Leucine-zipper motif is responsible for self-association of translation elongation factor 1Bβ
Translation elongation factor 1Bβ (eEF1Bβ) is a metazoan-specific protein catalyzing the guanine nucleotide exchange on translation elongation factor 1A (eEF1A). eEF1Bβ was reported to form oligomers. Aim. To define the structural region of human eEF1Bβ that mediates its self-association. In additio...
Saved in:
| Published in: | Вiopolymers and Cell |
|---|---|
| Date: | 2016 |
| Main Authors: | , , , |
| Format: | Article |
| Language: | English |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2016
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152750 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Leucine-zipper motif is responsible for self-association of translation elongation factor 1Bβ / T.V. Bondarchuk, V.F. Shalak, B.S. Negrutskii, A.V. El’skaya // Вiopolymers and Cell. — 2016. — Т. 32, № 1. — С. 9-20. — Бібліогр.: 25 назв. — англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1862744449424031744 |
|---|---|
| author | Bondarchuk, T.V. Shalak, V.F. Negrutskii, B.S. El’skaya, A.V. |
| author_facet | Bondarchuk, T.V. Shalak, V.F. Negrutskii, B.S. El’skaya, A.V. |
| citation_txt | Leucine-zipper motif is responsible for self-association of translation elongation factor 1Bβ / T.V. Bondarchuk, V.F. Shalak, B.S. Negrutskii, A.V. El’skaya // Вiopolymers and Cell. — 2016. — Т. 32, № 1. — С. 9-20. — Бібліогр.: 25 назв. — англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Вiopolymers and Cell |
| description | Translation elongation factor 1Bβ (eEF1Bβ) is a metazoan-specific protein catalyzing the guanine nucleotide exchange on translation elongation factor 1A (eEF1A). eEF1Bβ was reported to form oligomers. Aim. To define the structural region of human eEF1Bβ that mediates its self-association. In addition, the various truncated forms of this protein were tested in the guanine nucleotide exchange assay with two isoforms of mammalian eEF1A. Methods. The truncated forms of eEF1Bβ were generated by PCR, cloned, expressed in Escherichia coli and purified to homogeneity. Their apparent molecular masses were determined by analytical gel filtration and their guanine nucleotide exchange activities were assessed by filter binding assay. Results. Complete deletion of the N-terminal domain of eEF1Bβ does not affect its oligomerization propensity while deletion of the leucine-zipper motif drastically decreases the apparent molecular mass of the truncated form compared to the full-length protein. Also, the leucine-zipper motif of eEF1Bβ fused to glutathione S-transferase causes oligomerization of the chimeric protein. It was demonstrated that all N-terminally truncated forms of eEF1Bβ displayed similar catalytic activity to that of the full-length protein. Weak inhibitory effect on the catalytic activity was observed only for the truncated form with partially deleted central acidic region. Conclusions. The leucine-zipper motif facilitates oligomerization of recombinant eEF1Bβ. Stepwise deletion of the eEF1Bβ N-terminal domain does not significantly affect the guanine nucleotide exchange activity of the truncated proteins.
Фактор елонгації трансляції 1Bβ(eEF1Bβ) – це білок, наявний лише у багатоклітинних організмів. Він каталізує обмін гуанінових нуклеотидів на факторі елонгації трансляції 1A (eEF1A). Відомо, що eEF1Bβ утворює олігомери. Мета. Визначити структурний домен eEF1Bβ людини, який опосередковує його олігомеризацію. Для встановлення ймовірного впливу N-кінцевої ділянки eEF1Bβ на каталітичну активність цього білка, було перевірено здатність різних вкорочених форм eEF1Bβ каталізувати обмін гуанінових нуклеотидів на обох ізоформах eEF1A ссавців. Методи. Фрагменти кДНК, які кодують вкорочені форми, eEF1Bβ отримували шляхом ПЛР ампліфікації, потім клонували у відповідні вектори, які експресували в клітинах Escherichia coli. Рекомбінантні білки очищали і їхні молекулярні маси визначали аналітичною гель-фільтрацією. Активність вкорочених форм eEF1Bβ перевіряли в реакції обміну гуанінових нуклеотидів. Результати. Видалення N-кінцевого домену eEF1Bβ не вплинуло на його олігомерізацію, в той час як видалення мотиву типу «лейцинова застібка» значно зменшувало молекулярну масу вкороченої форми білка в порівнянні з повнорозмірною. Також, амінокислотний мотив eEF1Bβ типу «лейцинова застібка» злитий з глутатіон S-трансферазою спричиняв олігомерізацію цього химерного білка. Показано, що всі вкорочені з N-кінця форми eEF1Bβ проявляли каталітичну активність, подібну до повнорозмірного білка. Інгібіторний ефект на каталітичну активність спостерігався лише для вкороченої форми білка, в якої була відсутня частина центрального негативно зарядженого регіону. Висновки. Амінокислотний мотив типу «лейцинова застібка» сприяє олігомерізації рекомбінантного eEF1Bβ. Поступове вкорочення N-кінцевого домену не має значного впливу на каталітичну активність eEF1Bβ.
Фактор элонгации трансляции 1Bβ (eEF1Bβ) – белок, присутствующий только в многоклеточных организмах. Он катализирует обмен гуаниновых нуклеотидов на факторе элонгации трансляции 1A (eEF1A). Известно, что eEF1Bβ образует олигомеры. Цель. Определить структурный домен eEF1Bβ человека, который вызывает его олигомеризацию. Для исследования возможного влияния N-концевого участка eEF1Bβ на каталитическую активность этого белка, мы проверили способность различных укороченных форм eEF1Bβ катализировать обмен гуаниновых нуклеотидов на обеих изоформах eEF1A млекопитающих. Методы. Фрагменты кДНК, кодирующие укороченные формы eEF1Bβ, получали при помощи ПЦР амплификации, потом клонировали в соответствующие вектора, которые экспрессировали в клетках Escherichia coli. Рекомбинантные белки очищали и их молекулярные массы определяли аналитической гель-фильтрацией. Активность укороченных форм eEF1Bβ проверяли в реакции обмена гуаниновых нуклеотидов. Результаты. Полное удаление N-концевого домена не влияло на олигомеризацию eEF1Bβ, однако удаление мотива типа «лейцинова застёжка» значительно уменьшало молекулярную массу укороченной формы белка по сравнению с полноразмерной. Также, присоединение аминокислотного мотива eEF1Bβ типа «лейциновая застёжка» к глутатион S-трансферазе вызвало олигомеризацию этого химерного белка. Показано, что все укороченные с N-конца формы eEF1Bβ проявляли такую же каталитическую активность, как и полноразмерный белок. Слабый ингибирующий эффект на каталитическую активность наблюдался лишь для укороченной формы белка с отсутствующей частью центрального негативно заряженного региона. Выводы. Аминокислотный мотив типа «лейциновая застёжка» способствует олигомеризации рекомбинантного eEF1Bβ. Постепенное укорочение N-концевого домена не оказывает значительного влияния на каталитическую активность eEF1Bβ.
|
| first_indexed | 2025-12-07T20:35:22Z |
| format | Article |
| fulltext | |
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-152750 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | English |
| last_indexed | 2025-12-07T20:35:22Z |
| publishDate | 2016 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Bondarchuk, T.V. Shalak, V.F. Negrutskii, B.S. El’skaya, A.V. 2019-06-12T17:37:42Z 2019-06-12T17:37:42Z 2016 Leucine-zipper motif is responsible for self-association of translation elongation factor 1Bβ / T.V. Bondarchuk, V.F. Shalak, B.S. Negrutskii, A.V. El’skaya // Вiopolymers and Cell. — 2016. — Т. 32, № 1. — С. 9-20. — Бібліогр.: 25 назв. — англ. 0233-7657 1993-6842 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000907 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152750 577.217 Translation elongation factor 1Bβ (eEF1Bβ) is a metazoan-specific protein catalyzing the guanine nucleotide exchange on translation elongation factor 1A (eEF1A). eEF1Bβ was reported to form oligomers. Aim. To define the structural region of human eEF1Bβ that mediates its self-association. In addition, the various truncated forms of this protein were tested in the guanine nucleotide exchange assay with two isoforms of mammalian eEF1A. Methods. The truncated forms of eEF1Bβ were generated by PCR, cloned, expressed in Escherichia coli and purified to homogeneity. Their apparent molecular masses were determined by analytical gel filtration and their guanine nucleotide exchange activities were assessed by filter binding assay. Results. Complete deletion of the N-terminal domain of eEF1Bβ does not affect its oligomerization propensity while deletion of the leucine-zipper motif drastically decreases the apparent molecular mass of the truncated form compared to the full-length protein. Also, the leucine-zipper motif of eEF1Bβ fused to glutathione S-transferase causes oligomerization of the chimeric protein. It was demonstrated that all N-terminally truncated forms of eEF1Bβ displayed similar catalytic activity to that of the full-length protein. Weak inhibitory effect on the catalytic activity was observed only for the truncated form with partially deleted central acidic region. Conclusions. The leucine-zipper motif facilitates oligomerization of recombinant eEF1Bβ. Stepwise deletion of the eEF1Bβ N-terminal domain does not significantly affect the guanine nucleotide exchange activity of the truncated proteins. Фактор елонгації трансляції 1Bβ(eEF1Bβ) – це білок, наявний лише у багатоклітинних організмів. Він каталізує обмін гуанінових нуклеотидів на факторі елонгації трансляції 1A (eEF1A). Відомо, що eEF1Bβ утворює олігомери. Мета. Визначити структурний домен eEF1Bβ людини, який опосередковує його олігомеризацію. Для встановлення ймовірного впливу N-кінцевої ділянки eEF1Bβ на каталітичну активність цього білка, було перевірено здатність різних вкорочених форм eEF1Bβ каталізувати обмін гуанінових нуклеотидів на обох ізоформах eEF1A ссавців. Методи. Фрагменти кДНК, які кодують вкорочені форми, eEF1Bβ отримували шляхом ПЛР ампліфікації, потім клонували у відповідні вектори, які експресували в клітинах Escherichia coli. Рекомбінантні білки очищали і їхні молекулярні маси визначали аналітичною гель-фільтрацією. Активність вкорочених форм eEF1Bβ перевіряли в реакції обміну гуанінових нуклеотидів. Результати. Видалення N-кінцевого домену eEF1Bβ не вплинуло на його олігомерізацію, в той час як видалення мотиву типу «лейцинова застібка» значно зменшувало молекулярну масу вкороченої форми білка в порівнянні з повнорозмірною. Також, амінокислотний мотив eEF1Bβ типу «лейцинова застібка» злитий з глутатіон S-трансферазою спричиняв олігомерізацію цього химерного білка. Показано, що всі вкорочені з N-кінця форми eEF1Bβ проявляли каталітичну активність, подібну до повнорозмірного білка. Інгібіторний ефект на каталітичну активність спостерігався лише для вкороченої форми білка, в якої була відсутня частина центрального негативно зарядженого регіону. Висновки. Амінокислотний мотив типу «лейцинова застібка» сприяє олігомерізації рекомбінантного eEF1Bβ. Поступове вкорочення N-кінцевого домену не має значного впливу на каталітичну активність eEF1Bβ. Фактор элонгации трансляции 1Bβ (eEF1Bβ) – белок, присутствующий только в многоклеточных организмах. Он катализирует обмен гуаниновых нуклеотидов на факторе элонгации трансляции 1A (eEF1A). Известно, что eEF1Bβ образует олигомеры. Цель. Определить структурный домен eEF1Bβ человека, который вызывает его олигомеризацию. Для исследования возможного влияния N-концевого участка eEF1Bβ на каталитическую активность этого белка, мы проверили способность различных укороченных форм eEF1Bβ катализировать обмен гуаниновых нуклеотидов на обеих изоформах eEF1A млекопитающих. Методы. Фрагменты кДНК, кодирующие укороченные формы eEF1Bβ, получали при помощи ПЦР амплификации, потом клонировали в соответствующие вектора, которые экспрессировали в клетках Escherichia coli. Рекомбинантные белки очищали и их молекулярные массы определяли аналитической гель-фильтрацией. Активность укороченных форм eEF1Bβ проверяли в реакции обмена гуаниновых нуклеотидов. Результаты. Полное удаление N-концевого домена не влияло на олигомеризацию eEF1Bβ, однако удаление мотива типа «лейцинова застёжка» значительно уменьшало молекулярную массу укороченной формы белка по сравнению с полноразмерной. Также, присоединение аминокислотного мотива eEF1Bβ типа «лейциновая застёжка» к глутатион S-трансферазе вызвало олигомеризацию этого химерного белка. Показано, что все укороченные с N-конца формы eEF1Bβ проявляли такую же каталитическую активность, как и полноразмерный белок. Слабый ингибирующий эффект на каталитическую активность наблюдался лишь для укороченной формы белка с отсутствующей частью центрального негативно заряженного региона. Выводы. Аминокислотный мотив типа «лейциновая застёжка» способствует олигомеризации рекомбинантного eEF1Bβ. Постепенное укорочение N-концевого домена не оказывает значительного влияния на каталитическую активность eEF1Bβ. This work was supported by the interdisciplinary scientific program of the National Academy of Sciences of Ukraine “Fundamental basis for molecular and cell biotechnologies” (2010 2014). en Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Вiopolymers and Cell Structure and Function of Biopolymers Leucine-zipper motif is responsible for self-association of translation elongation factor 1Bβ Структурний мотив типу «лейцинова застібка» відповідає за асоціацію молекул фактора елонгації трансляції 1Bβ Структурный мотив типа «лейциновая застёжка» отвечает за ассоциацию молекул фактора элонгации трансляции 1Bβ Article published earlier |
| spellingShingle | Leucine-zipper motif is responsible for self-association of translation elongation factor 1Bβ Bondarchuk, T.V. Shalak, V.F. Negrutskii, B.S. El’skaya, A.V. Structure and Function of Biopolymers |
| title | Leucine-zipper motif is responsible for self-association of translation elongation factor 1Bβ |
| title_alt | Структурний мотив типу «лейцинова застібка» відповідає за асоціацію молекул фактора елонгації трансляції 1Bβ Структурный мотив типа «лейциновая застёжка» отвечает за ассоциацию молекул фактора элонгации трансляции 1Bβ |
| title_full | Leucine-zipper motif is responsible for self-association of translation elongation factor 1Bβ |
| title_fullStr | Leucine-zipper motif is responsible for self-association of translation elongation factor 1Bβ |
| title_full_unstemmed | Leucine-zipper motif is responsible for self-association of translation elongation factor 1Bβ |
| title_short | Leucine-zipper motif is responsible for self-association of translation elongation factor 1Bβ |
| title_sort | leucine-zipper motif is responsible for self-association of translation elongation factor 1bβ |
| topic | Structure and Function of Biopolymers |
| topic_facet | Structure and Function of Biopolymers |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152750 |
| work_keys_str_mv | AT bondarchuktv leucinezippermotifisresponsibleforselfassociationoftranslationelongationfactor1bβ AT shalakvf leucinezippermotifisresponsibleforselfassociationoftranslationelongationfactor1bβ AT negrutskiibs leucinezippermotifisresponsibleforselfassociationoftranslationelongationfactor1bβ AT elskayaav leucinezippermotifisresponsibleforselfassociationoftranslationelongationfactor1bβ AT bondarchuktv strukturniimotivtipuleicinovazastíbkavídpovídaêzaasocíacíûmolekulfaktoraelongacíítranslâcíí1bβ AT shalakvf strukturniimotivtipuleicinovazastíbkavídpovídaêzaasocíacíûmolekulfaktoraelongacíítranslâcíí1bβ AT negrutskiibs strukturniimotivtipuleicinovazastíbkavídpovídaêzaasocíacíûmolekulfaktoraelongacíítranslâcíí1bβ AT elskayaav strukturniimotivtipuleicinovazastíbkavídpovídaêzaasocíacíûmolekulfaktoraelongacíítranslâcíí1bβ AT bondarchuktv strukturnyimotivtipaleicinovaâzastežkaotvečaetzaassociaciûmolekulfaktoraélongaciitranslâcii1bβ AT shalakvf strukturnyimotivtipaleicinovaâzastežkaotvečaetzaassociaciûmolekulfaktoraélongaciitranslâcii1bβ AT negrutskiibs strukturnyimotivtipaleicinovaâzastežkaotvečaetzaassociaciûmolekulfaktoraélongaciitranslâcii1bβ AT elskayaav strukturnyimotivtipaleicinovaâzastežkaotvečaetzaassociaciûmolekulfaktoraélongaciitranslâcii1bβ |