The dynamics of actin filament polymerization in activated leukocytes under experimental diabetes mellitus against the background of agmatine administration - Brodyak, I.V.; Bila, I.I.; Sybirna, N.O. (Вiopolymers and Cell, 2017)
Aim. To research the impact of agmatine on the redistribution of actin fractions, which are repre-sented by cytoskeletal actin filaments, short actin filaments of the plasma membrane skeleton and actin monomers (G-actin) in rat leukocytes under experimental diabetes mellitus (EDM). Methods. Leukocytes were lyzed in Triton X-100 and subjected to centrifugation to obtain cytoskeletal actin filaments, short actin filaments and actin monomers, which were separated in SDS-PAAG, followed by the immunoblot analysis of anti-actin antibodies. Results. Under EDM, an intensifi-cation of the process of short actin filament depolymerization and an increase in the G-actin con-tent were observed in leukocytes activated by sialospecific wheat germ lectin (WGA). Against a background of agmatine administration, the response dynamics to the WGA-stimulating effect was characterized by an increase in actin polymerization in the fraction of cytoskeletal filaments already after 0.5 min exposure to lectin, an exceptionally rapid depolymerization process after 1 min of the lectin treatment, and return to the initial indices after 3 min exposure to lectin. Conclusions. In leukocytes of animals with EDM against a background of agmatine administration, the transduction of WGA-induced signal through sialoglycoconjugates causes the actin redistribution. It indicates that this polyamine helps to restore and maintain a functional response of leukocytes to the activation signals. Мета. Дослідити вплив агматину на перерозподіл фракцій актину, які представлені актиновими філаментами цито-скелету, короткими актиновими філаментами скелету плазматичної мембрани і мономерами актину (G-актин), у лейкоцитах щурів з експериментальним цукровим діабетом (ЕЦД) Методи. Лейкоцити лізували в Тритоні Х-100 і піддавали центрифугуванню, у результаті якого було отримано актинові філаменти цитоскелету, короткі актинові філаменти і мономери актину, які розділяли в SDS-ПААГ, після чого проводили імуноблот аналіз із використан-ням анти-актинових антитіл. Результати. За умов ЕЦД у лейкоцитах, активованих сіалоспецифічним лектином зародків пшениці (WGA), спостерігається інтенсифікування процесу деполімеризації коротких актинових філаме-нтів і збільшення вмісту G-актину, а на фоні введення агматину динаміка формування відповіді на WGA-стимулювальний вплив характеризувалася посиленням полімеризації актину у фракції філаментів цитоскелету вже на 0,5 хв впливу лектину, дуже стрімким процесом деполімеризації на 1 хв після дії лектину та поверненням пока-зників до рівня у вихідному стані у разі дії лектину впродовж 3 хв. Висновки. У лейкоцитах тварин з ЕЦД на фоні введення агматину трансдукція WGA-індукованого сигналу через сіалоглікокон’югати зумовлює перерозподіл вмісту актину, вказуючи на те, що даний поліамін сприяє відновленню і підтриманню функціональної відповіді лейкоцитів на активаційні сигнали. Цель. Исследовать влияние агматина на перераспределение фракций актина, которые представлены актиновыми филаментами цитоскелета, короткими актиновыми филаментами скелета плазматической мембраны и мономера-ми актина (G-актин), в лейкоцитах крыс с экспериментальным сахарным диабетом (ЭСД). Методы. Лейкоциты лизировали в Тритоне Х-100 и подвергали центрифугированию, в результате которого было получено актиновые филаменты цитоскелета, короткие актиновые филаменты и мономеры актина, которые разделяли в SDS-ПААГ, после чего проводили иммуноблот анализ с использованием антиактиновых антител. Результаты. В условиях ЭСД в лейкоцитах, активированных сиалоспецыфическим лектином зародышей пшеницы (WGA), наблюдается интен-сификация процесса деполимеризации коротких актиновых филаментов и увеличение содержания G-актина, а на фоне введения агматина динамика формирования ответа на WGA-стимулирующее влияние характеризировалась усилением полимеризации актина во фракции филаментов цитоскелета уже на 0,5 мин влияния лектина, очень стремительным процессом деполимеризации на 1 мин после действия лектина и возвращением показателей к уро-вню в исходном состоянии в случае действия лектина в течение 3 мин. Выводы. В лейкоцитах животных с ЭСД на фоне введения агматина трансдукция WGA-индуцированого сигнала через сиалогликоконьюгаты приводит к пе-рераспределению содержания актина, указывая на то, что данный полиамин способствует восстановлению и по-ддержанию функционального ответа лейкоцитов на активационные сигналы.