Строение триптических пептидов полиэдрина вируса ядерного полиэдроза озимой совки, Agrotis segetum
Восстановленный и карбоксиметилированный полиэдрин вируса ядерного полиэдроза (ВЯП) A. segetum расщепляли трипсином. Триптический гидролизат разделяли гель-фильтрованием через сефадекс G-25 и далее высоковольтным электрофорезом и хроматографией на бумаге. Получено 36 пептидов. Расшифрована полная ил...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Datum: | 1985 |
| Hauptverfasser: | , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1985
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152415 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Строение триптических пептидов полиэдрина вируса ядерного полиэдроза озимой совки, Agrotis segetum / Н.М. Гусак, Э.А. Козлов, Н.В. Роднин, С.Б. Серебряный // Биополимеры и клетка. — 1985. — Т. 1, № 6. — С. 312-317. — Бібліогр.: 6 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-152415 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Гусак, Н.М. Козлов, Э.А. Роднин, Н.В. Серебряный, С.Б. 2019-06-11T11:01:22Z 2019-06-11T11:01:22Z 1985 Строение триптических пептидов полиэдрина вируса ядерного полиэдроза озимой совки, Agrotis segetum / Н.М. Гусак, Э.А. Козлов, Н.В. Роднин, С.Б. Серебряный // Биополимеры и клетка. — 1985. — Т. 1, № 6. — С. 312-317. — Бібліогр.: 6 назв. — рос. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.000193 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152415 577.112.5:578.841 Восстановленный и карбоксиметилированный полиэдрин вируса ядерного полиэдроза (ВЯП) A. segetum расщепляли трипсином. Триптический гидролизат разделяли гель-фильтрованием через сефадекс G-25 и далее высоковольтным электрофорезом и хроматографией на бумаге. Получено 36 пептидов. Расшифрована полная или частичная аминокислотная последовательность 24 пептидов. Реконструировано два крупных фрагмента полипептидной цепи полиэдрина (12–173 и 181–244), насчитывающих в сумме 226 остатков аминокислот (93 % длины всей полипептидной цепи белка). Степень гомологии аминокислотной последовательности этих фрагментов с ранее установленными аминокислотными последовательностями аналогичных фрагментов полиэдрина ВЯП тутового, непарного шелкопрядов и большой вощинной моли составляет соответственно 84 %, 80 % и 82 %. Відновлений і карбоксиметильований поліедрин вірусу ядерного поліедрозу (ВЯП) A. segetum розщеплювали трипсином. Триптичний гідролізат розділяли гель-фільтруванням через сефадекс G-25 і далі високовольтним електрофорезом і хроматографією на папері. Отримано 36 пептидів. Розшифровано повну або часткову амінокислотну послідовність 24 пептидів. Реконструйовано два великих фрагменти поліпептидного ланцюга поліедрину (12–173 і 181–244), які налічують у сумі 226 залишків амінокислот (93 % довжини всього поліпептидного ланцюга білка). Ступінь гомології амінокислотної послідовності цих фрагментів з раніше встановленими амінокислотними послідовностями аналогічних фрагментів поліедрину ВЯП тутового, непарного шовкопрядів і великої вощинної молі становить відповідно 84, 80 і 82 %. 36 peptides comprising 263 amino acid residues are isolated from the tryptic hydrolyzate of the polyhedrin of the nuclear polyhedrosis virus of Agrotis segetum and amino acid sequence of 24 peptides are determined. Two extended fragments (12–173 and 181–244) comprising 226 amino acid residues are constructed that accounts for 93 % of the length of the whole polyhedrin polypeptide chain. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Структура и функции биополимеров Строение триптических пептидов полиэдрина вируса ядерного полиэдроза озимой совки, Agrotis segetum Будова триптичних пептидів поліедрину вірусу ядерного поліедрозу озимої совки, Agrotis segetum The structure of the tryptic peptides of polyhedrin of the nuclear polyhedrosis virus of Agrotis segetum Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Строение триптических пептидов полиэдрина вируса ядерного полиэдроза озимой совки, Agrotis segetum |
| spellingShingle |
Строение триптических пептидов полиэдрина вируса ядерного полиэдроза озимой совки, Agrotis segetum Гусак, Н.М. Козлов, Э.А. Роднин, Н.В. Серебряный, С.Б. Структура и функции биополимеров |
| title_short |
Строение триптических пептидов полиэдрина вируса ядерного полиэдроза озимой совки, Agrotis segetum |
| title_full |
Строение триптических пептидов полиэдрина вируса ядерного полиэдроза озимой совки, Agrotis segetum |
| title_fullStr |
Строение триптических пептидов полиэдрина вируса ядерного полиэдроза озимой совки, Agrotis segetum |
| title_full_unstemmed |
Строение триптических пептидов полиэдрина вируса ядерного полиэдроза озимой совки, Agrotis segetum |
| title_sort |
строение триптических пептидов полиэдрина вируса ядерного полиэдроза озимой совки, agrotis segetum |
| author |
Гусак, Н.М. Козлов, Э.А. Роднин, Н.В. Серебряный, С.Б. |
| author_facet |
Гусак, Н.М. Козлов, Э.А. Роднин, Н.В. Серебряный, С.Б. |
| topic |
Структура и функции биополимеров |
| topic_facet |
Структура и функции биополимеров |
| publishDate |
1985 |
| language |
Russian |
| container_title |
Биополимеры и клетка |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Будова триптичних пептидів поліедрину вірусу ядерного поліедрозу озимої совки, Agrotis segetum The structure of the tryptic peptides of polyhedrin of the nuclear polyhedrosis virus of Agrotis segetum |
| description |
Восстановленный и карбоксиметилированный полиэдрин вируса ядерного полиэдроза (ВЯП) A. segetum расщепляли трипсином. Триптический гидролизат разделяли гель-фильтрованием через сефадекс G-25 и далее высоковольтным электрофорезом и хроматографией на бумаге. Получено 36 пептидов. Расшифрована полная или частичная аминокислотная последовательность 24 пептидов. Реконструировано два крупных фрагмента полипептидной цепи полиэдрина (12–173 и 181–244), насчитывающих в сумме 226 остатков аминокислот (93 % длины всей полипептидной цепи белка). Степень гомологии аминокислотной последовательности этих фрагментов с ранее установленными аминокислотными последовательностями аналогичных фрагментов полиэдрина ВЯП тутового, непарного шелкопрядов и большой вощинной моли составляет соответственно 84 %, 80 % и 82 %.
Відновлений і карбоксиметильований поліедрин вірусу ядерного поліедрозу (ВЯП) A. segetum розщеплювали трипсином. Триптичний гідролізат розділяли гель-фільтруванням через сефадекс G-25 і далі високовольтним електрофорезом і хроматографією на папері. Отримано 36 пептидів. Розшифровано повну або часткову амінокислотну послідовність 24 пептидів. Реконструйовано два великих фрагменти поліпептидного ланцюга поліедрину (12–173 і 181–244), які налічують у сумі 226 залишків амінокислот (93 % довжини всього поліпептидного ланцюга білка). Ступінь гомології амінокислотної послідовності цих фрагментів з раніше встановленими амінокислотними послідовностями аналогічних фрагментів поліедрину ВЯП тутового, непарного шовкопрядів і великої вощинної молі становить відповідно 84, 80 і 82 %.
36 peptides comprising 263 amino acid residues are isolated from the tryptic hydrolyzate of the polyhedrin of the nuclear polyhedrosis virus of Agrotis segetum and amino acid sequence of 24 peptides are determined. Two extended fragments (12–173 and 181–244) comprising 226 amino acid residues are constructed that accounts for 93 % of the length of the whole polyhedrin polypeptide chain.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152415 |
| citation_txt |
Строение триптических пептидов полиэдрина вируса ядерного полиэдроза озимой совки, Agrotis segetum / Н.М. Гусак, Э.А. Козлов, Н.В. Роднин, С.Б. Серебряный // Биополимеры и клетка. — 1985. — Т. 1, № 6. — С. 312-317. — Бібліогр.: 6 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT gusaknm stroenietriptičeskihpeptidovpoliédrinavirusaâdernogopoliédrozaozimoisovkiagrotissegetum AT kozlovéa stroenietriptičeskihpeptidovpoliédrinavirusaâdernogopoliédrozaozimoisovkiagrotissegetum AT rodninnv stroenietriptičeskihpeptidovpoliédrinavirusaâdernogopoliédrozaozimoisovkiagrotissegetum AT serebrânyisb stroenietriptičeskihpeptidovpoliédrinavirusaâdernogopoliédrozaozimoisovkiagrotissegetum AT gusaknm budovatriptičnihpeptidívpolíedrinuvírusuâdernogopolíedrozuozimoísovkiagrotissegetum AT kozlovéa budovatriptičnihpeptidívpolíedrinuvírusuâdernogopolíedrozuozimoísovkiagrotissegetum AT rodninnv budovatriptičnihpeptidívpolíedrinuvírusuâdernogopolíedrozuozimoísovkiagrotissegetum AT serebrânyisb budovatriptičnihpeptidívpolíedrinuvírusuâdernogopolíedrozuozimoísovkiagrotissegetum AT gusaknm thestructureofthetrypticpeptidesofpolyhedrinofthenuclearpolyhedrosisvirusofagrotissegetum AT kozlovéa thestructureofthetrypticpeptidesofpolyhedrinofthenuclearpolyhedrosisvirusofagrotissegetum AT rodninnv thestructureofthetrypticpeptidesofpolyhedrinofthenuclearpolyhedrosisvirusofagrotissegetum AT serebrânyisb thestructureofthetrypticpeptidesofpolyhedrinofthenuclearpolyhedrosisvirusofagrotissegetum |
| first_indexed |
2025-11-25T20:36:47Z |
| last_indexed |
2025-11-25T20:36:47Z |
| _version_ |
1850524157279731712 |
| fulltext |
Структура
и функция
биополимеров
УДК 577.112.5:578.841
СТРОЕНИЕ ТРИПТИЧЕСКИХ ПЕПТИДОВ ПОЛИЭДРИНА
ВИРУСА ЯДЕРНОГО ПОЛИЭДРОЗА ОЗИМОЙ СОВКИ,
AGROTIS SEGETUM
Η. М. Гусак, Э. А. Козлов, Н. В. Роднин, С. В. Серебряный
Из проведенного нами ранее сравнительного исследования физико-хи-
мических свойств [1, 2] и первичной структуры [3, 4] полиэдринов ря-
да бакуловирусов очевидно, что полиэдрины составляют группу высо-
когомологичных белков. Поэтому для всех полиэдринов была выбрана
одна стратегия выяснения первичной структуры: установление амино-
кислотной последовательности триптических пептидов и реконструк-
ция полипептидной цепи белка путем сравнения строения пептидов с
известной аминокислотной последовательностью эталонного полиэдри-
на вируса ядерного полиэдроза (ВЯП) Bombyx mori [5]. Настоящее
сообщение посвящено выделению, очистке и выяснению аминокислот-
ной последовательности триптических пептидов и реконструкции поли-
пептидной цепи полиэдрина ВЯП A. segetum.
Материалы и методы. Белок получали, восстанавливали, карбоксиметилировали и
расщепляли трипсином, как описано для полиэдрина ВЯП капустной совки [4]. Раст-
воримые при рН 5,0 пептиды разделяли предварительно гель-фильтрованием через се-
фадекс G-25 (тонкий). Условия гель-фильтрования приведены в подписи к рисунку.
Дальнейшую очистку пептидов высоковольтным электрофорезом и хроматографией на
бумаге осуществляли, как описано в [4]. В этой же работе приведен состав электро-
литов и растворителей для электрофореза и хроматографии, а также методы опреде-
ления аминокислотного состава и секвенирования пептидов.
Результаты и обсуждение. На рисунке представлен результат
предварительного разделения гель-фильтрованием пептидов, раствори-
мых при рН 5,0. При растворении триптического гидролизата в 0,2 н.
Разделение растворимых при рН 5,0
триптических пептидов полиэдрина
ВЯП Л. segetum на колонке (2,5Х
X I 1 0 см) с сефадексом G-25. Ско-
рость элюции 30 мл/ч. Объем фрак-
ции 5 мл.
Separation of the soluble at рН 5.0
tryptic peptides of the polvhedrin of
A. segetum NPV on a 2.5X110 cm
column with Sephadex G-25. Flow
rate — 30 ml/hour. Column fraction —
5 ml.
уксусной кислоте (120 мг в 5 мл) образуется суспензия, величина рН
которой 5,0. Нерастворимый материал (ТН) удаляли центрифугирова-
нием. При разделении пептидов, растворимых при рН 5,0, часть мате-
риала осаждалась на колонке в результате снижения рН с 5,0 до 2,7
Номер ерракции
312 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, т. 1, № б
313 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, т. 1, № б
Аминокислотный состав триптических пептидов полиэдрина ВЯП A. segetum
Amino acid composition of a tryptic peptides of the polyhedrin of the nuclear polyhedrosis virus
(pH 0,2 н. ускусной кислоты). Этот материал элюировали с колонки
0,3 н. раствором аммиака. Дальнейшее разделение и очистку пепти-
дов из фракций I—VI, полученных гель-фильтрованием через сефа-
декс, осуществляли высоковольтным электрофорезом и хроматографи-
ей на бумаге.
В табл. 1 приведен аминокислотный состав полученных пептидов,
в табл. 2 — их строение и стадии очистки.
Строение пептида Т5 было выяснено, исходя из аминокислотного
состава и подвижности пептида при электрофорезе (рН 6,5). Из под-
вижности пептида следует, что он содержит два остатка лизина.
В пептиде Т21 дансил-методом не удается определение N-концево-
го остатка аминокислоты. По аналогии с соответствующим триптиче-
ским пептидом полиэдрина ВЯП B.mori [6] предполагается, что пеп-
тид Т12 содержит на N-конце остаток глутамина, который превратился
в пирролидонкарбоновую кислоту в процессе выделения пептида.
Таким образом, всего получено 36 пептидов, насчитывающих в
314 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, т. 1, № б
(NPV) of A. segetum
Т10 т и Т12 Т13 Т13' Т14 Т15 Т16 С17
1,0(1) 2 , 0 ( 2 ) 1 ,0(1) 1,0(1) 1 ,2 (1)
— 1,0(1) — — — — , 0 , 8 ( 1 )
1,0(1) — 1,0(1) 1 ,0(1) — , 2 , 2 ( 2 )
2 ,1 (2 ) 1 ,2(1) — — — 4,1(4) 0 , 9 ( 1 )
0 , 9 ( 1 ) — 1,1(1) — — — 1,6(2) 1 ,0(1)
— — 1,0(1) 0 , 8 ( 1 ) — 0,9(1) —
1,0(1) — — 1,0(1) 1 ,1(1) 3,7(4) 1 ,0(1)
— 0 ,9 (1 ) — — — 1,0(1) 2 ,1 (2)
— — 1,2(1) 1,2(1) — — —
— —
1,2(1)
— — — 2,0 (2)
0 , 9 ( 1 ) 1,5~(2) — — 2,2(3) —
— 0 , 3 ( 1 ) — — 0,7(1) —
0 ,8 (1 ) — — — 1,7(2) —
2,0 (2) — 1,0(1) — — 0 , 8 ( 1 )
1,Г(1) 1,0(1) — 2,7(3)
— — + ( 1 ) — + ( 1 )
— ·
5 3 8 8 3 4 5 19 12
Т25' Т26 Т26' Т27 Т28 Т28' Т29 тзо Т31
— — — — — — 0 ,9 (1 ) 1,0(1) —
1,0(1) 0 , 9 ( 1 ) — — — — Ζ —
2 , 0 ( 2 ) 1 .1(1) 1.1 (1) 2 ,2 (2 ) 1 ,1(1) 1,1 (1) — 2 ,1 (2 )
— — — — 0 , 9 ( 1 ) 1,0(1)
0 , 9 ( 1 ) — — — 1,1 (1) 0 ,9 (1 ) 0 , 9 ( 1 ) — 0 , 9 ( 1 )
2 ,2 (2 ) 1 ,3(1) 1 ,3(1) — 4,7 (5) 4 ,6 (5 ) — 2,1 (2)
—
1,3(1)
— — — — 1,5(2)
— — — — 1,3(1) 1,0(1)
— ·
1,0(1)
— — — — 0 , 9 ( 1 ) 1,0(1) — 1.1 (1)
0,8~(1) 0 , 5 ( 1 ) 0,5~(1) 0 , 9 ( 1 ) — — — 1 ,00) 0 ,6 (1 )
0 , 7 ( 1 ) 0 ,5 (1 ) 0 , 7 ( 1 ) ι .5(2) 1,6(2) . 0 ,4 (1 ) 0 ,5 (1 )
— 2 ,5 (3 ) 1,6(2) 3 ,0 (3 ) — 0 , 6 ( 1 )
1 .2(1) 0 ,6 (1 ) 0 , 6 ( 1 ) 0 ,7 (1 ) — — — — 1,0(1)
0 ,9 (1 ) 1.0(1) 1 ,0(1) — — 1,2(1) — 1,0(1)
— + ( 1 ) + ( 1 ) — — — —
10 8 7 4 15 14 6 2 14
сумме 263 остатка аминокислот. Выяснена полная или частичная ами-
нокислотная последовательность 24 пептидов. Пять пептидов, обозна-
ченные штрихом, имеют последовательности, перекрывающиеся с пос-
ледовательностями одноименных пептидов без штриха. 31 пептид с
уникальными аминокислотными последовательностями насчитывают
226 остатков, что составляет 93 % длины всей полипептидной цепи бел-
ка, если считать, что полиэдрин ВЯП A. segetum имеет молекулярную
массу 28000 и содержит 244 остатка аминокислот [1]. Сопоставление
строения пептидов с известной аминокислотной последовательностью
полиэдрина ВЯП В. morl [5] дает возможность локализовать их вдоль
полипептидной цепи и реконструировать таким путем два крупных
фрагмента полиэдрина ВЯП A. segetum. N-концевой остаток метиони-
на полипептидной цепи определен ранее на целом белке [2].
По реконструированным фрагментам можно рассчитать степень
гомологии их с аналогичными фрагментами полиэдрина ВЯП В. mori,
Galleria mellonella и Porthetria dispar [3], приняв принцип расчета,
315 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, т. 1, № б
Т а б л и ц а 2
Аминокислотная последовательность триптических пептидов полиэдрина ВЯП
A. і е get urn
Amino acid sequence of a tryptic peptides of the polyhedrin of A. segetum NPV
П р и м е ч а н и е . I—IV— фракции, полученные гель-фильтрованием через сефадекс;
ЭФ1, ЭФ2 — высоковольтный электрофорез в электролитах при рН 6,5 и 1,9 соот-
ветственно [4]; БХ — хроматография на бумаге в системе н-бутанол; уксусная кис-
лота: пиридин: вода ( 1 5 : 3 : 1 0 : 1 2 ) ; стрелками обозначены стадии ступенчатой дег-
радации.
316 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, т. 1, № б
избранный нами для полиэдринов бакуловирусов [3]. Степень гомологии
реконструированных фрагментов полиэдрина ВЯП A. segetum с анало-
гичными фрагментами полиэдрина перечисленных выше ВЯП равна со-
ответственно— 8 4 % , 82% и 8 0 % . Очевидно, что все исследованные
нами полиэдрины [3, 4] можно отнести к группе высокогомологичных
белков.
THE STRUCTURE OF THE TRYPTIC PEPTIDES OF POLYHEDRIN
OF THE NUCLEAR POLYHEDROSIS VIRUS OF AGROTIS SEGETUM
N. M. Gusak, E. A. Kozlov, Ν. V. Rodnin, S. B. Serebryany
Institute of Molecular Biology and Genetics,
Academy of Sciences of the Ukrainian SSR, Kiev
S u m m а г у
36 peptides comprising 263 amino acid residues are isolated from the tryptic hydrolyzate
of the polyhedrin of the nuclear polyhedrosis virus of Agrotis segetum and amino acid
sequence of 24 peptides are determined. Two extended f ragments (12-173 and 181-244)
comprising 226 amino acid residues are constructed that accounts for 93 % of the length
of the whole polyhedrin polypeptide chain.
1. Сравнительное биохимическое исследование полиэдренных белков вирусов ядерного
полиэдроза / Э. А. Козлов, Т. Л. Левитина, Η. М. Гусак и др.— Биохимия, 1978, 43,
№ 12, с. 2189—2195.
2. Некоторые физико-химические свойства белка тел включений вируса ядерного по-
лиэфроза и вируса гранулеза озимой совки, Agrotis segetum / Э. А. Козлов, Т. JI. Ле-
витина, Η. М. Гусак, С. Б. Серебряный.— Биополимеры и клетка, 1985, 1, № 3,
с. 121 — 124.
3. Сравнение аминокислотной последовательности белков тел включений вирусов ядер-
ного полиэдроза тутового, непарного шелкопрядов и большой вощинной моли /
3 . А. Козлов, Т. Л. Левитина, Η. М. Гусак и др.— Биоорган, химия, 1981, 7, № 7,
с. 1008—1015;
4. Козлов Э. Α., Серебряный С. Б. Строение некоторых триптических пептидов поли-
эдрина вируса ядерного полиэдроза капустной совки, Mamestra brassicae.— Биопо-
лимеры и клетка, 1985, 1, № 4, с. 194—198.
5. Реконструкция полипептидной цепи белка тел включений вируса ядерного полиэдро-
за тутового шелкопряда. Полная аминокислотная последовательность / Э. А. Козлов,
Т. Л. Левитина, М. С. Кацман и др.— Биоорган, химия, 1978, 4, № 8, с. 1048—1053.
6. 7 риптические фрагменты малеилированного белка тел включений вируса ядерного
полиэдроза тутового шелкопряда. 2. Аминокислотная последовательность фрагмен-
тов / Э. А. Козлов, Т. Л. Левитина, М. С. Кацман и др.— Биоорган, химия, 1978,
4, № 8, с. 1036—1047.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Получено 28.08.84
Киев
317 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1985, т. 1, № б
|