ITSN1 and Ruk/CIN85 colocalized to clathrin-coated pits in MCF-7 cells
Activation of receptor tyrosine kinases (RTK) by corresponding ligands results not only in signal propagation, but also initiates a number of processes, such as clathrin-mediated endocytosis, which precisely regulate biological outcome. These processes are tightly controlled by coordinated action of...
Saved in:
| Published in: | Вiopolymers and Cell |
|---|---|
| Date: | 2009 |
| Main Authors: | , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | English |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2009
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152964 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | ITSN1 and Ruk/CIN85 colocalized to clathrin-coated pits in MCF-7 cells / O.V. Nikolaienko, I.Ya. Skrypkina, L.O. Tsyba, L.B. Drobot, A.V. Rynditch // Вiopolymers and Cell. — 2009. — Т. 25, № 5. — С. 424-427. — Бібліогр.: 16 назв. — англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1862530624248610816 |
|---|---|
| author | Nikolaienko, O.V. Skrypkina, I.Ya. Tsyba, L.O. Drobot, L.B. Rynditch, A.V. |
| author_facet | Nikolaienko, O.V. Skrypkina, I.Ya. Tsyba, L.O. Drobot, L.B. Rynditch, A.V. |
| citation_txt | ITSN1 and Ruk/CIN85 colocalized to clathrin-coated pits in MCF-7 cells / O.V. Nikolaienko, I.Ya. Skrypkina, L.O. Tsyba, L.B. Drobot, A.V. Rynditch // Вiopolymers and Cell. — 2009. — Т. 25, № 5. — С. 424-427. — Бібліогр.: 16 назв. — англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Вiopolymers and Cell |
| description | Activation of receptor tyrosine kinases (RTK) by corresponding ligands results not only in signal propagation, but also initiates a number of processes, such as clathrin-mediated endocytosis, which precisely regulate biological outcome. These processes are tightly controlled by coordinated action of a plethora of proteins – enzymes, scaffolds and inhibitory molecules. An example of an endocytic accessory protein that also functions in cell signaling is provided by intersectin 1 (ITSN1). Previously we have shown that ITSN1 forms a complex with adaptor protein Ruk/CIN85 and ubiquitin ligase Cbl-b, which are implicated in down regulation of RTK. The present study aimed to determine the subcellular localization of ITSN1-Ruk/CIN85 complexes relatively to clathrin light chain and Cbl-b. Methods. Transient transfection of MCF-7 breast adenocarcinoma cells with the constructs containing Omni-tagged intersectin 1 and clathrin light chain fused with mCherry fluorescent protein was utilized to determine subcellular localization by direct or indirect immunofluorescence. Results. We found that Ruk/CIN85-ITSN1 complexes partially colocalized with Cbl-b and clathrin light chain in MCF-7 cells. Conclusions. In our report we provide experimental evidence that ITSN1-Ruk/CIN85 complexes exist in pre-assembled state with Cbl-b and are targeted to clathrin-coated pits in MCF-7 cells.
Активация рецепторних тирозин киназ соответствующими лигандами приводит не только к распространению сигнала, но и инициирует разные процессы, например, клатрин-опосредованный эндоцитоз, которые регулируют клеточный ответ. Эти процессы строго контролируются благодаря координированному действию большого количества белков – ферментов, адапторов и ингибиторов. Примером адапторного белка, функционирующего как в эндоцитозе, так и в клеточной сигнализации, служит интерсектин 1 (ITSN1). Ранее нами показано, что ITSN1 формирует комплекс с адапторным белком Ruk/CIN85 и убиквитин лигазой Cbl-b, участвующими в негативной регуляции рецепторных тирозинкиназ. Целью данной работы было выявление субклеточной локализации комплексов Ruk/CIN85-ITSN1 по отношению к клатрину и Cbl-b. Методы. Для определения локализации белков клетки аденокарциномы молочной железы человека MCF-7 транзиентно трансфицировали конструкциями, кодирующими ITSN1 и клатрин, и исследовали методами прямого и не прямого иммунофлуоресцентного анализа. Результаты. Показано, что ITSN1 и Ruk/CIN85 частично колокализуются с Cbl-b и клатрином в клетках линии MCF-7. Выводы. Установлено, что комплексы ITSN1 и белка Ruk/CIN85 частично колокализуются с Cbl-b и находятся в клатрин-окаймленных ямках клеток линии MCF-7
Активація рецепторних тирозинкіназ відповідними лігандами призводить не лише до розповсюдження сигналу, але й ініціює різні процеси, серед яких клатрин-опосередкований ендоцитоз, що регулюють клітинну відповідь. Такі процеси чітко контролюються завдяки координованій дії великої кількості білків ферментів, адапторів та інгібіторів. Прикладом адапторного білка, що функціонує як в ендоцитозі, так і в клітинній сигналізації, є інтерсектин 1 (ITSN1). У попередніх дослідженнях ми показали, що ITSN1 утворює комплекс з адапторним білком Ruk/CIN85 та убіквітинлігазою Cbl-b, які залучені до негативної регуляції рецепторних тирозинкіназ. Метою даної роботи було визначи ти субклітинну локалізацію комплексів Ruk/CIN85-ITSN1 по відношенню до клатрину та Cbl-b. Методи. Для встановлення локалізації білків клітини аденокарциноми молочної залози людини MCF-7 транзієнтно трансфікували конструкціями, що містять ITSN1 і клатрин, та вивчали методами прямого і не прямого імунофлуоресцентного аналізу. Результати. Показано, що ITSN1 і Ruk/CIN85 частковоко локалізуються з Cbl-b і клатрином у клітинах лінії MCF-7. Висновки. Продемонстровано, що комплекси Ruk/ CIN85 з ITSN1 колокалізуються з Cbl-b і знаходяться у клатрин-облямованих ямках клітин лінії MCF-7.
|
| first_indexed | 2025-11-24T02:41:21Z |
| format | Article |
| fulltext | |
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-152964 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | English |
| last_indexed | 2025-11-24T02:41:21Z |
| publishDate | 2009 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Nikolaienko, O.V. Skrypkina, I.Ya. Tsyba, L.O. Drobot, L.B. Rynditch, A.V. 2019-06-13T11:39:24Z 2019-06-13T11:39:24Z 2009 ITSN1 and Ruk/CIN85 colocalized to clathrin-coated pits in MCF-7 cells / O.V. Nikolaienko, I.Ya. Skrypkina, L.O. Tsyba, L.B. Drobot, A.V. Rynditch // Вiopolymers and Cell. — 2009. — Т. 25, № 5. — С. 424-427. — Бібліогр.: 16 назв. — англ. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0007F4 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152964 577.25 Activation of receptor tyrosine kinases (RTK) by corresponding ligands results not only in signal propagation, but also initiates a number of processes, such as clathrin-mediated endocytosis, which precisely regulate biological outcome. These processes are tightly controlled by coordinated action of a plethora of proteins – enzymes, scaffolds and inhibitory molecules. An example of an endocytic accessory protein that also functions in cell signaling is provided by intersectin 1 (ITSN1). Previously we have shown that ITSN1 forms a complex with adaptor protein Ruk/CIN85 and ubiquitin ligase Cbl-b, which are implicated in down regulation of RTK. The present study aimed to determine the subcellular localization of ITSN1-Ruk/CIN85 complexes relatively to clathrin light chain and Cbl-b. Methods. Transient transfection of MCF-7 breast adenocarcinoma cells with the constructs containing Omni-tagged intersectin 1 and clathrin light chain fused with mCherry fluorescent protein was utilized to determine subcellular localization by direct or indirect immunofluorescence. Results. We found that Ruk/CIN85-ITSN1 complexes partially colocalized with Cbl-b and clathrin light chain in MCF-7 cells. Conclusions. In our report we provide experimental evidence that ITSN1-Ruk/CIN85 complexes exist in pre-assembled state with Cbl-b and are targeted to clathrin-coated pits in MCF-7 cells. Активация рецепторних тирозин киназ соответствующими лигандами приводит не только к распространению сигнала, но и инициирует разные процессы, например, клатрин-опосредованный эндоцитоз, которые регулируют клеточный ответ. Эти процессы строго контролируются благодаря координированному действию большого количества белков – ферментов, адапторов и ингибиторов. Примером адапторного белка, функционирующего как в эндоцитозе, так и в клеточной сигнализации, служит интерсектин 1 (ITSN1). Ранее нами показано, что ITSN1 формирует комплекс с адапторным белком Ruk/CIN85 и убиквитин лигазой Cbl-b, участвующими в негативной регуляции рецепторных тирозинкиназ. Целью данной работы было выявление субклеточной локализации комплексов Ruk/CIN85-ITSN1 по отношению к клатрину и Cbl-b. Методы. Для определения локализации белков клетки аденокарциномы молочной железы человека MCF-7 транзиентно трансфицировали конструкциями, кодирующими ITSN1 и клатрин, и исследовали методами прямого и не прямого иммунофлуоресцентного анализа. Результаты. Показано, что ITSN1 и Ruk/CIN85 частично колокализуются с Cbl-b и клатрином в клетках линии MCF-7. Выводы. Установлено, что комплексы ITSN1 и белка Ruk/CIN85 частично колокализуются с Cbl-b и находятся в клатрин-окаймленных ямках клеток линии MCF-7 Активація рецепторних тирозинкіназ відповідними лігандами призводить не лише до розповсюдження сигналу, але й ініціює різні процеси, серед яких клатрин-опосередкований ендоцитоз, що регулюють клітинну відповідь. Такі процеси чітко контролюються завдяки координованій дії великої кількості білків ферментів, адапторів та інгібіторів. Прикладом адапторного білка, що функціонує як в ендоцитозі, так і в клітинній сигналізації, є інтерсектин 1 (ITSN1). У попередніх дослідженнях ми показали, що ITSN1 утворює комплекс з адапторним білком Ruk/CIN85 та убіквітинлігазою Cbl-b, які залучені до негативної регуляції рецепторних тирозинкіназ. Метою даної роботи було визначи ти субклітинну локалізацію комплексів Ruk/CIN85-ITSN1 по відношенню до клатрину та Cbl-b. Методи. Для встановлення локалізації білків клітини аденокарциноми молочної залози людини MCF-7 транзієнтно трансфікували конструкціями, що містять ITSN1 і клатрин, та вивчали методами прямого і не прямого імунофлуоресцентного аналізу. Результати. Показано, що ITSN1 і Ruk/CIN85 частковоко локалізуються з Cbl-b і клатрином у клітинах лінії MCF-7. Висновки. Продемонстровано, що комплекси Ruk/ CIN85 з ITSN1 колокалізуються з Cbl-b і знаходяться у клатрин-облямованих ямках клітин лінії MCF-7. en Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Вiopolymers and Cell Короткі повідомлення ITSN1 and Ruk/CIN85 colocalized to clathrin-coated pits in MCF-7 cells Інтерсектин 1 та Ruk/CIN85 колокалізуються в клатрин-облямованих ямках клітин лінії MCF-7 Интерсектин 1 и Ruk/CIN85 колокализуются в клатрин-окаймленных ямках клеток линии MCF-7 Article published earlier |
| spellingShingle | ITSN1 and Ruk/CIN85 colocalized to clathrin-coated pits in MCF-7 cells Nikolaienko, O.V. Skrypkina, I.Ya. Tsyba, L.O. Drobot, L.B. Rynditch, A.V. Короткі повідомлення |
| title | ITSN1 and Ruk/CIN85 colocalized to clathrin-coated pits in MCF-7 cells |
| title_alt | Інтерсектин 1 та Ruk/CIN85 колокалізуються в клатрин-облямованих ямках клітин лінії MCF-7 Интерсектин 1 и Ruk/CIN85 колокализуются в клатрин-окаймленных ямках клеток линии MCF-7 |
| title_full | ITSN1 and Ruk/CIN85 colocalized to clathrin-coated pits in MCF-7 cells |
| title_fullStr | ITSN1 and Ruk/CIN85 colocalized to clathrin-coated pits in MCF-7 cells |
| title_full_unstemmed | ITSN1 and Ruk/CIN85 colocalized to clathrin-coated pits in MCF-7 cells |
| title_short | ITSN1 and Ruk/CIN85 colocalized to clathrin-coated pits in MCF-7 cells |
| title_sort | itsn1 and ruk/cin85 colocalized to clathrin-coated pits in mcf-7 cells |
| topic | Короткі повідомлення |
| topic_facet | Короткі повідомлення |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152964 |
| work_keys_str_mv | AT nikolaienkoov itsn1andrukcin85colocalizedtoclathrincoatedpitsinmcf7cells AT skrypkinaiya itsn1andrukcin85colocalizedtoclathrincoatedpitsinmcf7cells AT tsybalo itsn1andrukcin85colocalizedtoclathrincoatedpitsinmcf7cells AT drobotlb itsn1andrukcin85colocalizedtoclathrincoatedpitsinmcf7cells AT rynditchav itsn1andrukcin85colocalizedtoclathrincoatedpitsinmcf7cells AT nikolaienkoov íntersektin1tarukcin85kolokalízuûtʹsâvklatrinoblâmovanihâmkahklítinlíníímcf7 AT skrypkinaiya íntersektin1tarukcin85kolokalízuûtʹsâvklatrinoblâmovanihâmkahklítinlíníímcf7 AT tsybalo íntersektin1tarukcin85kolokalízuûtʹsâvklatrinoblâmovanihâmkahklítinlíníímcf7 AT drobotlb íntersektin1tarukcin85kolokalízuûtʹsâvklatrinoblâmovanihâmkahklítinlíníímcf7 AT rynditchav íntersektin1tarukcin85kolokalízuûtʹsâvklatrinoblâmovanihâmkahklítinlíníímcf7 AT nikolaienkoov intersektin1irukcin85kolokalizuûtsâvklatrinokaimlennyhâmkahkletokliniimcf7 AT skrypkinaiya intersektin1irukcin85kolokalizuûtsâvklatrinokaimlennyhâmkahkletokliniimcf7 AT tsybalo intersektin1irukcin85kolokalizuûtsâvklatrinokaimlennyhâmkahkletokliniimcf7 AT drobotlb intersektin1irukcin85kolokalizuûtsâvklatrinokaimlennyhâmkahkletokliniimcf7 AT rynditchav intersektin1irukcin85kolokalizuûtsâvklatrinokaimlennyhâmkahkletokliniimcf7 |