Выделение трансляционно активной поли(А)⁺ и поли(А)⁻ мРНК из цитоплазмы прорастающих зародышей пшеницы
Хроматографией на бензоилированной целлюлозе выделена функционально активная поли (А)⁻ мРНК из полирибосом и свободных цитоплазматических информосом. Очищенные фракции поли (А)⁻ мРНК не имеют существенных отличий по молекулярно-весовым характеристикам от цитоплазматической поли (А)⁺ мРНК. Поли (А)⁻...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Дата: | 1986 |
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1986
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153427 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Выделение трансляционно активной поли(А)⁺ и поли(А)⁻ мРНК из цитоплазмы прорастающих зародышей пшеницы / Н.Г. Филимонов, А.О. Агашкин, О.Д. Саблина, М.А. Айтхожин // Биополимеры и клетка. — 1986. — Т. 2, № 6. — С.307-311. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-153427 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Филимонов, Н.Г. Агашкин, А.О. Саблина, О.Д. Айтхожин, М.А. 2019-06-14T10:11:27Z 2019-06-14T10:11:27Z 1986 Выделение трансляционно активной поли(А)⁺ и поли(А)⁻ мРНК из цитоплазмы прорастающих зародышей пшеницы / Н.Г. Филимонов, А.О. Агашкин, О.Д. Саблина, М.А. Айтхожин // Биополимеры и клетка. — 1986. — Т. 2, № 6. — С.307-311. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.0001C8 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153427 547.963.3 Хроматографией на бензоилированной целлюлозе выделена функционально активная поли (А)⁻ мРНК из полирибосом и свободных цитоплазматических информосом. Очищенные фракции поли (А)⁻ мРНК не имеют существенных отличий по молекулярно-весовым характеристикам от цитоплазматической поли (А)⁺ мРНК. Поли (А)⁻ мРНК полирибосом и свободных информосом в одинаковой мере стимулируют включение [³⁵S]метионина в кислотонерастворимый продукт, но эффективность их трансляции существенно ниже, чем эффективность трансляции поли (А)⁺ мРНК. Эти различия, очевидно, являются метаболической особенностью исследуемых мРНК и не связаны с их выделением. Хроматографією на бензоїльованій целюлозі виділено функціонально активну полі (А)⁻мРНК з полірибосом і вільних цитоплазматичних інформосом. Очищені фракції полі (А)⁻мРНК не мають істотних відмінностей за молекулярно-масовими характеристиками від цитоплазматичної полі (А)⁺ мРНК. Полі (А)⁻мРНК полірибосом і вільних інформосом однаковою мірою стимулюють включення [³⁵S] метіоніну в кислотонерозчинний продукт, але ефективність їхньої трансляції істотно нижча, ніж ефективність трансляції полі (А)+ мРНК. Ці відмінності, очевидно, є метаболічною особливістю досліджуваних мРНК і не пов’язані з їхнім виділенням. Biologically active poly (A)⁻ mRNA were isolated from polyribosomes and free cytoplasmic informosomes of germinating wheat embryos by benzoylated cellulose chromato-graphy. Purified fractions of poly (A)⁻ mRNA of polyribosomes and free isoformosomes do not essentially differ from cytoplasmic poly (A) ⁺ mRNA by molecular-weight characteristics and have translational activity in the cell-free system of protein synthesis. It is shown that poly (A) ⁻mRNA of polyribosomes and free informosomes equally stimulate incorporation of [³⁵S]methionine into acidinsoluble product, but the efficiency of their translation is much lower than that of poly (A) ⁺ mRNA. The difference in the translation efficiency of cytoplasmic poly (A) ⁺ and poly (A)⁻ mRNA of wheat embryos is obviously the metabolitic peculiarity of these mRNA and is not related to their isolation. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Структура и функции биополимеров Выделение трансляционно активной поли(А)⁺ и поли(А)⁻ мРНК из цитоплазмы прорастающих зародышей пшеницы Виділення трансляційно активної полі(А)⁺ і полі(А)⁻ мРНК з цитоплазми зародків пшениці, що проростають Isolation of biologically active poly(A)⁺ and poly (A)⁻ mRNA from germinating wheat embryos Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Выделение трансляционно активной поли(А)⁺ и поли(А)⁻ мРНК из цитоплазмы прорастающих зародышей пшеницы |
| spellingShingle |
Выделение трансляционно активной поли(А)⁺ и поли(А)⁻ мРНК из цитоплазмы прорастающих зародышей пшеницы Филимонов, Н.Г. Агашкин, А.О. Саблина, О.Д. Айтхожин, М.А. Структура и функции биополимеров |
| title_short |
Выделение трансляционно активной поли(А)⁺ и поли(А)⁻ мРНК из цитоплазмы прорастающих зародышей пшеницы |
| title_full |
Выделение трансляционно активной поли(А)⁺ и поли(А)⁻ мРНК из цитоплазмы прорастающих зародышей пшеницы |
| title_fullStr |
Выделение трансляционно активной поли(А)⁺ и поли(А)⁻ мРНК из цитоплазмы прорастающих зародышей пшеницы |
| title_full_unstemmed |
Выделение трансляционно активной поли(А)⁺ и поли(А)⁻ мРНК из цитоплазмы прорастающих зародышей пшеницы |
| title_sort |
выделение трансляционно активной поли(а)⁺ и поли(а)⁻ мрнк из цитоплазмы прорастающих зародышей пшеницы |
| author |
Филимонов, Н.Г. Агашкин, А.О. Саблина, О.Д. Айтхожин, М.А. |
| author_facet |
Филимонов, Н.Г. Агашкин, А.О. Саблина, О.Д. Айтхожин, М.А. |
| topic |
Структура и функции биополимеров |
| topic_facet |
Структура и функции биополимеров |
| publishDate |
1986 |
| language |
Russian |
| container_title |
Биополимеры и клетка |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Виділення трансляційно активної полі(А)⁺ і полі(А)⁻ мРНК з цитоплазми зародків пшениці, що проростають Isolation of biologically active poly(A)⁺ and poly (A)⁻ mRNA from germinating wheat embryos |
| description |
Хроматографией на бензоилированной целлюлозе выделена функционально активная поли (А)⁻ мРНК из полирибосом и свободных цитоплазматических информосом. Очищенные фракции поли (А)⁻ мРНК не имеют существенных отличий по молекулярно-весовым характеристикам от цитоплазматической поли (А)⁺ мРНК. Поли (А)⁻ мРНК полирибосом и свободных информосом в одинаковой мере стимулируют включение [³⁵S]метионина в кислотонерастворимый продукт, но эффективность их трансляции существенно ниже, чем эффективность трансляции поли (А)⁺ мРНК. Эти различия, очевидно, являются метаболической особенностью исследуемых мРНК и не связаны с их выделением.
Хроматографією на бензоїльованій целюлозі виділено функціонально активну полі (А)⁻мРНК з полірибосом і вільних цитоплазматичних інформосом. Очищені фракції полі (А)⁻мРНК не мають істотних відмінностей за молекулярно-масовими характеристиками від цитоплазматичної полі (А)⁺ мРНК. Полі (А)⁻мРНК полірибосом і вільних інформосом однаковою мірою стимулюють включення [³⁵S] метіоніну в кислотонерозчинний продукт, але ефективність їхньої трансляції істотно нижча, ніж ефективність трансляції полі (А)+ мРНК. Ці відмінності, очевидно, є метаболічною особливістю досліджуваних мРНК і не пов’язані з їхнім виділенням.
Biologically active poly (A)⁻ mRNA were isolated from polyribosomes and free cytoplasmic informosomes of germinating wheat embryos by benzoylated cellulose chromato-graphy. Purified fractions of poly (A)⁻ mRNA of polyribosomes and free isoformosomes do not essentially differ from cytoplasmic poly (A) ⁺ mRNA by molecular-weight characteristics and have translational activity in the cell-free system of protein synthesis. It is shown that poly (A) ⁻mRNA of polyribosomes and free informosomes equally stimulate incorporation of [³⁵S]methionine into acidinsoluble product, but the efficiency of their translation is much lower than that of poly (A) ⁺ mRNA. The difference in the translation efficiency of cytoplasmic poly (A) ⁺ and poly (A)⁻ mRNA of wheat embryos is obviously the metabolitic peculiarity of these mRNA and is not related to their isolation.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153427 |
| citation_txt |
Выделение трансляционно активной поли(А)⁺ и поли(А)⁻ мРНК из цитоплазмы прорастающих зародышей пшеницы / Н.Г. Филимонов, А.О. Агашкин, О.Д. Саблина, М.А. Айтхожин // Биополимеры и клетка. — 1986. — Т. 2, № 6. — С.307-311. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT filimonovng vydelenietranslâcionnoaktivnoipoliaipoliamrnkizcitoplazmyprorastaûŝihzarodyšeipšenicy AT agaškinao vydelenietranslâcionnoaktivnoipoliaipoliamrnkizcitoplazmyprorastaûŝihzarodyšeipšenicy AT sablinaod vydelenietranslâcionnoaktivnoipoliaipoliamrnkizcitoplazmyprorastaûŝihzarodyšeipšenicy AT aithožinma vydelenietranslâcionnoaktivnoipoliaipoliamrnkizcitoplazmyprorastaûŝihzarodyšeipšenicy AT filimonovng vidílennâtranslâcíinoaktivnoípolíaípolíamrnkzcitoplazmizarodkívpšenicíŝoprorostaûtʹ AT agaškinao vidílennâtranslâcíinoaktivnoípolíaípolíamrnkzcitoplazmizarodkívpšenicíŝoprorostaûtʹ AT sablinaod vidílennâtranslâcíinoaktivnoípolíaípolíamrnkzcitoplazmizarodkívpšenicíŝoprorostaûtʹ AT aithožinma vidílennâtranslâcíinoaktivnoípolíaípolíamrnkzcitoplazmizarodkívpšenicíŝoprorostaûtʹ AT filimonovng isolationofbiologicallyactivepolyaandpolyamrnafromgerminatingwheatembryos AT agaškinao isolationofbiologicallyactivepolyaandpolyamrnafromgerminatingwheatembryos AT sablinaod isolationofbiologicallyactivepolyaandpolyamrnafromgerminatingwheatembryos AT aithožinma isolationofbiologicallyactivepolyaandpolyamrnafromgerminatingwheatembryos |
| first_indexed |
2025-11-25T21:08:29Z |
| last_indexed |
2025-11-25T21:08:29Z |
| _version_ |
1850551284805926912 |
| fulltext |
В. Η. Глушак, А. П. Демченко, Η. Η. Орловская, Μ. Φ. Гулый/ /Молекуляр . био-
логия.—1984.—18, № 5.—С. 1330—1335.
18. Корнелюк А. И., Мацука Г. X., Шилин В. В. Флуоресцентный анализ доступности
триптофановых остатков лейцил-тРНК-синтетазы в фермент субстратных комплек-
сах / / Биофизика.— 1980.—25, № 3.— С. 402—404.
19. Черницкий Е. А. Люминесценция и структурная лабильность белков в растворе и
клетке.— Минск : Наука и техника, 1972.—278 с.
20. Permyakov Ε. Α., Burstein Ε. A. Some aspects of studies of thermal transit ions in
proteins by means of their intrinsic f luorescence / /Biophys . Chem.— 1984.—19, N 2.—
P. 265—271.
Каунас, мед. ин-т Получено 28.10.85
УДК 547.963.3
ВЫДЕЛЕНИЕ ТРАНСЛЯЦИОННО АКТИВНОЙ
ПОЛИ (А) + И ПОЛИ(А)- мРНК ИЗ ЦИТОПЛАЗМЫ
ПРОРАСТАЮЩИХ ЗАРОДЫШЕЙ ПШЕНИЦЫ
Н. Г. Филимонов, А. О. Агашкин, О. Д. Саблина, М. А. Айтхожин
Введение. Проведенные нами ранее исследования дитоплазматических
мРНК в прорастающих зародышах пшеницы показали, что они локали-
зованы в составе полирибосом и свободных информосом [1, 2]. Свобод-
ные информосомы, очевидно, представляют запасную или временно
неактивную форму мРНК [3]. Было установлено, что в составе полири-
босом около 40 % мРНК полиаденилированы, в то время как в соста-
ве свободных информосом большинство мРНК не содержат полиадени-
ловых последовательностей [4]. Исследование метаболических взаимо-
отношений между этими популяциями поли (А) + и поли (А)- мРНК
представляет большой интерес для изучения биогенеза информационной
РНК- В настоящее время общепринятым методом выделения поли (А)+
мРНК является хроматография на олиго(сГГ) -целлюлозе, тогда как
очистка поли (А)- мРНК представляет значительные трудности.
В нашей работе из полирибосом и свободных дитоплазматических
информосом прорастающих зародышей пшеницы хроматографией на
олиго(сПГ) -целлюлозе и бензоилированной целлюлозе выделены препа-
раты поли(А)+ и поли ( А ) - мРНК. Проведено сравнительное исследова-
ние их молекулярно-весовых характеристик и трансляционной активно-
сти в бесклеточной белоксинтезирующей системе.
Материалы и методы. Эксперименты выполнены на зародышах пшеницы сорта
«Казахстанская-4». Зародыши выделяли из сухих семян и проращивали при 26 °С в те-
чение 20 ч, как описано ранее [5].
В ы д е л е н и е п о л и р и б о с о м и с в о б о д н ы х д и т о п л а з м а т и ч е с к и х
и н ф о р м о с о м . Зародыши пшеницы после проращивания замораживали в жидком
азоте и гомогенизировали в буферном растворе: 0,01 Μ трис-НСІ, рН 8,0, 0,05 Μ КС1,
0,005 Μ MgCl2, 0,25 Μ сахароза; 0,005 Μ 2-меркаптоэтанол (МЭ), 0,01 Μ ванадилрибо-
нуклеозидный ингибитор (VRC). Гомогенат центрифугировали при 3000 g для освобож-
дения от ядер и неразрушенных клеток, затем при 23000 g — от митохондрий и хлоро-
пластов. К постмитохондриальному клеточному экстракту добавляли тритон Х-100 до
конечной концентрации 0,5 % и наслаивали его на 10 мл 1,5 Μ сахарозы. Центрифуги-
рованием при 43000 об/мин и температуре 3°С в течение 3 ч в роторе Type-45-Ti по-
лирибосомы осаждали на дно пробирки.
Для выделения фракции внеполисомных мРНК-содержащих рибонуклеопротеидов
клеточный экстракт после осаждения полирибосом подвергали ультрацентрифугирова-
нию через 0,5 Μ сахарозу в течение 5 ч при 43000 об/мин в роторе Type-45-Ti, 3 °С.
Свободные цитоплазматические информосомы получали после дополнительной очистки
препарата в градиенте концентрации сахарозы 15—30 %.
В ы д е л е н и е ц и т о п л а з м а т и ч е с к и х Р Н К из полирибосом и внеполи-
сомных информосом проводили по методу Перри и др. [6].
БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, № 6 307
Х р о м а т о г р а ф и ю н а о л и г o (dT)-u е л л ю л о з е для очистки поли (А)-со-
держащей м Р Н К из полирибосом проводили по стандартной процедуре [7].
С и н т е з б е н з о и л и р о в а н н о й ц е л л ю л о з ы . Необходимо отметить, что
применяемые в синтезе пиридин и бензоилхлорид должны быть очищены и обезвожены.
Мы использовали тщательно высушенную целлюлозу CF II фирмы «Whatman» (Анг-
лия). Бензоилирование проводили в точном соответствии с методикой, описанной Джил-
ламом и др. [8].
Х р о м а т о г р а ф и я Р Н К н а б е н з о и л и р о в а н н о й ц е л л ю л о з е . Перед
хроматографией Р Н К растворяли в 50 мМ трис-HCl буфере, рН 7,4, содержащем 0,3 Μ
NaCl, 1 мМ ЭДТА, до конечной концентрации 0,4—0,6 мг/мл и наносили на колонку
с бензоилированной целлюлозой, промытой этим же буфером. Элюцию связавшегося
материала проводили раствором 50 %-ного этанола и 0,05 мМ ЭДТА, рН 7,4.
Э л е к т р о ф о р е т и ч е с к и й а н а л и з Р Н К в а г а р о з н о м г е л е . Электро-
форез Р Н К проводили в горизонтальном 2%-ном агарозном геле при напряженности
4 В/см в 0,01 Μ трис-HCl буфере, рН 7,9, содержащем 0,001 Μ ЭДТА, 0,02 Μ Na-ane-
тат. После обработки бромистым этидием гели освещали УФ и фотографировали, нега-
тивы сканировали на микроденситометре МД-100 ( Г Д Р ) .
Т р а н с л я ц и я м Р Н К в б е л о к с и н т е з и р у ю щ е й с и с т е м е и з з а р о -
д ы ш е й п ш е н и ц ы . Трансляцию м Р Н К проводили в бесклеточной белоксинтезирую-
щей системе из покоящихся зародышей пшеницы по модифицированной методике Мар-
куса и др. [9]. Реакционная смесь объемом 0,1 мл содержала: 20 мМ H E P E S - K O H ,
рН 7,6, 140 мМ К-ацетат, 3 мМ Mg-ацетат, 8 мМ 2-МЭ, 50 мкМ спермин, 40 мкМ 19 не-
меченых аминокислот за исключением метионина, 0,4 МБк [ 3 5 S] метионина (ВО «Изо-
топ», Ташкентское отделение), 1,25 мМ АТФ, 0,4 мМ ГТФ, 10 мМ креатинфосфат,
5,3 мкг креатинфосфокиназы, 10 мкг тРНК, S23 из зародышей пшеницы в количестве
0,25 ед. А28о- Инкубацию бесклеточной системы проводили 1 ч при 28 °С. По окончании
инкубации определяли радиоактивность кислотонерастворимой фракции в соответствии
со стандартной процедурой.
Результаты и обсуждение. Принципиальная возможность исполь-
зования бензоилированной целлюлозы для очистки мРНК, имеющей в
растворе менее выраженную вторичную структуру по сравнению с дру-
гими РНК, ранее была продемонстрирована в работе Робертса [10].
На рис. 1 представлена картина электрофоретического анализа
тотальной цитоплазматической Р Н К зародышей пшеницы, фракциони-
рованной на бензоилированной целлюлозе, из чего следует, что бензо-
илированная целлюлоза преимущественно связывает мРНК (рис. Ι ,β ) ,
в то время как несвязавшаяся фракция (рис. 1,6) в основном содержит
рибосомные и другие РНК. Однократной хроматографией удается по-
лучить практически чистые препараты мРНК.
Используя хроматографию на олиго(сіТ)-целлюлозе и бензоилиро-
ванной целлюлозе мы выделяли поли(А)+ и поли ( А ) - мРНК из поли-
рибосом и свободных информосом.
С этой целью суммарная РНК полирибосом была фракционирова-
на на олиго(dT)-целлюлозе. Связавшуюся с олиго(dT)-целлюлозой по-
ли (А)-содержащую фракцию РНК дополнительно очищали повторной
хроматографией и подвергали электрофорезу в 2 %-ном агарозном
геле. На рис. 2, а приведена сканограмма электрофоретического рас-
пределения очищенной поли(А)+ мРНК. Видно, что препарат практиче-
ски не содержит примесей других РНК и имеет характерное гетероген-
ное распределение в области 8—23S.
Далее несвязавшуюся с олиго (dT)-целлюлозой РНК фракциони-
ровали на колонке с бензоилированной целлюлозой. Сканограмма
электрофоретического распределения очищенной поли (А)- мРНК поли-
рибосом показана на рис. 2, б. Электрофоретический анализ свидетель-
ствует об отсутствии видимых загрязнений в полученном препарате
мРНК другими видами РНК (рРНК, тРНК) . Ее электрофоретическое
распределение существенно не отличается от электрофоретического рас-
пределения поли (А) + мРНК.
Следует отметить, что поли (А)-содержащие мРНК обнаружива-
ются только во фракции полирибосом, в то время как во фракции сво-
308 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, № 6 308
бодных информосом нет заметного количества полиаденилированных
молекул. І
С помощью хроматографии на бензоилированной целлюлозе нами
была выделена поли (А)- мРНК из свободных цитоплазматических ин-
формосом. На рис. 2, в приведена сканограмма ее электрофоретичес-
кого распределения. При сравнении электрофоретической подвижности
^ Рис. 1. Электрофоретический ана-
лиз фракционированной на бензо-
илированной целлюлозе РНК, вы-
деленной из цитоплазматического
экстракта после удаления полири-
босом: а — нефракционированная
РНК; б — несвязавшаяся с бензо-
илированной целлюлозой РНК;
в — связавшаяся с бензоилирован-
ной целлюлозой мРНК-
Fig. 1. Electrophoretic analysis of
RNA fractionated by benzoylated
cellulose chromatography. RNA was
isolated from cytoplasmic extract
after removal of polyribosomes:
a — unfractionated RNA; 6— RNA
not linked with benzoylated cellulo-
se; в — mRNA linked with benzo-
ylated cellulose.
Рис. 2. Электрофоретический ана- •
лиз поли (А) + мРНК (а) , выделен-
ной из полирибосом хроматогра-
фией на олиго (dT)-целлюлозе; по-
ли (А) - мРНК (б), выделенной из
полирибосом хроматографией на
бензоилированной целлюлозе; по-
ли (А) - мРНК (в), выделенной из
свободных цитоплазматических ин-
формосом.
Fig. 2. Electrophoretic analysis of
poly (A) + mRNA (a), isolated from
polyribosomes by oligo (dT)-cellulo-
se chromatography; poly (A) -
mRNA (6), isolated from polyribo-
somes by benzoylated cellulose
chromatography; poly ( A ) - mRNA
(в), isolated from free cytoplasmic
informosomes.
видно, что исследуемые фракции мРНК (рис. 2) не имеют существен-
ных различий по молекулярно-весовым характеристикам и проявляют
сходное гетерогенное распределение в области 8—23S.
Основным присущим мРНК свойством является их матричная ак-
тивность в бесклеточной белоксинтезирующей системе. Нами проведе-
ны эксперименты по определению матричной активности исследуемых
популяций мРНК. Результаты этих экспериментов отражены в табли-
це. Обращает внимание тот факт, что трансляционная активность
поли (А) + мРНК в несколько раз выше по сравнению с таковой
поли (А)- мРНК. Более эффективная трансляция in vitro поли(А) +
мРНК может указывать на важную функцию поли (А) в процессе тран-
сляции мРНК. Вместе с тем наблюдаемая нами и другими исследова-
телями способность к трансляции поли (А)- мРНК свидетельствует о
том, что наличие поли (А)-последовательностей не является строго не-
обходимым условием для проявления матричной активности мРНК в
бесклеточной системе синтеза белка. Возможно, что поли (А)-последо-
вательности необходимы для поддержания высокой функциональной
стабильности молекул мРНК [11].
Обнаруженные нами различия в эффективности трансляции цито-
плазматических поли(А)+ и поли (А) - мРНК зародышей пшеницы явля-
ются, по-видимому, структурно-функциональной особенностью этих
БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, № 6 309
Трансляционная активность мРНК полирибосом и свободных цит о плазматических
информосом из прорастающих зародышей пшеницы
Translational activity of mRNA from germinating wheat embryos polyribosomes
and free cytoplasmic informosomes
Популяции мРНК
Включение [3 5S] метионина
в кислотонерастворимый
продукт, имп/мин на 1 о. е.
экзогенной мРНК
Поли(А)+мРНК полирибосом, выделенная хроматогра-
фией на олиго(ёТ) -целлюлозе 804413
Суммарная поли (А) + и поли ( А ) - мРНК из полирибосом,
выделенная хроматографией на бензоилированной целлю-
лозе 347610
Поли ( А ) - мРНК, выделенная из внеполисомных цитоплаз-
матических информосом хроматографией на бензоилиро-
ванной целлюлозе 211650
Поли (А)~ мРНК из полирибосом, полученная хромато-
графией на бензоилированной целлюлозе 272306
П р и м е ч а н и е . Сравнение трансляционной активности различных мРНК проводили
в нескольких независимых экспериментах. Абсолютные значения радиоактивности от
эксперимента к эксперименту варьировали, однако соотношения между трансляционной
активностью исследуемых мРНК сохранялись. В бесклеточную систему вносили такое
количество мРНК, при котором обеспечивалось максимальное включение [355]метиони-
на в кислотонерастворимый продукт и соблюдалась прямолинейная зависимость син-
теза белка от количества вносимой мРНК.
мРНК и не связаны с их выделением и очисткой. Подтверждением это-
му служит более высокая по сравнению с поли(А)~ мРНК эффектив-
ность трансляции суммарной полирибосомной мРНК, выделенной хро-
матографией на бензоилированной целлюлозе. Повышенная эффектив-
ность трансляции обусловлена присутствием в этом препарате
поли (А) + мРНК.
В целом анализ трансляционной активности различных популяций
мРНК показывает, что хроматография на бензоилированной целлюлозе
является эффективным методом очистки биологически активной мРНК,
не содержащей полиадениловых последовательностей и которую не
удается выделить фракционированием на олиго(сІТ) -целлюлозе. Очист-
ка поли (А) - мРНК на бензоилированной целлюлозе дает принципи-
альную возможность для исследования функциональных взаимоотно-
шений между популяциями мРНК, содержащимися в составе
полирибосом и свободных цитоплазматических информосом.
ISOLATION OF BIOLOGICALLY ACTIVE POLY (A) +
AND POLY (A) - mRNA FROM GERMINATING WHEAT EMBRYOS
N. G. Filimonov, A. O. Agashkin, O. D. Sablina, M. A. Aitkhozhin
Insti tute of Molecular Biology and Biochemistry,
Academy of Sciences of the Kazakh SSR, Alma-Ata
S u m m a r y
Biologically active poly ( A ) - mRNA were isolated from polyribosomes and free cyto-
plasmic informosomes of germinating wheat embryos by benzoylated cellulose chromato-
graphy. Purified fractions of p o l y ( A ) ~ m R N A of polyribosomes and free isoformosomes do
not essentially differ from cytoplasmic poly (A) + mRNA by molecular-weight characte-
ristics and have translat ional activity in the cell-free system of protein synthesis. It is
shown that poly ( A ) - mRNA of polyribosomes and free informosomes equally stimulate
incorporation of [35S] methionine into acid-insoluble product, but the efficiency of their
t ranslat ion is much lower than that of poly (A) + mRNA. The difference in the translat ion
efficiency of cytoplasmic poly (A) + and poly ( A ) - mRNA of wheat embryos is obviously
the metabolitic peculiarity of these mRNA and is not related to their isolation.
310 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, № 6 310
1. Ajtkhozhin Μ. Α., Akhanov Α. U., Doschanov Kh. I. In formosomes of ge rmina t ing
wheat embryos / / F E B S Lett.— 1973.—31, N 1 .—P. 104—106.
2. Ajtkhozhin Μ. Α., Akhanov A. U. Release of mRNP-par t ic les of the informosome type
f rom polyribosomes of higher p lant e m b r y o s / / I b i d . — 1974.—41, N 2.— P. 275—279.
3. Spirin A. S., Ajtkhozhin Μ. A. In formosomes and polyribosome associated proteins in
e u k a r y o t e s / / T r e n d s Biochem. Sci.— 1985.—10, N 4 . — P . 162—165.
4. Филимонов Η. Г., Айтхожин Μ. Α., Газарян К. Г. Поли (А)-содержащие Р Н К из
прорастающих зародышей п ш е н и ц ы / / М о л е к у л я р . биология.— 1978.—12, № 3.—
С. 552—556.
5. Организация нуклеотидных последовательностей ядерной Д Н К зародышей пшени-
цы / Н. Г. Филимонов, Н. А. Мартакова , Л . С. Попов и д р . / / Б и о х и м и я . — 1982.—
47, № 7 .—С. 1198—1207.
6. On the lability of poly (A)-sequences dur ing the extract ion of messenger RNA from
polyribosomes / R. P. Perry, J. La Torre, D. E. Kelley, J. R. Greenberg / / Biochim. et
biophys. acta.— 1972.—26.2, N 2 . — P . 220—226.
7. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Выделение, очистка и анализ м Р Н К из эука-
риотических к л е т о к / / М е т о д ы генетической инженерии.— М. : Мир, 1984.— С. 186—
204.
8. The separation of soluble ribonucleic acids on benzoylated diethylaminoethylcel lulo-
s e / J . Gillam, S. Mil lward, D. Biew et a l . / / B i o c h e m i s t r y . — 1967.—6, N 10.—
P. 3043—3056.
9. Marcus Α., Efron D., Weeks D. P. The wheat embryos cell-free s y s t e m / / M e t h . En-
zymol.— 1974.—30.— P. 749—754.
10. Roberts W. К. Use of benzoylated cellulose columns for the isolation of po ly(adeny-
lic acid) conta in ing RNA and other polynucleotides with little secondary s t ructure / /
Biochemistry.— 1974.—13, N 18,—P. 3677—3682.
U . Role of the polyadenyla te segment in the t rans la t ion of globin mRNA in Xenopus
o o c y t e s / G . Huez, G. Marbaix, E. Hubert et a l . / / P r o c . Nat. Acad. Sci. USA.—
1974.—71, N 7 . — P . 3143—3146.
Ин-т молекуляр. биологии и биохимии Получено 14.10.85
АН КазССР, Алма-Ата
УДК 577.113.6:542.95
ПОЛНЫЙ АВТОМАТИЧЕСКИЙ СИНТЕЗ ФОСФОТРИЭФИРНЫМ
МЕТОДОМ ОЛИГОДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕОТИДОВ
НА СИНТЕЗАТОРЕ «ВИКТОРИЯ-4М»
С. М. Грязнов, В. К. Потапов, В. В. Горн,
В. Ф. Зарытова, Ю. Г. Средин, Г. А. Потемкин, 3. А. Шабарова
Разработка и использование автоматических синтезаторов олигодезо-
ксирибонуклеотидов является логическим следствием прогресса, до-
стигнутого в последние годы в области химического олигонуклеотид-
ного синтеза [1, 2]. Работы по автоматическому твердофазному синтезу
олигонуклеотидов, проводимые в нашей стране с начала 70-х годов в
МГУ, СКТБ специальной электроники и аналитического приборострое-
ния и Новосибирском институте биоорганической химии СО АН СССР,
завершились в настоящее время созданием синтезатора «Виктория-4М»,
результаты испытаний которого в различных вариантах триэфирной
схемы в полностью автоматическом режиме описаны в настоящей
статье.
Материалы и методы. В работе использовали TPS, полученный в Опытном хими-
ческом производстве Новосибирского института органической химии СО АН СССР;
Melm («Fluka», Швейцария) ; силикагель Kieselgel-60 («Merck», Ф Р Г ) ; Kieselgel-
R P T M S («Merck», Ф Р Г ) ; тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводили на пластин-
ках Kieselgel-F254 («Merck», ФРГ) в системах хлороформ — этанол ( 9 : 1, ν / ν ) и ацето-
нитрил — вода ( 9 : 1 , v / v ) ; 5'- (п-хлорфенил-р-цианэтил)-фосфат-Ы-ацил-нуклеозиды,
Принятые обозначения: приставка сі-(дезокси-) везде опущена; T P S — 2,4,6-три-
изопропилбензолсульфохлорид; Me lm—1-метилимидазол , pN — 5'р-(п-хлорфенил, β-
цианэтил)-Ы-ацил-нуклеотид; М М Т г — (п-метокси)-трифенилметил; ТМГ — тетраметил-
гуанидин; ТФУ — трифторуксусная кислота; ТБАФ — тетрабутиламмонийфторид.
БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, № 6 311
|