Construction, expression, functional characterization and practical application of fusion protein SPA-BAPmut
Aim. The creation of genetically engineered fusion protein SPA-BAPmut and its application as a secondary immunoreagent in immunoassays. Methods. Gene cloning, PCR, electrophoresis, DNA sequencing, bacteria cells culturing, protein expression and purification, ELISA, Western-blotting were used. Resul...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Вiopolymers and Cell |
|---|---|
| Datum: | 2013 |
| Hauptverfasser: | , , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Englisch |
| Veröffentlicht: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2013
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152487 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Construction, expression, functional characterization and practical application of fusion protein SPA-BAPmut / O.B. Gorbatiuk, O.V. Okunev, Yu.S. Nikolaev, O.V. Svyatenko, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2013. — Т. 29, №. 1. — С. 49-54. — Бібліогр.: 12 назв. — англ, укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1862725371942666240 |
|---|---|
| author | Gorbatiuk, O.B. Okunev, O.V. Nikolaev, Yu.S. Svyatenko, O.V. Kordium, V.A. |
| author_facet | Gorbatiuk, O.B. Okunev, O.V. Nikolaev, Yu.S. Svyatenko, O.V. Kordium, V.A. |
| citation_txt | Construction, expression, functional characterization and practical application of fusion protein SPA-BAPmut / O.B. Gorbatiuk, O.V. Okunev, Yu.S. Nikolaev, O.V. Svyatenko, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2013. — Т. 29, №. 1. — С. 49-54. — Бібліогр.: 12 назв. — англ, укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Вiopolymers and Cell |
| description | Aim. The creation of genetically engineered fusion protein SPA-BAPmut and its application as a secondary immunoreagent in immunoassays. Methods. Gene cloning, PCR, electrophoresis, DNA sequencing, bacteria cells culturing, protein expression and purification, ELISA, Western-blotting were used. Results. The DNA sequences encoding Staphylococcus aureus protein A (SPA) and bacterial alkaline phosphatase with enhanced catalytic activity (BAPmut) were used for construction of gene encoding fusion protein SPA-BAPmut that was expressed in the high-productive Escherichia coli system and obtained in a soluble form. Cultivation conditions to provide a high-level expression of SPA-BAPmut (> 1 g/l) were determined. The target protein was obtained with purity more than 95 % using IMAX method. SPA-BAPmut is thermostable, and both parts of fusion protein (SPA and BAPmut) retain their IgG binding and alkaline phosphatase activity for a long time. SPA-BAPmut was used as a substitute of secondary antibodies in immunoassays. As little as 5 ng of the antigen could be detected in Western blotting and 1 g/ml of IgG in ELISA. Conclusions. The possibility of using SPA-BAPmut as universal secondary immunoreagent for different types of immunoassays was shown.
Мета. Створення генно-інженерного злитого білка SPA-BAPmut та його застосування як вторинного імунореагенту в імунологічних тестах. Методи. Клонування генів, ПЛР, секвенування ДНК, культивування бактерій, електрофорез, синтез і очищення білків, ELISA, вестерн-блот. Результати. З використанням послідовновностей ДНК, що кодують білок А Staphylococcus aureus (SPA) і бактерійну лужну фосфатазу з покращеними каталітичними властивостями (BAPmut), сконструйовано ген злитого білка SPA-BAPmut та забезпечено його препаративне отримання у розчинній формі внаслідок синтезу в клітинах Escherichia coli. Визначено умови ферментації, за яких вихід SPA-ВAPmut становить приблизно 1 г/л культури E. coli. Із застосуванням методу металоафінної хроматографії одержано цільовий білок з чистотою понад 95 %. SPA-ВAPmut термостабільний, а обидва його компоненти (SPA і ВAPmut) зберігають імуноглобулінзв’язувальну і фосфатазну активність тривалий час. SPA-BAPmut дозволяє виявляти щонайменше 5 нг антигену та 1 мкг/мл антитіл. Висновки. Показано можливість використання SPA-ВAPmut як універсального вторинного імунореагенту в імунохімічних тестах.
Цель. Создание генно-инженерного слитого белка SPA-BAPmut и eго использование как вторичного иммунореагента в иммунологических тестах. Методы. Клонирование генов, ПЛР, секвенирование ДНК, культивирование бактерий, электрофорез, биосинтез и очистка белков, ELISA, вестерн-блот. Результаты. С использованием последовательностей ДНК, кодирующих белок А Staphylo- coccus aureus (SPA) и бактериальную щелочную фосфатазу с улучшенными каталитическими свойствами (BAPmut), сконструирован ген слитого белка SPA-BAPmut и обеспечено его препаративное получение в растворимой форме вследствие синтеза в клетках Escherichia coli. Определены условия ферментации, при которых выход SPA-ВAPmut составляет около 1 г/л культуры E. coli. С применением метода металлоаффинной хроматографии целевой белок получен с чистотой более 95 %. SPA-ВAPmut термостабилен, а оба его компонента (SPA и ВAPmut) сохраняют иммуноглобулинсвязывающую и фосфатазную активность на протяжении длительного времени. SPA-BAPmut позволяет детектировать 5 нг антигена и 1 мкг/мл антител. Выводы. Показана возможность применения SPA-ВAPmut как универсального вторичного иммунореагента в иммунохимических тестах.
|
| first_indexed | 2025-12-07T18:52:43Z |
| format | Article |
| fulltext | |
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-152487 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | English |
| last_indexed | 2025-12-07T18:52:43Z |
| publishDate | 2013 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Gorbatiuk, O.B. Okunev, O.V. Nikolaev, Yu.S. Svyatenko, O.V. Kordium, V.A. 2019-06-11T19:19:59Z 2019-06-11T19:19:59Z 2013 Construction, expression, functional characterization and practical application of fusion protein SPA-BAPmut / O.B. Gorbatiuk, O.V. Okunev, Yu.S. Nikolaev, O.V. Svyatenko, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2013. — Т. 29, №. 1. — С. 49-54. — Бібліогр.: 12 назв. — англ, укр. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000805 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152487 579.69 + 577.112 Aim. The creation of genetically engineered fusion protein SPA-BAPmut and its application as a secondary immunoreagent in immunoassays. Methods. Gene cloning, PCR, electrophoresis, DNA sequencing, bacteria cells culturing, protein expression and purification, ELISA, Western-blotting were used. Results. The DNA sequences encoding Staphylococcus aureus protein A (SPA) and bacterial alkaline phosphatase with enhanced catalytic activity (BAPmut) were used for construction of gene encoding fusion protein SPA-BAPmut that was expressed in the high-productive Escherichia coli system and obtained in a soluble form. Cultivation conditions to provide a high-level expression of SPA-BAPmut (> 1 g/l) were determined. The target protein was obtained with purity more than 95 % using IMAX method. SPA-BAPmut is thermostable, and both parts of fusion protein (SPA and BAPmut) retain their IgG binding and alkaline phosphatase activity for a long time. SPA-BAPmut was used as a substitute of secondary antibodies in immunoassays. As little as 5 ng of the antigen could be detected in Western blotting and 1 g/ml of IgG in ELISA. Conclusions. The possibility of using SPA-BAPmut as universal secondary immunoreagent for different types of immunoassays was shown. Мета. Створення генно-інженерного злитого білка SPA-BAPmut та його застосування як вторинного імунореагенту в імунологічних тестах. Методи. Клонування генів, ПЛР, секвенування ДНК, культивування бактерій, електрофорез, синтез і очищення білків, ELISA, вестерн-блот. Результати. З використанням послідовновностей ДНК, що кодують білок А Staphylococcus aureus (SPA) і бактерійну лужну фосфатазу з покращеними каталітичними властивостями (BAPmut), сконструйовано ген злитого білка SPA-BAPmut та забезпечено його препаративне отримання у розчинній формі внаслідок синтезу в клітинах Escherichia coli. Визначено умови ферментації, за яких вихід SPA-ВAPmut становить приблизно 1 г/л культури E. coli. Із застосуванням методу металоафінної хроматографії одержано цільовий білок з чистотою понад 95 %. SPA-ВAPmut термостабільний, а обидва його компоненти (SPA і ВAPmut) зберігають імуноглобулінзв’язувальну і фосфатазну активність тривалий час. SPA-BAPmut дозволяє виявляти щонайменше 5 нг антигену та 1 мкг/мл антитіл. Висновки. Показано можливість використання SPA-ВAPmut як універсального вторинного імунореагенту в імунохімічних тестах. Цель. Создание генно-инженерного слитого белка SPA-BAPmut и eго использование как вторичного иммунореагента в иммунологических тестах. Методы. Клонирование генов, ПЛР, секвенирование ДНК, культивирование бактерий, электрофорез, биосинтез и очистка белков, ELISA, вестерн-блот. Результаты. С использованием последовательностей ДНК, кодирующих белок А Staphylo- coccus aureus (SPA) и бактериальную щелочную фосфатазу с улучшенными каталитическими свойствами (BAPmut), сконструирован ген слитого белка SPA-BAPmut и обеспечено его препаративное получение в растворимой форме вследствие синтеза в клетках Escherichia coli. Определены условия ферментации, при которых выход SPA-ВAPmut составляет около 1 г/л культуры E. coli. С применением метода металлоаффинной хроматографии целевой белок получен с чистотой более 95 %. SPA-ВAPmut термостабилен, а оба его компонента (SPA и ВAPmut) сохраняют иммуноглобулинсвязывающую и фосфатазную активность на протяжении длительного времени. SPA-BAPmut позволяет детектировать 5 нг антигена и 1 мкг/мл антител. Выводы. Показана возможность применения SPA-ВAPmut как универсального вторичного иммунореагента в иммунохимических тестах. en Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Вiopolymers and Cell Molecular and Cell Biotechnologies Construction, expression, functional characterization and practical application of fusion protein SPA-BAPmut Конструювання, синтез, функціональна характеристика і практичне застосування злитого білка SPA-ВAPmut Конструирование, синтез, функциональная характеристика и практическое применение слитого белка SPA-ВAPmut Article published earlier |
| spellingShingle | Construction, expression, functional characterization and practical application of fusion protein SPA-BAPmut Gorbatiuk, O.B. Okunev, O.V. Nikolaev, Yu.S. Svyatenko, O.V. Kordium, V.A. Molecular and Cell Biotechnologies |
| title | Construction, expression, functional characterization and practical application of fusion protein SPA-BAPmut |
| title_alt | Конструювання, синтез, функціональна характеристика і практичне застосування злитого білка SPA-ВAPmut Конструирование, синтез, функциональная характеристика и практическое применение слитого белка SPA-ВAPmut |
| title_full | Construction, expression, functional characterization and practical application of fusion protein SPA-BAPmut |
| title_fullStr | Construction, expression, functional characterization and practical application of fusion protein SPA-BAPmut |
| title_full_unstemmed | Construction, expression, functional characterization and practical application of fusion protein SPA-BAPmut |
| title_short | Construction, expression, functional characterization and practical application of fusion protein SPA-BAPmut |
| title_sort | construction, expression, functional characterization and practical application of fusion protein spa-bapmut |
| topic | Molecular and Cell Biotechnologies |
| topic_facet | Molecular and Cell Biotechnologies |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152487 |
| work_keys_str_mv | AT gorbatiukob constructionexpressionfunctionalcharacterizationandpracticalapplicationoffusionproteinspabapmut AT okunevov constructionexpressionfunctionalcharacterizationandpracticalapplicationoffusionproteinspabapmut AT nikolaevyus constructionexpressionfunctionalcharacterizationandpracticalapplicationoffusionproteinspabapmut AT svyatenkoov constructionexpressionfunctionalcharacterizationandpracticalapplicationoffusionproteinspabapmut AT kordiumva constructionexpressionfunctionalcharacterizationandpracticalapplicationoffusionproteinspabapmut AT gorbatiukob konstruûvannâsintezfunkcíonalʹnaharakteristikaípraktičnezastosuvannâzlitogobílkaspavapmut AT okunevov konstruûvannâsintezfunkcíonalʹnaharakteristikaípraktičnezastosuvannâzlitogobílkaspavapmut AT nikolaevyus konstruûvannâsintezfunkcíonalʹnaharakteristikaípraktičnezastosuvannâzlitogobílkaspavapmut AT svyatenkoov konstruûvannâsintezfunkcíonalʹnaharakteristikaípraktičnezastosuvannâzlitogobílkaspavapmut AT kordiumva konstruûvannâsintezfunkcíonalʹnaharakteristikaípraktičnezastosuvannâzlitogobílkaspavapmut AT gorbatiukob konstruirovaniesintezfunkcionalʹnaâharakteristikaipraktičeskoeprimenenieslitogobelkaspavapmut AT okunevov konstruirovaniesintezfunkcionalʹnaâharakteristikaipraktičeskoeprimenenieslitogobelkaspavapmut AT nikolaevyus konstruirovaniesintezfunkcionalʹnaâharakteristikaipraktičeskoeprimenenieslitogobelkaspavapmut AT svyatenkoov konstruirovaniesintezfunkcionalʹnaâharakteristikaipraktičeskoeprimenenieslitogobelkaspavapmut AT kordiumva konstruirovaniesintezfunkcionalʹnaâharakteristikaipraktičeskoeprimenenieslitogobelkaspavapmut |