Гистон Н1 и транскрипционно активные участки хроматина
При помощи метода ограниченного гидролиза ядер селезенки мыши ДНКазой 1 и последующего анализа высвобождаемых при этом белков изучен вопрос содержания гистона Н1 в транскрипционно активных участках хроматина. Полученные данные указывают на большое значение высоких уровней упаковки хроматина в ядре д...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Дата: | 1985 |
| Автор: | |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1985
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152255 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Гистон Н1 и транскрипционно активные участки хроматина / А.А. Караванов // Биополимеры и клетка. — 1985. — Т. 1, № 3. — С. 141-146. — Бібліогр.: 27 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859474398871814144 |
|---|---|
| author | Караванов, А.А. |
| author_facet | Караванов, А.А. |
| citation_txt | Гистон Н1 и транскрипционно активные участки хроматина / А.А. Караванов // Биополимеры и клетка. — 1985. — Т. 1, № 3. — С. 141-146. — Бібліогр.: 27 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Биополимеры и клетка |
| description | При помощи метода ограниченного гидролиза ядер селезенки мыши ДНКазой 1 и последующего анализа высвобождаемых при этом белков изучен вопрос содержания гистона Н1 в транскрипционно активных участках хроматина. Полученные данные указывают на большое значение высоких уровней упаковки хроматина в ядре для организации транскрипционно активных участков. Результаты также указывают на то, что гистон Н1 не входит в состав транскрипционно активных участков (или присутствует в них в крайне незначительных количествах). Однако изменение экстрагируемости гистонов из ядер после избирательного удаления из них гистона Н1 указывает на его возможное участие в поддержании стабильности взаимодействия сердцевинных гистонов с петлями транскрипционно активного хроматина на уровне высоких порядков его упаковки в ядре.
Методом обмеженого гідролізу ядер селезінки миші ДНКазою І і подальшим аналізом білків, які при цьому вивільняються, вивчено питання вмісту гістона Н1 в транскрипційно активних ділянках хроматину. Отримані дані вказують на велике значення високих рівнів упаковки хроматину в ядрі для організації транскрипційно активних ділянок. Результати також вказують на те, що гістон Н1 не входить до складу транскрипційно активних ділянок (чи присутній в них у вкрай незначних кількостях). Однак зміна екстрагованості гістонів з ядер після вибіркового видалення з них гістона Н1 вказує на його можливу участь у підтримці стабільності взаємодії серцевинних гістонів з петлями транскрипційно активного хроматину на рівні високих порядків його упаковки в ядрі.
The method of limited digestion of mouse spleen nuclei with DNAse I combined with electrophoretic analysis of proteins released from nuclei is used to investigate the participation of HI histone in the organization of transcriptionally active chromatin regions. The data obtained show that transcriptionally active chromatin regions digested under applied conditions do not contain at all or contain insignificant amounts of HI histone. Surprisingly, 0.35 M NaCl extraction of nuclei following selective extraction of HI histone at pH 3.0 is also found to result in the release of nucleosomal core histones possibly enriched in hyperacetylated species. It is proposed that while HI histone is not involved in the organization of transcriptionally active regions at the level of primary nucleosome fibre it may play an essential role in their organization at higher levels of chromatin packaging in nuclei participating in the stabilization of interactions between modified species of histones and DNA.
|
| first_indexed | 2025-11-24T11:06:56Z |
| format | Article |
| fulltext |
УДК 547.^63.3
ГИСТОН H1 И ТРАНСКРИПЦИОННО АКТИВНЫЕ
УЧАСТКИ ХРОМАТИНА
А. А. Караванов
Введение. Вопрос о роли гистона НІ в организации хроматина в ядрах
является одним из наиболее интересных и обсуждаемых вопросов в об-
ширной литературе по хроматину. Важной и одновременно наиболее
спорной стороной этого вопроса является проблема взаимоотношений
этого гистона и транскрипционно активного хроматина. В ряде работ
на основании нескольких косвенных критериев утверждалось, что гис-
тон HI присутствует в транскрипционно активных участках хроматина
в модифицированной форме. Уже в ранних исследованиях, сопоставляв-
ших количественные и качественные особенности гистона HI и его суб-
фракций в различных тканях и на разных стадиях клеточного цикла,
были получены данные, позволяющие предположить, что гистон HI мо-
жет играть не только пассивную роль в организации компактных струк-
тур хроматина, но и более специфическую, непосредственно относящую-
ся к процессам активации и репрессии [1]. Анализ этой проблемы про-
должается и в настоящее время [2—4].
С другой стороны, при изучении транскрипции хроматина in vitro,
начиная с самого раннего периода и по настоящее время, стало очевид-
ным, что HI ограничивает транскрипцию в хроматине [5—8]. Однако
необходимо отметить, что эти данные получены на препаратах хрома-
тина, а не на препаратах интактных ядер, т. е. на развернутом хрома-
тине, лишенном высоких порядков упаковки, характерных для него в
ядрах эукариот. В то же время косвенные данные о значении высоких
порядков упаковки хроматина в ядрах для организации транскрипци-
онно активных участков были получены Полом с сотр. [9]. Из резуль-
татов исследований этих авторов следовало, что при работе с выделен-
ным хроматином феномен повышенной чувствительности активных в
транскрипции участков хроматина к действию ДНКазы I [10] стано-
вится невоспроизводимым.
Кроме того, было продемонстрировано, что при обработке микро-
кокковой нуклеазой хроматина и ядер выявляются различия в белковом
составе нуклеосом, в том числе принадлежащих транскрипционно ак-
тивному хроматину [11]. Переход исследователей к работе с ядрами
эукариот дал первые указания на то, что гистон HI может вообще от-
сутствовать в транскрипционно активных участках хроматина. Удале-
ние значительных количеств гистона HI из ядер эритробластов не при-
водит к потере специфичности гидролиза ДНКазой I глобиновых ге-
нов, активно экспрессируемых в этих клетках [12].
В данной работе исследована роль высоких порядков упаковки хро-
матина на уровне интактных ядер и гистона НІ в организации транск-
рипционно активных участков. В качестве основного подхода исполь-
зовали избирательную чувствительность транскрипционно активных
участков к действию ДНКазы I при ограниченном гидролизе ядер (5—
20 %) этим ферментом.
Материалы и методы. Ядра выделяли из селезёнки белых беспородных мышей по
методу, описанному ранее [13]. Процедура выделения ядер включала гомогенизацию
ткани в растворе 0,25 Μ сахарозы, 4 мМ MgCl2 с последующим центрифугированием
при 5000 об/мин (К-23, «Janetzki», Г Д Р ) . Осадок клеток дважды обрабатывали раст-
вором 0,25 Μ сахарозы, 2 мМ MgCl2, 0,2%-ного тритона Х-100. Ядра собирали цент-
рифугированием и чистоту полученного препарата контролировали микроскопически,
используя окраску светлым зеленым и акридиновым оранжевым.
Выделение хроматина из ядер производили после отмывки очищенного препарата
ядер последовательно в растворах: а) 10 мМ NaCl, 10 мМ трис-HCl, рН 7,4, 5 MMMgCl2;
б) 0,075 Μ NaCl, 10 мМ трис-HCl, рН 7,4, 5 мМ ЭДТА; в) 10 мМ трис-HCl, рН 7,4,
БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, т. 1, Λ'Ϊ 3 141
5 мМ ЭДТА. Затем ядра вскрывали механическим разрушением в гомогенизаторе Да-
унса в растворе 5 мМ ЭДТА в воде и оставляли для набухания на холоде в течение
1 ч. Набухший хроматин центрифугировали при 25000 об/мин, ротор SW-27, центрифу-
га Spinco-L2 65В («Вескшап», США). Все операции проводили строго на холоде и в
присутствии ингибитора протеаз —0,1 мМ фенилметилсульфонилфторида.
Гидролиз ядер и хроматина нуклеазой (ДНКаза I фирмы «Serva», ФРГ) прово-
дили следующим образом. Препараты ядер или хроматина тщательно отмывали буфер-
ным раствором (10 мМ NaCl, 10 мМ трис-HCl, рН 7,5, 5 мМ MgCl2) до тех пор, пока
уровень оптической плотности при 260 ммк не становился ниже 0,2 ОЕ. Суспензию ядер
или хроматина доводили до концентрации по Д Н К 10 мг/мл ( ~ 2 0 0 ед. А260) в том же
растворе. Д Н К а з у I добавляли к суспензии до концентрации 200 ед. / мл, удельная ак-
тивность 2000 ед./мг. Гидролиз вели при 37 °С в течение времени, указанного в тексте.
Реакцию останавливали быстрым охлаждением до 4 °С и центрифугированием при
5000 об/мин. Надосадочную жидкость собирали (S1) и определяли процент гидролиза
Д Н К спектрофотометрически ПО увеличению оптической ПЛОТНОСТИ при А260 надосадоч-
ной жидкости или по методу Спирииа [14]. Для анализа белков надосадочной жидкос-
ти их осаждали добавлением 50 % -ной трихлоруксусной кислоты до конечной концент-
рации 20 % в течение ночи при —20 °С. Затем собирали центрифугированием, отмывали
ацетоном, смесью ацетон — эфир ( 2 : 1 ) , эфир — ацетон ( 2 : 1 ) и эфиром, после чего
высушивали либо под струей азота, либо под вакуумом над парафином.
Белки анализировали двумя методами электрофореза в полиакриламидном геле:
в 15%-ном геле толщиной 0,6 мм в присутствии DS-Na по методу Леммли [15] и в
системе уксусная кислота — мочевина по методу Чолкли [16]. Гели фиксировали и кра-
сили в смеси, содержащей 25 % изопропанола, 10 % уксусной кислоты, 0,05 % Кумасси
яркого голубого R-250 («Serva», ФРГ) . Фон удаляли отмывкой в 10 %-ной уксусной
кислоте. Избирательную экстракцию гистона HI из ядер проводили по методу Коула
[17]. Содержание белка определяли по методу Лоури [18].
Результаты и обсуждение. На значение высоких порядков упаков-
ки хроматина в ядрах для поддержания «правильной» в функциональ-
ном смысле структуры указывают результаты следующего эксперимен-
та (рис. 1). Мы проводили сравнение кинетики гидролиза хроматина
в составе интактных ядер селезенки мыши и хроматина, выделенного
из тех же ядер, с помощью обработки 5 мМ ЭДТА и мягкой гомогени-
зации. Условия обработки в отношении концентраций ДНК и фермента
были идентичными. Из рисунка хорошо видно, что кинетика действия
фермента при переходе от интактных ядер к хроматину резко меняет-
ся и, что особенно важно, она различается на первых этапах гидроли-
за, т. е. когда происходит преимущественное
разрушение ДНКазой I транскрипционно ак-
тивных участков хроматина [10]. Здесь необхо-
димо указать также, что если кинетика дейст-
вия фермента на интактные ядра остается посто-
янной при неизменных условиях гидролиза, то ки-
Рис. 1. Кинетика гидролиза Д Н К (1) и хроматина (2) ядер
селезенки мыши ДНКазой I.
Fig. 1. Hydrolysis kinetics of DNA (1) and chromatin (2)
in mouse spleen nuclei by DNAse I.
нетика гидролиза хроматина ДНКазой I является фактически невоспро-
изводимой, меняясь от эксперимента к эксперименту. Именно эта неста-
бильность служит доказательством того, что разница в кинетике, наблю-
даемая нами, определяется в первую очередь изменениями в уровне высо-
кой упаковки хроматина, а не просто увеличением доступности ДНК
для действия ДНКазы I. Подтверждением этого положения может слу-
жить сопоставление белков, высвобождаемых из ядер и хроматина при
гидролизе ДНКазой I до одинаковой степени. Результаты такого экс-
перимента приведены на рис. 2 (см. вклейку). Видно, что при гидроли-
зе ДНК ядер и хроматина до ~ 1 0 % электрофоретические профили
142 Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА, 1985, т. 1, Λ'Ϊ 3 142
белков, высвобождаемых в надосадочную жидкость, резко различают-
ся: выявляется целый ряд несовпадающих компонентов и меняется ко-
личественный вклад отдельных белков.
Таким образом, как собственные, так и данные литературы указы-
вают на значение высоких порядков упаковки хроматина и большую
адекватность данных, полученных в экспериментах с интактными ядра-
ми, по сравнению с таковыми, полученными на хроматине.
Переход к работе с ядрами эукариот дал некоторые сведения о том,
что гистон HI может отсутствовать в составе транскрипционно актив-
ных участков хроматина [12]. Анализ белков, высвобождаемых из ядер
при гидролизе их микрококковой нуклеазой в условиях, обеспечиваю-
щих избирательное разрушение транскрипционно активных участков
хроматина, также продемонстрировал крайне сниженное содержание
гистона HI среди этих белков [19, 20].
При исследовании этого вопроса мы использовали аналогичный
подход, т. е. изучали белки, переходящие из ядер клеток селезенки мы-
ши в надосадочную жидкость (S1) при ограниченном гидролизе
ДНКазой I. Электрофорез белков S1 в присутствии DS-Na (рис. 3, см.
в к л е й к у ) демонстоирует значительное число высвобождаемых из ядер
компонентов. Видно, что в зоне подвижности гистона HI выявляется
одна полоса, занимающая по подвижности промежуточное положение
между Н1а- и НІб-подфракпиями. Олнако, как видно из рис. 4 (см.
вклейку), эта полоса представляет собой ДНКазу I, внесенную в инку-
бационную смесь. Совпадение подвижности фермента и гистона НІ в
использованных условиях электрофореза обусловлено аномальной под-
вижностью сильно положительно заряженного гистона HI. Это перек-
рывание полос, соответствующих ферменту и гистону HI, не позволяет
сделать в этом случае какого-либо заключения или достаточно обосно-
ванного предположения о наличии или отсутствии гистона HI во фрак-
ции хроматина, избирательно гидролизуемой ДНКазой I. Для исклю-
чения маскирования ферментом гистона HI и для более точного опреде-
ления момента его появления в SZ-белках был проведен следующий
эксперимент (рис. 5, см. вклейку). Ядра клеток селезенки мыши гидро-
лизовали ДНКазой I последовательно до различной степени. Белки
S1 на каждой стадии гидролиза подвергали электрофорезу, удлинив
время разделения в 1,5 раза, что должно было обеспечить разделение
гистона HI и фермента (молекулярные массы 19000 и 31000 соответст-
венно). Можно видеть, что на ранних этапах гидролиза гистон HI пол-
ностью отсутствует. Однако при 15 %-ном гидролизе видно появление
рядом с полосой, соответствующей ферменту, двух полос подфракний
гистона HI. Увеличение степени гидролиза до 20 % приводит к увели-
чению количества этого гистона в 5 / и к появлению третьей полосы,
вероятно, соответствующей Н1°-подфракции. Таким образом, эти дан-
ные указывают на отсутствие или очень сниженное количество гистона
HI во фракции хроматина, избирательно гидролизуемой ДНКазой I,
т. е. транскрипционно активной. Однако для более однозначного заклю-
чения необходимо было исключить возможность удержания гистона
HI внутри ядра. Для этого были проанализированы белки S2, т. е. бел-
ки, оставшиеся в ядре после гидролиза ДНКазой I, но высвободившие-
ся из хроматина. С этой целью ядра после гидролиза их ДНКазой I
приблизительно на 10—12 % собирали центрифугированием, S1 удаля-
ли, а затем вскрывали в слабо притёртом гомогенизаторе тефлон-стек-
ло в присутствии 5 мМ ЭДТА. Осадок вскрытых ядер удаляли центри-
фугированием, а надосадочную жидкость (52) собирали, лиофилизиро-
вали и полученные таким образом белки подвергали электрофорезу
(рис. б, см. вклейку). Можно видеть, что в этом случае в S2 выходят
сердцевинные гистоны и некоторая часть гистона HI. Однако гистон
НІ явно количественно недопредставлен по сравнению с сердцевинны-
ми гистонами. Таким образом, эти данные подтверждают сделанное вы-
ше заключение об отсутствии или крайне сниженном количестве гисто-
на НІ в транскрипционно активной фракции хроматина.
БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, т. 1, Λ'Ϊ 3 143
В дальнейшем при исследовании белков, связанных с гистоном HI
в ядрах in vivo, нами был получен несколько неожиданный результат..
В этих экспериментах мы использовали следующий подход. Ядра селе-
зенки мыши подвергали экстракции при рН 3,0 в условиях физиологи-
ческой ионной силы. Как было показано [17, 21, 22], этот метод позво-
ляет избирательно удалить из ядер почти полностью гистон HI, при
этом структура ядер [21] и хроматина [22] не подвергается значитель-
ным изменениям. Затем ядра отмывали несколько раз буферным раст-
вором (10 мМ NaCl, 4 мМ MgCl2, 10 мМ трис-HCl, рН 7,4), возвращая
таким образом рН среды к нейтральному. После этого ядра подвергали
экстракции буферным раствором (0,35 Μ NaCl, 10 мМ трис-HCl, рН
7,4) в течение 30 мин на холоде. Экстрагированные белки диализирова-
ли против воды, лиофилизировали и анализировали с помощью элект-
рофореза. Ядра после такой экстракции подвергали обработке 0,4 н.
НС1 в течение 2 ч для получения остаточных гистонов и белков. Элект-
рофоретический анализ результатов такого эксперимента приведен на
рис. 7 (см. вклейку). Видно, что после удаления гистона HI (дорожка
г) в 0,35 Μ NaCl из ядер выходит некая часть сердцевинных гистоноз,
которые в обычных условиях выходят только при ионной силе свыше
1 Μ NaCl. Для того, чтобы установить, являются ли эти гистоны чисто
случайной или специфической фракцией, 0,35 Μ NaCl-экстракт подвер-
гали электрофорезу в системе уксусная кислота — мочевина [16]. При
этом оказалось (рис. 8, б, см. вклейку), что в зонах подвижности, ха-
рактерных для гиперацетилированных форм гистонов, выявляется це-
лый ряд компонентов, которые практически полностью отсутствуют сре-
ди фракции остаточных гистонов (рис. 8, а) . Особенно хорошо это вид-
но в зоне гистона Н4. Обогащенность ацетилированными формами
гистонов именно транскрипционно активного хроматина в настоящее
время хорошо обоснована в литературе [23, 24]. Таким образом, если
принять, что выявленные компоненты (рис. 8, б) действительно обога-
щены гиперацетилированными формами гистонов, то логично предполо-
жить, что удаление гистона HI приводит к лабилизации связи этих
форм гистонов с хроматином.
С нашей точки зрения, свидетельством в пользу того, что экстра-
гируемая 0,35 Μ NaCl фракция в данном случае обогащена гипераце-
тилированными формами гистонов, является тот факт, что они практи-
чески не выявляются среди белков, оставшихся в ядрах (рис. 8, а), не-
смотря на сверхчувствительный метод окрашивания гелей — серебре-
ние, использованный в этих экспериментах. Не совсем типичная карти-
на распределения гиперацетилированных компонентов (рис. 8, б) мо-
жет объясняться вкладом некоторых негистоновых белков и/или про-
дуктов деградации гистонов. Однако здесь необходимо подчеркнуть, что
данные о гиперацетилировании выходящих в этих условиях гистонов
являются косвенными и требуют более прямого подтверждения в опы-
тах с С14-ацетатом. Такие опыты в настоящий момент проводятся.
Для корректной интерпретации этих данных большое значение име-
ет количественный аспект, так как появление этих гистонов возможно
за счет выхода из ядер фрагментов нуклеосомной ДНК как результата
эндонуклеолиза в ходе экстракции. Количественные определения пока-
зали, что соотношение белок/ДНК в 0,35 Μ NaCl-экстракте более 100,
а гистон/ДНК — не менее 30, что исключает такую возможность.
Таким образом, если принять с указанными выше оговорками, что
удаление гистона HI способствует высвобождению фракции гистонов,
обогащенной гиперацетилированными формами в 0,35 Μ NaCl, то по-
лученные в настоящей работе данные приводят к парадоксальному
заключению. С одной стороны, гистон HI либо отсутствует в транскрип-
ционно активных участках, либо его количество крайне снижено; с
другой —его присутствие необходимо для поддержания стабильного
связывания модифицированных форм гистонов, расположенных в этих
участках. Это противоречие, фактически неразрешимое при рассмотре-
нии первого уровня упаковки хроматина, легко устраняется при перехо-
144 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, т. 1, Λ'Ϊ 3 144
де к высоким уровням. Существование петельной организации хрома-
тина на этом уровне подсказывает возможное участие гистона HI (или
его блоков [25]) самого по себе или вместе с негистоновыми белками
в организации упорядоченных «правильных» петель транскрипционно
активного хроматина. Иными словами, редкие молекулы гистона HI,
расположенные по длине транскрипционно активной петли хроматина
или у основания такой петли, взаимодействуют с молекулами гистона
HI и негистоновыми белками соседних, плотно упакованных в ядре
фибрилл хроматина. Это обеспечивает такую конформацию петли
ДНК, которая способствует стабильности взаимодействия этой петли
с модифицированными молекулами гистонов. Такое предположение яв-
ляется, безусловно, рабочей гипотезой. Тем не менее, оно не противо-
речит ни результатам настоящей работы, ни известным литературным
данным. Более того, оно выглядит логичным в свете приведенных выше
данных [25] о существовании блоков гистонов НІ на уровне высоких
порядков упаковки хроматина в ядре. В последнее время Лучником с
соавт. [27] продемонстрировано, что внесение незначительного коли-
чества разрывов ДНКазой I в минихромосому вируса ОВ-40, релакси-
рующее суперспираль петли ДНК, приводит к диссоциации гистонов
из транскрипционно активной фракции. Эти данные также подтвержда-
ют высказанное выше предположение.
HISTONE H1 AND TRANSCRIPTIONALLY ACTIVE CHROMATIN REGIONS
A. A. Karavanov
N. K. Koltzov Institute of Developmental Biology,
Academy of Sciences of the USSR, Moscow
S u m m a r y
The method of limited digestion of mouse spleen nuclei with DNAse I combined with
electrophoretic analysis of proteins released from nuclei is used to investigate the par-
ticipation of HI histone in the organization of transcriptionally active chromatin regions.
The data obtained show that transcriptionally active chromatin regions digested under
applied conditions do not contain at all or contain insignificant amounts of HI histone.
Surprisingly, 0.35 Μ NaCl extraction of nuclei following selective extraction of HI his-
tone at pH 3.0 is also found to result in the release of nucleosomal core histones possib-
ly enriched in hyperacetylated species. It is proposed that while HI histone is not invol-
ved in the organization of transcriptionally active regions at the level of primary nucleo-
some fibre it may play an essential role in their organization at higher levels of chroma-
tin packaging in nuclei participating in the stabilization of interactions between modified
species of histones and DNA.
1. Sluyzer M. The HI histones.—Trends Biochem. Sci., 1977, 2, N 1, p. 202-204.
2. Cooper J., Palmer R. D., Spaulding S. W. Effect of thyrotropin on P32 labelled his-
tone HI and H3 in specific population of nucleosomes in thyroid gland.— Nucl. Acids
Res., 1981, 9, N 16, p. 3389-3401.
3. Wilkinson D. J., Shiude ВHohmann Ph. Cell specific phosphorylation of HI histone
subtypes among different Chinese hamster cell lines in interphase.— J. Biol. Chem.,
1982, 257, No 5, p. 1427-1452.
4. Binding of benz(a)pyren to histones and altered affinity of histone HI for D N A /
Л. C. Jenson, J. Fitzgibon, L. Brennan, G. W. Litman.— Biochemistry, 1982, 21, N 1,
p. 601-607.
5. Kozlov Ju. V., Georgiev G. P. Stepwise removal of protein from DNA complex and
depression of the genome.—Nature, 1970, 228, N 5266, p. 245-247.
6. Spelsberg T. L., Hnilica L. S. Proteins of chromatin in template restriction.— Biochim.
et biophys. acta, 1971, 228, N 1, p. 212-218.
7. Chromatin as a template for RNA synthesis in vitro / Y. Groner, G. Monroy, M. Jacu-
et, G. Hurwitz .—Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1975, 72, N 1, p. 194-199.
8. Cedar H., Solange Α., Zurucki F. Control of RNA synthesis by chromatin proteins.—
Nucl. Acids Res., 1976, 3, N 7, p. 1659-1670.
9. Properties of transcriptionally active chromatin / G. D. Birnic, J. Paul, E. J. Mollner,
R. S. Gilmour.—Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1978, 42, p. 597-603.
БИОПОЛИМРРМ II KJIE1KA, 1985, τ. 1, № 3 145
10. Weintraub ΗGroudine Μ. Chromosomal subunits in active genes have an altered
conformation.—Science, 1976, 193, N 4256, p. 848-856.
11. Levy W. B. Effects of nuclear disruption on the macromolecular composition of mic-
r o s o m e subtractions.— Nucl. Acids Res., 1979, 7, N 8, p. 2239-2254.
12. Weisbroad S., Weintraub H. Isolation of subclass of nuclear proteins responsible for
conferr ing a DNAse 1 sensitive structure of globin chromatin — Proc. Nat. Acad. Sci.
USA, 1979, 76, N 2, p. 630-634.
13. Hymer W. С., Kuff P. C. Isolation of nuclei from mammalian tissues through the use
of Triton X-100.— J. Histochem. and Cytochem., 1964, 12, N 2, p. 359-363.
14. Спирин А С. Спектрофотометрическое определение содержания суммарных нуклеи-
новых кислот.— Биохимия, 1961, 26, № 1, с. 61—69.
15. Laemmli U. К. Cleavage of structural proteins during assembly of the head of bac-
teriophage T4.—Nature, 1970, 227, N 5254, p. 680-685.
16. Panyim S., Chalkley R. High resolution acrylamide gel electrophoresis of histones.—
Arch. Bioehem. and Biophys., 1969, 130, N 1, p. 337-346.
17. Cole R. D., Lawson G. Μ., Hsiang M. W. HI histone and condensation of chromatin
and DNA.—Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1978, 42, p. 253-263.
18. Protein measurement with the Folin phenol reagent / D. H. Lowry, N. J. Rosebrough,
A L. Farr, R. J. Randal l .—J. Biol. Chem., 1951, 193, N 1, p. 265-275.
19. Levy W. В., Dixon G. H. Part ial purification of transcriptionally active nucleosomes
from trout testis cells.—Nucl. Acids Res., 1978, 5, N 11, p. 4155-4163.
20. Lentansky K. Nuclear proteins in genetically active and inactive parts of chromatin.—
I EBS Lett., 1978, 89, N 1, p. 93-97.
21. The effects of salt concentration and HI depletion on the digestion of calf thymus
chromatin by micrococcal nuclease / W. O. Weishet, J. I. Allen, G. Reidel, K. Van Hol-
de.— Nucl. Acids Res., 1979, 6, N 5, p. 1843-1862.
22. Azorin F., Yumca R. Structural organization of calf thymus chromatin depleted of
hislone HI by acidic t rea tment .—FEBS Lett., 1981, 139, N 1, p. 67-71.
23. Davie J. R., Candido E. P. DNAse I sensitive chromatin is enriched in the acetylated
species of histone H4 .—FEBS Lett., 1980, 110, N 1, p. 164-168.
24. Weisbroad S. T. Properties of active nucleosomes as revealed by HMG 14 and 17
chromatography — Nucl. Acids Res., 1982, 10, N 6, p. 2017-2042.
25. Repeating oligonucleosomal units. A new element of chromatin s t r u c t u r e / Α . V. Itkes,
В О Glotov, L. G. Nikolaev, S. R. Preem.—Nucl . Acids Res., 1980, 8, N 3, p. 507-
527.
26. Oakley B. R., Kirsh D. R., Norris N. R. A simplified ultrasensitive silver stain for
detecting proteins in polyacrylamide gels.— Analyt. Bioehem., 1980, 105, N 2, p. 361—
363.
27. Лучник A. H., Бакаев В. В., Югай А. А. Гиперчувствительность к ДНКазе I упруго
напряженной Д Н К в составе транскрипционно активных минихромосом вируса SV-
40.—Докл. АН СССР, 1984, 274, № 3, с. 754—757.
Ин-т биологии развития им. Н. К. Кольцова, Получено 17.07.84
Москва
146 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, т. 1, Λ'Ϊ 3 146
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-152255 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-11-24T11:06:56Z |
| publishDate | 1985 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Караванов, А.А. 2019-06-09T11:21:59Z 2019-06-09T11:21:59Z 1985 Гистон Н1 и транскрипционно активные участки хроматина / А.А. Караванов // Биополимеры и клетка. — 1985. — Т. 1, № 3. — С. 141-146. — Бібліогр.: 27 назв. — рос. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.000021 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152255 547.^63.3 При помощи метода ограниченного гидролиза ядер селезенки мыши ДНКазой 1 и последующего анализа высвобождаемых при этом белков изучен вопрос содержания гистона Н1 в транскрипционно активных участках хроматина. Полученные данные указывают на большое значение высоких уровней упаковки хроматина в ядре для организации транскрипционно активных участков. Результаты также указывают на то, что гистон Н1 не входит в состав транскрипционно активных участков (или присутствует в них в крайне незначительных количествах). Однако изменение экстрагируемости гистонов из ядер после избирательного удаления из них гистона Н1 указывает на его возможное участие в поддержании стабильности взаимодействия сердцевинных гистонов с петлями транскрипционно активного хроматина на уровне высоких порядков его упаковки в ядре. Методом обмеженого гідролізу ядер селезінки миші ДНКазою І і подальшим аналізом білків, які при цьому вивільняються, вивчено питання вмісту гістона Н1 в транскрипційно активних ділянках хроматину. Отримані дані вказують на велике значення високих рівнів упаковки хроматину в ядрі для організації транскрипційно активних ділянок. Результати також вказують на те, що гістон Н1 не входить до складу транскрипційно активних ділянок (чи присутній в них у вкрай незначних кількостях). Однак зміна екстрагованості гістонів з ядер після вибіркового видалення з них гістона Н1 вказує на його можливу участь у підтримці стабільності взаємодії серцевинних гістонів з петлями транскрипційно активного хроматину на рівні високих порядків його упаковки в ядрі. The method of limited digestion of mouse spleen nuclei with DNAse I combined with electrophoretic analysis of proteins released from nuclei is used to investigate the participation of HI histone in the organization of transcriptionally active chromatin regions. The data obtained show that transcriptionally active chromatin regions digested under applied conditions do not contain at all or contain insignificant amounts of HI histone. Surprisingly, 0.35 M NaCl extraction of nuclei following selective extraction of HI histone at pH 3.0 is also found to result in the release of nucleosomal core histones possibly enriched in hyperacetylated species. It is proposed that while HI histone is not involved in the organization of transcriptionally active regions at the level of primary nucleosome fibre it may play an essential role in their organization at higher levels of chromatin packaging in nuclei participating in the stabilization of interactions between modified species of histones and DNA. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Биополимеры и регуляция генома Гистон Н1 и транскрипционно активные участки хроматина Гістон Н1 і транскрипційно активні ділянки хроматину Histone H1 and transcriptionally active chromatin regions Article published earlier |
| spellingShingle | Гистон Н1 и транскрипционно активные участки хроматина Караванов, А.А. Биополимеры и регуляция генома |
| title | Гистон Н1 и транскрипционно активные участки хроматина |
| title_alt | Гістон Н1 і транскрипційно активні ділянки хроматину Histone H1 and transcriptionally active chromatin regions |
| title_full | Гистон Н1 и транскрипционно активные участки хроматина |
| title_fullStr | Гистон Н1 и транскрипционно активные участки хроматина |
| title_full_unstemmed | Гистон Н1 и транскрипционно активные участки хроматина |
| title_short | Гистон Н1 и транскрипционно активные участки хроматина |
| title_sort | гистон н1 и транскрипционно активные участки хроматина |
| topic | Биополимеры и регуляция генома |
| topic_facet | Биополимеры и регуляция генома |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152255 |
| work_keys_str_mv | AT karavanovaa gistonn1itranskripcionnoaktivnyeučastkihromatina AT karavanovaa gístonn1ítranskripcíinoaktivnídílânkihromatinu AT karavanovaa histoneh1andtranscriptionallyactivechromatinregions |