Присутствие собственного промотора rpoB- гена снижает стабильность рекомбинантных однонитевых фагов, содержащих этот ген
Фрагмент ДНК<em> E. coli</em>, включающий ген β-субъединицы рифампицин-устойчивой РНК-полимеразы <em> E. coli</em>( <em>rpoB</em>- ген)б гены, направляющие синтез рибосомных белков – <em>rplL</em> и <em>rplJ</em>, а также два промотора –P...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Дата: | 1985 |
| Автори: | , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1985
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152282 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Присутствие собственного промотора rpoB- гена снижает стабильность рекомбинантных однонитевых фагов, содержащих этот ген / Е.Б. Патон, М.И. Вудмаска, Е.Д. Свердлов // Биополимеры и клетка. — 1985. — Т. 1, № 3. — С. 160-162. — Бібліогр.: 9 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-152282 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Патон, Е.Б. Вудмаска, М.И. Свердлов, Е.Д. 2019-06-09T15:03:54Z 2019-06-09T15:03:54Z 1985 Присутствие собственного промотора rpoB- гена снижает стабильность рекомбинантных однонитевых фагов, содержащих этот ген / Е.Б. Патон, М.И. Вудмаска, Е.Д. Свердлов // Биополимеры и клетка. — 1985. — Т. 1, № 3. — С. 160-162. — Бібліогр.: 9 назв. — рос. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.000026 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152282 577.214.622 Фрагмент ДНК<em> E. coli</em>, включающий ген β-субъединицы рифампицин-устойчивой РНК-полимеразы <em> E. coli</em>( <em>rpoB</em>- ген)б гены, направляющие синтез рибосомных белков – <em>rplL</em> и <em>rplJ</em>, а также два промотора –PJ Pβб клонирован в нитевидный фаг <em>M13mp9</em>. Показано, что удаление из рекомбинантной фаговой ДНК сильного промотора PJ повышает ее стабильность. Фрагмент ДНК <em>E. coli,</em> що включає ген β-субодиниці рифампіцин-стійкої РНК-полімерази<em> E. coli </em>(<em>rpoB</em>-ген), гени, які направляють синтез рибосомних білків – <em>rplL</em> і <em>rplJ</em>, а також два промотори – PJ Pβ, клоновано в ниткоподібний фаг <em>M13mp9</em>. Показано, що видалення з рекомбінантної фагової ДНК сильного промотора PJ підвищує її стабільність. A fragment of DNA including the <em>rpoB </em>gene coding for the p-subunit of rifampicin-resistant RNA-polymerase of <em>E. coli</em> and <em>rplL </em>and <em>rplJ </em>genes encoding ribosomal protein synthesis as well as two promoters Pj and PP was cloned into the filamentous M13mp9 phage. The stability of the recombinant phages was shown to increase as the result of the elimination of the strong Pj promoter. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Краткие сообщения Присутствие собственного промотора rpoB- гена снижает стабильность рекомбинантных однонитевых фагов, содержащих этот ген Пристуність власного промотора rpoB-гена знижує стабільність рекомбінантних однониткових фагів, що містять цей ген The stability of recombinant filamentous phages is reduced in the presence of the rpoB gene promoter Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Присутствие собственного промотора rpoB- гена снижает стабильность рекомбинантных однонитевых фагов, содержащих этот ген |
| spellingShingle |
Присутствие собственного промотора rpoB- гена снижает стабильность рекомбинантных однонитевых фагов, содержащих этот ген Патон, Е.Б. Вудмаска, М.И. Свердлов, Е.Д. Краткие сообщения |
| title_short |
Присутствие собственного промотора rpoB- гена снижает стабильность рекомбинантных однонитевых фагов, содержащих этот ген |
| title_full |
Присутствие собственного промотора rpoB- гена снижает стабильность рекомбинантных однонитевых фагов, содержащих этот ген |
| title_fullStr |
Присутствие собственного промотора rpoB- гена снижает стабильность рекомбинантных однонитевых фагов, содержащих этот ген |
| title_full_unstemmed |
Присутствие собственного промотора rpoB- гена снижает стабильность рекомбинантных однонитевых фагов, содержащих этот ген |
| title_sort |
присутствие собственного промотора rpob- гена снижает стабильность рекомбинантных однонитевых фагов, содержащих этот ген |
| author |
Патон, Е.Б. Вудмаска, М.И. Свердлов, Е.Д. |
| author_facet |
Патон, Е.Б. Вудмаска, М.И. Свердлов, Е.Д. |
| topic |
Краткие сообщения |
| topic_facet |
Краткие сообщения |
| publishDate |
1985 |
| language |
Russian |
| container_title |
Биополимеры и клетка |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Пристуність власного промотора rpoB-гена знижує стабільність рекомбінантних однониткових фагів, що містять цей ген The stability of recombinant filamentous phages is reduced in the presence of the rpoB gene promoter |
| description |
Фрагмент ДНК<em> E. coli</em>, включающий ген β-субъединицы рифампицин-устойчивой РНК-полимеразы <em> E. coli</em>( <em>rpoB</em>- ген)б гены, направляющие синтез рибосомных белков –
<em>rplL</em> и <em>rplJ</em>, а также два промотора –PJ Pβб клонирован в нитевидный фаг <em>M13mp9</em>. Показано, что удаление из рекомбинантной фаговой ДНК сильного промотора PJ повышает ее стабильность.
Фрагмент ДНК <em>E. coli,</em> що включає ген β-субодиниці рифампіцин-стійкої РНК-полімерази<em> E. coli </em>(<em>rpoB</em>-ген), гени, які направляють синтез рибосомних білків – <em>rplL</em> і <em>rplJ</em>, а також два промотори – PJ Pβ, клоновано в ниткоподібний фаг <em>M13mp9</em>. Показано, що видалення з рекомбінантної фагової ДНК сильного промотора PJ підвищує її стабільність.
A fragment of DNA including the <em>rpoB </em>gene coding for the p-subunit of rifampicin-resistant RNA-polymerase of <em>E. coli</em> and <em>rplL </em>and <em>rplJ </em>genes encoding ribosomal protein synthesis as well as two promoters Pj and PP was cloned into the filamentous M13mp9 phage. The stability of the recombinant phages was shown to increase as the result of the elimination of the strong Pj promoter.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152282 |
| citation_txt |
Присутствие собственного промотора rpoB- гена снижает стабильность рекомбинантных однонитевых фагов, содержащих этот ген / Е.Б. Патон, М.И. Вудмаска, Е.Д. Свердлов // Биополимеры и клетка. — 1985. — Т. 1, № 3. — С. 160-162. — Бібліогр.: 9 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT patoneb prisutstviesobstvennogopromotorarpobgenasnižaetstabilʹnostʹrekombinantnyhodnonitevyhfagovsoderžaŝihétotgen AT vudmaskami prisutstviesobstvennogopromotorarpobgenasnižaetstabilʹnostʹrekombinantnyhodnonitevyhfagovsoderžaŝihétotgen AT sverdloved prisutstviesobstvennogopromotorarpobgenasnižaetstabilʹnostʹrekombinantnyhodnonitevyhfagovsoderžaŝihétotgen AT patoneb pristunístʹvlasnogopromotorarpobgenaznižuêstabílʹnístʹrekombínantnihodnonitkovihfagívŝomístâtʹceigen AT vudmaskami pristunístʹvlasnogopromotorarpobgenaznižuêstabílʹnístʹrekombínantnihodnonitkovihfagívŝomístâtʹceigen AT sverdloved pristunístʹvlasnogopromotorarpobgenaznižuêstabílʹnístʹrekombínantnihodnonitkovihfagívŝomístâtʹceigen AT patoneb thestabilityofrecombinantfilamentousphagesisreducedinthepresenceoftherpobgenepromoter AT vudmaskami thestabilityofrecombinantfilamentousphagesisreducedinthepresenceoftherpobgenepromoter AT sverdloved thestabilityofrecombinantfilamentousphagesisreducedinthepresenceoftherpobgenepromoter |
| first_indexed |
2025-11-25T23:08:42Z |
| last_indexed |
2025-11-25T23:08:42Z |
| _version_ |
1850578859196416000 |
| fulltext |
УДК 577.214.622
ПРИСУТСТВИЕ СОБСТВЕННОГО ПРОМОТОРА rpoB- ГЕНА
СНИЖАЕТ СТАБИЛЬНОСТЬ РЕКОМБИНАНТНЫХ
ОДНОНИТЕВЫХ ФАГОВ, СОДЕРЖАЩИХ ЭТОТ ГЕН
Е. Б. Патон, М. И. Вудмаска, Е. Д. Свердлов
В предыдущем сообщении [1] мы демонстрировали нестабильность рекомбинантных
фагов М13тр8 и mWB2348, содержащих фрагмент ДНК, включающий ген гроВ, коди-
рующий β-субъединицу рифампицинустойчивой РНК-полимеразы Е. coli. Этот фрагмент
содержит, кроме того, гены rplL и rplJ, кодирующие рибосомные бёлки, и два промото-
Рис. 1. Физико-генетическая карта фрагмента ДНК Е. coli, содержащего гены гроВ,.
rplL и rplJ в составе рекомбинантного фага M13mp9/rpoB: lacPO, Pj и Ρβ— промото-
ры; ВВ — место сочленения BgUI липких концов фрагмента с ВатНІ-концами вектор-
ного фага; Η и Ε — сайты узнавания рестриктаз Hindlll и EcoRI; заштрихованные
участки соответствуют генам rplJ, rplL, гроВ. Пунктиром обозначены участки полилин-
керной области вектора. Цифры — длины фрагментов в Мдальтонах. Карта представляет
собой компилляцию [4—8].
Fig. 1. A physico-genetic map of Ε. coli DNA fragment containing rpoB, rplL and rplJ ge-
nes as a part of recombinant phage M13mp9/rpoB: lacPO, Pj, Ρ β — promoters; ВВ —
linkage of Bglll sticky ends of the fragment with BamHI-tnds of the vector phage; Η
and Ε — Hindi 11 and EcoRI recognition sites; cross-hatched sections denote rplJ, rplLt
rpoB genes. Dotted line marks the vector polylinker region. Figures designate fragment
lengths in MDaltons. Map represents a compillation of [4-8].
pa, один из которых — P j — является сильным (рис. 1). Было высказано предположе-
ние, что одной из причин, вызывающих эту нестабильность, может быть неблагоприят-
ное сочетание двух сильных промоторов lacUV5 и Pj, программирующих транскрипцию
в одном и том же направлении. В данном сообщении показано, что удаление промотора
Pj ИЗ рекомбинантного фага действительно повышает его стабильность.
Относительные количества устойчивых и чувствительных
к рифампицину клеток, трансформированных рекомбинантными
фаговыми ДНК, выделенными из рифампицинустойчивых клеток
Е. coli
Relative Amount of Rifampicin Resistant and Rifampicin Sensitive
Cells Transformed with Recombinant Phages Isolated from Rifampicin
Resistant E. coli Cells
Фаг-вектор
Количество ана-
лизированных
колоний
Количество ри-
фампицинчувст-
вительных коло-
ний
Рифампицин-
чувствительные
колонии, %
mp9/rpoB
mp9/rpoB без P j
250
250
89
14
35
5
Для того, чтобы выщепить промотор Pj, нами был сконструирован рекомбинант-
ный фаг тр9/гроВ, физико-генетическая карта участка которого приведена на рис. 1.
Видно, что промотор Ρj находится в участке ДНК, ограниченном двумя HindiII-сайта-
ми, один из которых находится в области вставки, а другой — в полилинкерной облас-
ти векторного фага. Поскольку в ДНК рекомбинантного фага находятся лишь эти два
сайта узнавания Hindlll, мы использовали расщепление именно этой эндонуклеазой
рестрикции для удаления промотора Pj из фаговой ДНК.
160 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, т. 1. № 3
Конструирование рекомбинантного фага тр9/гроВ проводили, как описано в [1].
Выделение фаговых ДНК, их расщепление эндонуклеазами рестрикции, гель-электрофо-
рез в агарозных гелях и электроэлюцию фрагментов проводили по методикам, описан-
ным в [2]. Смесь для гидролиза ДНК рекомбинантного фага тр9/гроВ рестрикта-
зой Hindlll включала 20 мкг фаговой ДНК. Продукты гидролиза разделяли гель-элект-
Рис. 2. Картина электрофоретического
разделения в 0,8%-ном агарозном геле
продуктов расщепления рестриктазой
EcoRI ДНК рекомбинантных фагов
М13тр9/гроВ с Pj-промотором (а) и
без него (б). В качестве реперов исполь-
зованы плазмиды pJC703 [8] и рекомби-
нантный фаг mWB2348/rpoB [1], рас-
щепленные EcoRI.
Fig. 2. The picture of electrophoretic se-
paration in 0.8 % agarose gel of EcoRI
cleavage products of recombinant phages
M13mp9/rpoB with (a) and without (6)
the Ρj promoter. EcoRI-cleaved plasmid
pJC703 [8] and mWB2348/rpoB [1] re-
combinant phage are used as markers.
рофорезом. После лигирования и последующей трансформации клеток Е. coli образую-
щейся рекомбинантной фаговой ДНК об удалении промоторсодержащего фрагмента
судили по отсутствию его в продуктах рестрикции EcoRI ДНК, анализируемых путем
гель-электрофореза в 0,8 % -ном агарозном геле.
На рис. 2 представлена картина электрофоретического разделения получаемых в
результате расщепления EcoRI ДНК рекомбинантных фагов tnp9/rpoB с промотором
Ρ j (а) и без него (б).
Для определения стабильности использовали то обстоятельство, что клетки Е. co-
li, содержащие рекомбинантные фаги, являются рифампицинустойчивыми. Клетки Е. coli
KI2 71—18 (Mac pro/F' АМ15 pro) [3] трансформировали ДНК рекомбинантного фа-
га и определяли отношение количества рифампицинчувствительных полунегативных ко-
лоний к общему числу колоний. Как видно из таблицы, относительное количество ри-
фампицинчувствительных клонов существенно ниже в случае рекомбинантов, лишенных
Pj-промотора.
Таким образом, действительно, сочетание двух однонаправленных промоторов ка-
ким-то образом неблагоприятно сказывается на стабильности рекомбинантных молекул.
Это может быть связано как со слишком сильной транскрипцией генов [9], содержа-
щихся во встроенном фрагменте, так и с какими-либо другими факторами.
161 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, т. 1. № 3
THE STABILITY OF RECOMBINANT FILAMENTOUS PHAGES
IS REDUCED IN THE PRESENCE OF THE rpoB GENE PROMOTER
Ε. B. Paton, M. I. Woodmaska, E. D. Sverdlov
Institute of Molecular Biology and Genetics, Academy of Sciences of the Ukrainian SSR,
Kiev;
Μ. M. Shemyakin Institute of Bioorganic Chemistry, Academy of Sciences of the USSR,
Moscow
S u m m a r y
A fragment of DNA including the rpoB gene coding for the β-subunit of rifampicin-rc-
sistant RNA-polymerase of E. coli and rplL and rplJ genes encoding ribosomal protein
synthesis as well as two promoters Pj and Ρβ was cloned into the filamentous M13mp9
phage. The stability of the recombinant phages was shown to increase as the result of
the elimination of the strong Pj promoter.
1. Патон Ε. БВудмаска Μ. ИСвердлов Ε. Д. Однонаправленная ориентация гена
rpoB Е. coli при клонировании в нитевидные фаги М13тр8 и mWB2348.— Биоорган,
химия, 1984, 10, № 11, с. 1544—1547.
2. Maniatis Т., Fritsch Ε. F., Sambrook J. Molecular cloning — a laboratory manual.—
N. Y.: Cold Spring Harbor, 1982.—545 p.
3. Barnes W. M., Bevan M. Kilo-sequencing: an ordered strategy for rapid DNA sequence
data acquisition.—Nucl. Acids Res., 1983, 11, N 2, p. 349-367.
4. Messing J. An integrative strategy of DNA sequencing and experiments beyond.— In:
Recombinant DNA: Third Cleveland Symp. on macromolecules / Ed. A. Walton.— Ams-
terdam: Elsevier, 1981, p. 143-153.
5. The molecular biology catalogue.— Uppsala: Pharmacia P-L biochemicals, 1983.—43 p.
6. Morgan Β. Α., Kellet E., Hayward R. S. The wild-type nucleotide sequence of the
гро ВС-attenuator region of Escherichia coli DNA, and its implications for the nature
of the rifd 18 mutation.—Nucl. Acids Res., 1984, 12, N 13, p. 5465-5470.
7. Evidence that rifampicin can stimulate readthrough of transcriptional terminators in
Escherichia coli, including the attenuator of the rpoBC operon / A. J. Newman,
J.-Ch. Ma, К. M. Howe et al.— Nucl. Acids Res., 1982, 10, N 22, p. 7409—7424.
8. Collins J. Deletions, insertions and rearrangements affecting rpoB gene expression.—
Мої. and Gen. Genet., 1979, 173, N 1, p. 217—220.
9. Remaut E., Sfanssens P., Fiers W. Plasmid vectors for high-efficiency expression cont-
rolled by the ΡL promoter of coliphage λ.— Gene, 1981, 15, N 1, p. 81—93.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Киев Получено 21.12.84
Ин-т биоорган, химии им. Μ. М. Шемякина
АН СССР, Москва
162 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, т. 1. № 3
|