Стимуляция синтеза ДНК в гепатоцитах фракциями сыворотки гепатэктомированных крыс
Установлено, что кислотно-этанольный экстракт сыворотки гепатоэктомированных крыс, полученной через 3 и 24 ч после частичной гепатэктомии, содержит белки, оказывающие стимулирующее действие на синтез ДНК в первичной культуре гепатоцитов взрослых крыс. Активные фракции, выделенные хроматографией на б...
Saved in:
| Published in: | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Date: | 1986 |
| Main Authors: | , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1986
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152743 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Стимуляция синтеза ДНК в гепатоцитах фракциями сыворотки гепатэктомированных крыс / Л.А. Осипова, Ю.Д. Иващенко, Н.И. Немлий, А.И. Быкорез // Биополимеры и клетка. — 1986. — Т. 2, № 3. — С. 141-146. — Бібліогр.: 16 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-152743 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Осипова, Л.А. Иващенко, Ю.Д. Немлий, Н.И. Быкорез, А.И. 2019-06-12T17:21:20Z 2019-06-12T17:21:20Z 1986 Стимуляция синтеза ДНК в гепатоцитах фракциями сыворотки гепатэктомированных крыс / Л.А. Осипова, Ю.Д. Иващенко, Н.И. Немлий, А.И. Быкорез // Биополимеры и клетка. — 1986. — Т. 2, № 3. — С. 141-146. — Бібліогр.: 16 назв. — рос. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.0001AA https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152743 577.152.5 Установлено, что кислотно-этанольный экстракт сыворотки гепатоэктомированных крыс, полученной через 3 и 24 ч после частичной гепатэктомии, содержит белки, оказывающие стимулирующее действие на синтез ДНК в первичной культуре гепатоцитов взрослых крыс. Активные фракции, выделенные хроматографией на биогеле Р-60, состоят из белков с молекулярной массой в диапазоне 50 000–70 000 и характеризуются сдвигом в зону кислых рН при изоэлектрофокусировке. Стимуляция синтеза ДНК в гепатоцитах in vitro более выражена при воздействии активных фракций сыворотки, полученной в ранние сроки после частичной гепатэктомии. Встановлено, що кислотно-етанольний екстракт сироватки гепатектомованих щурів, отриманої через 3 та 24 год після часткової гепатектомії, містить білки, які чинять стимулювальну дію на синтез ДНК у первинній культурі гепатоцитів дорослих щурів. Активні фракції, виділені хроматографією на біогелі Р-60, складаються з білків з молекулярною масою у діапазоні 50 000–70 000 і характеризуються зсувом у зону кислих рН при ізоелектрофокусуванні. Стимуляція синтезу ДНК у гепатоцитах in vitro більш виражена за впливу активних фракцій сироватки, отриманої в ранні терміни після часткової гепатектомії. The acid-ethanol extract of the hepatectomized rat serum (obtained 3 or 24 hs after the partial hepatectomy) contains proteins stimulating DNA synthesis in the primary culture of the adult rat hepatocytes. The active fractions partially purified by gel-filtration on the bio-gel P-60 include the spectrum of proteins with a molecular weight of 50–70 kDalton characterized by a shift towards more acidic pH values in comparison with the control, as it was shown by electrofocusing electrophoresis. Stimulation of DNA synthesis in hepatocytcs in vitro is more pronounced under the effect of the active fractions of serum obtained in the earlier periods after the partial hepatectomy. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Клеточная биология Стимуляция синтеза ДНК в гепатоцитах фракциями сыворотки гепатэктомированных крыс Стимулювання синтезу ДНК у гепатоцитах фракціями сироватки гепатектомованих щурів Stimulation of DNA synthesis in hepatocytes by serum fractions of hepatectomized rats Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Стимуляция синтеза ДНК в гепатоцитах фракциями сыворотки гепатэктомированных крыс |
| spellingShingle |
Стимуляция синтеза ДНК в гепатоцитах фракциями сыворотки гепатэктомированных крыс Осипова, Л.А. Иващенко, Ю.Д. Немлий, Н.И. Быкорез, А.И. Клеточная биология |
| title_short |
Стимуляция синтеза ДНК в гепатоцитах фракциями сыворотки гепатэктомированных крыс |
| title_full |
Стимуляция синтеза ДНК в гепатоцитах фракциями сыворотки гепатэктомированных крыс |
| title_fullStr |
Стимуляция синтеза ДНК в гепатоцитах фракциями сыворотки гепатэктомированных крыс |
| title_full_unstemmed |
Стимуляция синтеза ДНК в гепатоцитах фракциями сыворотки гепатэктомированных крыс |
| title_sort |
стимуляция синтеза днк в гепатоцитах фракциями сыворотки гепатэктомированных крыс |
| author |
Осипова, Л.А. Иващенко, Ю.Д. Немлий, Н.И. Быкорез, А.И. |
| author_facet |
Осипова, Л.А. Иващенко, Ю.Д. Немлий, Н.И. Быкорез, А.И. |
| topic |
Клеточная биология |
| topic_facet |
Клеточная биология |
| publishDate |
1986 |
| language |
Russian |
| container_title |
Биополимеры и клетка |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Стимулювання синтезу ДНК у гепатоцитах фракціями сироватки гепатектомованих щурів Stimulation of DNA synthesis in hepatocytes by serum fractions of hepatectomized rats |
| description |
Установлено, что кислотно-этанольный экстракт сыворотки гепатоэктомированных крыс, полученной через 3 и 24 ч после частичной гепатэктомии, содержит белки, оказывающие стимулирующее действие на синтез ДНК в первичной культуре гепатоцитов взрослых крыс. Активные фракции, выделенные хроматографией на биогеле Р-60, состоят из белков с молекулярной массой в диапазоне 50 000–70 000 и характеризуются сдвигом в зону кислых рН при изоэлектрофокусировке. Стимуляция синтеза ДНК в гепатоцитах in vitro более выражена при воздействии активных фракций сыворотки, полученной в ранние сроки после частичной гепатэктомии.
Встановлено, що кислотно-етанольний екстракт сироватки гепатектомованих щурів, отриманої через 3 та 24 год після часткової гепатектомії, містить білки, які чинять стимулювальну дію на синтез ДНК у первинній культурі гепатоцитів дорослих щурів. Активні фракції, виділені хроматографією на біогелі Р-60, складаються з білків з молекулярною масою у діапазоні 50 000–70 000 і характеризуються зсувом у зону кислих рН при ізоелектрофокусуванні. Стимуляція синтезу ДНК у гепатоцитах in vitro більш виражена за впливу активних фракцій сироватки, отриманої в ранні терміни після часткової гепатектомії.
The acid-ethanol extract of the hepatectomized rat serum (obtained 3 or 24 hs after the partial hepatectomy) contains proteins stimulating DNA synthesis in the primary culture of the adult rat hepatocytes. The active fractions partially purified by gel-filtration on the bio-gel P-60 include the spectrum of proteins with a molecular weight of 50–70 kDalton characterized by a shift towards more acidic pH values in comparison with the control, as it was shown by electrofocusing electrophoresis. Stimulation of DNA synthesis in hepatocytcs in vitro is more pronounced under the effect of the active fractions of serum obtained in the earlier periods after the partial hepatectomy.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152743 |
| citation_txt |
Стимуляция синтеза ДНК в гепатоцитах фракциями сыворотки гепатэктомированных крыс / Л.А. Осипова, Ю.Д. Иващенко, Н.И. Немлий, А.И. Быкорез // Биополимеры и клетка. — 1986. — Т. 2, № 3. — С. 141-146. — Бібліогр.: 16 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT osipovala stimulâciâsintezadnkvgepatocitahfrakciâmisyvorotkigepatéktomirovannyhkrys AT ivaŝenkoûd stimulâciâsintezadnkvgepatocitahfrakciâmisyvorotkigepatéktomirovannyhkrys AT nemliini stimulâciâsintezadnkvgepatocitahfrakciâmisyvorotkigepatéktomirovannyhkrys AT bykorezai stimulâciâsintezadnkvgepatocitahfrakciâmisyvorotkigepatéktomirovannyhkrys AT osipovala stimulûvannâsintezudnkugepatocitahfrakcíâmisirovatkigepatektomovanihŝurív AT ivaŝenkoûd stimulûvannâsintezudnkugepatocitahfrakcíâmisirovatkigepatektomovanihŝurív AT nemliini stimulûvannâsintezudnkugepatocitahfrakcíâmisirovatkigepatektomovanihŝurív AT bykorezai stimulûvannâsintezudnkugepatocitahfrakcíâmisirovatkigepatektomovanihŝurív AT osipovala stimulationofdnasynthesisinhepatocytesbyserumfractionsofhepatectomizedrats AT ivaŝenkoûd stimulationofdnasynthesisinhepatocytesbyserumfractionsofhepatectomizedrats AT nemliini stimulationofdnasynthesisinhepatocytesbyserumfractionsofhepatectomizedrats AT bykorezai stimulationofdnasynthesisinhepatocytesbyserumfractionsofhepatectomizedrats |
| first_indexed |
2025-11-25T21:04:12Z |
| last_indexed |
2025-11-25T21:04:12Z |
| _version_ |
1850545888381894656 |
| fulltext |
УДК 577.152.5
СТИМУЛЯЦИЯ СИНТЕЗА ДНК В ГЕПАТОЦИТАХ
ФРАКЦИЯМИ СЫВОРОТКИ ГЕПАТЭКТОМИРОВАННЫХ КРЫС
Л. А. Осипова, Ю. Д. Иващенко, Н. И. Немлий, А. И. Быкорез
Введение. Выделение и очистка факторов, специфически контролирую-
щих пролиферацию гепатоцитов, является необходимым этапом в ре-
шении вопроса о взаимодействии нормальных и трансформирующих
факторов роста при гепатоканцерогенезе. Физиологическая стимуляция
покоящихся гепатоцитов к вступлению в митотический цикл частичной
гепатэктомией предоставляет естественную возможность поиска фак-
торов пролиферации клеток печени (гепатотропинов). Рядом исследо-
ваний, начатых на крысах-парабионтах с перекрестной циркуляцией
крови [1, 2], установлено присутствие в сыворотке гепатэктомирован-
ных животных факторов, стимулирующих синтез ДНК в печени интакт-
ных особей [3], в первичной культуре эмбриональных гепатоцитов [4],
гепатоцитах взрослых крыс [5, 6], клетках гепатомы НТС [7] и отли-
чающихся от известных полипептидных факторов роста и гормонов.
Во всех указанных работах исследовали сыворотку, полученную от
животных через 12—48 ч после частичной гепатэктомии, т. е. в период
завершения Gi-фазы митотического цикла гепатоцитами неудаленных
долей (12 ч) либо максимума синтеза ДНК в популяции гепатоцитов
(24 ч), или непаренхиматозных клеток (48 ч). В то же время наи-
большую концентрацию гепатотропных митогенов в сыворотке гепат-
эктомированных животных можно ожидать в более ранние сроки после
операции.
Целью настоящей работы явилась частичная очистка и характе-
ристика факторов сыворотки гепатэктомированных крыс, стимулирую-
щих пролиферацию гепатоцитов взрослых крыс.
Материалы и методы. Работа выполнена на взрослых беспородных крысах-самцах
разводки вивария Института проблем онкологии им. Р. Е. Кавецкого АН УССР. Час-
тичную гепатэктомию по [8] осуществляли между 9 и 11 ч утра, через различные про-
межутки времени (3 ч, 24 ч) крыс декапитировали, собирали кровь и получали сыво-
ротку общепринятым методом. Кислотно-этанольную экстракцию белков сыворотки
проводили по [9], суммарный белок, полученный осаждением кислотно-этанольного
экстракта смесью этанол : эфир ( 2 : 4 ) , собирали центрифугированием, высушивали на
воздухе, растворяли в 1 Μ уксусной кислоте. Хроматографию белков осуществляли на
колонке 2,5X75 см, заполненной биогелем Р-60 («Віо-Rad», США), элюцию проводили
1 Μ уксусной кислотой со скоростью 18—20 мл/ч. Фракции, соответствовавшие пикам
поглощения при λ = 280 нм, собирали, лиофилизировали, растворяли в 0,04 Μ НС1 в
концентрации 1 мг/мл и использовали для: 1) тестирования в первичной культуре ге-
патоцитов; 2) изофокусировки на амфолинах («LKB», Швеция) в диапазоне величины
рН 3—10. Эпидермальный фактор роста из подчелюстных слюнных желез мышей выде-
ляли, как описано ранее [11].
Для получения первичной культуры гепатоцитов изолированные клетки печени вы-
деляли при помощи коллагеназы («Fluka», Швейцария) [12], гепатоциты отделяли от
непаренхиматозных клеток двукратным центрифугированием при 50 g в течение 40 с,
промывали в среде Игла и наносили в этой же среде с 20 %-ной сывороткой крупного
рогатого скота (Киевский мясокомбинат) на покрытые коллагеном покровные стекла
из расчета (60—70) · 103 гепатоцитов на стекло. Коллаген выделяли по [13]. Первую
смену среды осуществляли через 18 ч, при этом вносили разные фракции сыворотки до
конечной концентрации 2 мкг/мл среды, в состав которой входили также 10 %-ный
гидролизат лактальбумина и инсулин («Віо-Rad», США) в концентрации 10~7 М. Через
20—22 ч в чашки добавляли 3Н-тимидин (СССР) в дозе 74 Бк /мл среды на 60 мин, за-
тем клетки промывали двумя сменами 0,15 Μ NaCl, фиксировали смесью спирт : уксус-
ная кислота (3 : 1), монтировали покровные стекла на предметные и покрывали фото-
эмульсией типа Μ (завод технических фотопластинок, Москва). После экспозиции в те-
чение 10—14 дней проявленные радиоавтографы клеток окрашивали гематоксилин-эози-
БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, Кя 3 141
ном и подсчитывали индекс мечения среди 1000 гепатоцитов произвольно выбранных
полей зрения (Х400).
Результаты и обсуждение. В качестве первого этапа очистки сы-
воротки крови от высокомолекулярных белков, часть из которых ока-
зывает неспецифическое стимулирующее действие на синтез ДНК в
клетках линии L [14], использовали кислотно-этанс/'ьную экстракцию.
Дальнейшее исследование фракций, полученных при хроматографии
кислотно-этанольного экстракта на биогеле Р-60, показало, что сыво-
ротка гепатэктомированных крыс содержит белки, стимулирующие син-
тез ДНК в первичной культуре гепатоцитов (таблица). При исследо-
вании дозовой зависимости митогенного эффекта белков фракций уста-
новлено, что некоторая стимуляция синтеза ДНК в гепатоцитах наблю-
дается при внесении в культурную среду 0,5—1 мкг белка на 1 мл,
максимальная—при добавлении 2—5 мкг, а добавление больших ко-
личеств (до 10 мкг) вызывает некоторое угнетение пролиферативной
активности гепатоцитов. Характерно, что при кумулятивной метке
(3Н-тимидин, 24 ч) индекс мечения гепатоцитов достигает 72,5 %, что
приближается к размеру пролиферативного пула клеток регенерирую-
щей печени и свидетельствует о специфичности белков-гепатотропинов.
При этом уровень стимуляции в значительной мере зависит от времени,
прошедшего от момента операции частичной гепатэктомии. Так, при
внесении в культуральную среду одного и того же количества белка
(2 мкг/мл) аналогичных фракций экстракта, выделенного через 3 и
24 ч после частичной гепатэктомии, наблюдается соответственно 14—
17- и 2,5-кратное повышение индекса мечения гепатоцитов. Как видно
из данных, представленных на рис. 1, проявление стимулирующего
эффекта фракции I в значительной степени зависит от присутствия
сыворотки в культуральной среде, а в бессывороточной среде усилива-
ется инсулином. Следует подчеркнуть, что в присутствии белков фрак-
ций 1—2 значительно удлиняется продолжительность культивирования
Влияние ЭФР, фракций сыворотки интактных и гепатэктомированных крыс
на синтез ДНК в первичной культуре гепатоцитов взрослых крыс
Effect of EGF and serum fractions of intact and partially hepatectomized rats
on DNA synthesis of adult rat hepatocytes cultures
Индекс мечения гепатоцитов
Фракция
А Б
Фракция
Центр Периферия Центр Периферия
контроль
I
II
III
0,34+0,14
0,27-4-0,15
0,124-0,06
0,29+0,16
3,31+0,84
3,64+0,91
3,17+0,94
2,54+0,63
5,75+1,12
4,81 + 1,03
1,15+0,42
18,42+1,78
15,34+1,45
5,29+0,88
Индекс мечения гепатоцитов
Фракция
в 1 нМ ЭФР
Фракция
Центр Периферия Центр Периферия
контроль
I
II
III
0,85+0,23
0,87+0,18
0,41+0,16
4,46+0,98
3,22+0,71
1,62+0,53
7,37+1,62 13,05+1,94
П р и м е ч а н и е . Д л я определения индекса мечения гепатоцитов культуру клеток им-
пульсно метили 3Н-тимидином (60 мин) через 20—22 ч после внесения белков тести-
руемых фракций. Индекс мечения выражен как Λ1+σ из трех независимых эксперимен-
тов (три параллели в каждом) . А — фракции сыворотки интактных крыс; Б и В —
сыворотки животных через 3 и 24 ч после частичной гепатэктомии соответственно.
142 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, Кя 3 142
гепатоцитов, позднее наступает их вакуолизация и деградация, «спол-
зание» с субстрата и замещение их фибробластами.
Использованное в опытах количество белка, оказывающее выра-
женный митогенный эффект на гепатоциты, эквивалентно 0,035 мкл
цельной сыворотки. Если учесть, что по данным изоэлектрофокусиров-
ки (рис. 2) в активных фракциях присутствуют 6—8 белков, среди
которых преобладают альбумины, то очевидно, что тестируемые мито-
генные стимуляторы по своей активности близки к полипептидным
Рис. 1. Индекс мечения гепатоцитов в первичной
культуре в бессывороточной среде без (А) И с
ΙΟ - 7 Μ инсулином (Б). 1, 2, 3 — с добавлением
2 мкг/мл среды белков фракции 1 сыворотки ин-
тактных и гепатэктомированных (через 3 и 24 ч
после операции) крыс соответственно; К — конт-
роль (среда без добавления исследуемых фрак-
ций).
Fig. 1. The labelling index of hepatocytes in pri-
mary cell culture in the serum-free medium without
(A) and with 10~7 Μ insulin (Б). 1, 2., 3 — with
addition of 2 μ g / m l of fraction 1 proteins of the
intact and hepatectomized rat serum (3 and 24
hours after partial hepatectomy), respectively; К —
control.
факторам роста. Действительно, стимуляция синтеза ДНК в культуре
гепатоцитов, индуцированная белками фракций I—II, сравнима с та-
ковой, вызванной введением в культуральную среду 1 нМ (или 6 нг/мл
среды) эпидермального фактора роста (ЭФР, таблица). Так же как
и при действии ЭФР, существенное увеличение индекса мечения гепа-
тоцитов наблюдается в центральных участках и в меньшей мере на
периферии монослоя, тогда как при воздействии инсулина отмечается
повышение пролиферативной активности гепатоцитов, локализованных
на периферии культуры. Соответствующие фракции сыворотки, полу-
ченной через 24 ч после частичной гепатэктомии, не оказывают сти-
мулирующего действия на синтез ДНК в гепатоцитах, растущих в
бессывороточной среде, что также свидетельствует о более низком
содержании гепатотропных митогенов.
Поскольку кислотно-этанольная экстракция белков применяется и
для выделения ЭФР [9], нельзя исключить, что митогенная активность
фракций сыворотки обусловлена присутствием данного фактора роста,
находящегося в виде комплекса с белком-носителем (так как молеку-
лярная масса белков активных фракций находится в диапазоне
50000—70000 по данным хроматографии на биогеле Р-60, рис. 3). Ре-
зультаты определения содержания ЭФР во фракциях после лиофили-
зации и соответствующего растворения в 0,04 Μ НС1 с помощью ра-
диоиммунологического анализа свидетельствуют о том, что концентра-
ция ЭФР в них составляет менее 3 пг/мг белка фракций и, следова-
тельно, не может обусловливать их митогенный эффект.
Известно, что в клетках-продуцентах ЭФР определяется в виде
комплекса с белком аргинин-эстеразой, однако последний никоим об-
разом не модулирует биологического действия фактора роста [10].
В крови ЭФР, как и многие другие гормоны и факторы роста, суще-
ствует в виде комплекса с белками-носителями типа альбуминов или
глобулинов, основной функцией которых является защита молекул гор-
монов от действия ферментов при доставке к клеткам-мишеням. Биоло-
гически активными являются, как правило, свободные молекулы факто-
ров роста.
При сравнительном исследовании гетерогенности белков активных
фракций и соответствующих им фракций сыворотки нормальных крыс
при изоэлектрофокусировке выявлены значительные различия в спект-
БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, Кя 3 143
pax белков с определенным сдвигом основных компонентов в зону
более кислых рН. Это указывает на появление новых белков в сыво-
ротке крови крыс уже через 3 ч после частичной гепатэктомии. Дей-
ствительно, по имеющимся данным [3, 5, 6], в сыворотке гепатэкто-
мированных крыс присутствует ряд относительно высокомолекулярных
(с молекулярной массой 35000—70000) соединений белковой природы,
Рис. 2. Дснситограмма изоэлектрофореграмм белковой фракции 1: 1 — интактные жи-
вотные; 2,3 — через 3 и 24 ч после гепатэктомии соответственно. Амфолины фирмы
«LKB», рН 3—10; окраска — кумасси R-250; К — трипсиновый ингибитор из сои,
pi 4,6.
Fig. 2. Dcnsitogram of the fractions 1 proteins isoelectroforegrams: 1 — intact rats; 2,
3—-3 and 24 hours after partial hepatectomy, respectively. LKB ampholines, pH 3—10;
staining — Coomassie R-250; /( — soybean trypsin inhibitor, pi 4.6.
стимулирующих включение 3Н-тимидина гепатоцитами in vitro и не
являющихся известными неспецифическими гормоноподобными веще-
ствами типа соматомединов, инсулинподобных факторов, инсулина,
глюкагопа. Определяемая нами ДНК-стимулирующая активность свя-
зана с белками с молекулярной массой 35000—70000 и по этой харак-
теристике наиболее близка к гепатотропину, идентифицированному в
тромбоцитарных пластинках крови интактных взрослых крыс, с моле-
кулярной массой около 67000 [15]. Однако, как указывают авторы,
данный белок инактивируется при рН ниже 5,5 и концентрации NaCl
меньше 0,05 М, т. с. именно в тех условиях, при которых ведется кис-
лотно-этанольная экстракция. Клетки регенерирующей печени не яв-
ляются источником белков, обладающих ДНК-стимулирующей актив-
144 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, Кя 3 144
ностью, так как соответствующая экстракция, последующее фракцио-
нирование и тестирование белков ткани не выявило влияния на ин-
тенсивность включения 3Н-тимидина в ДНК гепатоцитов in vitro. Воз-
можно, что белки — стимуляторы пролиферативной активности гепа-
тоцитов — присутствуют и в сыворотке интактных животных, но дей-
ствие их блокировано высокими концентрациями ингибиторов [16].
Таким образом, в сыворотке крыс через 3 ч после частичной гепат-
эктомии выявляются «кислые», относительно высокомолекулярные бел-
Рис. 3. Хроматограмма кислотно-этанольного экстракта сыворотки интактных (N) и
гепатэктомированных (Я, 3 ч после операции) крыс на биогеле Р-60. 1 — бычий сыво-
роточный альбумин (68 к Д ) ; 2 — трипсиновый ингибитор из сои (22 к Д ) ; 3 — инсулин
(6 к Д ) . / — IV—объединенные фракции, использованные для тестирования на мито-
генную активность.
Fig. 3. The bio-gel Р-60 chromatogram of the acid-ethanol extract of the intact (N) and
hepatectomized (Я, 3 hours a f te r operat ion) ra t serum. 1 — b o v i n e serum albumin (68
kDal ton) ; 2 — soybean t rypsin inhibitor (22 kDal ton) ; 3 — insulin (6 kDal ton) . I - I V —
the pooled f ract ions tested for the mitogenic activity.
ки, стимулирующие синтез ДНК в гепатоцитах in vitro. Дальнейшие
исследования по очистке и характеристике указанных белков-гепато-
тропинов позволят определить, создают ли они состояние компетент-
ности гепатоцитов к известным факторам роста (типа ЭФР, фактора
роста из тромбоцитов) или непосредственно специфически обусловли-
вают переход гепатоцитов из G0 периода в митотический цикл.
STIMULATION OF DNA SYNTHESIS IN HEPATOCYTES
BY S E R U M FRACTIONS OF H E P A T E C T O M I Z E D RATS
L. A. Osipova, Yu. D. Ivashchenko, N. I. Nemly, A. I. Bykorez
R. E. Kavetsky Ins t i tu te for Oncology Problems,
Academy of Sciences of the Ukrainian SSR, Kiev
S u m m a г у
The acid-ethanol extract of the hepatectomized rat serum (obtained 3 or 24 lis a f te r the
part ial hepatcctomy) contains proteins s t imula t ing DNA synthesis in the pr imary culture
of the adult rat hepatocytes. The active f ract ions par t ia l ly purified by gel-f i l t rat ion on
the bio-gel P-60 include the spectrum of proteins with a molecular weight of 50-70 kDal ton
characterized by a shift towards more acidic p l l values in comparison with the c o n t r o l
БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, Кя 3 145
as it was shown by electrofocusing electrophoresis. Stimulation of DNA synthesis in
hepatocytes in vitro is more pronounced under the effect of the active fractions of serum
obtained in the earlier periods after the partial hepatectomy.
1. Moolten C., Bucher N. Regeneration of rat liver: transfer of humoral agent across cir-
culation//Science.—1967.—158, N 3798.—P. 272—274.
2. A portal blood factor as the humoral agent in liver regeneration / B. Fisher, P. Szuch,
M. Levine, E. Fisher/ /Ibid.—1971.—171, N 3971.—P. 575—577.
3. Morley C., Kingdon Η. The regulation of cell growth. I. Identification and partial
characterization of a DNA synthesis stimulating factor from the serum of partially
hepatectomized rats / / Biochim. et biophys. acta.— 1973.—308, N 2.—P. 260—275.
4. Sakai Α., Kountz S. Stimulation of hepatocytes and lymphocytes in vitro by liver
regeneration / / N a t u r e . — 1975.—257, N 5521.—P. 53—54.
5. Nakamuta Т., Nawa K., Ichihara A. Partial purification and characterization of hepato-
cyte growth factor from serum of hepatectomized rats / / Biochem. and Biophys. Res.
C o m m u n s . - 1984.—122, N 3.—P. 1450—1459.
6. Control of hepatocyte replication by two serum factors / G. Michalopoulos, K. Houck,
M. Dolan, N. Lue t t eke / /Cancer Res.— 1984.—44, N 10.—P. 4414—4419.
7. Labrecque D., Wilson M., Fogerty S. Stimulation of HTC hepatoma cells growth in
vitro by hepatic stimulator substance (HSS) / / Exp. Cell Res.— 1984.—150, N 2.—
P. 419—429.
8. Higgins G.} Anderson R. Experimental pathology of the liver: restoration of the li-
ver of the white rats following partial surgical r emova l / /Arch . Pathol.— 1931.—
31.—P. 186—202.
9. New class of transforming growth factors potentiated by epidermal growth factor:
isolation from non-neoplastic tissues / A. Roberts, M. Ansano, L. Lamb et al. / / Proc.
Nat. Acad. Sci. USA.— 1981.—78, N 9.—P. 5339—5343.
10. Taylor J., Mitchell WCohen S. Characterization of the binding protein for epidermal
growth f a c t o r / / J . Biol. Chem.— 1974.—248, N 7.—P. 2188—2194.
11. Ускоренное получение высокоочищенного эпидермального фактора роста с помощью
жидкостной хроматографии в обращенной фазе / Ю. Д. Иващенко, Л. А. Осипова,
И. Т. Гут, Л. В. Гарманчук//Эксперим. онкология— 1985—7, № 6.—С. 47—49.
12. Гринчишин В. П., Осипова Л. Α., Винарчук М. П. Получение изолированных гепа-
тоцитов и их оценка/ /Цитология и генетика.— 1981.—15, № 3.— С. 29—31.
13. Strom S., Michalopoulos G. Collagen as a substrate for cell growth and differentiati-
o n / / M e t h . Enzymol.— 1982.—82.—P. 544—555.
14. Шуклинов Β. Α., Шумилина В. В. Влияние различных сывороточных фракций на
дифференцировку клеток линии L / / Цитология.— 1982.—24, № 12.— С. 1454—1457.
15. Russell W., McGowan J., Bucher Ν. Partial characterization of a hepatocyte growth
factor from rat p l a t e l e t s / / J . Cell Physiol.— 1984.—119, N 1.—P. 183—192.
16. Iype P., McMahon B. Hepatic proliferation inhibitor / / Мої. and Cell. Biochem.—
1984.—59, N 1.—P. 57—80.
Ин-т пробл. онкологии им. Р. Ε. Кавецкого АН УССР, Получено 13.06.85
Киев
146 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, Кя 3 146
|