Влияние леветирацетама на агрегацию и слияние мембран синаптических везикул в бесклеточной модели экзоцитоза

Изучали влияние антиэпилептического препарата леветирацетама на процессы агрегации синаптических везикул (СВ) и их кальцийиндуцированного слияния с мембранами-мишенями в бесклеточной модели нейросекреции. Размер СВ и их агрегатов в суспензии измеряли с применением лазерно-корреляционной спе...

Повний опис

Збережено в:

Бібліографічні деталі
Опубліковано в: :	Нейрофизиология
Дата:	2014
Автори:	Гуменюк, В.П., Трикаш, И.О.
Формат:	Стаття
Мова:	Російська
Опубліковано:	Інститут фізіології ім. О.О. Богомольця НАН України 2014
Онлайн доступ:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/148263
Теги:	Додати тег Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:	Влияние леветирацетама на агрегацию и слияние мембран синаптических везикул в бесклеточной модели экзоцитоза / В.П. Гуменюк, И.О. Трикаш // Нейрофизиология. — 2014. — Т. 46, № 2. — С. 129-133. — Бібліогр.: 15 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

_version_	1860058309230329856
author	Гуменюк, В.П. Трикаш, И.О.
author_facet	Гуменюк, В.П. Трикаш, И.О.
citation_txt	Влияние леветирацетама на агрегацию и слияние мембран синаптических везикул в бесклеточной модели экзоцитоза / В.П. Гуменюк, И.О. Трикаш // Нейрофизиология. — 2014. — Т. 46, № 2. — С. 129-133. — Бібліогр.: 15 назв. — рос.
collection	DSpace DC
container_title	Нейрофизиология
description	Изучали влияние антиэпилептического препарата леветирацетама на процессы агрегации синаптических везикул (СВ) и их кальцийиндуцированного слияния с мембранами-мишенями в бесклеточной модели нейросекреции. Размер СВ и их агрегатов в суспензии измеряли с применением лазерно-корреляционной спектроскопии. Слияние мембранных структур количественно определяли по изменению величины самогашения флуоресценции зонда октадецил-родамин Б хлорида (R18). Воздействие леветирацетама приводило к увеличению кластеризации СВ и уменьшению уровня стимулированного кальцием слияния таких везикул как с плазматическими мембранами, так и друг с другом. Таким образом, получены новые данные о влиянии леветирацетама на регуляцию процесса экзоцитоза на этапах кластеризации СВ и их кальцийстимулированного слияния с мембранами-мишенями. Вивчали вплив антиепілептичного препарату леветирацетаму на процеси агрегації синаптичних везикул (СВ) та їх кальційіндукованого злиття з мембранами-мішенями в безклітинній моделі нейросекреції. Розмір СВ та їх агрегатів у суспензії вимірювали за допомогою лазерно-кореляційної спектроскопії. Злиття мембранних структур кількісно визначали за зміною величини самогасіння флуоресценції зонда октадецил родамін Б хлориду (R18). Дія леветирацетаму призводила до збільшення кластеризації СВ і зменшення рівня стимульованого кальцієм як злиття таких везикул із плазматичними мембранами, так і їх взаємного злиття. Таким чином, отримані нові дані про вплив леветирацетаму на регуляцію процесу екзоцитозу на етапах кластеризації СВ та їх кальційстимульованого злиття з мембранами-мішенями.
first_indexed	2025-12-07T17:02:48Z
format	Article
fulltext	NEUROPHYSIOLOGY / НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ.—2014.—T. 46, № 2 129 УДК 577.352:615.213 В. П. ГУМЕНЮК1, И. О. ТРИКАШ1 ВЛИЯНИЕ ЛЕВЕТИРАЦЕТАМА НА АГРЕГАЦИю И СЛИЯНИЕ МЕМБРАН СИНАПТИЧЕСКИХ ВЕЗИКУЛ В БЕСКЛЕТОЧНОЙ МОДЕЛИ ЭКЗОЦИТОЗА Поступила 20.07.13 Изучали влияние антиэпилептического препарата леветирацетама на процессы агре- гации синаптических везикул (СВ) и их кальцийиндуцированного слияния с мембра- нами-мишенями в бесклеточной модели нейросекреции. Размер СВ и их агрегатов в суспензии измеряли с применением лазерно-корреляционной спектроскопии. Слияние мембранных структур количественно определяли по изменению величины самогаше- ния флуоресценции зонда октадецил-родамин Б хлорида (R18). Воздействие леветир- ацетама приводило к увеличению кластеризации СВ и уменьшению уровня стимули- рованного кальцием слияния таких везикул как с плазматическими мембранами, так и друг с другом. Таким образом, получены новые данные о влиянии леветирацетама на регуляцию процесса экзоцитоза на этапах кластеризации СВ и их кальцийстимулиро- ванного слияния с мембранами-мишенями. КЛюЧЕВЫЕ СЛОВА: бесклеточная модель, синаптические везикулы (СВ), слия- ние мембран, леветирацетам, экзоцитоз. 1Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, Киев (Украина). Эл. почта: vitakli@mail.ru (В. П. Гуменюк); trikash@biochem.kiev.ua (И. О. Трикаш). ВВЕДЕНИЕ Экзоцитоз синаптических везикул (СВ) включа- ет в себя несколько последовательных этапов – за- грузку везикул нейротрансмиттером, их докинг в активной зоне, активацию (прайминг) и кальций- стимулированное слияние с плазматической мем- браной. В реализацию этих процессов задейство- ваны специфические интегральные мембранные белки, известные как t-SNARE (синтаксин 1А и SNAP25) и v-SNAPE (синаптобревин/VAMP2) [1], а также белки цитозоля нервных окончаний, в том числе MUNC18-1 [2]. В разработанных нами бесклеточных системах были моделированы два этапа экзоцитоза – агре- гация СВ, которая проходит без слияния их мем- бран и имитирует in vitro этап докинга, и кальций- инициируемое слияние либо СВ с плазматическими мембранами синаптосом (взаимодействие гетеро- типных мембран), либо СВ друг с другом (взаи- модействие гомотипных мембран) [3, 4]. На этих модельных системах были изучены не только осо- бенности отдельных этапов экзоцитоза [5], но и эф- фекты антиэпилептических препаратов, влияющих на нейросекрецию [6, 7]. Известно, что местом специфического связывания антиэпилептического препарата леветирацетама яв- ляется белок синаптических везикул гликопротеин SV2A, функция которого связана с регуляцией про- цесса нейросекреции в синапсе. Для мышей, нок- аутных по гену белка SV2A, характерны повышен- ная возбудимость ЦНС (с постепенным развити- ем тяжелых эпилептических припадков) и прежде- временная смертность [8, 9]. Показано, что SV2A взаимодействует с цитоплазматическим доменом белка синаптотагмина и вместе с белками SNARE- комплекса регулирует процесс экзоцитоза [9]. Из- вестно, что леветирацетам связывается с протеи- ном SV2A и модулирует его активность. В целом же механизм действия леветирацетама пока оста- ется мало исследованным. Мы изучали влияние леветирацетама на процес- сы агрегации СВ и их кальцийиндуцированного слияния с мембранами-мишенями в бесклеточной модели нейросекреции. МЕТОДИКА В работе были использованы следующие реактивы и материалы: флуоресцентный зонд R18 (октаде- цил-родамин Б хлорид; «Molecular Probes», США), NEUROPHYSIOLOGY / НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ.—2014.—T. 46, № 2130 В. П. ГУМЕНЮК, И. О. ТРИКАШ сефадекс G75 («Pharmacia», Швеция), C12E8 (доде- циловый эфир oктаэтиленгликоля; «Calbiochem- Behring», США), ЭГТА (этиленгликоль-бис-β- аминоэтиловый эфир N,N’-тетрауксусной кисло- ты), сахароза (“Реахім”, Украина), фосфатидил- холин, фосфатидилэтаноламин, кардиолипин (,,Мінмедпром”, Украина), стекловолоконные фильтры Whatman GF/C («Whatman», Велико- британия), леветирацетам и АТФ – аденозин-5´- трифосфат («Sigma», США). Исследования проводили на крысах-самцах ли- нии Вистар с массой тела 200–250 г, которых содер- жали в обычных условиях вивария со свободным доступом к пище и воде. Для получения образцов головного мозга крыс подвергали эвтаназии с уче- том общепринятых международных нормативов гу- манного отношения к животным. СВ, плазматические мембраны и фракцию белков цитозоля выделяли из синаптосом головного мозга по методу де Лоренцо в модификации Колчинской и соавт. [4]. Размер СВ и их агрегатов в суспензии измеряли с помощью лазерно-корреляционной спектроскопии с использованием системы Malvern Zetasizer-3 (Ве- ликобритания). Для определения размера частиц в среде применяли программное обеспечение S 4700, PCS V.1.61, Rev.1 («Malvern Instruments LTD 2002», Великобритания). Данные анализировали с помо- щью алгоритма CONTIN, что позволяло рассчитать средний размер частиц и индекс полидисперсности. 50 мкл суспензии СВ (50 мкг белка) помеща- ли в кювету с 950 мкл буферного раствора (1 мМ ЭГТА и 10 мМ Трис-HCl; рН 8.1) или цитозольной фракции синаптосом (1 мг/мл белка, 1 мМ ЭГТА и 10 мМ Трис-HCl; рН 8.1). Степень слияния мембранных структур количе- ственно определяли по изменению величины са- могашения флуоресценции зонда R18 при длине волны возбуждения 560 нм и эмиссии 580 нм, ис- пользуя флуоресцентный спектрофотометр «Hitachi 650 10S» (Япония) [10]. К 1.0 мл цитозольной фракции синаптосом (1 мг белка/мл) в среде, содержащей в себе 1 мМ ЭГТА и 10 мМ Трис-HCl (рН 7.5), добавляли 3–10 мкл суспензии СВ, меченных зондом R18 (0.8 мг белка/мл), и 20–60 мкл суспензии СВ, не подвергнутых мечению (2 мг белка/мл), или же 10 мкл суспензии плазматических мембран синап- тосом (3 мг белка/мл). Слияние мембранных струк- тур инициировали путем добавления 10-5 М Са2+. Концентрацию свободного кальция в среде вычис- ляли с учетом присутствия ЭГТА в растворе. Полу- ченные результаты представлены ниже в виде ти- пичных кривых [10]. РЕЗУЛЬТАТЫ Как уже упоминалось, размер частиц в полученной фракции СВ исследовали с применением метода ла- зерно-корреляционной спектроскопии. На рис. 1, А показано распределение СВ по размеру в среде, со- держащей в себе буферный раствор. Следует отме- тить, что выделенная нами фракция СВ не пропу- скалась через фильтр Whatman GF/C. Как видно, диаметр частиц варьировал от 30 до 55 нм, что со- ответствует размеру единичных СВ. Крупные ча- стицы (450–500 нм), очевидно, являлись результа- том взаимодействия СВ в интактных синаптосомах перед их лизированием. Добавление леветирацета- ма к суспензии СВ в буферной среде не изменяло распределения размеров частиц (Б). Как видно из рис. 1, В, при добавлении суспен- зии СВ в среду, содержащую в себе белки цитозоль- ной фракции синаптосом, относительное количе- ство крупных частиц со средним диаметром около 450–500 нм увеличивалось до 12 %. С добавлением в такую систему 2 мг/мл леветирацетама размер ча- стиц диаметром около 500 нм не изменялся, но их количество увеличивалось от 12 до 22 % (Г). Полу- ченные результаты указывают на то, что леветир- ацетам стимулирует кластеризацию СВ только в среде цитозольной фракции синаптосом. На модели слияния гетеротипных мембран было показано, что под воздействием 2 мг/мл леветир- ацетама степень кальцийинициируемого слияния СВ с плазматическими мембранами синаптосом уменьшалась. Как видно из рис. 2, после добавле- ния в среду 10-5 М Са2+ степень слияния мембран в контроле на 4-й мин составляла 28 % (1), а с добав- лением в среду инкубации 2 мг/мл леветирацатема этот уровень снижался до 23 % (2). В ходе исследования влияния преинкубации СВ с леветирацетамом (10 мин при 22 °С) было обнару- жено еще более значительное ингибирование про- цесса инициированного кальцием слияния мембран (рис. 2, 3). Следует отметить, что в системе без кальция слияния мембранных компонентов в усло- виях модели не происходило и добавление леветир- ацетама не изменяло величины сигнала флуорес- ценции (данные не иллюстрированы). Эффекты, вызываемые леветирацетамом, иссле- NEUROPHYSIOLOGY / НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ.—2014.—T. 46, № 2 131 ВЛИЯНИЕ ЛЕВЕТИРАЦЕТАМА НА АГРЕГАЦИЮ кальция в суспензию СВ в среде, содержащей в себе белки цитозольной фракции синаптосом, сте- пень слияния мембран на 4-й мин составляла 26 % (1), а в присутствии 2 мг/мл леветирацетама в том 0 5 10 15 20 25 40 – 50 450 – 500 0 5 10 15 20 25 40 – 50 450 – 500 0 5 10 15 20 25 0 5 10 15 20 25 % % % % Р и с. 1. Распределение размеров частиц в суспензии синаптических везикул. А – в буферном растворе (1 мM ЭГТА; 10 мM Трис-HCl; pH 8.1); Б – в буферном растворе, содержащем в себе 2 мг/мл леветир- ацетама; В – в растворе с добавлением цитозольной фракции синаптосом (1 мг белка); Г – в растворе с добавлением цитозольной фракции синаптосом (1 мг белка) и 2 мг/мл леветирацетама. Показаны нормированные количества частиц различных размеров согласно результатам анализа по алгоритму CONTIN («Malvern Instruments», Великобритания), что позволяет рассчитать средний размер и полидисперсность. Для межгруппового сравнения использовали t-тест Стьюдента (Р < 0.05). Р и с. 1. Розподіл розмірів частинок у суспензії синаптичних везикул. А В нм нм Б Г 1 2 3 0 % 5 10 15 20 25 30 35 0 1 2 3 4 5 Р и с. 2. Уменьшение уровня инициированного кальцием слия- ния синаптических везикул (СВ) с плазматическими мембрана- ми синаптосом под действием леветирацетама. Уровень стимулированного 10-5 М Са2+ слияния СВ (4 мкг белка в пробе) с плазматическими мембранами синаптосом (50 мкг белка) в среде, которая содержала в себе 1 мг белков цитозоль- ной фракции синаптосом. 1 – контроль, 2 – при добавлении 2 мг/мл леветирацетама, 3 – после преинкубации суспензии СВ с 2 мг/мл леветирацетама в течение 10 мин. Р и с. 2. Зменшення рівня ініційованого кальцієм злиття синап- тичних везикул із плазматичними мембранами синаптосом під дією леветирацетаму. довали и на модели кальцийстимулированного сли- яния гомотипных мембран, т. е. слияния СВ друг с другом. На рис. 3 показано, что при добавлении Р и с. 3. Влияние леветирацетама на процесс кальцийстимули- рованного слияния синаптических везикул (СВ) друг с другом. Уровень стимулированного 10-5 М Са2+ слияния меченных зон- дом R18 СВ (4 мкг белка в пробе) с немечеными СВ (30 мкг белка) в среде, которая содержала в себе 1 мг белков цитозоль- ной фракции синаптосом. 1 – контроль, 2 – при добавлении 2 мг/мл леветирацетама, 3 – после преинкубации суспензии СВ с 2 мг/мл леветирацетама в течение 10 мин. Р и с. 3. Вплив леветирацетаму на процес кальційстимульова- ного злиття синаптичних везикул одна з одною. мин мин 1 2 3 0 5 10 15 20 25 30 35 0 % 1 2 3 4 5 NEUROPHYSIOLOGY / НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ.—2014.—T. 46, № 2132 В. П. ГУМЕНЮК, И. О. ТРИКАШ же временнóм интервале была заметно меньше – 21 % (2). После преинкубации СВ с леветирацета- мом в течение 10 мин степень слияния мембран на 4-й мин составляла 18 % (3). Таким образом, пре- инкубация СВ с леветирацетамом в моделях стиму- лированного кальцием слияния и гетеротипных, и гомотипных мембран выявляла заметный ингиби- рующий эффект препарата. Следует отметить, что процесс агрегации вези- кул в наших условиях базируется на тесном контак- те мембран, не сопровождаемом слиянием бислоев и рассматриваемом как модель отдельного этапа эк- зоцитоза – докинга [5]. Было показано наличие кор- реляции между антиэпилептическими свойствами леветирацетама и его аффинностью к белку SV2A [11]. Из рис. 1 видно, что леветирацетам повыша- ет агрегацию СВ в бесклеточной системе. Поэто- му можно полагать, что белок SV2A задействован на этапе докинга СВ; возможно, указанный белок является негативным регулятором процесса агрега- ции СВ в нервных окончаниях. Согласно данным Баялех и соавт., белок SV2A модулирует размер легковысвобождаемого пула СВ на этапе их прайминга; последний следует за про- цессом докинга и характеризуется состоянием го- товности СВ к кальцийстимулированному слиянию [11]. Сюдхоф и соавт. показали, что белок SV2A действует в пределах ранее не идентифицирован- ного этапа экзоцитоза, связывающего прайминг СВ с кальцийиндуцируемым слиянием; предполага- лось, что белок SV2A повышает чувствительность к кальцию везикул, уже готовых к слиянию [12]. Действие белка SV2A было обнаружено на раз- ных этапах экзоцитоза – докинга (наши данные), прайминга [9] и в интервале после прайминга [12]. Несмотря на то что мнения авторов совпадают не в полной мере, общей является точка зрения, со- гласно которой регуляция экзоцитоза белком SV2A происходит ранее этапа стимулированного слияния мембран. Как видно из рис. 1, В и Г, реализация влияния леветирацетама на формирование кластеров СВ в существенной степени зависит от белков цитозоль- ной фракции синаптосом. Известно, что тримерный белковый комплекс цитозоля, состоящий из протеи- нов Munc13, Rab3 и RIM, способствует взаимодей- ствию СВ с пресинаптическими мембранами и вме- сте с синтаксином 1 формирует «докинг-машину» [13]. Механизм кластеризации СВ под влиянием леветирацетама пока остается неясным, поскольку непосредственно анализировать взаимодействие белка SV2A с факторами докинга в цитозоле синап- тосом не представляется возможным. Известно, что в условиях связывания белка SV2А с белком СВ синаптотагмином слияния мембран не происходит. При стимуляции кальцием послед- ний связывается с синаптотагмином, связь между упомянутыми белками нарушается, и формируется комплекс белков SNARE, который опосредует сли- яние липидных бислоев мембран [14]. Отсутствие SV2A-белка в возбуждающих и тор- мозных нейронах, а также в культуре хромаффин- ных клеток обусловливает снижение интенсивности стимулированной нейросекреции [15]. И наоборот, избыточная экспрессия белка SV2A вызывает нару- шения в передаче нервных импульсов; этот процесс восстанавливается после обработки леветирацета- мом [14]. Согласно кривым 1 на рис. 2 и 3, уровень кальцийзависимого слияния мембран в отсутствие леветирацетама в среде характеризуется наиболь- шим значением; соответственно, можно предполо- жить, что в данном случае белок SV2А выступает в качестве положительного модулятора изучаемо- го этапа экзоцитоза. В присутствии леветирацетама интенсивность кальцийинициированного слияния СВ как с плазматическими мембранами, так и друг с другом уменьшается (рис. 2, 2; 3, 2). Время инку- бации СВ с леветирацетамом оказывает влияние на этот процесс; при увеличении экспозиции степень ингибирования слияния мембран возрастает (рис. 2, 3; 3, 3). Этосуксимид и вальпроат натрия, как и боль- шинство других антиэпилептических препаратов, воздействуют на функционирование кальциевых и натриевых каналов, а также ГАМК-эргической си- стемы. Ранее мы показали, что этосуксимид и валь- проат натрия усиливают процесс кальцийстимули- рованного слияния мембран [6, 7]. Ингибирующий эффект леветирацетама, обнаруженный в такой же бесклеточной модели слияния мембран, скорее всего, обусловлен уникальным свойством данного агента взаимодействовать с интегральным белком синаптических везикул SV2A. Таким образом, при использовании леветираце- тама в качестве инструмента для изучения функции белка SV2A были получены новые данные относи- тельно возможного участия этого белка в регуляции процесса экзоцитоза на этапах кластеризации СВ и их кальцийстимулированного слияния с мембрана- ми-мишенями. NEUROPHYSIOLOGY / НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ.—2014.—T. 46, № 2 133 ВЛИЯНИЕ ЛЕВЕТИРАЦЕТАМА НА АГРЕГАЦИЮ Исследования проводили в соответствии с положениями Международной конвенции по защите животных, которые используются в эксперементальных и других научных це- лях (Страсбург, 1985), а также с положениями Комитета по биоэтике Института биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины. Авторы данной роботы – В. П. Гуменюк и И. О. Трикаш – подтверждают, что у них отсутствует конфликт интересов В. П. Гуменюк1, І. О. Трикаш1 ВПЛИВ ЛЕВЕТИРАЦЕТАМУ НА АГРЕГАЦІЮ ТА ЗЛИТ- ТЯ МЕМБРАН СИНАПТИЧНИХ ВЕЗИКУЛ У БЕЗКЛІ- ТИННІЙ МОДЕЛІ ЕКЗОЦИТОЗУ 1Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, Київ (Україна). Р е з ю м е Вивчали вплив антиепілептичного препарату леветираце- таму на процеси агрегації синаптичних везикул (СВ) та їх кальційіндукованого злиття з мембранами-мішенями в без- клітинній моделі нейросекреції. Розмір СВ та їх агрегатів у суспензії вимірювали за допомогою лазерно-кореляційної спектроскопії. Злиття мембранних структур кількісно визна- чали за зміною величини самогасіння флуоресценції зон- да октадецил родамін Б хлориду (R18). Дія леветирацета- му призводила до збільшення кластеризації СВ і зменшення рівня стимульованого кальцієм як злиття таких везикул із плазматичними мембранами, так і їх взаємного злиття. Та- ким чином, отримані нові дані про вплив леветирацетаму на регуляцію процесу екзоцитозу на етапах кластеризації СВ та їх кальційстимульованого злиття з мембранами-мі- шенями. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. T. Sollner, S. W. Whiteheart, M. Brunner, et al., “SNAP receptors implicated in vesicle targeting and fusion,” Nature, 362, No. 6418, 318-324 (1993). 2. I. Dulubova, M. Khvotchev, S. Liu, et al., “Munc18-1 binds directly to the neuronal SNARE complex,” Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 104, 2697-2702 (2007). 3. І. О. Трикаш, В. П. Гуменюк, В. І. Чернишов, “Злиття ізольованих синаптичних везикул як модель останнього етапу регульованого екзоцитозу”, Нейрофизиология/ Neurophysiology, 36, № 4, 272-281 (2004). 4. I. O. Trikash and L. I. Kolchinskaya, “Fusion of synaptic vesicles and plasma membrane in the presence of synaptosomal soluble proteins,” Neurochem. Int., 49, No. 3, 270-275 (2006). 5. I. O. Trikash, G. P. Volynets, O. V. Remenyak, et al., “Docking and fusion of synaptic vesicles in cell-free model system of exocytosis,” Neurochem. Int., 53, Nos. 6/8, 401-407 (2008). 6. В. П. Гуменюк, Г. П. Волинець, Т. М. Кучмеровська та ін . , “Вплив антиепілептичних препаратів на процес гомотипного злиття синаптичних везикул”, Нейрофизиология/Neurophysiology, 41, № 6, 467-475 (2009). 7. I. O. Трикаш, В. П. Гуменюк, Л. О. Громов та ін., “Модулювальний ефект протисудомних препаратів на Са2+-залежне злиття мембран”, Укр. биохим. журн., 75, № 6, 81-86 (2003). 8. T. De Smedt, R. Raedt, K. Vonck, et al., “Levetiracetam: the profile of a novel anticonvulsant drug-part I: preclinical data,” CNS Drug Rev., 13, No. 1, 43-56 (2007). 9. A. Nowack, J. Yao, K. L. Custer, et al., “SV2 regulates neurotransmitter release via multiple mechanisms,” Am. J. Physiol. Cell Physiol., 299, No. 5, 960-967 (2010). 10. I. Trikash, V. Gumenyuk, and V. Lishko, “The fusion of synaptic vesicle membranes studied by lipid mixing: the R18 fluorescence assay validity,” Chem. Phys. Lipids, 163, No. 8, 778-786 (2010). 11. B. A. Lynch, N. Lambeng, K. Nocka, et al., “The synaptic vesicle protein SV2A is the binding site for the anti- epileptic drug levetiracetam,” Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101, No. 26, 9861-9866 (2004). 12. W. P. Chang and T. C. Südhof, “SV2 renders primed synaptic vesicles competent for Ca2+-induced exocytosis,” J. Neurosci., 29, No. 4, 883-897 (2009). 13. H. De Wit, L. N. Cornelisse, R. F. Toonen, et al., “Docking of secretory vesicles is syntaxin dependent,” PLoS one, 1, e126 (2006). 14. A. Nowack, E. B. Malarkey, J. Yao, et al., “Levetiracetam reverses synaptic deficits produced by overexpression of SV2A,” PLoS one, 6, No. 12, e29560 (2011). 15. R. M. Kaminski, M. Gillard, and K. Leclercq, “Proepileptic phenotype of SV2A-deficient mice is associated with reduced anticonvulsant efficacy of levetiracetam,” Epilepsia, 50, No. 7, 1729-1740 (2009).
id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-148263
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
issn	0028-2561
language	Russian
last_indexed	2025-12-07T17:02:48Z
publishDate	2014
publisher	Інститут фізіології ім. О.О. Богомольця НАН України
record_format	dspace
spelling	Гуменюк, В.П. Трикаш, И.О. 2019-02-17T19:24:21Z 2019-02-17T19:24:21Z 2014 Влияние леветирацетама на агрегацию и слияние мембран синаптических везикул в бесклеточной модели экзоцитоза / В.П. Гуменюк, И.О. Трикаш // Нейрофизиология. — 2014. — Т. 46, № 2. — С. 129-133. — Бібліогр.: 15 назв. — рос. 0028-2561 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/148263 577.352:615.213 Изучали влияние антиэпилептического препарата леветирацетама на процессы агрегации синаптических везикул (СВ) и их кальцийиндуцированного слияния с мембранами-мишенями в бесклеточной модели нейросекреции. Размер СВ и их агрегатов в суспензии измеряли с применением лазерно-корреляционной спектроскопии. Слияние мембранных структур количественно определяли по изменению величины самогашения флуоресценции зонда октадецил-родамин Б хлорида (R18). Воздействие леветирацетама приводило к увеличению кластеризации СВ и уменьшению уровня стимулированного кальцием слияния таких везикул как с плазматическими мембранами, так и друг с другом. Таким образом, получены новые данные о влиянии леветирацетама на регуляцию процесса экзоцитоза на этапах кластеризации СВ и их кальцийстимулированного слияния с мембранами-мишенями. Вивчали вплив антиепілептичного препарату леветирацетаму на процеси агрегації синаптичних везикул (СВ) та їх кальційіндукованого злиття з мембранами-мішенями в безклітинній моделі нейросекреції. Розмір СВ та їх агрегатів у суспензії вимірювали за допомогою лазерно-кореляційної спектроскопії. Злиття мембранних структур кількісно визначали за зміною величини самогасіння флуоресценції зонда октадецил родамін Б хлориду (R18). Дія леветирацетаму призводила до збільшення кластеризації СВ і зменшення рівня стимульованого кальцієм як злиття таких везикул із плазматичними мембранами, так і їх взаємного злиття. Таким чином, отримані нові дані про вплив леветирацетаму на регуляцію процесу екзоцитозу на етапах кластеризації СВ та їх кальційстимульованого злиття з мембранами-мішенями. ru Інститут фізіології ім. О.О. Богомольця НАН України Нейрофизиология Влияние леветирацетама на агрегацию и слияние мембран синаптических везикул в бесклеточной модели экзоцитоза Вплив леветирацетаму на агрегацію та злиття мембран синаптичних везикул у безклітинній моделі екзоцитозу Article published earlier
spellingShingle	Влияние леветирацетама на агрегацию и слияние мембран синаптических везикул в бесклеточной модели экзоцитоза Гуменюк, В.П. Трикаш, И.О.
title	Влияние леветирацетама на агрегацию и слияние мембран синаптических везикул в бесклеточной модели экзоцитоза
title_alt	Вплив леветирацетаму на агрегацію та злиття мембран синаптичних везикул у безклітинній моделі екзоцитозу
title_full	Влияние леветирацетама на агрегацию и слияние мембран синаптических везикул в бесклеточной модели экзоцитоза
title_fullStr	Влияние леветирацетама на агрегацию и слияние мембран синаптических везикул в бесклеточной модели экзоцитоза
title_full_unstemmed	Влияние леветирацетама на агрегацию и слияние мембран синаптических везикул в бесклеточной модели экзоцитоза
title_short	Влияние леветирацетама на агрегацию и слияние мембран синаптических везикул в бесклеточной модели экзоцитоза
title_sort	влияние леветирацетама на агрегацию и слияние мембран синаптических везикул в бесклеточной модели экзоцитоза
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/148263
work_keys_str_mv	AT gumenûkvp vliânielevetiracetamanaagregaciûisliâniemembransinaptičeskihvezikulvbeskletočnoimodeliékzocitoza AT trikašio vliânielevetiracetamanaagregaciûisliâniemembransinaptičeskihvezikulvbeskletočnoimodeliékzocitoza AT gumenûkvp vplivlevetiracetamunaagregacíûtazlittâmembransinaptičnihvezikulubezklítinníimodelíekzocitozu AT trikašio vplivlevetiracetamunaagregacíûtazlittâmembransinaptičnihvezikulubezklítinníimodelíekzocitozu

Влияние леветирацетама на агрегацию и слияние мембран синаптических везикул в бесклеточной модели экзоцитоза

Репозитарії

Схожі ресурси