Влияние УФ-облучения на перенос чужеродных генов в Ті-плазмиду Agrobacterium tumefaciens, осуществляемый с помощью промежуточных векторов
Изучали влияние УФ-облучения реципиентных клеток A. tumefaciens на частоту переноса чужеродных генов в Ті-плазмиду, осуществляемого с помощью промежуточных векторов. Показано, что эффективность переноса возрастает в 10–100 раз после кратковременного облучения реципиентных клеток. УФ-облучение клеток...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Datum: | 1991 |
| Hauptverfasser: | , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russisch |
| Veröffentlicht: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1991
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153473 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Влияние УФ-облучения на перенос чужеродных генов в Ті-плазмиду Agrobacterium tumefaciens, осуществляемый с помощью промежуточных векторов / О.Н. Добачевская, С.Е. Рымарь, В.А. Кордюм // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 2. — С. 22-24. — Бібліогр.: 5 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860119169713831936 |
|---|---|
| author | Добачевская, О.Н. Рымарь, С.Е. Кордюм, В.А. |
| author_facet | Добачевская, О.Н. Рымарь, С.Е. Кордюм, В.А. |
| citation_txt | Влияние УФ-облучения на перенос чужеродных генов в Ті-плазмиду Agrobacterium tumefaciens, осуществляемый с помощью промежуточных векторов / О.Н. Добачевская, С.Е. Рымарь, В.А. Кордюм // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 2. — С. 22-24. — Бібліогр.: 5 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Биополимеры и клетка |
| description | Изучали влияние УФ-облучения реципиентных клеток A. tumefaciens на частоту переноса чужеродных генов в Ті-плазмиду, осуществляемого с помощью промежуточных векторов. Показано, что эффективность переноса возрастает в 10–100 раз после кратковременного облучения реципиентных клеток. УФ-облучение клеток A. tumefaciens перед конъюгацией предлагается в качестве приема для повышения эффективности переноса чужеродных генов в Ті-плазмиду A. tumefaciens при использовании для этого промежуточных векторов.
Вивчали вплив УФ-опромінення реципієнтних клітин A. tumefaciens на частоту переносу чужерідних генів в П-плазміду, що здійснюється за допомогою проміжних векторів. По- казано, що ефективність переносу зростає в 10–100 разів після короткочасного опромінення реципієнтних клітин. УФ-опромінення А. tumefaciens перед кон'югацією пропонується як засіб для збільшення ефективності переносу чужерідних генів у Ti-плазміду A. tumefaciens при використанні для цього проміжних векторів.
The influence of UV irradiation of recipient A. tumefaciens cells on the frequency of the foreign gene transfer into Ti plasmid via intermediate vectors has been investigated. It has been established that the frequency of this process after transient irradiation of recipient cells is 10–100 times higher than the frequency observed without irradiation. This fact is suggested to be used as an effective method to increase the foreign gene transfer frequency into Ti plasmid if the intermediate vectors are applied for it.
|
| first_indexed | 2025-12-07T17:38:03Z |
| format | Article |
| fulltext |
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Plasmid Col Ei as a molecular vehicle for cloning and amplification of D N A / V . Her-
shfield, H. W. Boyer, C. Yanovsky, M. A. Lovett / / P r o c . Nat. Acad. Sci. USA.— 1974.—
71, N 9 . — P . 3455—3459.
2. Overexpression, solubilization and refolding of a genetically engineering derivative of
the penicillinbinding protein 3 of E. coli K 1 2 / G . B. de Belder, M. N. Disteche,
H. N. Houba et a l . / / М о ї . Microbiol.— 1988.—2, N 4 . — P . 519—525.
3. Localization of inclusion bodies in E. coli overproducing β-lactamase or alkaline phos-
phase / G. Georgion, J. N. Telford, M. L. Shuler, D. B. W i l s o n / / A p p l . Envir. Micro-
b io l .—1986 ,—52, N 5 . — P . 1157—1161.
4. Moir ABrammer W. J. The use of specialised transducing phages in the amplifica-
tion of enzyme p r o d u c t i o n / / М о ї . and Gen. Genet.— 1976.— 149, N 1.— P. 87—99.
5. Плазмиды. Методы / Под ред. К. Харди.— М . : Мир, 1989.— 267 с.
6. Dagert M., Ehrlich S. D. Prolonged incubation in calcium chloride improves the com-
petence of Escherichia coli cells / / G e n e . — 1979.—6, N 1 .—P. 23—28.
7. Сорочинская Т. В., Черных С. И. Исследование синтеза β-лактамазы ТЕМ 1 в раз-
личных штаммах Е. coli при заражении их фагом Xbla с амбер-мутациями в регуля-
торних г е н а х / / Биополимеры и клетка.— 1991.— 7, № 1.— С. 101—107.
8. Чайковская С. M., Венкина Т. Г. Модифицированный иодометрический метод опре-
деления активности β-лактамазы//Антибиотики.— 1962.— 7, № 5.— С. 453—456.
9. Гуревич А. И., Бабий H. И. Роль структурных элементов плазмид группы Col Ex в
контроле репликации / / Биоорг. химия.— 1987.— 13, JNfo 2.— С. 213—218.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Киев Получено 27.07.90
УДК 579.254
О. Н. Добачевская, С. Е. Рымарь, В, А. Кордюм
ВЛИЯНИЕ УФ-ОБЛУЧЕНИЯ НА ПЕРЕНОС ЧУЖЕРОДНЫХ ГЕНОВ
В Ті-ПЛАЗМИДУ AGROBACTERIUM TUMEFACIENS,
ОСУЩЕСТВЛЯЕМЫЙ С ПОМОЩЬЮ ПРОМЕЖУТОЧНЫХ ВЕКТОРОВ
Изучали влияние УФ-облучения реципиентных клеток A. tumefaciens на частоту пере-
носа чужеродных генов в Ті-плазмиду, осуществляемого с помощью промежуточных
векторов. Показано, что эффективность переноса возрастает в 10—100 раз после крат-
ковременного облучения реципиентных клеток. УФ-облучение клеток A. tumefaciens
перед конъюгацией предлагается в качестве приема для повышения эффективности пе-
реноса чужеродных генов в Ті-плазмиду A. tumefaciens при использовании для этого
промежуточных векторов.
Введение. Один из наиболее распространенных способов переноса чу-
жеродных генов в растительный геном заключается в трансформации
растительных клеток 77-плазмидой A. tumefaciens. Чужеродные гены
либо вводятся в 77-плазмиду с помощью промежуточных векторов [1]
и в составе Т - Д Н К сопереносятся в растительный геном, либо такой
соперенос осуществляется бинарной системой [2]. При использовании
промежуточных векторов перенос чужеродного гена в 77-плазмиду про-
исходит за счет рекомбинации in vivo между гомологичными участками
промежуточного вектора и 77-плазмиды. Частота появления трапсконъ-
югантов, содержащих коинтеграт 77-плазмида — промежуточный век-
тор, отражает эффективность двух процессов: переноса плазмиды в ре-
ципиентную клетку и рекомбинации и также зависит от протяженно-
сти области гомологии [3]. Эта величина, как правило, невелика
(10~ 8 —Ю - 7 на реципиентную клетку) и в некоторых случаях получить
трансконъюганты без определенных усилий не удается.
В данной работе описано применение УФ-облучения реципиентных
клеток агробактерий для повышения частоты переноса чужеродных
генов в 77-плазмиду, происходящего в результате рекомбинации между
77-плазмидой и плазмидой, в которой локализован чужеродный ген,
т. е. промежуточным вектором.
© О. Н. ДОБАЧЕВСКАЯ, С. Е. РЫМАРЬ, В. А. КОРДЮМ, 1991
22 !ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1991. Г. 7. № 2.
Материалы и методы. В работе использовали следующие бакте-
риальные штаммы: Escherichia coli GJ23, содержащий плазмиды GJ28
и R64drdll, Ε. coli НВ101, Л. tumefaciens С58 и GV3850 — (паї*) . Про-
межуточными векторами служили плаз-
миды pBR322-4T и pLGV23neo. Первая
сконструирована нами следующим об-
разом: в Pstl-сайт pBR322 (с инактиви-
рованным BamHI-сайтом) был клони-
рован IV PstI-фрагмент pTiC58, затем
в BamIiI-сайт этого фрагмента встроен
EcoRI-Sall-фрагмент рКС7, содержа-
щий ген пео. Выделение Д Н К , клониро-
вание, рестрикционный анализ, транс-
формацию Е. coli проводили по обще-
принятым методикам [4]. Конъюгацию
Влияние УФ-облучения на жизнеспособность кле-
ток A. tumefaciens: 1 — штамм С58; 2 — штамм
GV3850
The influence of the U V irradiation on the survial
of the A. tumefaciens cells: 1 — C58 strain, 2—
GV3850 strain
осуществляли no [3]. Клетки агробактерий облучали, помещая в чаш-
ки Петри (8 см) 2,5 мл клеточной суспензии, двумя лампами БУФ
30 на расстоянии 35 см. Отбор трансконъюгантов, содержащих коин-
теграты П-плазмида — промежуточный вектор, осуществляли на среде
YEB (100 мкг/мл налидиксовой кислоты и 30 мкг/мл сульфата ка-
намицина) .
Результаты и обсуждение. В экспериментах по изучению влияния
УФ-облучения на частоту появления трансконъюгантов, содержащих
коинтеграты 77-плазмиды и промежуточного вектора, в качестве реци-
пиентов использовали два штамма A. tumefaciens: С58 и GV3850.
Штамм С58 содержит нопалиновую 7Ї-плазм иду, а штамм QV3850
является производным С58, в 77-плазмиде которого делетирована вся
Т - Д Н К , за исключением ее границ и гена нопалинсинтазы [5] . После-
довательности Т - Д Н К заменены на pBR322, что обеспечивает область
гомологии для любых промежуточных векторов, созданных на основе
серии pBR.
Влияние УФ-облучения на жизнеспособность реципиентных клеток
отражено на рисунке. Видимое падение жизнеспособности клеток на-
блюдается при длительности облучения более 20 с. В отсутствие облу-
чения эффективность появления трансконъюгантов при переносе
pBR322-4T в клетки штамма С58 в 10 раз выше, чем при переносе
pLGV23neo, которая имеет небольшую по протяженности область гомоло-
гии с П-плазмидой (фрагменты 1,5- IO6 и 1,2· IO6) (таблица) . При ис-
пользовании в качестве реципиента штамма GV3850 эта разница еще
больше. УФ-облучепие реципиентных клеток перед конъюгацией при-
водит к изменению частоты появления трансконъюгантов, содержащих
коинтеграты 77-плазмида — промежуточный вектор, которые образуют-
ся в результате рекомбинации. Эта величина в зависимости от реципи-
ента и переносимой плазмиды увеличивается в 10— 100 раз. Особенно
отчетливо проявляется влияние УФ-облучения на эффективность появ-
лення трансконъюгантов в тех случаях, когда в клетки агробактерий
переносится плазмида, имеющая небольшую протяженность области
гомологии с 77-плазмидой, как в случае pEGV23neo. Оптимальным вре-
менем облучения реципиентных клеток является интервал 10 — 20 с,
так как при более длительном облучении заметно падает жизнеспособ-
ность клеток, что приводит к уменьшению абсолютного числа колоний
на чашках.
УФ-облучение, как известно, индуцирует повышение активности
рекомбинационных систем бактериальной клетки. В связи с этим пред-
23 !ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1991. Г. 7. № 2.
Влияние УФ-облучения на эффективность появления трансконъюгантов при переносе
промежуточных векторов в клетки
The influence of UV irradiation on the efficiency of the exconjugant's appearing during
the intermediate vector s transfer to the A. tumefaciens cells
Переносимая
плазмида
(промежуточ-
ный вектор)
Штамм-
реципиент
Время
облуче-
ния, с
Эффектив-
ность появле-
ния транско-
нъюгантов (на
реципиентную
клетку)
PBR322-4T С58 0 4 , 7 · I O - 7
10 3 , 5 . Ю - 6
20 2 , 3 · I O - 6
40 1,0 .10— 6
pLGV23neo С58 0 5 , 0 - 1 0 ~ 8
10 6 , 0 . IO"7
20 1 , 0 - 1 0 ~ 6
40 5 , 4 . I O - 6
Переносимая
плазмида
(промежуточ-
ный вектор)
Штамм-
реципиент
Время
облуче-
ния, с
Эффектив-
ность появле-
ния транско-
нъюгантов (на
реципиентную
клетку)
*pBR322-4T2 GV3850
pl,GV23neo GV3850
О
10
20
40
0
10
20
40
3 ,9 -10— 8
1 , 8 · 10—6
6 , 5 - Ю - 7
7 , 0 - 1 0 ~ 6
1 , 2 . 1 0 ~ 9
2 , 1 . 1 0 ~ 7
0 , 9 . I O - 6
0 , 5 . IO"6
полагается, что наблюдаемое в эксперименте увеличение эффективно-
сти переноса чужеродных генов в 77-плазмиду (образование коинтегра-
тов) обусловлено повышением частоты рекомбинации между гомоло-
гичными участками 77-плазмиды и переносимых в клетки агробактерий
плазмид, являющихся промежуточными векторами.
Таким образом, кратковременное облучение ультрафиолетом реци-
пиентных клеток агробактерий перед конъюгацией можно предложить
в качестве эффективного методического приема для повышения часто-
ты переноса чужеродных генов в 77-плазмиду, если для их переноса
используются промежуточные векторы.
Р е з ю м е
Вивчали вплив УФ-опромінення реципієнтних клітин A. tumefaciens на частоту переносу
чужерідних генів в П-плазміду, що здійснюється за допомогою проміжних векторів. По-
казано, що ефективність переносу зростає в 10—100 разів після короткочасного опромі-
нення реципієнтних клітин. УФ-опромінення А. tumefaciens перед кон'югацією пропо-
нується як засіб для збільшення ефективності переносу чужерідних генів у 7ї-плазміду
A. tumefaciens при використанні для цього проміжних векторів.
S u m m a r y
The influence of UV irradiation of recipient A. tumefaciens cells on the frequency of the
foreign gene transfer into Ti plasmid via intermediate vectors has been investigated. It
has been established that the frequency of this process after transient irradiation of re-
cipient cells is 10-100 times higher than the frequency observed without irradiation. This
fact is suggested to be used as an effective method to increase the foreign gene transfer
frequency into Ti plasmid if the intermediate vectors are applied for it.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Site-specific mutagenesis of Agrobacterium Ti plasmid and transfer of genes to plant
c e l l s / S . Leemans, C. Shaw, R. de Blaere et a l . / / M o l . and Gen. Genet .—1981 .—1,
N 2 . — P . 149—164.
2. A binary plant vector strategy based on separation of Vir and T-region of the Agro-
bacterium tumefaciens Ti p l a s m i d / A . Hoekema, P. R. Hirsch, P. J. J. Hookaas,
R. A. S c h i l p e r o o r t / / N a t u r e . — 1983.—303, N 5919 .—P. 179—180.
3. Intergenic transfer and exchange recombinant of restriction fragments cloned in pBR
322: a novel strategy for the reversed genetics of the Ti plasmids of Agrobacterium
tumefaciens / E. van Huete, H. Joos, M. Maes et al. / / T h e EMBO J.— 1983.—2, N 3.—
p. 411—417.
4. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование.— М. : Мир, 1984.—
420 с.
5. Systematic disign of a Ti plasmid vector for the introduction of DNA into plant cel ls
without alteration of their normal regeneration capacity / P. Zambraski, H. Joos,
C. Genetello et al. / / The EMBO J.— 1983.— 2, N 3 . — P . 2143—2150.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Киев Получено 28.06.90
2 4 !ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1991. Г. 7. № 2.
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-153473 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T17:38:03Z |
| publishDate | 1991 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Добачевская, О.Н. Рымарь, С.Е. Кордюм, В.А. 2019-06-14T10:34:01Z 2019-06-14T10:34:01Z 1991 Влияние УФ-облучения на перенос чужеродных генов в Ті-плазмиду Agrobacterium tumefaciens, осуществляемый с помощью промежуточных векторов / О.Н. Добачевская, С.Е. Рымарь, В.А. Кордюм // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 2. — С. 22-24. — Бібліогр.: 5 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0002BF https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153473 579.254 Изучали влияние УФ-облучения реципиентных клеток A. tumefaciens на частоту переноса чужеродных генов в Ті-плазмиду, осуществляемого с помощью промежуточных векторов. Показано, что эффективность переноса возрастает в 10–100 раз после кратковременного облучения реципиентных клеток. УФ-облучение клеток A. tumefaciens перед конъюгацией предлагается в качестве приема для повышения эффективности переноса чужеродных генов в Ті-плазмиду A. tumefaciens при использовании для этого промежуточных векторов. Вивчали вплив УФ-опромінення реципієнтних клітин A. tumefaciens на частоту переносу чужерідних генів в П-плазміду, що здійснюється за допомогою проміжних векторів. По- казано, що ефективність переносу зростає в 10–100 разів після короткочасного опромінення реципієнтних клітин. УФ-опромінення А. tumefaciens перед кон'югацією пропонується як засіб для збільшення ефективності переносу чужерідних генів у Ti-плазміду A. tumefaciens при використанні для цього проміжних векторів. The influence of UV irradiation of recipient A. tumefaciens cells on the frequency of the foreign gene transfer into Ti plasmid via intermediate vectors has been investigated. It has been established that the frequency of this process after transient irradiation of recipient cells is 10–100 times higher than the frequency observed without irradiation. This fact is suggested to be used as an effective method to increase the foreign gene transfer frequency into Ti plasmid if the intermediate vectors are applied for it. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Генно-инженерная биотехнология Влияние УФ-облучения на перенос чужеродных генов в Ті-плазмиду Agrobacterium tumefaciens, осуществляемый с помощью промежуточных векторов Вплив УФ-опромінення на перенесення чужорідних генів у Ti-плазміду Agrobacterium tumefaciens, здійснюване за допомогою проміжних векторів The influence of UV irradiation on the transfer of foreign genes into Ti plasmid of Agrobacterium tumefaciens via intermediate vectors Article published earlier |
| spellingShingle | Влияние УФ-облучения на перенос чужеродных генов в Ті-плазмиду Agrobacterium tumefaciens, осуществляемый с помощью промежуточных векторов Добачевская, О.Н. Рымарь, С.Е. Кордюм, В.А. Генно-инженерная биотехнология |
| title | Влияние УФ-облучения на перенос чужеродных генов в Ті-плазмиду Agrobacterium tumefaciens, осуществляемый с помощью промежуточных векторов |
| title_alt | Вплив УФ-опромінення на перенесення чужорідних генів у Ti-плазміду Agrobacterium tumefaciens, здійснюване за допомогою проміжних векторів The influence of UV irradiation on the transfer of foreign genes into Ti plasmid of Agrobacterium tumefaciens via intermediate vectors |
| title_full | Влияние УФ-облучения на перенос чужеродных генов в Ті-плазмиду Agrobacterium tumefaciens, осуществляемый с помощью промежуточных векторов |
| title_fullStr | Влияние УФ-облучения на перенос чужеродных генов в Ті-плазмиду Agrobacterium tumefaciens, осуществляемый с помощью промежуточных векторов |
| title_full_unstemmed | Влияние УФ-облучения на перенос чужеродных генов в Ті-плазмиду Agrobacterium tumefaciens, осуществляемый с помощью промежуточных векторов |
| title_short | Влияние УФ-облучения на перенос чужеродных генов в Ті-плазмиду Agrobacterium tumefaciens, осуществляемый с помощью промежуточных векторов |
| title_sort | влияние уф-облучения на перенос чужеродных генов в ті-плазмиду agrobacterium tumefaciens, осуществляемый с помощью промежуточных векторов |
| topic | Генно-инженерная биотехнология |
| topic_facet | Генно-инженерная биотехнология |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153473 |
| work_keys_str_mv | AT dobačevskaâon vliânieufoblučeniânaperenosčužerodnyhgenovvtíplazmiduagrobacteriumtumefaciensosuŝestvlâemyispomoŝʹûpromežutočnyhvektorov AT rymarʹse vliânieufoblučeniânaperenosčužerodnyhgenovvtíplazmiduagrobacteriumtumefaciensosuŝestvlâemyispomoŝʹûpromežutočnyhvektorov AT kordûmva vliânieufoblučeniânaperenosčužerodnyhgenovvtíplazmiduagrobacteriumtumefaciensosuŝestvlâemyispomoŝʹûpromežutočnyhvektorov AT dobačevskaâon vplivufopromínennânaperenesennâčužorídnihgenívutiplazmíduagrobacteriumtumefacienszdíisnûvanezadopomogoûpromížnihvektorív AT rymarʹse vplivufopromínennânaperenesennâčužorídnihgenívutiplazmíduagrobacteriumtumefacienszdíisnûvanezadopomogoûpromížnihvektorív AT kordûmva vplivufopromínennânaperenesennâčužorídnihgenívutiplazmíduagrobacteriumtumefacienszdíisnûvanezadopomogoûpromížnihvektorív AT dobačevskaâon theinfluenceofuvirradiationonthetransferofforeigngenesintotiplasmidofagrobacteriumtumefaciensviaintermediatevectors AT rymarʹse theinfluenceofuvirradiationonthetransferofforeigngenesintotiplasmidofagrobacteriumtumefaciensviaintermediatevectors AT kordûmva theinfluenceofuvirradiationonthetransferofforeigngenesintotiplasmidofagrobacteriumtumefaciensviaintermediatevectors |