Экспрессия в Esherichia coli гена ангиогенина человека, трансляционно слитого с N-концевым фрагментом β-галактозидазы
Методом олигонуклеотид-направленного мутагенеза из фага М13mp8 с проклонированым синтетическим геном ангиогенина человека получен фаг М13mp8, кодирующий слитый белок ангиогенин—α-пептид β-галактозидазы Е. coli (фаг M1-1). Продемонстрировано, что в клетках, инфицированных фагом M1-1, синтезируется пе...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Datum: | 1990 |
| Hauptverfasser: | , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1990
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153694 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Экспрессия в Esherichia coli гена ангиогенина человека, трансляционно слитого с N-концевым фрагментом β-галактозидазы / С.П. Коваленко, Н.П. Мертвецов // Биополимеры и клетка. — 1990. — Т. 6, № 4. — С. 92-96. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-153694 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Коваленко, С.П. Мертвецов, Н.П. 2019-06-14T13:30:48Z 2019-06-14T13:30:48Z 1990 Экспрессия в Esherichia coli гена ангиогенина человека, трансляционно слитого с N-концевым фрагментом β-галактозидазы / С.П. Коваленко, Н.П. Мертвецов // Биополимеры и клетка. — 1990. — Т. 6, № 4. — С. 92-96. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000284 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153694 57.214.622 Методом олигонуклеотид-направленного мутагенеза из фага М13mp8 с проклонированым синтетическим геном ангиогенина человека получен фаг М13mp8, кодирующий слитый белок ангиогенин—α-пептид β-галактозидазы Е. coli (фаг M1-1). Продемонстрировано, что в клетках, инфицированных фагом M1-1, синтезируется пептид, обладающий α-донорской активностью. Проведена оценка количества слитого белка на разных стадиях роста клеточной культуры, инфицированной фагом М1-1. Методом олігонуклеотид-направленого мутагенезу з фага М13mp8 з проклонованим синтетичним геном ангіогеніну людини отримано фаг М13mp8, що кодує злитий білок ангіогенін-α-пептид β-галактозидази Е. coli (фаг M1-1). Продемонстровано, що в клітинах, інфікованих фагом M1-1, синтезується пептид з α-донорською активністю. Зроблено оцінку кількості злитого білка на різних стадіях росту клітинної культури, інфікованої фагом М1-1. The phage M13mp8 earring a DNA fragment coding for fusion protein angiogenin-α-peptide of β-galactosidase was obtained by oligonucleotide directed mutagenesis technique from the M13mp8 phage with a cloned synthetic human angiogenin gene. The synthesis of peptide with, α-donor activity in the phage Ml-1-infected cells was demonstrated. The amount of the fusion protein was estimated at the different stages of E. coll cell growth after the phage infection. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Генно-инженерная биотехнология Экспрессия в Esherichia coli гена ангиогенина человека, трансляционно слитого с N-концевым фрагментом β-галактозидазы Експресія у Esherichia coli гена ангіогеніну людини, трансляційно злитого з N-кінцевим фрагментомβ-галактозидази Expression in Escherichia coli of the human angiogenin gene translationally fused with the N-terminal fragment of β-galactosidase Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Экспрессия в Esherichia coli гена ангиогенина человека, трансляционно слитого с N-концевым фрагментом β-галактозидазы |
| spellingShingle |
Экспрессия в Esherichia coli гена ангиогенина человека, трансляционно слитого с N-концевым фрагментом β-галактозидазы Коваленко, С.П. Мертвецов, Н.П. Генно-инженерная биотехнология |
| title_short |
Экспрессия в Esherichia coli гена ангиогенина человека, трансляционно слитого с N-концевым фрагментом β-галактозидазы |
| title_full |
Экспрессия в Esherichia coli гена ангиогенина человека, трансляционно слитого с N-концевым фрагментом β-галактозидазы |
| title_fullStr |
Экспрессия в Esherichia coli гена ангиогенина человека, трансляционно слитого с N-концевым фрагментом β-галактозидазы |
| title_full_unstemmed |
Экспрессия в Esherichia coli гена ангиогенина человека, трансляционно слитого с N-концевым фрагментом β-галактозидазы |
| title_sort |
экспрессия в esherichia coli гена ангиогенина человека, трансляционно слитого с n-концевым фрагментом β-галактозидазы |
| author |
Коваленко, С.П. Мертвецов, Н.П. |
| author_facet |
Коваленко, С.П. Мертвецов, Н.П. |
| topic |
Генно-инженерная биотехнология |
| topic_facet |
Генно-инженерная биотехнология |
| publishDate |
1990 |
| language |
Russian |
| container_title |
Биополимеры и клетка |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Експресія у Esherichia coli гена ангіогеніну людини, трансляційно злитого з N-кінцевим фрагментомβ-галактозидази Expression in Escherichia coli of the human angiogenin gene translationally fused with the N-terminal fragment of β-galactosidase |
| description |
Методом олигонуклеотид-направленного мутагенеза из фага М13mp8 с проклонированым синтетическим геном ангиогенина человека получен фаг М13mp8, кодирующий слитый белок ангиогенин—α-пептид β-галактозидазы Е. coli (фаг M1-1). Продемонстрировано, что в клетках, инфицированных фагом M1-1, синтезируется пептид, обладающий α-донорской активностью. Проведена оценка количества слитого белка на разных стадиях роста клеточной культуры, инфицированной фагом М1-1.
Методом олігонуклеотид-направленого мутагенезу з фага М13mp8 з проклонованим синтетичним геном ангіогеніну людини отримано фаг М13mp8, що кодує злитий білок ангіогенін-α-пептид β-галактозидази Е. coli (фаг M1-1). Продемонстровано, що в клітинах, інфікованих фагом M1-1, синтезується пептид з α-донорською активністю. Зроблено оцінку кількості злитого білка на різних стадіях росту клітинної культури, інфікованої фагом М1-1.
The phage M13mp8 earring a DNA fragment coding for fusion protein angiogenin-α-peptide of β-galactosidase was obtained by oligonucleotide directed mutagenesis technique from the M13mp8 phage with a cloned synthetic human angiogenin gene. The synthesis of peptide with, α-donor activity in the phage Ml-1-infected cells was demonstrated. The amount of the fusion protein was estimated at the different stages of E. coll cell growth after the phage infection.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153694 |
| citation_txt |
Экспрессия в Esherichia coli гена ангиогенина человека, трансляционно слитого с N-концевым фрагментом β-галактозидазы / С.П. Коваленко, Н.П. Мертвецов // Биополимеры и клетка. — 1990. — Т. 6, № 4. — С. 92-96. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT kovalenkosp ékspressiâvesherichiacoligenaangiogeninačelovekatranslâcionnoslitogosnkoncevymfragmentomβgalaktozidazy AT mertvecovnp ékspressiâvesherichiacoligenaangiogeninačelovekatranslâcionnoslitogosnkoncevymfragmentomβgalaktozidazy AT kovalenkosp ekspresíâuesherichiacoligenaangíogenínulûdinitranslâcíinozlitogoznkíncevimfragmentomβgalaktozidazi AT mertvecovnp ekspresíâuesherichiacoligenaangíogenínulûdinitranslâcíinozlitogoznkíncevimfragmentomβgalaktozidazi AT kovalenkosp expressioninescherichiacoliofthehumanangiogeningenetranslationallyfusedwiththenterminalfragmentofβgalactosidase AT mertvecovnp expressioninescherichiacoliofthehumanangiogeningenetranslationallyfusedwiththenterminalfragmentofβgalactosidase |
| first_indexed |
2025-11-24T21:46:52Z |
| last_indexed |
2025-11-24T21:46:52Z |
| _version_ |
1850498523374551040 |
| fulltext |
Генноинженерная
биотехнология
УДК 57, .214.622
© С. П. Коваленко, Η. II. Мертвецов, 1990
ЭКСПРЕССИЯ В ESHERICHIA COLI ГЕНА
АНГИОГЕНИНА ЧЕЛОВЕКА, ТРАНСЛЯЦИОННО СЛИТОГО
С N-КОНЦЕВЫМ ФРАГМЕНТОМ β-ГАЛАКТОЗИДАЗЫ
Методом олигонуклеотид-направленного мутагенеза из фага М13тр8 с проклонирован-
HbiM синтетическим геном ангиогенина человека получен фаг М13тр8, кодирующий сли-
тый белок ангиогенин—α-пептид $-галактозидазы Е. coli (фаг M1-1). Продемонстри-
ровано, что в клетках, инфицированных фагом Mi l, синтезируется пептид, обладаю-
щий α-донорской активностью. Проведена оценка количества слитого белка на разных
стадиях роста клеточной культуры, инфицированной фагом М1-1.
Введение. При получении генноинженерных продуцентов оценка уровня
экспрессии гетерологичных генов в E. coli часто затруднена из-за слож-
ности или даже отсутствия функциональных тестов, позволяющих оп-
редилить количества целевого продукта в клетках. Один из возможных
подходов к созданию универсальных систем оценки количества реком-
бинантных белков — конструирование полипептидов, содержащих на-
ряду с целевой аминокислотной последовательностью какой-либо
дополнительный, легко тестируемый маркер. Таким маркером может слу-
жить, в частности, α-пептид β-галактозидазы Е. coli, способный к α-ком-
плементации с ДМ15р-галактозидазой Е. coli с формированием актив-
ного фермента. ΔΜΙδβ-галактозидаза представляет собой белок, не об-
ладающий β-галактозидазной активностью, в котором отсутствует
N-концевая аминокислотная последовательность нормальной β-галакто-
зидазы Е. coli. Такой белок формируется в клетках Е. coli, несущих
делецию AM15gal. При добавлении к раствору с ΔΜΙδβ-галактозидазой
полипептида с недостающей N-концевой последовательностью β-галак-
тозидазы формируется белок, обладающий β-галактозидазной активно-
стью. При этом N-концевой пептид называют α-донором, дефектную
β-галактозидазу — α-акцептором, а явление формирования белка с фер-
ментативной активностью — α-комплементацией [6].
α-Пептид представляется удобным маркером для генноинженерных
белков, поскольку, с одной стороны, в целом ряде широко распростра-
ненных векторов, например, серий М13, pUC, pTZ в непосредственной
близости от клонированного фрагмента находится ген IacZ', кодирую-
щий α-пептид β-галактозидазы Е. coli, а с другой — известен ряд при-
меров, где α-пептид с полипептидными «довесками» самой разной при-
роды обладал способностью к α-комплементации. Так, α-донорской
активностью обладали слитые с α-пептидом домены белка А [1], белки
фага ц)Х174 [2], продукт гена гроС' [3], α-2-интерферон человека [4]
и ряд других белков [5]. α-Донорская активность тестируется довольно
просто — достаточно в исследуемый образец добавить избыток ΔΜΙδβ-
галактозидазы (в виде грубого экстракта клеток Е. coli штамма
JM103) и измерить β-галактозидазную активность в исследуемом образ-
це, которая будет прямо пропорциональна количеству α-донора [6].
В данной работе описано конструирование единой трансляционной
рамки гена ангиогенина человека с геном IacZf в фаге М13пгр8. Фор-
мирование такой трансляционной рамки приводит к появлению в Е. co-
li, инфицированной соответствующим фагом, белка, обладающего спо-
собностью к α-комплементации ΔΜΙδβ-галактозидазы Е. coli.
92 ISSN 0233-7667. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № 4, 92
Материалы и методы. В работе использовали штамм Е. coli JM103, бактериофаг
МІЗАят [7], dNTP, ddNTP, изопропил^-/)-тиогалактозид (ИПТГ), 5-броминдок-
сил-3-Р-£)-галактопиранозид (Y-Gal), о-нитрофенилгалактозид (ОНФГ) производства
НИКТИ БАВ (Бердск), фенилметилсульфонилфлуорид фирмы «Serva» (ФРГ), ДНКазу
I фирмы «Sigma» (США). Олигонуклеотиды синтезированы В. В. Горн (Ин-т биоорг.
химии Сиб. отд-ния АН СССР, Новосибирск), как описано ранее [7].
Олигонуклеотид-направленный мутагенез проводили по [9], для анализа нуклео-
тидной последовательности также использовали метод, примененный в работе [9].
Для оценки количеств α-комплементирующих белков в иИ7-У-инфицированных
клетках Е. coli ночную культуру JM103 разводили средой YTX2 [9] до IO8 клеток в
1 мл, добавляли фаг M l - I в соотношении 100 : 1; 250 : 1; 500 : 1, 30 мин инкубировали
при 37 °С, разводили средой Υ Τ χ 2 в 10 раз, растили при встряхивании и 37 °С. Через
2 ч добавляли ИПТГ до 2 мМ, после чего отбирали аликвоты по 0,5 мл через каждые
30—60 мин. Аликвоты центрифугировали, клетки ресуспендировали в буфере, содер-
жащем 0,1 M трис-HCl, рН 8,0; 0,2 M NaCl, 10 M фенилметилсульфонилфлуорид, 10 мМ
2-меркаптоэтанол, 0,5 мг/мл лизоцима, выдерживали 1 ч при 0°С, добавляли тритон
Х-100 до 0,1 %, MgCl2 до 2,7 мМ, ДНКазу I до 0,1 мг/мл. После З ч инкубации добав-
ляли 0,5 мл буфера Z [11], 10—100 мкл экстракта клеток JM103, ОНФГ до 0,4 мг/мл.
После инкубации 1—20 ч) образцы центрифугировали, измеряли оптическую плотность
супернатанта при длине волны 420 нм. Активность β-галактозидазы рассчитывали по [11].
Результаты и обсуждение. Ранее нами описан химико-фермента-
тивный синтез гена ангиогенина человека [7]. В соответствии со схемой
сборки и клонирования гена ангиогенина получен фаг Λί/ЗАнг, в кото-
ром трансляционная рамка ангиогенина совпадает с рамкой α-пептида
β-галактозидазы фага М13тр8у однако α-пептид не экспрессируется в
клетках, инфицированных Λί/ЗАнг из-за наличия двух терминирующих
кодонов в конце гена ангиогенина. Возможность замены этих термини-
рующих кодонов на кодоны для аспарагиновой кислоты и пролина по-
зволяет получить фрагмент ДНК, кодирующий'слитый белок ангиоге-
нин — α-пептид. Такой белок, предположительно, может служить эффек-
тивным α-донором для ΔΜΙδβ-галактозидазы, а значит и детектировать
его будет довольно просто даже в незначительных количествах. После-
довательность Asp-Pro, привносимая на место стыка полипептидов, соот-
ветствующих ангиогенину и α-пептиду, предполагает выщепление ан-
гиогенина из слитого белка с помощью мягкого кислотного гидролиза [8].
Замену терминирующих кодонов TAATGA на кодоны GATCCG
осуществили с помощью олигонуклеотид-направленного мутаге-
неза [9]. Для этого 27-членный олигонуклеотид структуры
CTTGGCTGCAGCGGATCTGGTCGACGG, а также универсальный прай-
мер для секвенирования структуры GTAAAACGACGGCCAGT отжигали
с одноцепочечной Д Н К фага М13Ату вторую цепь гетеродуплекса до-
страивали большим фрагментом ДНК-полимеразы I Е. coli, гетеродуп-
лексами трансфицировали клетки Е. coli JM103. После трансфекции на
индикаторном газоне JM103 образовались 604 белые бляшки и 6 синих.
В контрольном эксперименте (без мутагенизирующего олигонуклеоти-
да) все бляшки (Ю4) были белыми. Анализ первичной структуры Д Н К
фагов, размноженных из синих бляшек, показал, что замена нуклеоти-
дов произошла в соответствии с запланированной схемой (рис. 1). По-
лученный фаг с заменой TAATGA -»- GATCCG назвали Ml-I . Фаг Ml - I
формировал синие бляшки на индикаторном газоне Е. coli JM103.
На электрофореграмме суммарных клеточных белков Е. coli, инфи-
цированных Ml-Iy не удалось обнаружить полос, соответствующих сли-
тому белку, что свидетельствует о невысоком уровне экспрессии этого
белка в Е. coli. В то же время возможность оценить количество слито-
го белка ангиогенин — α-пептид по тесту комплементации с ΔΜΙδβ-га-
лактозидазой позволяет рассмотреть изменение количества слитого бел-
ка в разных фазах роста клеточной культуры, инфицированной Μ 1 Ί .
Как отмечалось выше, β-галактозидазная активность клеточных экст-
рактов, содержащих α-донор, в условиях избытка А М ^ - г а л а к т о з и д а з ы
отражает количество α-комплементирующего белка. Результаты изме-
ISSN 0233-7667. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № 4, 93
Рис. 1. Схема введения олигонуклеотид-направленной мутапии в Д Н К фага МїЗАпт
для получения единой трансляционной рамки ангиогенин—N-концевой фрагмент β-га-
лактозидазы. Приведены фрагменты секвенирующего геля, демонстрирующие проис-
шедшую замену
Fig. 1. Oligonucleotide-directed mutation was introduced in M13Ang phage to obtain a
single reading frame of angiogenin-N-terminal fragment of β-galactosidase. Fragments
of sequencing gel are presented to demonstrate the mutation occured
рения активности β-галактозидазы в экстрактах клеток при добавлении
избытков А М ^ - г а л а к т о з и д а з ы на разных стадиях роста клеточной
культуры Е. coli JM103, инфицированной Ml-I, приведены на рис. 2, а.
Видно, что количества белка, способного быть α-донором, возрастают
94 ISSN 0233-7667. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № 4, 94
с увеличением плотности культуры, а на ранних фазах роста Е. coli —
с увеличением множественности инфекции фагом. Возрастание количе-
ства α-донора в первые часы после индукции сменяется уменьшением
(по-видимому, вследствие протеолиза) α-комплементирующего белка в
стационарной фазе роста. Увеличением множественности фага можно
добиться некоторого повышения количества α-донора на ранних этапах
роста Е. coli. Однако в целом количества исследуемого белка столь
незначительны, что не обнаруживаются гель-электрофорезом суммарных
ед. акт /т
4,0-
3,5-
3,0 -
2,5-
2,0 -
15 -
1,0 -
0,5 -
О 120155190 320 395 485 620 1640мин 0 3570 200 275 365 500 мин
Рис. 2. Динамика изменения количества α-комплементирующих белков в Л4/-1-инфи-
цированной культуре Е. coli при различной множественности заражения фагом (а) и
то же в пересчете на единичную клетку Е. coli (б): а — по оси абсцисс—время от
начала инфекции, стрелкой отмечено введение в среду индуктора Iac-оперона ИПТГ;
по оси ординат—активность β-галактозидазы в 1 мл клеточной суспензии в условиях
избытка AM15 β-галактозидазы; б — по оси абсцисс — время после индукции Iac-оперо-
на; по оси ординат — то же, что а в пересчете на единичную клетку. Множественность
заражения фагом: 7 — 100; 2 — 250; 5 — 500
Fig. Z Dynamics of changes in the α -complementary porteins amount s dur ing the Ml-I
infected E. coli growtx. X axis—time af ter infection, induction of /ac-operon by IPTG indi-
cated by arrow. Y a x i s — β - g a l a c t o s i d a s e activity in I ml of cell suspension in the
excess of ΔΜ15 β-galactos idase (a) ; dynamics of changes in the α-complementary pro-
teins amounts per a single cell. X axis — time af te r Zac-operon induction. Y axis — β-
galac tos idase activity per a single cell in the ΔΜ16 β-galac tos idase excess (6). Multipli-
city of infection: 1 — 100, 2 — 250, 5 — 500
белков Л1У-/-инфицированной E. coli даже при оптимизации множест-
венности заражения в момент максимального количества α-донора в
клетке (множественность заражения — 500, время после индукции —
70 мин). Принимая во внимание, что в наиболее чистых препаратах
β-галактозидазы Е. coli удельная активность не превышает 1000 ед. акт.
на 1 мг белка [10], можно оценить и абсолютные количества белка с
α-донорской активностью в экстрактах Е. coli, инфицированных фагом
Ml-L Действительно, измеряемая активность β-галактозидазы через
4 ч после индукции составляет 1,8 ед. акт., что соответствует ~ 1,8 мкг
β-галактозидазы. Учитывая, что молекулярная масса β-галактозидазы
в 4,1 раза больше, чем слитого белка (ангиогенин—α-пептид), при ус-
ловии участия всех имеющихся молекул слитого белка в а-комплемента-
ции, количество α-донора можно оценить как ~ 0 , 4 5 мкг в 1 мл клеточ-
ной суспензии. Это составляет менее 0,1 % суммарных белков клетки.
Понятно, что такие количества слитого белка могут маскироваться дру-
гими белками на электрофореграммах суммарных клеточных лизатов.
Таким образом, используемая схема позволяет оценивать количе-
ства белка в клетке даже в том случае, когда отсутствуют методы его
функциональной детекции, необходимые антитела недоступны, а элек-
трофоретический анализ суммарных белков клетки не позволяет вы-
явить этот белок из-за незначительных количеств. Введение сайта хи-
мического расщепления белка между полипептидами, соответствующи-
ми ангиогенину и α-пептиду, предполагает возможность избавиться от
маркера после очистки химерного белка. Несмотря на то, что об уни-
версальности данной схемы говорить, по-видимому, еще рано, а-донор-
94 ISSN 0233-7667. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № 4, 95
екая активность α-пептида, слитого с интерфероном [4], фрагментом
белка А [1], белком фага φХ174 [2] и рядом других белков [3, 5], дает
основание предположить достаточно широкие возможности применения
использованной нами методологии для детекции самых различных про-
и эукариотических генноинженерных белков при экспрессии их в
Е. coli. Пример с ангиогенином, описанный в данной статье, — еще одно
тому подтверждение. Оценка количества слитого белка в Ml-I-инфици-
рованных клетках показала, что сама по себе система Е. coli/фаг М13
с геном ангиогенин — α-пептид под регуляцией Iac-оперона дает незна-
чительный уровень экспрессии, мало изменяющийся в процессе роста
культуры и с варьированием множественности инфекции. Однако ис-
пользование слитого белка ангиогенин — α-пептид несомненно может
значительно упростить выбор оптимальной системы экспрессии ангиоге-
нина в Е. coli.
EXPRESSION IN ESCHERICHIA COLI OF THE HUMAN ANGIOGENIN GENE
TRANSLATIONALLY FUSED WITH THE N-TERMINAL FRAGMENT OF β-GALA-
CTOSIDASE
S. P. Kovalenko, N. P. Mertvetsov
Institute of Bioorganic Chemistry,
Siberian Branch of Academy of Sciences of the USSR,
Institute of Therapy,
Siberian Branch of Medical Sciences of the USSR
S u m m a r y
The phage M13mp8 earring a DNA fragment coding for fusion protein angiogenin-a-
peptide of β-galactosidase was obtained by oligonucleotide directed mutagenesis techni-
que from the M13mp8 phage with a cloned synthetic human angiogenin gene. The syn-
thesis of peptide with, α-donor activity in the phage Ml-I-infected cells was demonstra-
ted. The amount of the fusion protein was estimated at the different stages of E. coli
cell growth after the phage infection.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. A gene fusion system for generating antibodies against short peptides / B. Lowenadler,
B. Jansson, S. Palens et a l . / / Gene.— 1987.—58, N 1.—P. 87—97.
2. Struck D. K., Maratea D., Young R. Purification of hybrid β-galactosidase proteins
encoded by φX174E IacZ and E. coli prlA IacZ: a general method for the isolation of
IacZ fusion polypeptides produced in low amounts / / J. Мої. and Appl. Genet.—
1985.—3, N 1,—P. 18—25.
3. Патон Ε. БЖиволуп Α. Η. Химерный ген rpoC' — IacZf рекомбинантной плазмиды
pUC 19, сохраняющей β-галактозидазную активность в клетках Escherichia coli//
Биополимеры и клетка.— 1987.— 3, № 5.— С. 276—279.
4. Экспрессия в Escherichia coli гена лейкоцитарного α-2-интерферона человека, тран-
сляционно слитого с N-концевым фрагментом β-галактозидазы / В. А. Петренко,
C. И. Татьков, Л. Н. Семенова и др. / / Молекуляр. генетика, микробиология и ви-
русология.— 1988,—4, № 1.—С. 37—41.
5. Close T. J., Christmann J. L., Rodriquer R. L. М13 bacteriophage and pUC plasmids
containing DNA inserts but still capable of β-galactosidase α-complementation / /
GeneJ— 1985.—33, N 1.—P. 131—136.
6. Molecular basis of β-galactosidase α-complementation / K. E. Langley, M. R. Villa-
rejo, Α. V. Fowler et a l . / / P r o c . Nat. Acad. Sci. USA.— 1975.—72, N 4.—P. 1254.
7. Химико-ферментативный синтез и клонирование гена ангиогенина человека в соста-
ве фага М13пгр8 / С. П. Коваленко, В. В. Горн, В. А. Каргинов и др. / / Биоорг.
химия,— 1988.— 14, № 7.—С. 910—915.
8 .Landon М. Cleavage at aspartyl-prolyl bonds / / M e t h . Enzymol.— 1977.— 47.—
P. 145—149.
9. EMBO / EMBL summer course on site directed mutagenesis: Lab. manual.— Heidel-
berg, 1984.—59 p.
10. Sigma Company Chemical Catalog.— 1989.—631 p.
11. Миллер Дж. Эксперименты в молекулярной генетике.— М. : Мир, 1976.— 486 с.
Ин-т биоорг. химии Сиб. отд-ния АН СССР, Новосибирск Получено 23.08.89
Ин-т терапии Сиб. отд-ния АМН СССР, Новосибирск
96 ISSN 0233-7667. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № 4, 96
|