Обнаружение ковалентно связаного с ДНК клетки генома бакуловируса у большой вощинной моли пражской линии
Обнаружены нуклеотидные последовательности генома вируса ядерного полиэдроза в клеточной ДНК большой вощинной моли пражской линии. Оценено количество геномов вируса (или его частей) на клетку хозяина методом кинетики реассоциации. Методом сети в сочетании с методом кинетики реассоциации показано нал...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Дата: | 1985 |
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1985
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152249 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Обнаружение ковалентно связаного с ДНК клетки генома бакуловируса у большой вощинной моли пражской линии / Н.Ю. Мирюта, Л.И. Строковская, И.П. Кок, И.Н. Скуратовская // Биополимеры и клетка. — 1985. — Т. 1, № 2. — С. 106-108. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-152249 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Мирюта, Н.Ю. Строковская, Л.И. Кок, И.П. Скуратовская, И.Н. 2019-06-09T10:11:54Z 2019-06-09T10:11:54Z 1985 Обнаружение ковалентно связаного с ДНК клетки генома бакуловируса у большой вощинной моли пражской линии / Н.Ю. Мирюта, Л.И. Строковская, И.П. Кок, И.Н. Скуратовская // Биополимеры и клетка. — 1985. — Т. 1, № 2. — С. 106-108. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.00001B https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152249 578.841:577.113:578.23 Обнаружены нуклеотидные последовательности генома вируса ядерного полиэдроза в клеточной ДНК большой вощинной моли пражской линии. Оценено количество геномов вируса (или его частей) на клетку хозяина методом кинетики реассоциации. Методом сети в сочетании с методом кинетики реассоциации показано наличие ковалентной связи вирусных нуклеотидных последовательностей с геномом клетки большой вощинной моли пражской линии. Виявлено нуклеотидні послідовності геному вірусу ядерного поліедрозу в клітинній ДНК великої вощинної молі празької лінії. Оцінено кількість геномів вірусу (або його частин) на клітину господаря методом кінетики реасоціації. Методом мережі у поєднанні з методом кінетики реасоціації показано наявність ковалентного зв’язку вірусних нуклеотидних послідовностей з геномом клітини великої вощинної молі празької лінії. NPV nucleotide sequences were revealed in the cell DNA of Prague stock Galleria mellonella. The viral genome copy number per host cell was quantified by kinetic reassociation method. Using the network technique and kinetic reassociation in presence of tested DNA it was shown that the viral DNA was covalently bound with the Prague stock genome. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Краткие сообщения Обнаружение ковалентно связаного с ДНК клетки генома бакуловируса у большой вощинной моли пражской линии Виявлення ковалентно зв’язаного з ДНК клітини геному бакуловірусу у великої вощинної молі празької лінії Finding of baculovirus genome covalent-bound with the cell DNA in prague stock Galleria mellonella Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Обнаружение ковалентно связаного с ДНК клетки генома бакуловируса у большой вощинной моли пражской линии |
| spellingShingle |
Обнаружение ковалентно связаного с ДНК клетки генома бакуловируса у большой вощинной моли пражской линии Мирюта, Н.Ю. Строковская, Л.И. Кок, И.П. Скуратовская, И.Н. Краткие сообщения |
| title_short |
Обнаружение ковалентно связаного с ДНК клетки генома бакуловируса у большой вощинной моли пражской линии |
| title_full |
Обнаружение ковалентно связаного с ДНК клетки генома бакуловируса у большой вощинной моли пражской линии |
| title_fullStr |
Обнаружение ковалентно связаного с ДНК клетки генома бакуловируса у большой вощинной моли пражской линии |
| title_full_unstemmed |
Обнаружение ковалентно связаного с ДНК клетки генома бакуловируса у большой вощинной моли пражской линии |
| title_sort |
обнаружение ковалентно связаного с днк клетки генома бакуловируса у большой вощинной моли пражской линии |
| author |
Мирюта, Н.Ю. Строковская, Л.И. Кок, И.П. Скуратовская, И.Н. |
| author_facet |
Мирюта, Н.Ю. Строковская, Л.И. Кок, И.П. Скуратовская, И.Н. |
| topic |
Краткие сообщения |
| topic_facet |
Краткие сообщения |
| publishDate |
1985 |
| language |
Russian |
| container_title |
Биополимеры и клетка |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Виявлення ковалентно зв’язаного з ДНК клітини геному бакуловірусу у великої вощинної молі празької лінії Finding of baculovirus genome covalent-bound with the cell DNA in prague stock Galleria mellonella |
| description |
Обнаружены нуклеотидные последовательности генома вируса ядерного полиэдроза в клеточной ДНК большой вощинной моли пражской линии. Оценено количество геномов вируса (или его частей) на клетку хозяина методом кинетики реассоциации. Методом сети в сочетании с методом кинетики реассоциации показано наличие ковалентной связи вирусных нуклеотидных последовательностей с геномом клетки большой вощинной моли пражской линии.
Виявлено нуклеотидні послідовності геному вірусу ядерного поліедрозу в клітинній ДНК великої вощинної молі празької лінії. Оцінено кількість геномів вірусу (або його частин) на клітину господаря методом кінетики реасоціації. Методом мережі у поєднанні з методом кінетики реасоціації показано наявність ковалентного зв’язку вірусних нуклеотидних послідовностей з геномом клітини великої вощинної молі празької лінії.
NPV nucleotide sequences were revealed in the cell DNA of Prague stock Galleria mellonella. The viral genome copy number per host cell was quantified by kinetic reassociation method. Using the network technique and kinetic reassociation in presence of tested DNA it was shown that the viral DNA was covalently bound with the Prague stock genome.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152249 |
| citation_txt |
Обнаружение ковалентно связаного с ДНК клетки генома бакуловируса у большой вощинной моли пражской линии / Н.Ю. Мирюта, Л.И. Строковская, И.П. Кок, И.Н. Скуратовская // Биополимеры и клетка. — 1985. — Т. 1, № 2. — С. 106-108. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT mirûtanû obnaruženiekovalentnosvâzanogosdnkkletkigenomabakulovirusaubolʹšoivoŝinnoimolipražskoilinii AT strokovskaâli obnaruženiekovalentnosvâzanogosdnkkletkigenomabakulovirusaubolʹšoivoŝinnoimolipražskoilinii AT kokip obnaruženiekovalentnosvâzanogosdnkkletkigenomabakulovirusaubolʹšoivoŝinnoimolipražskoilinii AT skuratovskaâin obnaruženiekovalentnosvâzanogosdnkkletkigenomabakulovirusaubolʹšoivoŝinnoimolipražskoilinii AT mirûtanû viâvlennâkovalentnozvâzanogozdnkklítinigenomubakulovírusuuvelikoívoŝinnoímolíprazʹkoílíníí AT strokovskaâli viâvlennâkovalentnozvâzanogozdnkklítinigenomubakulovírusuuvelikoívoŝinnoímolíprazʹkoílíníí AT kokip viâvlennâkovalentnozvâzanogozdnkklítinigenomubakulovírusuuvelikoívoŝinnoímolíprazʹkoílíníí AT skuratovskaâin viâvlennâkovalentnozvâzanogozdnkklítinigenomubakulovírusuuvelikoívoŝinnoímolíprazʹkoílíníí AT mirûtanû findingofbaculovirusgenomecovalentboundwiththecelldnainpraguestockgalleriamellonella AT strokovskaâli findingofbaculovirusgenomecovalentboundwiththecelldnainpraguestockgalleriamellonella AT kokip findingofbaculovirusgenomecovalentboundwiththecelldnainpraguestockgalleriamellonella AT skuratovskaâin findingofbaculovirusgenomecovalentboundwiththecelldnainpraguestockgalleriamellonella |
| first_indexed |
2025-11-25T22:11:20Z |
| last_indexed |
2025-11-25T22:11:20Z |
| _version_ |
1850560789190017024 |
| fulltext |
Краткие
сообщения
УДК 578.841:577.113:578.23
ОБНАРУЖЕНИЕ КОВАЛЕНТНО СВЯЗАННОГО С ДНК
КЛЕТКИ ГЕНОМА БАКУЛОВИРУСА
У БОЛЬШОЙ ВОЩИННОЙ МОЛИ ПРАЖСКОЙ ЛИНИИ
Н. Ю. Мирюта, Л. И. Строковская, И. П. Кок, И. Н. Скуратовская
Вирусоноситсльство широко распространено у чешуекрылых насекомых и имеет боль-
шое практическое значение. Латентный вирус ядерного полиэдроза (ВЯП) легко ак-
тивируется у насекомых некоторых видов и их изолятов под влиянием различных,
не всегда изученных факторов, что ведет к развитию продуктивной инфекции и ука-
зывает на полноценность вирусного генома. В клетках одного из таких насекомых —
тутового шелкопряда — методами молекулярной биологии впервые показана интегра-
ция генома вируса и клетки [1]. Но существуют изоляты насекомых, у которых не
наблюдается спонтанный ядерный полиэдроз: можно предположить, что у них пег
латентного вируса. К ним относится, например, большая вощинная моль (БВМ)
пражской линии. Однако при заражении таких насекомых чужеродным ВЯП через
несколько пассажей появляются вирусные тела включения — полиэдры, по кубичес-
кой форме характерные для ВЯП БВМ [2]. Одной из причин этого явления может
быть присутствие в геноме клетки иуклеотидных последовательностей ВЯП БВМ.
Для проверки такой возможности мы применили молекулярно-биологичсскис методы,
разработанные в 70-х годах для изучения состояния генома вируса в клетках поз-
воночных [3, 4].
В работе использовали личинок БВМ пражской линии, штамм М-1 ВЯП БВМ,
описанный ранее [1], и ВЯП кольчатого шелкопряда (КШ), наработанный на куль-
туре клеток.
Супсрсниральную вирусную Д Н К получали центрифугированием лизата вируса
ν, градиенте плотности хлористого цезия с этидия бромидом [5]. 3 2 Р-ДНК ВЯП с
удельной активностью 107—108 имп/мии/мкг получали методом ник-трапеляции [6].
Высокоиолимсрную клеточную Д Н К выделяли из ядер клеток здоровых личинок
БВМ и из молочной железы коровы (МЖК) фенолыю-детергентпым методом. Д Н К
тимуса теленка — коммерческая, отечественного производства. Дробление и денатура-
цию, кинетику реассоциации и определение числа копий вирусных геномов (величину
этих геномов можно округлить до 108), приходящихся на клеточный геном, проводи-
ли, как в работе [3]. Сеть ДНК, образующуюся при ренатурации повторяющихся пос-
ледовательностей клеточной ДНК, с которыми ковалентно связаны вирусные нуклео-
тидные последовательности, получали по Вармусу [4]. Полученные фракции иссле-
довали на содержание вирусных иуклеотидных последовательностей методом кинети-
ки реассоциации.
Анализ кривых кинетики реассоциации 3 2Р-ДНК ВЯП БВМ в присутствии испы-
тываемой клеточной Д Н К БВМ выявил отклонения этих кривых от кинетики второго
порядка. Результаты опытов, проведенных с целью выявления причин этих отклоне-
ний и определения оптимальных соотношений вирусной и клеточной ДНК, показали,
что наименьшие отклонения соответствуют соотношениям концентраций немеченой
вирусной (присутствующей в препаратах клеточной ДНК) к меченой вирусной ДНК,
лежащим в области 2-МО. Обнаруживаемые при этом доли вирусного генома в кле-
точной Д Н К составляют 0 ,5-0 ,8 . Подобранные соотношения позволили получить
наименьшие значения поправки для определения числа копий вирусной ДНК, прихо-
дящейся на геном клетки хозяина.
106 Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА, 1985, т. I, № 2
Приведенные в качестве примера на рис. 1 результаты говорят об ускорении
реассоциации 3 2 Р-ДНК ВЯП БВМ в присутствии клеточной Д Н К БВМ, которое сви-
детельствует о наличии вирусных нуклеотидных последовательностей в препаратах
клеточной ДНК. Это позволяет определить число копий вирусной ДНК, приходящей-
ся на геном БВМ пражской линии, которое в данном случае равно трем. Подсчет
среднего значения числа геномов вируса на клетку методом, применяемым для обра-
ботки косвенных измерений, показал, что на диплоидный геном БВМ (размер ге-
нома у чешуекрылых насекомых составляет примерно 6-Ю11) приходится 2 ,0±0,6 ви-
русных геномов, причем полученные значения принадлежат к данной совокупности
с надежностью α = 0,9.
О наличии ковалентной связи вирусной и клеточной Д Н К судят по распределе-
нию вирусной Д Н К во фракциях сети и надосадка [4], принимая во внимание вели-
Рис. 1. Выявление вирусной Д Н К в препаратах клеточной Д Н К БВМ: 1 — кинетика
реассоциации 3 2 Р-ДНК ВЯП БВМ (0,02 мкг/мл) в присутствии тимусной Д Н К
(180 мкг/мл); 2 — тимусной Д Н К в таком же количестве + Д Н К ВЯП БВМ
(0,25 мкг/мл); 3 — клеточной Д Н К БВМ пражской линии (180 мкг/мл); / ^ — фрак-
ция 3 2Р-ДНК, которая остается односпиральной при t (времени отжига).
Fig. 1. Revealing of viral DNA in cell DNA of Galleria mellonella: kinetics of reasso-
ciation of 32P-labelled NPV DNA (0.02 ^ig/ml) in presence of thymus DNA (180 μίξ/ml)
(1)\ thvmus DNA (the same concentration) and NPV of G. mellonella DNA
(0.25 ,ug/ml) (2); cell G. mellonella DNA (180 μg /ml ) (3); f88 — the fraction of
32P-labelled DNA that is single-stranded at t (time of anneal ing) .
Рис. 2. Анализ содержания вирусных нуклеотидных последовательностей во фракци-
ях сети и надосадка клеточной Д Н К БВМ пражской линии: 1—кинетика реассоциа-
ции 3 2 Р-ДНК ВЯП БВМ (0,02 мкг/мл) в присутствии тимусной Д Н К (180 мкг/мл);
2 — препарата Д Н К БВМ (180 мкг/мл); 3 — фракции сети'этой Д Н К (147 мкг/мл);
4 — фракция надосадка этой Д Н К (61 мкг/мл).
Fig. 2. Analysis of viral nucleotide sequence content in network and supernatant
fractions of Prague stock G. mellonella DNA: kinetics of reassociation of 32P-labelled
NPV DNA (0.02 μg /ml ) in presence of thymus DNA (180 μ g / m l ) (1); cell G. mel-
lonella DNA (180 μg /ml ) (2); network fraction of cell G. mellonella DNA (147
μg /ml ) (3)\ supernatant fraction of cell G. mellonella DNA (61 μ^ /π ι ΐ ) (4).
чипу иеспецифического связывания [7]. Определяя эту величину, получали сеть по-
дробленной клеточной Д Н К БВМ с добавлением 5 копий Д Н К ВЯП КШ на геном
клетки насекомого и сеть Д Н К М Ж К с добавлением 20 копий Д Н К ВЯП БВМ на
геном клетки млекопитающих. Сравнение количеств вирусной Д Н К во фракциях се-
ти и надосадка, определяемых методом кинетики реассоциации при величине сетеоб-
разования 84—87 %, показало, что неспецифическое связывание Д Н К вируса сетью
составляет 23—24 %. Это значение близко к неспецифическому связыванию Д Н К ви-
руса герпеса [7], размер генома которого близок к величине бакуловирусной Д Н К .
Приведенные на рис. 2 результаты одного из опытов по анализу на содержание ви-
русных нуклеотидных последовательностей во фракциях сети и надосадка Д Н К БВМ
пражской линии методом кинетики реассоциации показали наличие вирусных нуклео-
тидных последовательностей в обеих фракциях; расчет, произведенный по этим дан-
ным, показал, что при величине сетеобразования 86—87 % во фракции сети обнару-
жено 6 0 % (а в среднем по трем опытам 5 0 ± 1 0 % ) вирусной ДНК. Это значение
выше величины иеспецифического связывания и говорит о наличии ковалентной связи
вирусной Д Н К и Д Н К БВМ пражской линии.
Резюмируя результаты проведенных опытов, можно сделать следующие выводы.
В здоровых личинках БВМ пражской линии присутствует вирусная Д Н К в количест-
ве 2 ,0±0,6 генома ВЯП на диплоидный геном клетки. Большая часть присутствующих
107 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, т. I, № 2
ι; клетках вирусных иуклеотидных последовательностей обнаруживается в ковалентно
связанном состоянии. В дальнейших исследованиях мы хотим выяснить локализацию
вирусных иуклеотидных последовательностей в геноме клеток, а также решить вопрос
о том, непрерывна ли последовательность вирусной Д Н К или ее отдельные участки
включены в клеточный геном разобщенно.
F INDING OF BACULOVIRUS G E N O M E COVALENT-BOUND WITH
THE CELL DNA IN PRAGUE STOCK GALLERIA MELLONELLA
N. Yu. Miryuta. L. I. Sirokovskaya, I. P. Kok, I. N. Skuratovskaya
Inst i tu te of Molecular Biology and Genetics,
Academy of Sciences of the Ukrainian SSR, Kiev
S u m m a r y
N P V nucleotide sequences were revealed in the cell DNA of P r a g u e stock Galleria mel-
lonetta. The viral genome copy number per host cell w a s quantif ied by kinetic reasso-
ciation method. Using the network technique and kinetic reassociat ion in presence oi
tested DNA it was shown that the viral DNA was covalent lv bound with the P r a g u e
stock genome.
1. Обнаружение интеграции бакуловирусиого и клеточного геномов ( Д Н К ) при ла-
тентной инфекции / И. П. Кок, И. Н. Скуратовская, Л. И. Строковская и др.— Мо-
лекуляр. биология, 1983, вып. 34, с. 67—69.
2. Примаченко Л. В. Про адаптацію вірусу ядерного поліедрозу шовковичного шов-
копряду до великої вощинної молі.—Мікробіол. жури., 1970, 32, № 4 , с. 487—490.
3. Gelb L. D., Kohne D. Ε., Martin Μ. Α. Quant i ta t ion of simian virus 40 sequences
in Afr ican green monkey, mouse and virus t ransformed cell genomes.— J. Мої. Bi-
ol., 1971, 57, N 1, p. 129—145.
4. Vannus H., Vogt P. КBishop / . Λί. In tegra t ion of deoxyribonucleic acid specific
for Rous sarcoma virus af ter infection for permissive and nonpermissive hosts.—
Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1973, 70, N 11, p. 3067—3071.
5. Supercoiled DNA of nuclear polyhedrosis virus of Galleria mellonella L./ I. N. Sku-
ra tovskaya, L. I. St rokovskaya, E. N. Zherebtsova, A. P. Gudz—Gorban.— Arch. Vi-
rol., 1977, 53, N 1, p. 79—86.
6. Labelling DNA to high specific in vitro bv nick t rans la t ion with DNA polymerase
I . / P . W. J. Rigby, M. Dickman, C. Rhode," P. B e r g . — J . Мої. Biol., 1977, 113, Ν I,
p. 237—251.
7. Padgett R. Α., Moore D. E., Kingsbury D. T. Herpes virus nucleic acid synthesis
fo l lowing infection of nonpermissive XC cells.— J. Gen. Virol., 1978, 40, N 3,
p. 605—614.
ИH-т молекулярной биологии и генетики Получено 28.08.84
АН УССР, Киев
108 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, т. I, № 2
|