In vitro model for study the interaction between tumor and stromal cells
Aim. To develop a model to study the interaction between tumor and stromal cells in three-dimensional culture. Methods. Cultivation of HeLa cell lines and human dermal fibroblasts in monolayer and three-dimensional culture, immunofluorescent and immunohistochemical analysis. Results. In this work we...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Вiopolymers and Cell |
|---|---|
| Дата: | 2013 |
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | English |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2013
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152490 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | In vitro model for study the interaction between tumor and stromal cells / K.A.Shkarina, O.V. Cherednyk, I.O. Tykhonkova, A.I. Khoruzhenko // Вiopolymers and Cell. — 2013. — Т. 29, №. 1. — С. 79-82. — Бібліогр.: 12 назв. — англ, рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-152490 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Shkarina, K.A. Cherednyk, O.V. Tykhonkova, I.O. Khoruzhenko, A.I. 2019-06-11T19:21:40Z 2019-06-11T19:21:40Z 2013 In vitro model for study the interaction between tumor and stromal cells / K.A.Shkarina, O.V. Cherednyk, I.O. Tykhonkova, A.I. Khoruzhenko // Вiopolymers and Cell. — 2013. — Т. 29, №. 1. — С. 79-82. — Бібліогр.: 12 назв. — англ, рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.00080A https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152490 576 Aim. To develop a model to study the interaction between tumor and stromal cells in three-dimensional culture. Methods. Cultivation of HeLa cell lines and human dermal fibroblasts in monolayer and three-dimensional culture, immunofluorescent and immunohistochemical analysis. Results. In this work we present an approach based on a direct interaction between the cells of multicellular tumor spheroids and spheroids of fibroblasts. Subsequent immunofluorescence analysis allows to determine an origin of cells in the area of their contact. Conclusions. This model will be useful to study the basic mechanisms of carcinogenesis, and to find targets for anticancer therapy. Мета. Розробити модель для вивчення взаємодії пухлинних і стромальних клітин за умов тривимірної культури. Методи. Культивування клітин лінії HeLa і дермальних фібробластів людини в моношаровий і тривимірній культурі, імунофлуоресцентний та імуногістохімічний аналіз. Результати. Запропоновано підхід, що базується на дослідженні безпосередньої взаємодії клітин багатоклітинних сфероїдів пухлинних клітин і сфероїдів фібробластів. Подальший імунофлуоресцентний аналіз дає можливість визначити походження клітин у зоні їхнього контакту. Висновки. Описана модель буде корисною як для вивчення базових механізмів канцерогенезу, так і за пошуку мішеней для протипухлинної терапії. Цель. Разработать модель для изучения взаимодействия опухолевых и стромальных клеток в условиях трехмерной культуры. Методы. Культивирование клеток линии HeLa и дермальных фибробластов человека в монослойной и трехмерной культуре, иммунофлуоресцентный и иммуногистохимический анализ. Результаты. Предложен подход, базирующийся на исследовании непосредственных взаимодействий клеток многоклеточных сфероидов опухолевых клеток и сфероидов фибробластов. Последующий иммунофлуоресцентный анализ дает возможность определить происхождение клеток в зоне их контакта. Выводы. Описанная модель будет полезна как для изучения базовых механизмов канцерогенеза, так и при поиске мишеней для противоопухолевой терапии. en Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Вiopolymers and Cell Methods In vitro model for study the interaction between tumor and stromal cells Модель in vitro для дослідження взаємодії стромальних клітин і клітин пухлинного походження Модель in vitro для изучения взаимодействия стромальных клеток и клеток опухолевого происхождения Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
In vitro model for study the interaction between tumor and stromal cells |
| spellingShingle |
In vitro model for study the interaction between tumor and stromal cells Shkarina, K.A. Cherednyk, O.V. Tykhonkova, I.O. Khoruzhenko, A.I. Methods |
| title_short |
In vitro model for study the interaction between tumor and stromal cells |
| title_full |
In vitro model for study the interaction between tumor and stromal cells |
| title_fullStr |
In vitro model for study the interaction between tumor and stromal cells |
| title_full_unstemmed |
In vitro model for study the interaction between tumor and stromal cells |
| title_sort |
in vitro model for study the interaction between tumor and stromal cells |
| author |
Shkarina, K.A. Cherednyk, O.V. Tykhonkova, I.O. Khoruzhenko, A.I. |
| author_facet |
Shkarina, K.A. Cherednyk, O.V. Tykhonkova, I.O. Khoruzhenko, A.I. |
| topic |
Methods |
| topic_facet |
Methods |
| publishDate |
2013 |
| language |
English |
| container_title |
Вiopolymers and Cell |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Модель in vitro для дослідження взаємодії стромальних клітин і клітин пухлинного походження Модель in vitro для изучения взаимодействия стромальных клеток и клеток опухолевого происхождения |
| description |
Aim. To develop a model to study the interaction between tumor and stromal cells in three-dimensional culture. Methods. Cultivation of HeLa cell lines and human dermal fibroblasts in monolayer and three-dimensional culture, immunofluorescent and immunohistochemical analysis. Results. In this work we present an approach based on a direct interaction between the cells of multicellular tumor spheroids and spheroids of fibroblasts. Subsequent immunofluorescence analysis allows to determine an origin of cells in the area of their contact. Conclusions. This model will be useful to study the basic mechanisms of carcinogenesis, and to find targets for anticancer therapy.
Мета. Розробити модель для вивчення взаємодії пухлинних і стромальних клітин за умов тривимірної культури. Методи. Культивування клітин лінії HeLa і дермальних фібробластів людини в моношаровий і тривимірній культурі, імунофлуоресцентний та імуногістохімічний аналіз. Результати. Запропоновано підхід, що базується на дослідженні безпосередньої взаємодії клітин багатоклітинних сфероїдів пухлинних клітин і сфероїдів фібробластів. Подальший імунофлуоресцентний аналіз дає можливість визначити походження клітин у зоні їхнього контакту. Висновки. Описана модель буде корисною як для вивчення базових механізмів канцерогенезу, так і за пошуку мішеней для протипухлинної терапії.
Цель. Разработать модель для изучения взаимодействия опухолевых и стромальных клеток в условиях трехмерной культуры. Методы. Культивирование клеток линии HeLa и дермальных фибробластов человека в монослойной и трехмерной культуре, иммунофлуоресцентный и иммуногистохимический анализ. Результаты. Предложен подход, базирующийся на исследовании непосредственных взаимодействий клеток многоклеточных сфероидов опухолевых клеток и сфероидов фибробластов. Последующий иммунофлуоресцентный анализ дает возможность определить происхождение клеток в зоне их контакта. Выводы. Описанная модель будет полезна как для изучения базовых механизмов канцерогенеза, так и при поиске мишеней для противоопухолевой терапии.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152490 |
| citation_txt |
In vitro model for study the interaction between tumor and stromal cells / K.A.Shkarina, O.V. Cherednyk, I.O. Tykhonkova, A.I. Khoruzhenko // Вiopolymers and Cell. — 2013. — Т. 29, №. 1. — С. 79-82. — Бібліогр.: 12 назв. — англ, рос. |
| work_keys_str_mv |
AT shkarinaka invitromodelforstudytheinteractionbetweentumorandstromalcells AT cherednykov invitromodelforstudytheinteractionbetweentumorandstromalcells AT tykhonkovaio invitromodelforstudytheinteractionbetweentumorandstromalcells AT khoruzhenkoai invitromodelforstudytheinteractionbetweentumorandstromalcells AT shkarinaka modelʹinvitrodlâdoslídžennâvzaêmodíístromalʹnihklítiníklítinpuhlinnogopohodžennâ AT cherednykov modelʹinvitrodlâdoslídžennâvzaêmodíístromalʹnihklítiníklítinpuhlinnogopohodžennâ AT tykhonkovaio modelʹinvitrodlâdoslídžennâvzaêmodíístromalʹnihklítiníklítinpuhlinnogopohodžennâ AT khoruzhenkoai modelʹinvitrodlâdoslídžennâvzaêmodíístromalʹnihklítiníklítinpuhlinnogopohodžennâ AT shkarinaka modelʹinvitrodlâizučeniâvzaimodeistviâstromalʹnyhkletokikletokopuholevogoproishoždeniâ AT cherednykov modelʹinvitrodlâizučeniâvzaimodeistviâstromalʹnyhkletokikletokopuholevogoproishoždeniâ AT tykhonkovaio modelʹinvitrodlâizučeniâvzaimodeistviâstromalʹnyhkletokikletokopuholevogoproishoždeniâ AT khoruzhenkoai modelʹinvitrodlâizučeniâvzaimodeistviâstromalʹnyhkletokikletokopuholevogoproishoždeniâ |
| first_indexed |
2025-11-26T15:28:59Z |
| last_indexed |
2025-11-26T15:28:59Z |
| _version_ |
1850626522378928128 |
| fulltext |
UDC 576
Ìîäåëü in vitro äëÿ èçó÷åíèÿ âçàèìîäåéñòâèÿ
ñòðîìàëüíûõ êëåòîê è êëåòîê îïóõîëåâîãî
ïðîèñõîæäåíèÿ
Å. À. Øêàðèíà, Î. Â. ×åðåäíèê, È. À. Òèõîíêîâà, À. È. Õîðóæåíêî
Ãîñóäàðñòâåííàÿ êëþ÷åâàÿ ëàáîðàòîðèÿ ìîëåêóëÿðíîé è êëåòî÷íîé áèîëîãèè
Èíñòèòóò ìîëåêóëÿðíîé áèîëîãèè è ãåíåòèêè ÍÀÍ Óêðàèíû
Óë. Àêàäåìèêà Çàáîëîòíîãî, 150, Êèåâ, Óêðàèíà 03680
a.i.khoruzhenko@imbg.org.ua
Öåëü. Ðàçðàáîòàòü ìîäåëü äëÿ èçó÷åíèÿ âçàèìîäåéñòâèÿ îïóõîëåâûõ è ñòðîìàëüíûõ êëåòîê â óñëîâèÿõ
òðåõìåðíîé êóëüòóðû. Ìåòîäû. Êóëüòèâèðîâàíèå êëåòîê ëèíèè HeLa è äåðìàëüíûõ ôèáðîáëàñòîâ ÷å-
ëîâåêà â ìîíîñëîéíîé è òðåõìåðíîé êóëüòóðå, èììóíîôëóîðåñöåíòíûé è èììóíîãèñòîõèìè÷åñêèé àíà-
ëèç. Ðåçóëüòàòû. Ïðåäëîæåí ïîäõîä, áàçèðóþùèéñÿ íà èññëåäîâàíèè íåïîñðåäñòâåííûõ âçàèìîäåéñò-
âèé êëåòîê ìíîãîêëåòî÷íûõ ñôåðîèäîâ îïóõîëåâûõ êëåòîê è ñôåðîèäîâ ôèáðîáëàñòîâ. Ïîñëåäóþùèé
èììóíîôëóîðåñöåíòíûé àíàëèç äàåò âîçìîæíîñòü îïðåäåëèòü ïðîèñõîæäåíèå êëåòîê â çîíå èõ êîí-
òàêòà. Âûâîäû. Îïèñàííàÿ ìîäåëü áóäåò ïîëåçíà êàê äëÿ èçó÷åíèÿ áàçîâûõ ìåõàíèçìîâ êàíöåðîãåíåçà,
òàê è ïðè ïîèñêå ìèøåíåé äëÿ ïðîòèâîîïóõîëåâîé òåðàïèè.
Êëþ÷åâûå ñëîâà: âçàèìîäåéñòâèå ñòðîìàëüíûõ è îïóõîëåâûõ êëåòîê, òðåõìåðíûå êóëüòóðû çëîêà÷åñ-
òâåííûõ êëåòîê, ìíîãîêëåòî÷íûå ñôåðîèäû.
Ââåäåíèå. Â óñëîâèÿõ îðãàíèçìà ðîñò è ðàçâèòèå
ðàêîâîé îïóõîëè ïðîèñõîäÿò â êîíòåêñòå ñèñòåìû
ñëîæíûõ ãîìî- è ãåòåðîòèïè÷åñêèõ ìåæêëåòî÷íûõ
âàçèìîäåéñòâèé, îêàçûâàþùèõ ñóùåñòâåííîå âëè-
ÿíèå íà âûæèâàíèå è ïðîëèôåðàöèþ êëåòîê îïóõî-
ëè, à òàêæå íà ïðîöåññû èíâàçèè, àíãèîãåíåçà è ìå-
òàñòàçèðîâàíèÿ [1]. Ôèáðîáëàñòû ÿâëÿþòüñÿ îñíîâ-
íûì êëåòî÷íûì êîìïîíåíòîì ñòðîìû ðàêîâîé îïó-
õîëè. Îíè ñåêðåòèðóþò êîìïîíåíòû ìåæêëåòî÷íî-
ãî ìàòðèêñà, òàêèå êàê ôèáðèëëÿðíûå êîëëàãåíû,
ôèáðîíåêòèí è òåíàñöèí Ñ, à òàêæå ïðîäóöèðóþò
çíà÷èòåëüíîå êîëè÷åñòâî àóòî- è ïàðàêðèííûõ ôàê-
òîðîâ ðîñòà [2, 3].  íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ ôèáðîáëà-
ñòû òàêæå àêòèâíî ó÷àñòâóþò â ïðåîáðàçîâàíèè
ìåæêëåòî÷íîãî ìàòðèêñà çà ñ÷åò ñåêðåöèè ìàòðèê-
ñíûõ ìåòàëëîïðîòåèíàç MMP2, MMP3 è MMP9 [1].
Èçâåñòíî, ÷òî ðàêîâûå êëåòêè ñïîñîáíû âëèÿòü
íà ñâîéñòâà îêðóæàþùåé ñîåäèíèòåëüíîòêàííîé
ñòðîìû è èçìåíÿòü åå õàðàêòåðèñòèêè, ñîçäàâàÿ, òà-
êèì îáðàçîì áëàãîïðèÿòíîå ìèêðîîêðóæåíèå äëÿ
äàëüíåéøåé ïðîãðåññèè îïóõîëè. Â ïðîöåññå ðàç-
âèòèÿ ðàêîâîé îïóõîëè ïðîèñõîäèò àêòèâàöèÿ
ñòðîìàëüíûõ ôèáðîáëàñòîâ, ïîäîáíàÿ òîé, ÷òî íà-
áëþäàåòñÿ ïðè çàæèâëåíèè ðàí è ôèáðîçå òêàíåé
[3]. Ïðîöåññ àêòèâàöèè ôèáðîáëàñòîâ âêëþ÷àåò â
ñåáÿ èçìåíåíèå ðÿäà ìîðôîôóíêöèîíàëüíûõ õà-
ðàêòåðèñòèê, à òàêæå ýêñïðåññèþ íåêîòîðûõ ñïåöè-
ôè÷åñêèõ áèîõèìè÷åñêèõ ìàðêåðîâ, òàêèõ êàê ãëàä-
êîìûøå÷íûé àêòèí è ôèáðîáëàñò-ñïåöèôè÷åñêèé
áåëîê (FSP), à òàêæå ôèáðîáëàñò-àêòèâèðóþùèé áå-
ëîê (FAP) è äð. Àêòèâèðîâàííûå ôèáðîáëàñòû ñòè-
ìóëèðóþò äàëüíåéøóþ ïðîãðåññèþ îïóõîëè, ñåê-
ðåòèðóÿ áîëüøîå êîëè÷åñòâî ôàêòîðîâ ðîñòà, ãîð-
ìîíîâ è öèòîêèíîâ, ñðåäè êîòîðûõ PDGF-�/â, TGF
�1, bFGF, IL-6, LPA è ýéêîçàíîèäû, à òàêæå ÷åðåç óñ-
òàíîâëåíèå íåïîñðåäñòâåííûõ ìåæêëåòî÷íûõ êîí-
òàêòîâ è ðåìîäåëèðîâàíèå îêðóæàþùåãî ìàòðèêñà
[1, 4]. Îïóõîëü-àññîöèèðîâàííûå ôèáðîáëàñòû íå
òîëüêî ñèìóëèðóþò ïðîëèôåðàòèâíóþ àêòèâíîñòü
îïóõîëåâûõ êëåòîê, íî òàêæå ó÷àñòâóþò â èíèöèà-
ISSN 0233–7657. Biopolymers and Cell. 2013. Vol. 29. N 1. P. 79–82 doi: 10.7124/bc.00080A
79
� Institute of Molecular Biology and Genetics, NAS of Ukraine, 2013
80
öèè èõ ýïèòåëèàëüíî-ìåçåíõèìàëüíûõ ïåðåõîäîâ.
Êðîìå òîãî, îíè ñïîñîáíû èíèöèèðîâàòü ïîÿâëå-
íèå ðàêîâûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê â ñîñòàâå ïîïóëÿöèè
îïóõîëåâûõ êëåòîê [4] è èãðàþò âàæíóþ ðîëü â îá-
ðàçîâàíèè îðãàíîñïåöèôè÷åñêèõ íèø, áëàãîïðèÿò-
íûõ äëÿ îñåäàíèÿ öèðêóëèðóþùèõ ðàêîâûõ êëåòîê
è îáðàçîâàíèÿ ìåòàñòàçîâ [5].
 ýêñïåðèìåíòàõ in vivo è in vitro ïîêàçàíî, ÷òî
ñòðîìàëüíûå ýëåìåíòû ìîãóò ñóùåñòâåííî âëèÿòü
íà ÷óâñòâèòåëüíîñòü çëîêà÷åñòâåííûõ êëåòîê ê ïðî-
òèâîîíêîãåííûì ïðåïàðàòàì, à òàêæå ó÷àñòâîâàòü â
ôîðìèðîâàíèè õåìîðåçèñòåíòíîñòè îïóõîëè. Îäíî-
âðåìåííî ñóùåñòâóþò óáåäèòåëüíûå äîêàçàòåëüñò-
âà òîãî, ÷òî â ðÿäå ñëó÷àåâ íîðìàëüíîå êëåòî÷íîå
ìèêðîîêðóæåíèå ñïîñîáíî â çíà÷èòåëüíîé ìåðå
ïðåïÿòñòâîâàòü ðàçâèòèþ ðàêîâîé îïóõîëè, ñíèæàÿ
åå ïðîëèôåðàòèâíóþ àêòèâíîñòü è óìåíüøàÿ ðèñê
èíâàçèè [6]. Â ñâÿçè ñ ýòèì ìîäåëè, ïðåäóñìàòðèâà-
þùèå íàëè÷èå ñòðîìàëüíûõ ýëåìåíòîâ, ìîãóò îêà-
çàòüñÿ óäîáíûì èíñòðóìåíòîì äëÿ èçó÷åíèÿ ìîëå-
êóëÿðíûõ îñíîâ âçàèìíîãî âëèÿíèÿ ñòðîìàëüíûõ è
òðàíñôîðìèðîâàííûõ êëåòîê è èõ ðîëè â èíèöèà-
öèè è èíãèáèðîâàíèè ïðîöåññîâ îíêîãåíåçà, à òàê-
æå äàòü íåîáõîäèìóþ èíôîðìàöèþ äëÿ ðàçðàáîòêè
íîâûõ ïîäõîäîâ ê ïðîôèëàêòèêå è òåðàïèè ðàêî-
âûõ çàáîëåâàíèé [2, 4, 6].
Äëÿ èçó÷åíèÿ ìåæêëåòî÷íûõ âçàèìîäåéñòâèé in
vitro èñïîëüçóþò ðÿä ìåòîäèê, íà÷èíàÿ ñ íåïðÿìûõ
ìåòîäîâ, îñíîâàííûõ íà âûÿâëåíèè äåéñòâèÿ êîí-
äèöèîíèðîâàííîé ñðåäû, ïîëó÷åííîé îò ôèáðîá-
ëàñòîâ è äðóãèõ òèïîâ êëåòîê, íà ðàçëè÷íûå àñïåê-
òû ïîâåäåíèÿ ðàêîâûõ êëåòîê â êóëüòóðå, è çàêàí-
÷èâàÿ ðàçëè÷íûìè òåõíèêàìè ñîâìåñòíîãî êóëüòè-
âèðîâàíèÿ êëåòîê äâóõ è áîëåå òèïîâ. Ïðè ýòîì èñ-
ïîëüçóþò êàê äâóõ-, òàê è òðåõìåðíûå ñèñòåìû, ñî-
ñòîÿùèå èç êëåòîê äâóõ è áîëåå òèïîâ, à òàêæå ñìå-
øàííûå è ïðîìåæóòî÷íûå âàðèàíòû [7, 8].
Ïðåèìóùåñòâàìè òðåõìåðíîãî êóëüòèâèðîâà-
íèÿ ÿâëÿþòñÿ ñîõðàíåíèå ïîëÿðíîñòè è ìîðôîëî-
ãèè êëåòîê, à òàêæå õàðàêòåðà ãåííîé ýêñïðåññèè è
àêòèâàöèè âíóòðèêëåòî÷íûõ ñèãíàëüíûõ êàñêàäîâ,
õàðàêòåðíûõ äëÿ èñõîäíîé òêàíè. Ïîêàçàíî, ÷òî
êëåòêè â 2Ä è 3Ä êóëüòóðàõ çíà÷èòåëüíî îòëè÷àþò-
ñÿ ïî ðÿäó ìîðôîëîãè÷åñêèõ è áèîõèìè÷åñêèõ ïà-
ðàìåòðîâ, âêëþ÷àÿ ýêñïðåññèþ ðåöåïòîðîâ ê ôàê-
òîðàì ðîñòà è ðÿäó äðóãèõ ïàðàêðèííûõ ðåãóëÿòî-
ðîâ, à òàêæå ïî óðîâíþ ïðîòåîëèòè÷åñêîé àêòèâ-
íîñòè, ñïîñîáíîñòè ê ìèãðàöèè è ÷óâñòâèòåëüíîñòè
ê íåêîòîðûì òåðàïåâòè÷åñêèì àãåíòàì [8].
Ïðè ðàáîòå ñ îðãàíîòèïè÷åñêèìè òðåõìåðíûìè
êóëüòóðàìè ïðèìåíÿþò ðÿä òåõíèê, íàèáîëåå ðàñ-
ïðîñòðàíåííîé ñðåäè êîòîðûõ ÿâëÿåòñÿ îáðàçîâà-
íèå ìíîãîêëåòî÷íûõ ñôåðîèäîâ èç îäíîãî èëè áîëåå
òèïîâ êëåòîê.
Äëÿ ïîëó÷åíèÿ òðåõìåðíûõ àãðåãàòîâ ñóñïåí-
çèþ êëåòîê íàíîñÿò íà íåàäãåçèâíûé ñóáñòðàò, â êà-
÷åñòâå êîòîðîãî ÷àùå âñåãî èñïîëüçóþò Ìàòðè-
ãåëü, àãàðîçó èëè èõ àíàëîãè, ÷òî ñïîñîáñòâóåò èíè-
öèàöèè ìåæêëåòî÷íûõ êîíòàêòîâ è îáðàçîâàíèþ
ìíîãîêëåòî÷íûõ àãðåãàòîâ [7].  ïîñëåäíèå ãîäû â
ñâÿçè ñ ðîñòîì ïîïóëÿðíîñòè 3Ä êóëüòèâèðîâàíèÿ
ðàçðàáîòàíî áîëüøîå êîëè÷ñåòâî ñïîñîáîâ ïîëó÷å-
íèÿ òàêèõ àãðåãàòîâ, íà÷èíàÿ îò òðàäèöèîííûõ, òà-
êèõ êàê ìåòîä âèñÿ÷åé êàïëè, ìåòîä âðàùàþùèõñÿ
ôëàêîíîâ è «ñýíäâè÷»-ìåòîä, è çàêàí÷èâàÿ ñîçäà-
íèåì ðàçëè÷íûõ áèîèíæåíåðíûõ ñèñòåì è ìèêðî-
ðåàêòîðîâ äëÿ áûñòðîãî ïîëó÷åíèÿ áîëüøîãî êîëè-
÷åñòâà ñôåðîèäîâ [8, 9].
Èçó÷åíèå âçàèìîäåéñòâèÿ ðàêîâûõ è ñòðîìàëü-
íûõ êëåòîê â òðåõìåðíûõ óñëîâèÿõ ìîæåò äàòü áî-
ëåå ïîëíîå ïðåäñòàâëåíèå î ãåòåðîòèïè÷åñêèõ ìåæ-
êëåòî÷íûõ âçàèìîäåéñòâèÿõ â ñîñòàâå ðàêîâîé îïó-
õîëè è ðîëè êîìïîíåíòîâ ñòðîìû â ðåãóëÿöèè ðàç-
ëè÷íûõ ñòàäèé îíêîãåíåçà [9, 10]. Äëÿ ïîëó÷åíèÿ
ãåòåðîòèïè÷åñêèõ àãðåãàòîâ ÷àùå âñåãî ïðèìåíÿþò
ñëåäóþùèå ìåòîäû: ôîðìèðîâàíèå ñôåðîèäîâ ñìå-
øàííîãî òèïà, êóëüòèâèðîâàíèå ñôåðîèäîâ îäíîãî
òèïà êëåòîê ñ ìîíîñëîåì êëåòîê äðóãîãî òèïà, äî-
áàâëåíèå ñóñïåíçèè êëåòîê ê óæå ñôîðìèðîâàííûì
ñôåðîèäàì äðóãîãî òèïà êëåòîê [10, 11].
Ïðåäëîæåííûé íàìè ìåòîä ñîñòîèò âî âçàèìî-
äåéñòâèè óæå ñôîðìèðîâàííûõ ñôåðîèäîâ èç ôèá-
ðîáëàñòîâ ÷åëîâåêà è êëåòîê ëèíèè HeLa.
Ìàòåðèàëû è ìåòîäû. Êóëüòóðà êëåòîê. Êëåò-
êè ëèíèè HeLa, ïðîèñõîäÿùèå èç êàðöèíîìû øåé-
êè ìàòêè, êóëüòèâèðîâàëè â ïèòàòåëüíîé ñðåäå
DMEM («Sigma», CØÀ) ñ äîáàâëåíèåì 10 % òåëÿ÷ü-
åé ýìáðèîíàëüíîé ñûâîðîòêè (FBS, «Hy Clone»,
ÑØÀ), 50 åä/ìë ïåíèöèëëèíà, 50 ìêã/ìë ñòðåïòî-
ìèöèíà, 4 ìÌ ãëþòàìèíà («ÐÀÀ», ÑØÀ) äî äîñòè-
æåíèÿ èìè 80–90 % êîíôëþåíòíîñòè ìîíîñëîÿ.
Êëåòêè ñíèìàëè ðàñòâîðîì 0,25 %-é òðèïñèí–0,02
ØÊÀÐÈÍÀ Å. À. È ÄÐ.
%-é ÝÄÒÀ («ÐÀÀ») è ïîäñ÷èòûâàëè â êàìåðå Ãîðÿ-
åâà. Ïðåäâàðèòåëüíî ãîòîâèëè 1 %-é ðàñòâîð àãàðî-
çû (# 11400, «Serva», ÑØÀ) íà äåèîíèçèðîâàííîé
âîäå, ïîñëå ÷åãî åãî àâòîêëàâèðîâàëè. 1 ìë ãîðÿ÷åé
àãàðîçû íàñëàèâàëè íà ëóíêè 24-ëóíî÷íîãî ïëàí-
øåòà. Ïîñëå îñòûâàíèÿ ïðîìûâàëè ïèòàòåëüíîé
ñðåäîé ñ ñûâîðîòêîé. 5�103 êëåòîê âíîñèëè â ëóíêè
è êóëüòèâèðîâàëè â òå÷åíèå 5 ñóò, íàáëþäàëè ôîð-
ìèðîâàíèå ìíîãîêëåòî÷íûõ àãðåãàòîâ. Ïåðâè÷íàÿ
êóëüòóðà äåðìàëüíûõ ôèáðîáëàñòîâ ÷åëîâåêà ëþ-
áåçíî ïðåäîñòàâëåíà Ê. À. Íèæåðàäçå (Èíñòèòóò êî
ëëîèäíîé õèìèè è õèìèè âîäû èì. À. Â. Äóìàíñêî-
ãî ÍÀÍ Óêðàèíû) .
Ôèáðîáëàñòû êóëüòèâèðîâàëè â ñðåäå F-12 ñ äî-
áàâëåíèåì 10 % òåëÿ÷üåé ýìáðèîíàëüíîé ñûâîðîò-
êè, 50 åä/ìë ïåíèöèëëèíà, 50 ìêã/ìë ñòðåïòîìèöè-
íà, 4 ìÌ ãëþòàìèíà. Êàê óêàçàíî âûøå äëÿ êëåòîê
HeLa, ôèáðîáëàñòû ñíèìàëè ñ ðîñòîâîé ïîâåðõíî-
ñòè ñìåñüþ 0,25 %-é òðèïñèí–0,02 %-é ÝÄÒÀ è ïå-
ðåíîñèëè ïî 5�103 êëåòîê â ëóíêè, ïîêðûòûå àãàðî-
çîé äëÿ ôîðìèðîâàíèÿ ìíîãîêëåòî÷íûõ àãðåãàòîâ.
×åðåç 5 ñóò àãðåãàòû, ñôîðìèðîâàííûå êëåòêàìè
HeLa è ôèáðîáëàñòàìè, ïîìåùàëè â îäíó ëóíêó è
íàáëþäàëè èõ ñëèÿíèå. Àãðåãàòû ôèêñèðîâàëè ôîð-
ìàëèíîì, ïàðàôèíîâûå ñðåçû ïîëó÷àëè ïî ñòàíäàðò-
íîé ãèñòîëîãè÷åñêîé ìåòîäèêå.
Èììóíîãèñòîõèìè÷åñêèé è èììóíîôëóîðåñöåí-
òíûé àíàëèç. Ïîëó÷åííûå ãèñòîëîãè÷åñêèå ñðåçû
ïîäâåðãàëè òåðìè÷åñêîé îáðàáîòêå â ìèêðîâîëíî-
âîé ïå÷è (700 Âò) äâàæäû â òå÷åíèå 5 ìèí â 10 ìM
öèòðàòíîì áóôåðå, ðÍ 6, äëÿ ýêñïîíèðîâàíèÿ äåòåð-
ìèíàíò [12]. Àóòîôëóîðåñöåíöèþ ïðåïàðàòîâ ïîäàâ-
ëÿëè ïðè ïîìîùè áóôåðà, ñîäåðæàùåãî 10 ìÌ ñóëü-
ôàò ìåäè, 50 ìÌ àöåòàò àììîíèÿ, ðÍ 5, â òå÷åíèå
20 ìèí ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå. Ýïèòåëèàëüíûå
àíòèãåíû îïðåäåëÿëè, èñïîëüçóÿ ìûøèíûå ìîíîêëî-
íàëüíûå àíòèòåëà ê öèòîêåðàòèíàì (anti-Pan cytoke-
ratin, Clone 11, «Sigma») â ðàçâåäåíèè 1:100, ôèá-
ðîáëàñòû – ñ ïðèìåíåíèåì àíòèòåë ê âèìåíòèíó
(«Dako», Äàíèÿ) â ðàçâåäåíèè 1:100. Äëÿ âèçóàëè-
çàöèè àíòèãåíîâ èñïîëüçîâàëè âòîðè÷íûå àíòèòå-
ëà, ìå÷åííûå FITC («Jacksonimmunoresearch», ÑØÀ),
äëÿ èììóíîïåðîêñèäàçíîé ðåàêöèè – ñèñòåìó Ultra
Vision LPValue Large Volume Detection («Thermo
Scientific», ÑØÀ). Ïðåïàðàòû àíàëèçèðîâàëè ñ ïðè-
ìåíåíèåì ìèêðîñêîïà Leica DM 1000 (Ãåðìàíèÿ).
Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå. Âîïðîñ î âçàèìîîò-
íîøåíèÿõ îïóõîëè è ñòðîìû ÿâëÿåòñÿ î÷åíü ñëîæ-
íûì. Íà ïðèìåðå êàðöèíîìû ìîëî÷íîé æåëåçû ïî-
êàçàíî, ÷òî íà íà÷àëüíûõ ýòàïàõ ôîðìèðîâàíèÿ îïó-
õîëè ñòðîìà ñêîðåå ïðåïÿòñòâóåò åå ðîñòó è ðàñïðî-
ñòðàíåíèþ, îäíàêî íà áîëåå ïîçäíèõ ýòàïàõ îíà ìî-
æåò ñîäåéñòâîâàòü ðàçâèòèþ îïóõîëè [5]. Ïðîáëå-
ìå âçàèìîâëèÿíèÿ îïóõîëåâûõ è ñòðîìàëüíûõ êëå-
òîê ïîñâÿùåíî ìíîæåñòâî èññëåäîâàíèé è ñîîòâåò-
ñòâåííî ñîçäàíî ìíîãî ìîäåëåé äëÿ èçó÷åíèÿ ïîäî-
áíûõ âçàèìîäåéñòâèé. Â ïðåäñòàâëåííîé ðàáîòå
ïðåäëîæåí ìîäèôèöèðîâàííûé ïîäõîä ê ìîäåëè-
ðîâàíèþ âçàèìîäåéñòâèÿ ñòðîìà–îïóõëü. Êëàññè-
÷åñêèå ìîäåëè ïðåäïîëàãàþò èñïîëüçîâàíèå ñóñ-
ïåíçèè êëåòîê, ïîìåùåííûõ â íåàäãåçèâíûå óñëî-
âèÿ. Â íàøåé ðàáîòå ïðåäñòàâëåí ìåòîä, áàçèðóþ-
ùèéñÿ íà âçàèìîäåéñòâèè óæå ñôîðìèðîâàííûõ
ìíîãîêëåòî÷íûõ àãðåãàòîâ ôèáðîáëàñòîâ (êàê ñòðî-
ìàëüíûõ ýëåìåíòîâ) è îïóõîëåâûõ êëåòîê. Òàêîé
ïîäõîä äàåò âîçìîæíîñòü ìîðôîëîãè÷åñêèìè è èì-
ìóíîãèñòîõèìè÷åñêèìè ìåòîäàìè èçó÷àòü íåïî-
ñðåäñòâåííî âçàèìîäåéñòâóþùèå îïóõîëåâûå êëåò-
êè è ôèáðîáëàñòû.
Ïåðâè÷íóþ êóëüòóðó äåðìàëüíûõ ôèáðîáëàñòîâ
ïðîàíàëèçèðîâàëè èììóíîöèòîõèìè÷åñêèì ìåòî-
äîì ñ èñïîëüçîâàíèåì àíòèòåë ê ïîâåðõíîñòè ôèá-
ðîáëàñòîâ ÷åëîâåêà è íå îáíàðóæèëè êëåòîê, äàâ-
øèõ íåãàòèâíóþ ðåàêöèþ (äàííûå íå ïðèâåäåíû).
Óêàçàííûå ôèáðîáëàñòû ïîñëóæèëè èñòî÷íèêîì
ïîëó÷åíèÿ ìíîãîêëåòî÷íûõ àãðåãàòîâ (ñôåðîèäîâ).
Êëåòêè ëèíèè HeLa ñôîðìèðîâàëè ñôåðîèäû
óæå íà âòîðîé äåíü êóëüòèâèðîâàíèÿ íà àãàðèçîâàí-
íîé ïîâåðõíîñòè. Ïðè ñîêóëüòèâèðîâàíèè ñôåðîè-
äîâ ôèáðîáëàñòîâ è êëåòîê HeLa ñëèÿíèå àãðåãà-
òîâ íàáëþäàëè óæå íà ñëåäóþùèå ñóòêè (ðèñ. 1, ñì.
âêëåéêó). Âî ìíîãèõ ñëó÷àÿõ êîëè÷åñòâî àãðåãàòîâ
HeLa áûëî áîëüøå, ÷åì ôèáðîáëàñòîâ. Ïðè âçàèìî-
äåéñòâèè àãðåãàòîâ, ñôîðìèðîâàííûõ êëåòêàìè HeLa
è àãðåãàòà èç ôèáðîáëàñòîâ, ýïèòåëèàëüíûå êëåòêè
îêàéìëÿëè ôèáðîáëàñòû, ÷òî ñîîòâåòñòâóåò ìåõà-
íèçìàì ãèñòîãåíåçà â öåëîì (ðèñ. 2, 3, ñì. âêëåéêó).
Ïîñëå îêîí÷àíèÿ ñðîêà êóëüòèâèðîâàíèÿ ïîëó÷åí-
íûå êîìáèíèðîâàííûå òðåõìåðíûå êóëüòóðû êëå-
òîê ôèêñèðîâàëè ôîðìàëèíîì è, ñîãëàñíî ãèñòîëî-
ãè÷åñêîé òåõíèêå, ãîòîâèëè ïàðàôèíîâûå ñðåçû.
Ìåòîäîì èììóíîôëóîðåñöåíòíîãî àíàëèçà îïðåäå-
81
ÌÎÄÅËÜ ÂÇÀÈÌÎÄÅÉÑÒÂÈß ÎÏÓÕÎËÅÂÛÕ È ÑÒÎÌÀËÜÍÛÕ ÊËÅÒÎÊ
ISSN 0233-7657. Biopolymers and Cell. 2013. Vol. 29. N 1
Figure to article by K. A. Shkarina et al.
à á
HeLaHeLa
Ôèáðîáëàñòû Ôèáðîáëàñòû
Ðèñ. 1. Ñîêóëüòèâè-
ðîâàíèå ñôåðîèäîâ,
ïîëó÷åííûõ èç äåð-
ìàëüíûõ ôèáðîáëà-
ñòîâ è êëåòîê HeLa:
à – 1 ñóòêè êóëüòè-
âèðîâàíèÿ (îêóëÿð
10x; îáúåêòèâ 20x);
á – 4 ñóòîê êóëüòè-
âèðîâàíèÿ. Îêóëÿð
10x; îáúåêòèâ 10x
Ôèáðîáëàñòû
HeLa
Ðèñ. 2. Àãðåãàò – ðåçóëüòàò ñëèÿíèÿ ñôåðîèäà èç ôèáðîáëàñòîâ è
íåñêîëüêèõ ñôåðîèäîâ èç êëåòîê HeLa. Èììóíîïåðîêñèäàçíàÿ
ðåàêöèÿ (êîðè÷íåâîå îêðàøèâàíèå) âûÿâèëà ýïèòåëèàëüíûå, ïî-
ëîæèòåëüíûå íà öèòîêåðàòèíû êëåòêè, ðàñïîëîæåííûå âîêðóã
ñôåðîèäà èç ôèáðîáëàñòîâ. Îêóëÿð 10x; îáúåêòèâ 10x
Ðèñ.4. Èììóíîôëþîðåñöåíòíîå âûÿâëåíèå âèìåíòèíà (áåëêà
ïðîìåæóòî÷íûõ ôèëàìåíòîâ ôèáðîáëàñòîâ) â êëåòêàõ ñôåðîèäà,
îáðàçîâàííîãî ôèáðîáëàñòàìè. Öèòîïëàçìà êëåòîê îêðàøåíà â
çåë¸íûé öâåò. Îêóëÿð 10x; îáúåêòèâ 40x
Ðèñ.3. Èììóíîãèñòîõèìè÷åñêîå âûÿâëåíèå ýïèòåëèàëüíûõ àíòè-
ãåíîâ (öèòîêåðàòèíîâ, ïðîìåæóòî÷íûõ ôèëàìåíòîâ öèòîñêåëåòà
ýïèòåëèàëüíûõ êëåòîê) â êëåòêàõ ëèíèè HeLa, ñôîðìèðîâàâøèõ
ñôåðîèä. ßäðà êëåòîê äîêðàøåíû ãåìàòîêñèëèíîì. Îêóëÿð 10x;
îáúåêòèâ 40x
HeLa
Ôèáðîáëàñòû
Ðèñ. 5. Èììóíîôëóîðåñöåíòíîå âûÿâëåíèå ôèáðîáëàñòîâ ïî ñî-
äåðæàíèþ âèìåíòèíà (çåëåíûé) â àãðåãàòàõ ïðè ñîâìåñòíîì êóëü-
òèâèðîâàíèè HeLa è ôèáðîáëàñòîâ. ßäðà êëåòîê äîêðàøèâàëè PrI
(êðàñíûé). Îêóëÿð 10x; îáúåêòèâ 40x
ëÿëè ôèáðîáëàñòû è ýïèòåëèàëüíûå êëåòêè â îáðà-
çîâàâøèõñÿ àãðåãàòàõ. ßäðà êëåòîê äîêðàøèâàëè èî-
äèäîì ïðîïèäèóìà. Íàáëþäàëè ÿðêóþ èììóíîôëó-
îðåñöåíòíóþ ðåàêöèþ ñ èñïîëüçîâàíèåì àíòèòåë ê
ïîâåðõíîñòè ôèáðîáëàñòîâ ÷åëîâåêà íà ìîíîñëîé-
íîé êóëüòóðå, îäíàêî íà ãèñòîëîãè÷åñêèõ ñðåçàõ
ïðèñóòñòâîâàëà äîâîëüíî ñëàáàÿ ðåàêöèÿ. Ïîýòîìó
äëÿ äèôôåðåíöèàöèè ýïèòåëèàëüíûõ êëåòîê è ôèá-
ðîáëàñòîâ ïðèìåíèëè àíòèòåëà ê âèìåíòèíó. Íà
ñðåçàõ âçàèìîäåéñòâóþùèõ àãðåãàòîâ íàáëþäàëè
ÿðêî îêðàøåííûå ôèáðîáëàñòû, îäíàêî ñëàáàÿ ðåàê-
öèÿ ïðèñóòñòâîâàëà è â êëåòêàõ HeLa, ÷òî ñîîòâåò-
ñòâóåò ëèòåðàòóðíûì äàííûì (ðèñ. 4, 5, ñì. âêëåé-
êó). Ïðè ýòîì õàðàêòåð ðåàêöèè â êëåòêàõ ðåçêî îò-
ëè÷àëñÿ. Ïðèìåíåíèå àíòèòåë ê ýïèòåëèàëüíûì àí-
òèãåíàì ïîçâîëèëî âûÿâèòü ïîëîæèòåëüíóþ ðåàê-
öèþ â êëåòêàõ HeLa, êîòîðàÿ â ôèáðîáëàñòàõ îòñóò-
ñòâîâàëà (ðèñ. 2, 3, ñì. âêëåéêó).
Òàêèì îáðàçîì, íà ãèñòîëîãè÷åñêèõ ñðåçàõ íàì
óäàëîñü çàôèêñèðîâàòü ó÷àñòêè êîíòàêòà îïóõîëå-
âûõ è ñòðîìàëüíûõ êëåòîê. Èìåííî îíè ñòàíóò ïðåä-
ìåòîì íàøèõ äàëüíåéøèõ èññëåäîâàíèé â àñïåêòå
âíóòðèêëåòî÷íîãî ñèãíàëèíãà â îïóõîëåâûõ êëåòêàõ
è ôèáðîáëàñòàõ.
Ïðåäëîæåííàÿ íàìè ìîäåëü èçó÷åíèÿ âçàèìî-
äåéñòâèÿ îïóõîëè è ñòðîìû áóäåò ïîëåçíà ïðè èçó-
÷åíèè êàê ôóíäàìåíòàëüíûõ ìåõàíèçìîâ êàíöåðî-
ãåíåçà, òàê è ïðè ïîèñêå ìèøåíåé äëÿ ïðîòèâîîïó-
õîëåâîé òåðàïèè.
K. A. Shkarina, O. V. Cherednyk, I. O. Tykhonkova, A. I. Khoruzhenko
In vitro model for study the interaction between tumor and
stromal cells
State Key Laboratory on Molecular and Cellular Biology
Institute of Molecular Biology and Genetics, NAS of Ukaine
150, Akademika Zabolotnoho Str., Kyiv, Ukraine, 03680
Summary
Aim. To develop a model to study the interaction between tumor and
stromal cells in three-dimensional culture. Methods. Cultivation of HeLa
cell lines and human dermal fibroblasts in monolayer and three-dimen-
sional culture, immunofluorescent and immunohistochemical analysis.
Results. In this work we present an approach based on a direct inter-
action between the cells of multicellular tumor spheroids and sphe-
roids of fibroblasts. Subsequent immunofluorescence analysis allows
to determine an origin of cells in the area of their contact. Conclu-
sions. This model will be useful to study the basic mechanisms of carci-
nogenesis, and to find targets for anticancer therapy.
Keywords: interaction of stromal and tumor cells, three-dimen-
sional cultures of malignant cells, multicellular spheroids.
Ê. À. Øêàð³íà, Î. Â. ×åðåäíèê, ². Î. Òèõîíêîâà, À. ². Õîðóæåíêî
Ìîäåëü in vitro äëÿ äîñë³äæåííÿ âçàºìî䳿 ñòðîìàëüíèõ êë³òèí ³
êë³òèí ïóõëèííîãî ïîõîäæåííÿ
Ðåçþìå
Ìåòà. Ðîçðîáèòè ìîäåëü äëÿ âèâ÷åííÿ âçàºìî䳿 ïóõëèííèõ ³ ñòðî-
ìàëüíèõ êë³òèí çà óìîâ òðèâèì³ðíî¿ êóëüòóðè. Ìåòîäè. Êóëüòè-
âóâàííÿ êë³òèí ë³í³¿ HeLa ³ äåðìàëüíèõ ô³áðîáëàñò³â ëþäèíè â ìî-
íîøàðîâèé ³ òðèâèì³ðí³é êóëüòóð³, ³ìóíîôëóîðåñöåíòíèé òà
³ìóíîã³ñòîõ³ì³÷íèé àíàë³ç. Ðåçóëüòàòè. Çàïðîïîíîâàíî ï³äõ³ä, ùî
áàçóºòüñÿ íà äîñë³äæåíí³ áåçïîñåðåäíüî¿ âçàºìî䳿 êë³òèí áàãà-
òîêë³òèííèõ ñôåðî¿ä³â ïóõëèííèõ êë³òèí ³ ñôåðî¿ä³â ô³áðîáëà-
ñò³â. Ïîäàëüøèé ³ìóíîôëóîðåñöåíòíèé àíàë³ç äຠìîæëèâ³ñòü
âèçíà÷èòè ïîõîäæåííÿ êë³òèí ó çîí³ ¿õíüîãî êîíòàêòó. Âèñíîâ-
êè. Îïèñàíà ìîäåëü áóäå êîðèñíîþ ÿê äëÿ âèâ÷åííÿ áàçîâèõ ìåõà-
í³çì³â êàíöåðîãåíåçó, òàê ³ çà ïîøóêó ì³øåíåé äëÿ ïðîòèïóõëèí-
íî¿ òåðàﳿ.
Êëþ÷îâ³ ñëîâà: âçàºìîä³ÿ ñòðîìàëüíèõ ³ ïóõëèííèõ êë³òèí,
òðèâèì³ðí³ êóëüòóðè çëîÿê³ñíèõ êë³òèí, áàãàòîêë³òèíí³ ñôåðî¿äè.
REFERENCES.
1. Kalluri R., Zeisberg M. Fibroblasts in cancer // Nat. Rev. Cancer.–
2006.–6, N 5.–P. 392–401.
2. Pietras K., Ostman A. Hallmarks of cancer: interactions with the
tumor stroma // Exp. Cell Res.–2010.–316, N 8.–P. 1324–1331.
3. Xing F., Saidou J., Watabe K. Cancer associated fibroblasts
(CAFs) in tumor microenvironment // Front Biosci.–2010.–
15.–P. 166–179.
4. Cirri P., Chiarugi P. Cancer associated fibroblasts: the dark side
of the coin // Am. J. Cancer Res.–2011.–1, N. 4.–P. 482–497.
5. Joyce J. A., Pollard J. W. Microenvironmental regulation of me-
tastasis // Nat. Rev. Cancer.–2009.–9, N 4.–P. 239–252.
6. Wadlow R. C., Wittner B. S., Finley S. A., Bergquist H., Upad-
hyay R., Finn S., Loda M., Mahmood U., Ramaswamy S. Sys-
tems-level modeling of cancer-fibroblast interaction // PLoS
One.–2009.–4, N 9.–e6888.
7. Nyga A., Cheema U., Loizidou M. 3D tumor models: novel in vit-
ro approaches to cancer studies // J. Cell Commun. Signal.–
2011.–5, N 3.–P. 239–248.
8. Yamada K. M., Cukierman E. Modeling tissue morphogenesis
and cancer in 3D // Cell.–2007.–130, N 4.–P. 601–610.
9. Lin R. Z., Chang H. Y. Recent advances in three-dimensional
multicellular spheroid culture for biomedical research // Biotech-
nol. J.–2008.–3, N 9–10.–P. 1172–1184.
10. Miki Y., Ono K., Hata S., Suzuki T., Kumamoto H., Sasano H.
The advantages of co-culture over mono cell culture in simulating
in vivo environment // J. Steroid Biochem. Mol. Biol.–2012.–
131, N 3–5.–P. 68–75.
11. Hirschhaeuser F., Menne H., Dittfeld C., West J., Mueller-Klie-
ser W., Kunz-Schughart L. A. Multicellular tumor spheroids: an
underestimated tool is catching up again // J. Biotechnol.–
2010.–148, N 1.–P. 3–15.
12. Khoruzhenko A. I. Optimization of tumor cell culture conditions
in soft agar for subsequent immunohistochemical analysis // Bio-
polym. Cell.–2012.–28, N 4.–P. 302–305.
Received 01.12.12
82
ØÊÀÐÈÍÀ Å. À. È ÄÐ.
|