3+, •109/л 1,34 ± 0,53 1,23 ± 0,11
CD4+, % 41,88 ± 8,94 36,27 ± 0,24
CD4+, •109/л 0,87 ± 0,34 0, 65 ± 0,05
CD8+, % 24,84 ± 5,64 30,51 ± 0,41
CD8+, •109/л 0,51 ± 0,18 0,57 ± 0,03
CD4/CD8 1,80 ± 0,66 1,21 ± 0,09
CD16+, % 15,56 ± 1,251 20,30 ± 1,43
CD16+, •109/л 0,29 ± 0,031 0,38 ± 0,03
ЦТЛ (CD3+CD8+), % 19,18 ± 6,05 25,30 ± 0,42
ЦТЛ (CD3+CD8+), •109/л 0,39 ± 0,17 0,49 ± 0,06
НKTК (CD3+CD16+CD56+), % 6,37 ± 3,70 9,85 ± 0,77
НKTК (CD3+CD16+CD56+), •109/л 0,11 ± 0,011 0,18 ± 0,03
НKК (CD3-CD16+CD56+), % 13,26 ± 6,92 17,20 ± 1,43
НKК (CD3-CD16+CD56+), •109/л 0,25 ± 0,16 0,33 ± 0,02
1Вірогідність зміни показника р < 0,05 порівняно з контролем.
При аналізі показників субпопуляційного складу
лімфоцитів відмічене незначне зменшення віднос-
ної та абсолютної кількості CD8+ клітин при збіль-
шенні кількості клітин з маркером CD4+. Поряд
з цим у обстежених хворих відзначали зниження
в 1,3 раза відносної та абсолютної кількості ЦТЛ
(CD3+CD8+) (див. табл. 1). При цьому у 22% паці-
єнтів (9 з 41) кількість CD3+CD8+ клітин була змен-
шена в 2,5 раза.
Показано статистично вірогідне (р < 0,05) зни-
ження відносної кількості клітин з фенотипом
CD16+. У 19 з 41 нейроонкологічного хворого кіль-
кість CD16+ клітин зменшувалася в 3 рази. Також
встановлено зменшення як відносної, так і абсо-
лютної кількості НКТК (CD3+CD16+CD56+) (в 1,5
і 1,6 раза відповідно) та НKК (CD3−CD16+CD56+)
(у середньому на 35%). Аналіз індивідуальних да-
них пацієнтів із пухлинами ЦНС виявив, що віднос-
на кількість НKК зменшена у 32% хворих у 2 рази,
а у 15% хворих — у 3 рази. При цьому у 39% таких
пацієнтів у периферичній крові поряд зі знижен-
ням вмісту НKК відмічали також зменшення від-
носної (в 2,5 раза) і абсолютної (в 3 рази) кількості
НКТК, що свідчить про значне пригнічення ефек-
торної ланки протипухлинного імунітету у хворих
із пухлинами ЦНС.
Отримані результати дозволяють зробити висно-
вок, що у пацієнтів із пухлинами головного мозку
розвивається дисбаланс в складі основних субпопу-
ляцій клітин периферичної крові, а саме: знижен-
ня рівня CD8+ та підвищення рівня CD4+ лімфо-
цитів, що призводить до зростання в 1,5 раза від-
носного показника CD4/CD8. Поряд із незначним
зниженням рівня CD8+ Т-клітин відбувалося ві-
рогідне зменшення кількості НКТК, рівень НКК
у периферичній крові пацієнтів із пухлинами зни-
жувався недостовірно. Отже, у хворих із пухлина-
ми головного мозку спостерігали суттєве (р < 0,05)
зменшення кількості клітин-ефекторів природно-
го імунітету (НКТК і CD16+) та незначне зниження
рівня CD8+ лімфоцитів на фоні субкомпенсаторно-
го збільшення кількості CD4+ клітин, що може свід-
чити, на думку авторів, не про загальне гальмування
генерації лімфоцитів, а тільки певних їх субпопуля-
цій, які відповідають за протипухлинний імунітет.
Порівняльне дослідження вмісту різних субпопу-
ляцій ефекторних клітин у периферичній крові хво-
рих з гліомами різного ступеня злоякісності виявило
певні особливості. Дані, наведені в табл. 2, свідчать
про вірогідне (р < 0,05) зменшення відносного вміс-
ту ЦТЛ (CD3+CD8+), НКТК (CD3+CD16+CD56+) та
НКК (CD3-CD16+CD56+) у периферичній крові хво-
рих зі злоякісним перебігом гліом (ступінь злоякіс-
ності ІІІ–ІV) порівняно як з контрольними показ-
никами умовно здорових донорів, так і з відповідни-
ми показниками хворих із доброякісним перебігом
гліом (ступінь злоякісності ІІ). Так, у хворих з гліо-
мами ІІ ступеня злоякісності в периферичній крові
визначали несуттєве зменшення кількості НКТК,
НKК та ЦТЛ порівняно з відповідними показни-
ками умовно здорових осіб. Зіставлення відносного
вмісту ефекторних клітин різних субпопуляцій в пе-
риферичній крові у хворих з гліомами ІІІ та ІV сту-
пеня злоякісності не виявило суттєвих відміннос-
тей між цими групами. Проте показано, що для па-
цієнтів зі злоякісним перебігом гліом характерне
більш виражене зменшення кількості клітин порів-
няно як з відповідними показниками умовно здоро-
вих осіб, так і з показниками хворих із добро якісним
перебігом захворювання. Зокрема, кількість НKК
була зменшеною в 1,5 раза порівняно з показника-
ми пацієнтів з гліомами ІІ ступеня та в 2 рази порів-
няно з показниками контрольної групи. Відносний
вміст ефекторних Т-клітин (НKТК та ЦТЛ) змен-
шувався на 25–30% порівняно з відповідними по-
казниками хворих з гліомами ІІ ступеня та в серед-
ньому на 50% — порівняно з показниками умовно
здорових осіб.
Таким чином, у пацієнтів зі злоякісними гліо-
мами ІІІ та ІV ступеня анаплазії відмічається більш
значне зменшення кількості цитотоксичних лімфо-
цитів (ЦТЛ, НКК, НКТК) порівняно з пацієнтами
з пухлинами І–ІІ ступеня анаплазії. Судячи із серед-
нього групового рівня клітин цих субпопуляцій в пе-
риферичній крові, складно визначити, на яку попу-
ляцію більшою мірою діють імуносупресивні чинни-
ки пухлини. Водночас можна припустити, що таке
гальмування продукції цитотоксичних лімфоцитів
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
215ОНКОЛОГИЯ • Т. 20 • № 3 • 2018 215
різних субпопуляцій відбувається на різних рівнях
лімфопоезу або на різних етапах їх диференціюван-
ня в цитотоксичні клітини.
Виявлений нами дисбаланс ефекторних клітин
(а саме ЦТЛ, НКК і НKTК), значне зменшення
яких визначалося у хворих зі злоякісними гліома-
ми, може мати декілька механізмів. Одним із них є
Fas-опосередкована делеція, зумовлена наявністю
циркулюючих розчинних форм Fas-лігандів (FasL).
Останні утворюються внаслідок відщеплення ма-
триксними металопротеазами від поверхні пух-
линної клітини трансмембранних форм FasL, і,
таким чином, FasL+ пухлини можуть індукувати
апоптоз Fas+ ЦТЛ. Підтвердженням такого припу-
щення, на нашу думку, може бути виявлене нами
підвищення (p < 0,05) експресії маркера апопто-
зу CD95+ у хворих з гліомами ІV ступеня злоякіс-
ності: в 2 рази порівняно з показником пацієнтів
з гліомами ІІ ступеня та в 3,5 раза порівняно з па-
цієнтами з менінгіомами (рисунок). В літературі
наведено відомості щодо експресії FasL на кліти-
нах гліом [25].
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
Ãë³îìà ²-²² Ãë³îìà ²²² Ãë³îìà IV Ìåí³íã³îìà
%
Рисунок. Відносний вміст CD95+ лімфоцитів у перифе-
ричній крові хворих із пухлинами ЦНС різного ступе-
ню злоякісності
По-друге, не можна виключити пригнічу-
вальний вплив на НКТК та ЦТЛ регуляторних
Т-лімфоцитів (Тreg), кількість яких збільшена
у хворих з гліомами, особливо зі злоякісним пе-
ребігом [26]. В експериментальних досліджен-
нях на різних моделях індукованого пухлинно-
го росту показано, що ін’єкції Тreg призводять
до зменшення кількості НKTК І типу та CD8+
Т-лімфоцитів [27]. Супресорний ефект опосе-
редковано секрецією фактора TGFβ. TGFβ ін-
дукує Тreg (CD4+CD25+), які перешкоджають
проліферації CD8+ клітин у відповідь на алоан-
тиген та диференціюванню їх в ЦTЛ [28]. Відо-
мо, що самі гліальні клітини здатні продукувати
TGFβ, при цьому клітини злоякісних гліом про-
дукують вірогідно більше TGFβ порівняно з клі-
тинами доброякісних пухлин [29]. На нашу дум-
ку, це може зумовлювати більш виражені зміни
вмісту ефекторних клітин (НKTК та ЦТЛ) у пе-
риферичній крові хворих з гліо мами ІІІ та ІV сту-
пеня анаплазії.
Таким чином, у результаті проведених дослі-
джень встановлено, що у хворих з гліомами різно-
го ступеня анаплазії до оперативного втручання ви-
значається нерівномірне зниження в периферичній
крові вмісту клітин-ефекторів протипухлинного іму-
нітету, а саме: НKК, НKТК та ЦТЛ. Для гліальних
пухлин І–ІІ ступеня анаплазії (доброякісний пе-
ребіг) було характерним вірогідне зниження рівня
НКК, з боку інших субпопуляцій лімфоцитів від-
мічали лише незначне відхилення від показників
умовно здорових осіб. Злоякісний перебіг гліом су-
проводжувався більш значним (р < 0,05) зменшен-
ням вмісту клітин даних субпопуляцій в перифе-
ричній крові, що свідчить про суттєві порушення
в протипухлинній ланці як вродженого, так і адап-
тивного імунітету у хворих із гліомами ІІІ та ІV сту-
пеня анаплазії.
ВИСНОВКИ
1. У периферичній крові хворих з пухлинами го-
ловного мозку різного гістогенезу відмічали змен-
шення вмісту основних ефекторів клітинної ланки
імунітету — ЦТЛ, НКК та НКTК.
2. Для хворих із доброякісним перебігом гліом
(ІІ ступінь) характерне несуттєве зменшення кіль-
Таблиця 2
Субпопуляційний склад лімфоцитів периферичної крові хворих з пухлинами ЦНС різного ступеня злоякісності
Показники
Ступінь злоякісності гліом Контроль
(n = 9)І–ІІ
(n = 4)
ІІІ
(n = 17)
ІV
(n = 12)
Лейкоцити, •109/л 7,50 ± 1,54 7,98 ± 1,79 8,91 ± 0 3,32 5,71 ± 0,52
Лімфоцити, •109/л 33,50 ± 3,70 27,80 ± 11,30 18,60 ± 4,80 33,76 ± 2,04
Субпопуляційний склад лімфоцитів, %
CD3+ 66,00 ± 2,90 63,70 ± 7,43 58,70 ± 6,29 65,78 ± 1,63
CD4+ 36,01 ± 3,15 38,70 ± 5,42 35,90 ± 4,26 36,27 ± 0,24
CD8+ 30,50 ± 3,71 23,68 ± 4,88 21,66 ± 6,671 30,51 ± 0,41
CD4/CD8 1,20 ± 0,08 1,65 ± 0,09 1,66 ± 0,27 1,21 ± 0,09
CD16+ 18,70 ± 2,44 15,98 ± 7,26 15,45 ± 7,07 20,30 ± 1,43
ЦТЛ (CD3+CD8+) 22,30 ± 2,51 17,20 ± 6,801, 2 17,00 ± 2,531, 2 25,30 ± 0,42
НKTК (CD3+CD16+CD56+) 7,40 ± 2,00 5,92 ± 2,951 5,71 ± 1,841 9,85 ± 0,77
НKК (CD3-CD16+CD56+) 13,80 ± 1,48 8,44 ± 4,172 9,05 ± 2,181, 2 17,20 ± 1,43
1Вірогідність зміни показника р < 0,05 відносно контролю; 2вірогідність зміни показника р < 0,05 відносно групи хворих із доброякісним перебігом
гліом.
ОНКОЛОГИЯ • Т. 20 • № 3 • 2018
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
216
кості ЦТЛ, НКТК та НKК порівняно з відповідни-
ми показниками умовно здорових осіб.
3. Злоякісний перебіг гліом (ІІІ–ІV ступінь) су-
проводжувався статистично достовірним (р < 0,05)
зниженням вмісту клітин названих субпопуляцій
порівняно з показниками не лише умовно здоро-
вих осіб, а й пацієнтів з гліомами І–ІІ ступеня ана-
плазії, а також підвищенням вмісту лімфоцитів, які
експресують маркер апоптозу (CD95+).
СПИСОК ВИКОРИСТАНОЇ ЛІТЕРАТУРИ
1. Dix A, Brooks W, Roszman T, et al. Immune defects observed
in patients with primary malignant brain tumours. J Neuroimmu-
nol 1999; 100 (2): 216–32.
2. Parney I. Basic concepts in glioma immunology. In: Ya-
manaka R (ed). Glioma. Springer, New York, 2012: 42–52.
3. Lisyaniy NI. Changes in immune responses in various species
of gliomas. In: Gliomas of the Brain. Zozylia UA (ed). K., UIPK
«EksOb», 2007. 235–53 (in Ukrainian).
4. Avril T, Vauleon E, Hamlat A, et al. Human glioblastoma
stem-like cells are more sensitive to allogeneic NK and T cell me-
diated killing compared with serum-cultured glioblastoma cells.
Brain Pathol 2012; 22 (4): 159–74.
5. Friese M, Wischhusen J, Wick W, et al. RNA interference
targeting transforming growth factor-beta enhances NKG2D-me-
diated antiglioma immune response, inhibits glioma cell migration
and invasiveness, and abrogates tumorigenicity in vivo. J Neuroon-
col 2014; 116 (1): 7121–3.
6. Alizadeh D, Zhang L, Brown C, et al. Induction of anti-gli-
oma natural killer cell response following multiple low-dose intra-
cerebral CpG therapy. Clin Cancer Res 2010; 16 (2): 3399–408.
7. Poli A, Wang J, Domingues O, et al. Targeting glioblastoma
with NK cells and mAb against NG2/CSPG4 prolongs animal sur-
vival. Oncotarget 2013; 4 (9): 1507–26.
8. Seidel U, Schlegel P, Lang P. Natural killer cell mediated an-
tibody-dependent cellular cytotoxicity in tumour immunotherapy
with therapeutic antibodies. Front Immunol 2013; 4: 76.
9. Hsia J, Chen J, Chen C, et al. Prognostic significance
of intratumoural natural killer cells in primary resected esoph-
ageal squamous cell carcinoma. Chang Gung Med J 2005; 28
(5): 335–40.
10. Ishigami S, Natsugoe S, Tokuda K, et al. Prognostic val-
ue of intratumoral natural killer cells in gastric carcinoma. Can-
cer 2000; 88 (3): 577–83.
11. Kondo E, Koda K, Takiguchi N, et al. Preoperative natural
killer cell activity as a prognostic factor for distant metastasis fol-
lowing surgery for colon cancer. Dig Surg 2003; 20 (5): 445–51.
12. Ishikawa E, Tsuboi K, Saijo K, et al. Autologous natural
killer cell therapy for human recurrent malignant glioma. Anti-
cancer Res 2004; 24 (3b): 1861–71.
13. Akinfieva OV, Bubnov LN, Bessmelshev SS. NKТ cells:
characteristic features and functional significance in the immune
response regulation. Onkogematologiya 2010; 4: 39–43 (in Rus-
sian).
14. Terabe M, Berzofsky JA, et al. The role of NKT cells in tu-
mor immunity Adv Cancer Res 2009; 101: 277–348.
15. Kato S, Berzofsky J, Terabe M, et al. Possible therapeutic
application of targeting type II natural killer T cell-mediated sup-
pression of tumor immunity. Front Immunol 2018; 22 (9): 314.
16. Robertson F, Berzofsky J, Terabe M, et al. NKT cell net-
works in the regulation of tumor immunity. Front Immunol 2014;
5: 543.
17. Ambrosino E, Terabe M, Halder R. Cross-regulation be-
tween type I and type II NKT cells in regulating tumor immu-
nity: a new immunoregulatory axis. J Immunol 2007; 179 (8):
5126–36.
18. Hix L, Shi Y, Brutkiewicz R, et al. CD1d-expressing breast
cancer cells modulate NKT cell-mediated antitumor immunity
in a murine model of breast cancer metastasis. PLoS One 2011;
6 (6): 20702.
19. Liao Y, Geng P, Tian Y, et al. Marked anti-tumor effects of
CD8(+)CD62L(+) T-cells from melanoma-bearing mice. Immu-
nol Invest 2015; 44 (2): 147–63.
20. Cagigi A, Nilsson A, Levitsky V, Sabri F. Cytotoxic T-lym-
phocytes secrete soluble factors that induce caspase-mediated
apoptosis in glioblastoma cell lines. J Neuroimmunol 2010; 225
(1–2): 34–42.
21. Kruse C, Cepeda L, Owens B, et al. Treatment of recurrent
glioma with intracavitary alloreactive cytotoxic T lymphocytes and
interleukin-2. Cancer Immunol Immunother 1997; 45 (2): 77–87.
22. Xu L, Chen D, Lu C, et al. Advanced lung cancer is asso-
ciated with decreased expression of perforin, CD95, CD38 by cir-
culating CD3+CD8+ T lymphocytes. Ann Clin Lab Sci 2015; 45
(5): 528–32.
23. Tuncel T, Karagoz B, Haholu A, et al. Immunoregulatory
function of HLA-G in gastric cancer. Asian Pacific J Cancer Pre-
vent, 2013; 14 (12): 7681–4.
24. Parks DR, Herzenberg LA. Fluorescence-activated cell
sorting: theory, experimental optimization, and applications in
lymphoid cell biology. Methods Enzymol 1984; 108: 197–241.
25. Saggioro F, Neder L, Stávale J, et al. Fas, FasL, and cleaved
caspases 8 and 3 in glioblastomas: a tissue microarray-based study.
Pathol Res Pract 2014; 210 (5): 267–73.
26. Belskaya LN, Lisyany NI. Number CD4+CD25+ immu-
noregulatory cells at patients with glioma tumor. Immunol Aller-
gol. Science Prakt 2011; 4: 50–3 (in Ukrainian).
27. Azuma T, Takahashi T, Kunisato A, et al. Human
CD4+CD25+ regulatory T cells suppress NKT cell function. Can-
cer Res 2003; 63: 4516–20.
28. Freidlin IS. Regulatory T-cells: nature and functions. Med
Immunol 2005; 7 (4): 347–54 (in Russian).
29. Lisyany NI, Belska LN. Immunosuppressive influence of
the malignant brain tumors. Ukr Neurosurgical J 2007; (1): 4–9
(in Ukrainian).
INVESTIGATION OF THE CONTENT
OF EFFECTOR CELLS IN PERIPHERAL
BLOOD OF PATIENTS WITH GLIOMAS
OF DIFFERENT DEGREES OF MALIGNANCY
L.M. Belska, N.I. Lisyany
State Institution «Romodanov Neurosurgery Institute,
National Academy of Medical Sciences of Ukraine»,
Kyiv, Ukraine
Summary. Aim: to investigate the changes in the sub-
population composition of peripheral blood lymphocytes
in patients with gliomas of varying degrees of malignan-
cy before surgery. Object and Methods: samples the pe-
ripheral blood of neuronecological patients (41 samples)
and conditionally healthy persons (9 samples) were ex-
amined. Quantitative composition of subpopulations of
lymphocytes was studied on a flow cytofluorometer «FC-
500» («Beckman Coulter», USА) using dual monoclonal
antibody combinations («Beckman Coulter», USA). Sta-
tistical processing of the results was carried out with the
help of the Microsoft Excel program with the determina-
tion of the mean arithmetic and standard statistical de-
viation (m ± δ) and Student’s t-criterion. Results: con-
tents of the main effector cells of the immune system —
cytotoxic lymphocytes (CTL), natural killer cells (NKCs)
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
217ОНКОЛОГИЯ • Т. 20 • № 3 • 2018 217
and natural killer T cells (NSCTs) was found in periph-
eral blood of patients with brain tumors of different his-
togenesis. In patients with gliomas I–II degree of ana-
plasia, a slight decrease in the number of CTL, NSCLC
and NSC was determined in comparison with the corre-
sponding indices of conditionally healthy persons. Malig-
nant gliomas (III–IV degree of anaplasia) was accom-
panied by a statistically significant (p < 0.05) decrease
in the content of cells of these subpopulations compared
with those of not only conditionally healthy persons, but
also patients with gliomas of the I–II degree of anapla-
sia, as well as an increase in the content of lymphocytes,
expressing an apoptosis marker (CD95+). Conclusion: the
analysis of the subpopulation composition of peripheral
blood lymphocytes in patients with brain tumors suggests
the development of marked violations in cellular antitumor
immunity (both congenital and adaptive) in patients with
malignant flow of gliomas (III–IV degree of anaplasia).
Key Words: gliomas, degree of malignancy, peripheral
blood, effector immune cells, lymphocytes,
phenotype.
Адреса для листування:
Бєльська Л.М.
04050, Київ, вул. Платона Майбороди, 32
ДУ «Iнститут нейрохірургії
ім. акад. А.П. Ромоданова НАМН України»
E-mail: adsg@ukr.net
Одержано: 18.06.2018
|