Recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue for preparation of affinity chromatography stationary phase and immunosensor applications

Recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue for preparation of affinity chromatography stationary phase and immunosensor applications

Aim. Engineering of recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue (SPA-Cys) for preparation of affinity chromatography stationary phase and formation of bioselective element of immunosensor. Methods. DNA sequences encoding IgG-binding region of SPA, His-tag and cysteine were genetically...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:
Bibliographische Detailangaben
Veröffentlicht in:Вiopolymers and Cell
Datum:2015
Hauptverfasser: Gorbatiuk, O.B., Bakhmachuk, A.O., Dubey, L.V., Usenko, M.O., Irodov, D.M., Okunev, O.V., Kostenko, O.M., Rachkov, A.E., Kordium, V.A.
Format: Artikel
Sprache:English
Veröffentlicht: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2015
Schlagworte:
Molecular and Cell Biotechnologies
Online Zugang:https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152442
Tags: Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:Recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue for preparation of affinity chromatography stationary phase and immunosensor applications / O.B. Gorbatiuk, A.O. Bakhmachuk, L.V. Dubey, M.O. Usenko, D.M. Irodov, O.V. Okunev, O.M. Kostenko, A.E. Rachkov, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2015. — Т. 31, № 2. — С. 115-122. — Бібліогр.: 22 назв. — англ.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-152442
record_format dspace
spelling Gorbatiuk, O.B.
Bakhmachuk, A.O.
Dubey, L.V.
Usenko, M.O.
Irodov, D.M.
Okunev, O.V.
Kostenko, O.M.
Rachkov, A.E.
Kordium, V.A.
2019-06-11T17:26:07Z
2019-06-11T17:26:07Z
2015
Recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue for preparation of affinity chromatography stationary phase and immunosensor applications / O.B. Gorbatiuk, A.O. Bakhmachuk, L.V. Dubey, M.O. Usenko, D.M. Irodov, O.V. Okunev, O.M. Kostenko, A.E. Rachkov, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2015. — Т. 31, № 2. — С. 115-122. — Бібліогр.: 22 назв. — англ.
0233-7657
DOI: http://biopolymers.org.ua/doi/bc.0008D5
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152442
579.69 + 577.112
Aim. Engineering of recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue (SPA-Cys) for preparation of affinity chromatography stationary phase and formation of bioselective element of immunosensor. Methods. DNA sequences encoding IgG-binding region of SPA, His-tag and cysteine were genetically fused and expressed in E. coli. SPA-Cys was immobilized on maleimide-functionalized silica beads for affinity chromatography stationary phase preparation and on a gold sensor surface as a bioselective element of immunosensor. Results. SPA-Cys was expressed at a high-level in a soluble form. The target protein was purified and showed a high IgG-binding activity. The capacity of the obtained SPA-Cys-based affinity chromatography stationary phase was 10–12 mg of IgG /ml. The purity of eluted IgG was more than 95 % in one-step purification procedure. The developed SPA-Cys-based bioselective element of immunosensor selectively interacted with human IgG and did not interact with the control proteins. Conclusions. The recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue was successfully used for the preparation of affinity chromatography stationary phase and formation of the bioselective element of immunosensor.
Цель. Получение рекомбинантного белка А Staphylococcus aureus с остатком цистеина (SPA-Cys) и его применение для аффинной хроматографии и формирования биоселективного элемента иммуносенсора. Методы. Генно-инженерными методами конструировали и экспрессировали в E. coli последовательность ДНК, которая кодирует пять IgG-связывающих доменов SPA, His-таг и цистеин. Полученный рекомбинантный белок SPA-Cys иммобилизовали на малеимид-активированных микрогранулах силикагеля для приготовления биоафинного сорбента и на золотой сенсорной поверхности для разработки иммуносенсора. Результаты. Cинтезом в E. coli был получен белок SPA-Cys в растворимой форме с высоким выходом. Очищенный рекомбинантный белок А имеет высокую IgG-связывающую активность. Емкость синтезированного с использованием SPA-Cys биоафинного сорбента составляла 10–12 мг IgG/мл. Одностадийная процедура аффинной хроматографии сыворотки крови позволяет получать IgG с чистотой более 95 %. Показано, что биоселек­тивный элемент иммуносенсора, сформированный на ос­нове SPA-Cys, избирательно взаимодействует с IgG человека и не взаимодействует с контрольными белками. Выво­ды. Рекомбинантный белок SPA-Cys был успешно использован для приготовления стационарной фазы аффинной хро­ма­то­графии и формирования биоселективного элемента иммуносенсора.
Мета. Отримання рекомбінантного білка А Staphylococcus aureus із залишком цистеїну (SPA-Cys) та його застосування для афінної хроматографії та формування біоселективного елемента імуносенсора. Методи. Генно-інженерними методами конструювали та експресували в E. coli послідовність ДНК, яка кодує п’ять IgG-зв’язувальних доменів SPA, His-таг і цистеїн. Отриманий рекомбінантний білок SPA-Cys іммобілізували на малеїмід-активованих мікрогранулах силікагелю для приготування біоафінного сорбенту та на золотій сенсорній поверхні для розробки імуносенсора. Результати. Cин­те­зом у E. coli був отриманий білок SPA-Cys в розчинній формі з високим виходом. Очищений рекомбінантний білок А має високу IgG-зв’язувальну активність. Ємність біоафінного сор­бенту з іммобілізованим SPA-Cys складала 10–12 мг IgG/мл. Одностадійна процедура афінної хроматографії сироватки кро­ві дозволяє отримувати IgG з чистотою більш ніж 95 %. По­казано, що біоселективний елемент імуносенсора, сформований на основі SPA-Cys, вибірково взаємодіє з IgG людини і не взаємодіє з контрольними білками. Висновки. Рекомбінантний білок SPA-Cys був успішно використаний для приготування стаціонарної фази афінної хроматографії і формування біоселективного елемента імуносенсора.
This work was partially supported by STCU project N 6044; 2015.
en
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
Вiopolymers and Cell
Molecular and Cell Biotechnologies
Recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue for preparation of affinity chromatography stationary phase and immunosensor applications
Рекомбінантний білок А Staphylococcus aureus із залишком цистеїну для приготування стаціонарної фази афінної хроматографії та для розробки імуносенсорів
Рекомбинантный белок A Staphylococcus aureus с остатком цистеина для приготовления стационарной фазы аффинной хроматографии и для разработки иммуносенсоров
Article
published earlier
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
title Recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue for preparation of affinity chromatography stationary phase and immunosensor applications
spellingShingle Recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue for preparation of affinity chromatography stationary phase and immunosensor applications
Gorbatiuk, O.B.
Bakhmachuk, A.O.
Dubey, L.V.
Usenko, M.O.
Irodov, D.M.
Okunev, O.V.
Kostenko, O.M.
Rachkov, A.E.
Kordium, V.A.
Molecular and Cell Biotechnologies
title_short Recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue for preparation of affinity chromatography stationary phase and immunosensor applications
title_full Recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue for preparation of affinity chromatography stationary phase and immunosensor applications
title_fullStr Recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue for preparation of affinity chromatography stationary phase and immunosensor applications
title_full_unstemmed Recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue for preparation of affinity chromatography stationary phase and immunosensor applications
title_sort recombinant staphylococcal protein a with cysteine residue for preparation of affinity chromatography stationary phase and immunosensor applications
author Gorbatiuk, O.B.
Bakhmachuk, A.O.
Dubey, L.V.
Usenko, M.O.
Irodov, D.M.
Okunev, O.V.
Kostenko, O.M.
Rachkov, A.E.
Kordium, V.A.
author_facet Gorbatiuk, O.B.
Bakhmachuk, A.O.
Dubey, L.V.
Usenko, M.O.
Irodov, D.M.
Okunev, O.V.
Kostenko, O.M.
Rachkov, A.E.
Kordium, V.A.
topic Molecular and Cell Biotechnologies
topic_facet Molecular and Cell Biotechnologies
publishDate 2015
language English
container_title Вiopolymers and Cell
publisher Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
format Article
title_alt Рекомбінантний білок А Staphylococcus aureus із залишком цистеїну для приготування стаціонарної фази афінної хроматографії та для розробки імуносенсорів
Рекомбинантный белок A Staphylococcus aureus с остатком цистеина для приготовления стационарной фазы аффинной хроматографии и для разработки иммуносенсоров
description Aim. Engineering of recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue (SPA-Cys) for preparation of affinity chromatography stationary phase and formation of bioselective element of immunosensor. Methods. DNA sequences encoding IgG-binding region of SPA, His-tag and cysteine were genetically fused and expressed in E. coli. SPA-Cys was immobilized on maleimide-functionalized silica beads for affinity chromatography stationary phase preparation and on a gold sensor surface as a bioselective element of immunosensor. Results. SPA-Cys was expressed at a high-level in a soluble form. The target protein was purified and showed a high IgG-binding activity. The capacity of the obtained SPA-Cys-based affinity chromatography stationary phase was 10–12 mg of IgG /ml. The purity of eluted IgG was more than 95 % in one-step purification procedure. The developed SPA-Cys-based bioselective element of immunosensor selectively interacted with human IgG and did not interact with the control proteins. Conclusions. The recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue was successfully used for the preparation of affinity chromatography stationary phase and formation of the bioselective element of immunosensor. Цель. Получение рекомбинантного белка А Staphylococcus aureus с остатком цистеина (SPA-Cys) и его применение для аффинной хроматографии и формирования биоселективного элемента иммуносенсора. Методы. Генно-инженерными методами конструировали и экспрессировали в E. coli последовательность ДНК, которая кодирует пять IgG-связывающих доменов SPA, His-таг и цистеин. Полученный рекомбинантный белок SPA-Cys иммобилизовали на малеимид-активированных микрогранулах силикагеля для приготовления биоафинного сорбента и на золотой сенсорной поверхности для разработки иммуносенсора. Результаты. Cинтезом в E. coli был получен белок SPA-Cys в растворимой форме с высоким выходом. Очищенный рекомбинантный белок А имеет высокую IgG-связывающую активность. Емкость синтезированного с использованием SPA-Cys биоафинного сорбента составляла 10–12 мг IgG/мл. Одностадийная процедура аффинной хроматографии сыворотки крови позволяет получать IgG с чистотой более 95 %. Показано, что биоселек­тивный элемент иммуносенсора, сформированный на ос­нове SPA-Cys, избирательно взаимодействует с IgG человека и не взаимодействует с контрольными белками. Выво­ды. Рекомбинантный белок SPA-Cys был успешно использован для приготовления стационарной фазы аффинной хро­ма­то­графии и формирования биоселективного элемента иммуносенсора. Мета. Отримання рекомбінантного білка А Staphylococcus aureus із залишком цистеїну (SPA-Cys) та його застосування для афінної хроматографії та формування біоселективного елемента імуносенсора. Методи. Генно-інженерними методами конструювали та експресували в E. coli послідовність ДНК, яка кодує п’ять IgG-зв’язувальних доменів SPA, His-таг і цистеїн. Отриманий рекомбінантний білок SPA-Cys іммобілізували на малеїмід-активованих мікрогранулах силікагелю для приготування біоафінного сорбенту та на золотій сенсорній поверхні для розробки імуносенсора. Результати. Cин­те­зом у E. coli був отриманий білок SPA-Cys в розчинній формі з високим виходом. Очищений рекомбінантний білок А має високу IgG-зв’язувальну активність. Ємність біоафінного сор­бенту з іммобілізованим SPA-Cys складала 10–12 мг IgG/мл. Одностадійна процедура афінної хроматографії сироватки кро­ві дозволяє отримувати IgG з чистотою більш ніж 95 %. По­казано, що біоселективний елемент імуносенсора, сформований на основі SPA-Cys, вибірково взаємодіє з IgG людини і не взаємодіє з контрольними білками. Висновки. Рекомбінантний білок SPA-Cys був успішно використаний для приготування стаціонарної фази афінної хроматографії і формування біоселективного елемента імуносенсора.
issn 0233-7657
url https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152442
citation_txt Recombinant Staphylococcal protein A with cysteine residue for preparation of affinity chromatography stationary phase and immunosensor applications / O.B. Gorbatiuk, A.O. Bakhmachuk, L.V. Dubey, M.O. Usenko, D.M. Irodov, O.V. Okunev, O.M. Kostenko, A.E. Rachkov, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2015. — Т. 31, № 2. — С. 115-122. — Бібліогр.: 22 назв. — англ.
work_keys_str_mv AT gorbatiukob recombinantstaphylococcalproteinawithcysteineresidueforpreparationofaffinitychromatographystationaryphaseandimmunosensorapplications
AT bakhmachukao recombinantstaphylococcalproteinawithcysteineresidueforpreparationofaffinitychromatographystationaryphaseandimmunosensorapplications
AT dubeylv recombinantstaphylococcalproteinawithcysteineresidueforpreparationofaffinitychromatographystationaryphaseandimmunosensorapplications
AT usenkomo recombinantstaphylococcalproteinawithcysteineresidueforpreparationofaffinitychromatographystationaryphaseandimmunosensorapplications
AT irodovdm recombinantstaphylococcalproteinawithcysteineresidueforpreparationofaffinitychromatographystationaryphaseandimmunosensorapplications
AT okunevov recombinantstaphylococcalproteinawithcysteineresidueforpreparationofaffinitychromatographystationaryphaseandimmunosensorapplications
AT kostenkoom recombinantstaphylococcalproteinawithcysteineresidueforpreparationofaffinitychromatographystationaryphaseandimmunosensorapplications
AT rachkovae recombinantstaphylococcalproteinawithcysteineresidueforpreparationofaffinitychromatographystationaryphaseandimmunosensorapplications
AT kordiumva recombinantstaphylococcalproteinawithcysteineresidueforpreparationofaffinitychromatographystationaryphaseandimmunosensorapplications
AT gorbatiukob rekombínantniibílokastaphylococcusaureusízzališkomcisteínudlâprigotuvannâstacíonarnoífaziafínnoíhromatografíítadlârozrobkiímunosensorív
AT bakhmachukao rekombínantniibílokastaphylococcusaureusízzališkomcisteínudlâprigotuvannâstacíonarnoífaziafínnoíhromatografíítadlârozrobkiímunosensorív
AT dubeylv rekombínantniibílokastaphylococcusaureusízzališkomcisteínudlâprigotuvannâstacíonarnoífaziafínnoíhromatografíítadlârozrobkiímunosensorív
AT usenkomo rekombínantniibílokastaphylococcusaureusízzališkomcisteínudlâprigotuvannâstacíonarnoífaziafínnoíhromatografíítadlârozrobkiímunosensorív
AT irodovdm rekombínantniibílokastaphylococcusaureusízzališkomcisteínudlâprigotuvannâstacíonarnoífaziafínnoíhromatografíítadlârozrobkiímunosensorív
AT okunevov rekombínantniibílokastaphylococcusaureusízzališkomcisteínudlâprigotuvannâstacíonarnoífaziafínnoíhromatografíítadlârozrobkiímunosensorív
AT kostenkoom rekombínantniibílokastaphylococcusaureusízzališkomcisteínudlâprigotuvannâstacíonarnoífaziafínnoíhromatografíítadlârozrobkiímunosensorív
AT rachkovae rekombínantniibílokastaphylococcusaureusízzališkomcisteínudlâprigotuvannâstacíonarnoífaziafínnoíhromatografíítadlârozrobkiímunosensorív
AT kordiumva rekombínantniibílokastaphylococcusaureusízzališkomcisteínudlâprigotuvannâstacíonarnoífaziafínnoíhromatografíítadlârozrobkiímunosensorív
AT gorbatiukob rekombinantnyibelokastaphylococcusaureussostatkomcisteinadlâprigotovleniâstacionarnoifazyaffinnoihromatografiiidlârazrabotkiimmunosensorov
AT bakhmachukao rekombinantnyibelokastaphylococcusaureussostatkomcisteinadlâprigotovleniâstacionarnoifazyaffinnoihromatografiiidlârazrabotkiimmunosensorov
AT dubeylv rekombinantnyibelokastaphylococcusaureussostatkomcisteinadlâprigotovleniâstacionarnoifazyaffinnoihromatografiiidlârazrabotkiimmunosensorov
AT usenkomo rekombinantnyibelokastaphylococcusaureussostatkomcisteinadlâprigotovleniâstacionarnoifazyaffinnoihromatografiiidlârazrabotkiimmunosensorov
AT irodovdm rekombinantnyibelokastaphylococcusaureussostatkomcisteinadlâprigotovleniâstacionarnoifazyaffinnoihromatografiiidlârazrabotkiimmunosensorov
AT okunevov rekombinantnyibelokastaphylococcusaureussostatkomcisteinadlâprigotovleniâstacionarnoifazyaffinnoihromatografiiidlârazrabotkiimmunosensorov
AT kostenkoom rekombinantnyibelokastaphylococcusaureussostatkomcisteinadlâprigotovleniâstacionarnoifazyaffinnoihromatografiiidlârazrabotkiimmunosensorov
AT rachkovae rekombinantnyibelokastaphylococcusaureussostatkomcisteinadlâprigotovleniâstacionarnoifazyaffinnoihromatografiiidlârazrabotkiimmunosensorov
AT kordiumva rekombinantnyibelokastaphylococcusaureussostatkomcisteinadlâprigotovleniâstacionarnoifazyaffinnoihromatografiiidlârazrabotkiimmunosensorov
first_indexed 2025-12-07T21:09:31Z
last_indexed 2025-12-07T21:09:31Z
_version_ 1850885297833771008

Ähnliche Einträge