Сравнение эффективности использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии гена β-галактозидазы в Escherichia coli
Создана модельная система, позволяющая сравнить эффективность использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии beta-галактозидазного гена Е. coli. Избрана следующая стратегия конструирования. Ген PHК-полимеразы фага Т7 клонирован в составе ДНК векторного фага lambda, Модельный ген...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Datum: | 1990 |
| Hauptverfasser: | , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1990
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152951 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Сравнение эффективности использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии гена β-галактозидазы в Escherichia coli / Л.Г. Глушакова, О.Р. Романовская, В.А. Кордюм // Биополимеры и клетка. — 1990. — Т. 6, № 1. — С. 100-103. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-152951 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Глушакова, Л.Г. Романовская, О.Р. Кордюм, В.А. 2019-06-13T11:12:16Z 2019-06-13T11:12:16Z 1990 Сравнение эффективности использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии гена β-галактозидазы в Escherichia coli / Л.Г. Глушакова, О.Р. Романовская, В.А. Кордюм // Биополимеры и клетка. — 1990. — Т. 6, № 1. — С. 100-103. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000250 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152951 577.023 Создана модельная система, позволяющая сравнить эффективность использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии beta-галактозидазного гена Е. coli. Избрана следующая стратегия конструирования. Ген PHК-полимеразы фага Т7 клонирован в составе ДНК векторного фага lambda, Модельный ген z lас-оперона Е. coli (EcoRI-Sal1-фрагмент pLZ56) клонирован в составе ДНК коммерческой плазмиды GEM-I фирмы «Promega» (USA), содержащей поздний промотор фага Т7. В клонироанном фрагменте сохранены сайты связывания с рибосомами и промотор А3, ранний промотор фага Т7, специфичный для РНК-полимеразы Е. coli. Приведены закономерности синтеза β-галактозидазы при транскрипции z-гена как с позднего промотора фага Т7, так и с промотора А3. Створено модельну систему, що дозволяє порівняти ефективність використання раннього і пізнього промоторів фага Т7 для експресії beta-галактозидазного гена Е. coli. Обрано наступну стратегію конструювання. Ген PHК-полімерази фага Т7 клоновано у складі ДНК векторного фага lambda, Модельний ген lасz-оперону Е. coli (EcoRI-Sal1-фрагмент pLZ56) клоновано у складі ДНК комерційної плазміди GEM-I фірми «Promega» (USA), що містить пізній промотор фага Т7. У клонованому фрагменті збережені сайти зв'язування з рибосомами і промотор А3, ранній промотор фага Т7, специфічний для РНК- полімерази Е. coli. Наведено закономірності синтезу β-галактозидази при транскрипції z-гена як з пізнього промотора фага Т7, так і з промотора А3. The model system for comparison of the efficiency of use of early and late promoters of T7 phage for the β-galactosidase gene expression has been constructed. The following strategy of construction has been chosen. The gene of T7 phage RNA-polymerase has been inserted into DNA of phage cloning vector. The model gene z of lac operon of E. coli (EcoRI-Sall digest of pLZ56) has been inserted into DNA of plasmid GEM-1 (firm «Promega») which contains phage T7 late promoter. The cloned pLZ56 fragment of DNA contains also S-D sites and A3 promoter specifically recognized by E. coli RNA-polymerase. Some features of b-galactosidase synthesis during transcription of the z gene under the control of the late promoter of phage T7 and under the control of A3 promoter are shown. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Краткие сообщения Сравнение эффективности использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии гена β-галактозидазы в Escherichia coli Порівняння ефективності використання раннього і пізнього промоторів фага Т7 для експресії гена β-галактозидази в Escherichia coli Comparison of efficiency of use of early and late promoters of T7 phage for β-galactosidase genie expression in Escherichia coli Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Сравнение эффективности использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии гена β-галактозидазы в Escherichia coli |
| spellingShingle |
Сравнение эффективности использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии гена β-галактозидазы в Escherichia coli Глушакова, Л.Г. Романовская, О.Р. Кордюм, В.А. Краткие сообщения |
| title_short |
Сравнение эффективности использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии гена β-галактозидазы в Escherichia coli |
| title_full |
Сравнение эффективности использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии гена β-галактозидазы в Escherichia coli |
| title_fullStr |
Сравнение эффективности использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии гена β-галактозидазы в Escherichia coli |
| title_full_unstemmed |
Сравнение эффективности использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии гена β-галактозидазы в Escherichia coli |
| title_sort |
сравнение эффективности использования раннего и позднего промоторов фага т7 для экспрессии гена β-галактозидазы в escherichia coli |
| author |
Глушакова, Л.Г. Романовская, О.Р. Кордюм, В.А. |
| author_facet |
Глушакова, Л.Г. Романовская, О.Р. Кордюм, В.А. |
| topic |
Краткие сообщения |
| topic_facet |
Краткие сообщения |
| publishDate |
1990 |
| language |
Russian |
| container_title |
Биополимеры и клетка |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Порівняння ефективності використання раннього і пізнього промоторів фага Т7 для експресії гена β-галактозидази в Escherichia coli Comparison of efficiency of use of early and late promoters of T7 phage for β-galactosidase genie expression in Escherichia coli |
| description |
Создана модельная система, позволяющая сравнить эффективность использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии beta-галактозидазного гена Е. coli. Избрана следующая стратегия конструирования. Ген PHК-полимеразы фага Т7 клонирован в составе ДНК векторного фага lambda, Модельный ген z lас-оперона Е. coli (EcoRI-Sal1-фрагмент pLZ56) клонирован в составе ДНК коммерческой плазмиды GEM-I фирмы «Promega» (USA), содержащей поздний промотор фага Т7. В клонироанном фрагменте сохранены сайты связывания с рибосомами и промотор А3, ранний промотор фага Т7, специфичный для РНК-полимеразы Е. coli. Приведены закономерности синтеза β-галактозидазы при транскрипции z-гена как с позднего промотора фага Т7, так и с промотора А3.
Створено модельну систему, що дозволяє порівняти ефективність використання раннього і пізнього промоторів фага Т7 для експресії beta-галактозидазного гена Е. coli. Обрано наступну стратегію конструювання. Ген PHК-полімерази фага Т7 клоновано у складі ДНК векторного фага lambda, Модельний ген lасz-оперону Е. coli (EcoRI-Sal1-фрагмент pLZ56) клоновано у складі ДНК комерційної плазміди GEM-I фірми «Promega» (USA), що містить пізній промотор фага Т7. У клонованому фрагменті збережені сайти зв'язування з рибосомами і промотор А3, ранній промотор фага Т7, специфічний для РНК- полімерази Е. coli. Наведено закономірності синтезу β-галактозидази при транскрипції z-гена як з пізнього промотора фага Т7, так і з промотора А3.
The model system for comparison of the efficiency of use of early and late promoters of T7 phage for the β-galactosidase gene expression has been constructed. The following strategy of construction has been chosen. The gene of T7 phage RNA-polymerase has been inserted into DNA of phage cloning vector. The model gene z of lac operon of E. coli (EcoRI-Sall digest of pLZ56) has been inserted into DNA of plasmid GEM-1 (firm «Promega») which contains phage T7 late promoter. The cloned pLZ56 fragment of DNA contains also S-D sites and A3 promoter specifically recognized by E. coli RNA-polymerase. Some features of b-galactosidase synthesis during transcription of the z gene under the control of the late promoter of phage T7 and under the control of A3 promoter are shown.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152951 |
| citation_txt |
Сравнение эффективности использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии гена β-галактозидазы в Escherichia coli / Л.Г. Глушакова, О.Р. Романовская, В.А. Кордюм // Биополимеры и клетка. — 1990. — Т. 6, № 1. — С. 100-103. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT glušakovalg sravnenieéffektivnostiispolʹzovaniârannegoipozdnegopromotorovfagat7dlâékspressiigenaβgalaktozidazyvescherichiacoli AT romanovskaâor sravnenieéffektivnostiispolʹzovaniârannegoipozdnegopromotorovfagat7dlâékspressiigenaβgalaktozidazyvescherichiacoli AT kordûmva sravnenieéffektivnostiispolʹzovaniârannegoipozdnegopromotorovfagat7dlâékspressiigenaβgalaktozidazyvescherichiacoli AT glušakovalg porívnânnâefektivnostívikoristannârannʹogoípíznʹogopromotorívfagat7dlâekspresíígenaβgalaktozidazivescherichiacoli AT romanovskaâor porívnânnâefektivnostívikoristannârannʹogoípíznʹogopromotorívfagat7dlâekspresíígenaβgalaktozidazivescherichiacoli AT kordûmva porívnânnâefektivnostívikoristannârannʹogoípíznʹogopromotorívfagat7dlâekspresíígenaβgalaktozidazivescherichiacoli AT glušakovalg comparisonofefficiencyofuseofearlyandlatepromotersoft7phageforβgalactosidasegenieexpressioninescherichiacoli AT romanovskaâor comparisonofefficiencyofuseofearlyandlatepromotersoft7phageforβgalactosidasegenieexpressioninescherichiacoli AT kordûmva comparisonofefficiencyofuseofearlyandlatepromotersoft7phageforβgalactosidasegenieexpressioninescherichiacoli |
| first_indexed |
2025-11-26T00:12:36Z |
| last_indexed |
2025-11-26T00:12:36Z |
| _version_ |
1850596315358035968 |
| fulltext |
Краткие
сообщения
У Д К 577.023
Л. Г. Глушакова, О. Р. Романовская, В. А. Кордюм
СРАВНЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ РАННЕГО
И ПОЗДНЕГО ПРОМОТОРОВ ΦΑΓΑ Т7 ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ
ГЕНА β-ГАЛАКТОЗИДАЗЫ В ESCHERICHIA COLI
Создана модельная система, позволяющая сравнить эффективность использования ран-
него и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии [і-галактозидазного гена Е. coli.
Избрана следующая стратегия конструирования. Ген PHК-полимеразы фага Т7
клонирован в составе ДНК векторного фага λ, Модельный ген ζ Іас-оперона Ε. coli
(EcoRI-S all-фрагмент pLZ56) клонирован в составе ДНК коммерческой плазмиды
GEM-I фирмы «Promega» (USA), содержащей поздний промотор фага Т7. В клониро-
ванном фрагменте сохранены сайты связывания с рибосомами и промотор A3, ранний
промотор фага Т7, специфичный для РНК-полимеразы Е. coli.
Приведены закономерности синтеза β-галактозид азы при транскрипции z-гена как
с позднего промотора фага Т7, так и с промотора A3.
Использование высокоспецифичной полимеразы фага Т7 позволяет осуществлять конт-
ролируемую экспрессию целевых генов [1, 2] , что особенно существенно для эукарио-
тических генов, продукты которых могут оказывать токсический эффект на клетки ки-
шечной палочки. РНК-полимераза фага Т7 узнает только поздние промоторы фага 77,
с о д е р ж а щ и е строго консервативные последовательности Д Н К , отсутствующие у
Е. coli [3].
Нам представляется перспективным использование системы, предлагаемой автора-
ми [1, 2], для получения продуктов некоторых эукариотических генов в Е. coli, токсич-
ных для нее и синтез которых можно обеспечить только в контролируемых условиях.
Заимствуя в перспективных целях вышеупомянутую систему, мы решили срав-
нить эффективность позднего промотора фага 7 7 и одного из сильных прокариотиче-
ских промоторов — раннего промотора фага 77,— узнаваемого РНК-полимеразой coli,
а т а к ж е динамику накопления продукта целевого гена, экспрессируемого под контролем
к а ж д о г о из этих промоторов.
Предлагается два способа введения гена полимеразы фага 77 (ген 1) в клетку
кишечной палочки: а) при инфекции рекомбинантным фагом λ, несущим ген 1 фага
7 7 [2] ; б) введение гена 1 в составе Д Н К многокопийной плазмиды [1].
Нами избран следующий путь конструирования векторной системы для контро-
лируемой экспрессии в Е. coli. Ген РНК-полимеразы фага 77 клонирован в составе
Д Н К векторного фага XzUV5E8 [4]. Полученный рекомбинантный фаг обозначили
λρο/77. Целевой ген клонирован в составе векторной Д Н К коммерческой плазмиды
GEM-I (фирма «Promega» , U S A ) . Векторная Д Н К GEM-I предназначена для транс-
крипционной системы in vitro и имеет полилинкерную область, расположенную вслед
за поздним промотором фага 7 7 (рис. 1). Индукция транскрипции с P r 7 осуществля-
ется при инфекции GEM-7-трансформантов фагом λρο/77.
Источником гена 1 фага 77 служила плазмида pAR1219, с о д е р ж а щ а я маркерный
ген Ыа [5]. Д Н К плазмиды pAR1219 гидролизовали рестриктазой EcoRI и лигировали
э т у полноразмерную плазмидную Д Н К с Д Н К векторного фага λ, расщепленной по
.этому ж е сайту.
Отбор рекомбинантных фагов проведен по наличию признака, кодируемого ге-
ном Ыа ( β -лактамазная активность) . Наличие РНК-полимеразной активности в фаго-
лизатах определяли, используя транскрипционную систему in vitro [6].
В качестве модельного гена был избран z-ген /ас-оперона Е. coli, так как его
продукт (β -галактозидаза) легко тестируется и достаточно стабилен в клетках кишеч-
IOO ISSN 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № I
ной палочки [7] . Источником г-гена служила плазмида pLZ56 (рис. 1), любезно предо-
ставленная В. Г. Коробко. Учитывая, что векторная плазмида GEM-I предназначена
для транскрипции in vitro, в полилинкерную область под контролем Pτι был клониро-
ван EcoRI-SalI-фрагмент pLZ56, содержащий помимо z-гена т а к ж е последовательность
Шайна-Далгарно . В этом фрагменте сохранен ранний промотор фага Т7, специфичный
для РНК-полимеразы Е. coli (обозначен A3).
При литической инфекции С£М-1-г -трансформантов фагом λροΙΤ7 обнаружено,
что содержание β -галактозидазы в первые 4 ч после з а р а ж е н и я резко увеличивается,
а затем синтез фермента прекращается (рис. 2, кривая 1). В этом случае экспрессия
Рис. 1. Схема конструирования гибридной гтлазмиды GEM-1-z: L — полилинкерная об-
ласть, с о д е р ж а щ а я уникальные сайты для 13 рестриктаз; Л2 и A3—ранние промото-
ры фага Т7, узнаваемые РНК-полимеразой Е. coli; г — структурный ген β -галактози-
дазы; P t7 — поздний промотор фага Т7, специфичный для РНК-полимеразы фага Т7
Fig. 1. Scheme of cons t ruc t ion of hybrid plasinid GEM-l-z: L — polyl inkcr region con-
t a in ing 13 unique restr ict ion enzyme recogni t ion sites; A2 and A3—early p romote r s of
7 7 p h a g e recognized by E. coli RNA-polymerase ; 2 — a s t ruc tu ra l gene of β -ga lac tos ida -
se; Pn—'a late promoter of phage T7, specific for phage T7 RNA-po lymerase
Рис. 2. β -галактозидазная активность в культуре GEM-I - ζ при инфекции
фагами λροΙΤ7 ( I ) , )aUV5L8 (2), Kc 1857 (<?). Культуру аэрировали при 37 °С в среде
LB, содержащей ампициллин (20 м к г / м л ) . При достижении концентрации ~ IO8 кле-
т о к / м л среды культуру инфицировали с множественностью 1—5 корпускул на клетку.
В момент з а р а ж е н и я вносили мальтозу до конечной концентрации 0,4 % (масса /объем)
Fig. 2. β -ga lac tos idase act ivi ty in JM103 AlccGEM-l-z cul ture infected by p h a g e s λροΙΤ7
( I ) t XzUV5L8 (2), Xc 1857 (3). The cul ture w a s aerated at 37° in LB medium supplemen-
ted with 20 μ^ / ιη ΐ of ampicil l in. When the cell concent ra t ion reached — 1 -108 ce l l s /ml ,
the cul ture w a s infected with mult ipl ic i ty of about 1-5 p h a g e par t ic le /cel l . At this momen t ,
mal tose w a s added to a f inal concent ra t ion of 0.4 % ( w / v )
г-гена контролировалась PtΊ. В отдельном эксперименте сравнивали характер экспрес-
сии модельного гена под контролем как Pti (рис. 2, кривая 1), так и A3 (рис. 2, кри-
вые 2 и 3) промоторов. Д л я полной идентификации условий эксперимента и для исклю-
чения влияния инфекции фагом на характер выражения г-гена при анализе экспрессии
под контролем ЛЗ-промотора GEM-1-z-трансформанты инфицировали фагами λα 1857
и XzUV5L8.
Векторный фаг XzUV5L8, использованный для клонирования гена РНК-полимера-
зы фага Т7, содержит структурный ген β -галактозидазы. Ранее [8] нами показано,
что фагозависимый синтез β -галактозидазы в клетках Е. coli при низких значениях мно-
жественности инфекции малоэффективен. Однако, чтобы исключить этот уровень син-
теза β -галактозидазы и характеризовать только синтез, обеспечиваемый экспрессией
гена ζ в составе GEM-1-z под контролем промотора A3, мы использовали фаг λcl857
(предоставлен В. Н. Рыбчиным, Ленинград, политехи, ин-т).
Все три варианта микробного синтеза β -галактозидазы рассматривали в одинако-
вых условиях (рис. 2) . Отмечаем, что синтез β -галактозидазы, наблюдаемый при ли-
тической инфекции фагом λροΙΤ7 GEМ-/ - г -трансформантов (транскрипция г-гена кон-
тролируется P t 7 ) , осуществляется с большей скоростью (в первые 3—4 ч) и прерыва-
ется (лизисом клеток) значительно раньше (рис. 2, кривая / ) , чем для двух других
вариантов (рис. 2, кривая 2 — транскрипция г-гена контролируется промотором A3,
кривая 3 — транскрипция г-гена контролируется как A3, так и lacUV5 промотором (в
ISSN 0233-7b57. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. N° 1 103
составе Д Н К фага λ) . Весь эксперимент проведен со штаммом Е. coli К12JMЮЗМас
[9], в клетках которого вследствие делении /ос-области отсутствует синтез β-галак-
тозидазы.
Как представлено на рис. 2 (кривая / ) , при инфекции фагом KpolT7 GEM-I-ζ-
трансформантов, наблюдается активный синтез β-галактозидазы, прекращающийся
через 4 ч после заражения.
Известно [2], что РНК-полимераза фага Т7 активно конкурирует с РНК-полиме-
разой Е. coli, причем настолько, что транскрибируются практически только гены под
контролем Рт7- В таких условиях в клетках кишечной палочки, трансформированных
GEM-I и инфицированных фагом КроП7, не происходит созревания фага. В наших
условиях при использовании множественности инфекции в дапазоне 1—5 корпускул на
клетку не все клетки популяции оказываются зараженными фагом λροΙΤ7. Незаражен-
ные исходно клетки продолжают делиться и уже не могут быть инфицированы потом-
ством исходного (внесенного в культуру) фага роП7 и, следовательно, в них отсут-
ствует экспрессия целевого гена под контролем Pti (рис. 2, кривая 1).
При заражении культуры клеток JM103 GEM-1-z фагами Kc 1857 и KzUV5L8 про-
исходит их успешное размножение с последующей «реинфекцией» неинфицированной
части клеточной популяции. Благодаря этому обстоятельству наблюдается увеличение
уровня β-галактозидазной активности достаточно длительное время (рис. 2, кривые 2,
3) . Этот подход приемлем для получения в Е. coli нетоксичных для ее клеток и до-
статочно стабильных продуктов целевых генов [10, 11].
В последующей работе будет оценена возможность экспрессии в Е. coli под
контролем PTI целевого эукариотического гена.
C O M P A R I S O N O F EFFICIENCY OF U S E O F EARLY AND LATE P R O M O T E R S
OF 7 7 P h a g e FOR β -GALACTOSIDASE GENIE E X P R E S S I O N
IN ESCHERICHIA COLI
L. G. Glushakova, O. R. Romanovskaya, V. A. Kordium
Ins t i tu te of Molecular Biology and Genetics,
Academy of Sciences of the Ukrainian SSR, Kiev
S u m m a r y
The jnode l system for comparison of the efficiency of use of early and late promoters
of 77 phage for the β-galac tos idase gene expression has been constructed.
The fol lowing s t ra tegy of construction has been chosen. The gene of T7 phage RNA-
polymerase has been inserted into DNA of phage cloning vector. The model gene ζ of
lac operon of E. coli (EcoRI-SalI digest of pLZ56) has been inserted into DNA of plasmid
GEM-I (firm «Promega») which contains phage T7 late promoter. The cloned pLZ56
f r agmen t of DNA contains also S-D sites and A3 promoter specifically recognized by
E. coli RNA-polymerase. Some features of β-galac tos idase synthesis dur ing t ranscr ip-
tion of the z gene under the control of the late promoter of phage 77 and under the
control of A3 promoter are shown.
С П И С О К Л И Т Е Р А Т У Р Ы
1. Tabor /., Richardson C. A bacter iophage 77 RNA polymerase /promoter system for
conrolled exclusive expression of specific genes / / P r o c . Nat. Acad. S с і. USA.— 1985.—
82, N б — P . 1074—1078.
2. Sludier W., Mofjatt В. Use of bacter iophage 77 polymerase to direct selective high-
level expression of cloned g e n e s / / J . Мої. Biol.— 1986.·—189, N 1,—P. 113—130.
3. Moffatt B., Dunn J., Studier W. Nucleotide sequence of the gene for bacter iophage
77 RNA polymerase / / Ibid.— 1984.— 173, N 2 . — P . 265—269.
4. Bacteriophage lambda — E. coli K12 vector host system for gene cloning and expres-
sion under lactose promoter control / P. Charney, A. Louise, A. Fritsch et a l . / / М о ї .
and Gen. Genet.— 1979,— 170, N 2 . — P . 171 — 178.
5. Cloning and expression of the gene for bacter iophage 77 RNA polymerase / P. Davan-
loo, A. Rosenberg, J. Dunn, W:. S t u d i e r / / P r o c . Nat. Acad. Sci. USA.— 1984,—81,
7,— P. 2035—2039.
6. Eukarijotic t ransient expression system based on recombinant vaccinia virus that syn-
thesizes bacter iophage 77 RNA polymerase / T. Fuerst , E. iNilcs, W. Studicr, B. Moss / /
Ibid.—1986 —83 , N 21 .—P. >8122—8126.
7. Миллер Д. Определение ферментов лактозного оперона.—Μ. : Мир, 1976.— 436 с.
8. Черных С. И., Глуилакова JI. Г., Стельмашенко Л. Н. Исследование фагозависимого
синтеза β-галактозидазы клетками Escherichia coli / / Микробиол. ж у р н — 1979.—
41, № 5 ,—С. 479—482.
102 ISSN 0233-7b57. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. N° 1 103
9. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование.— М. : Мир,
1984.— 479 с.
10. Moire Л., Brammer W. / . The use of specialized t r a n s d u c i n g p h a g e s in the ampl i f ica-
tion of enzyme p r o d u c t i o n / / М о ї . and Gen. Genet .— 1976.— 149, N 1.— P. '87—99.
11. Суперсинтез β -галактозидазы, индуцированный некоторыми амбер-мутантами фага
Xplac5cl857 / Л. Г. Глушакова , С. И. Черных, Л . Н. Стельмашенко, В. А. К о р д ю м / /
Молекуляр . биология.— 1982.— Вып. 30.— С. 37—41.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Киев Получено 06.02.89
УДК 575.113.1:581.143.6
В. Т. Соловьян, О. В. Захленюк, В. А. Кунах
ПЕРЕСТРОЙКИ ГЕНОМА РАУВОЛЬФИИ
В ПРОЦЕССЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ IN VITRO
Проведено сравнительное изучение геномов интактного растения и культивируемых
клеток раувольфии. Методом дот-гибридизации показано отсутствие значительных
геномных перестроек в непродолжительно культивируемых каллусах R. serpentina и
R. Verticillataf в то время как геном длительно пассируемых клеток R. serpentina пре-
терпевает значительные изменения.
Рестрикционным анализом выявлено наличие геномных перестроек как в первич-
ных каллусах R. serpentina и R. verticillata, так и в длительно пассируемых клетках
R. serpentina.
Заключено, что геномные перпестройки могут происходить на ранних этапах
культивирования, однако процесс пассирования in vitro приводит к более значитель-
ным изменениям генома.
1 2 3 4 { / 2 5 4 1
WO 114*6 114*9 150*10 100 105*5 90*2 120*5 \30Ч 754 100
Рис. 1. Дот-гибридизация 3 2Р-меченных частых (а) и умеренных (б) повторов линии
R. и.-1,5 с суммарной Д Н К растения и каллусов R. verticillata: Д Н К интактного рас-
тения (1): Д Н К первичного каллуса (2 ) ; Д Н К линии R. v.-1,0, культивируемой in vitro
1 год (3)\ Д Н К линии R. υ.-1,5. Цифры внизу — средний процент гомологии, вычис-
ленный по результатам четырех опытов
Fig. 1. Dot hybr id iza t ion of 3 2P-Iabeled h ighly (α) and middle (υ) repeated sequences
f rom line R. "J.-1.5 with total DNAs f rom p lan t and calli of R. verticillata: DNA f rom
intact p lant ( / ) ; DNA from p r imary cal lus (2); DNA f rom line R. u.-l.O cul t ivated for
1 year (3); DNA from line R. v.-1.5 cul t ivated for 1.5 year (4). F igu res below are the
sequence homology pe rcen tages ave rage of the four de te rmina t ions
Рис. 2. Дот-гибридизация 3 2Р-меченных повторяющихся последовательностей (Cot до
100) первичного каллуса с суммарной Д Н К растения и каллусов R. serpentina: Д Н К
длительно пассируемой линии R. serpentina ( / ) ; Д Н К первичного каллуса (2); Д Н К
интактного растения (3). Цифры в н и з у — с р е д н и й процент гомологии повторов, вы-
численный по результатам четырех опытов
Fig . 2. Dot hybr idizat ion of 3 2P-Iabeled p r imary cal lus repeated sequences (Cot up to
100) with total DNAs f rom p lan t and calli of R. serpentina: DNA from long cul t ivated
R. serpentina line (1); DNA f rom pr imary cal lus (2); DNA f rom intact p lan t (3). Fi-
g u r e s below are the sequence homology pe rcen tages ave rage of the four de te rmina t ions
ISSN 0233-7b57. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. N° 1 103
|