Исследование репликации плазмид, содержащих геном SV40, в клетках млекопитающих
В культурах обезьяньих клеток CVI изучали репликацию бактериальных рекомбинантных плазмид, содержащих геном SV40. Показано, что плазмида pYM, в состав которой входит один полный геном SV40 и которая не содержит «ядовитых» последовательностей, свободно реплицируется в CVI-клетках. Репликацию рекомбин...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Дата: | 1987 |
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1987
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153803 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Исследование репликации плазмид, содержащих геном SV40, в клетках млекопитающих / С.М. Ландау, Л.К. Сасина, Н.А. Чащин, Л.И. Чащина // Биополимеры и клетка. — 1987. — Т. 3, № 3. — С. 134-136.— Бібліогр.: 6 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-153803 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Ландау, С.М. Сасина, Л.К. Чащин, Н.А. Чащина, Л.И. 2019-06-14T16:34:38Z 2019-06-14T16:34:38Z 1987 Исследование репликации плазмид, содержащих геном SV40, в клетках млекопитающих / С.М. Ландау, Л.К. Сасина, Н.А. Чащин, Л.И. Чащина // Биополимеры и клетка. — 1987. — Т. 3, № 3. — С. 134-136.— Бібліогр.: 6 назв. — рос. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.0001E1 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153803 575.155:575.224.46 В культурах обезьяньих клеток CVI изучали репликацию бактериальных рекомбинантных плазмид, содержащих геном SV40. Показано, что плазмида pYM, в состав которой входит один полный геном SV40 и которая не содержит «ядовитых» последовательностей, свободно реплицируется в CVI-клетках. Репликацию рекомбинантных ДНК, имеющих «ядовитые» последовательности, можно индуцировать введением вакуолизирующего вируса 40 одновременно с химерными плазмидами, содержащими геном SV40. У культурах мавп’ячих клітин CVI вивчали реплікацію бактерійних рекомбінантних плазмід, що містять геном SV40. Показано, що плазміда pYM, до складу якої входить один повний геном SV40 і яка не містить «отруйних» послідовностей, вільно реп лікується в CVI-клітинах. Реплікацію рекомбінантних ДНК, що мають «отруйні» послідовності, можна індукувати введенням вакуолізувального вірусу 40 одночасно з химерними плазмідами, що містять геном SV40. The replication of the bacterial recombinant plasmids containing SV40 genome has been studied in cultures of simian CVI cells. It is shown that replication of recombinant DNAs having "poison sequences" may be induced by introduction of the vacuolating SV40 virus simultaneously with chimeric plasmids containing SV40 genome. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Краткие сообщения Исследование репликации плазмид, содержащих геном SV40, в клетках млекопитающих Дослідження реплікації плазмід, що містять геном SV40, у клітинах ссавців Studies in replication of plasmids containing SV40 genome in mammalian cells Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Исследование репликации плазмид, содержащих геном SV40, в клетках млекопитающих |
| spellingShingle |
Исследование репликации плазмид, содержащих геном SV40, в клетках млекопитающих Ландау, С.М. Сасина, Л.К. Чащин, Н.А. Чащина, Л.И. Краткие сообщения |
| title_short |
Исследование репликации плазмид, содержащих геном SV40, в клетках млекопитающих |
| title_full |
Исследование репликации плазмид, содержащих геном SV40, в клетках млекопитающих |
| title_fullStr |
Исследование репликации плазмид, содержащих геном SV40, в клетках млекопитающих |
| title_full_unstemmed |
Исследование репликации плазмид, содержащих геном SV40, в клетках млекопитающих |
| title_sort |
исследование репликации плазмид, содержащих геном sv40, в клетках млекопитающих |
| author |
Ландау, С.М. Сасина, Л.К. Чащин, Н.А. Чащина, Л.И. |
| author_facet |
Ландау, С.М. Сасина, Л.К. Чащин, Н.А. Чащина, Л.И. |
| topic |
Краткие сообщения |
| topic_facet |
Краткие сообщения |
| publishDate |
1987 |
| language |
Russian |
| container_title |
Биополимеры и клетка |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Дослідження реплікації плазмід, що містять геном SV40, у клітинах ссавців Studies in replication of plasmids containing SV40 genome in mammalian cells |
| description |
В культурах обезьяньих клеток CVI изучали репликацию бактериальных рекомбинантных плазмид, содержащих геном SV40. Показано, что плазмида pYM, в состав которой входит один полный геном SV40 и которая не содержит «ядовитых» последовательностей, свободно реплицируется в CVI-клетках. Репликацию рекомбинантных ДНК, имеющих «ядовитые» последовательности, можно индуцировать введением вакуолизирующего вируса 40 одновременно с химерными плазмидами, содержащими геном SV40.
У культурах мавп’ячих клітин CVI вивчали реплікацію бактерійних рекомбінантних плазмід, що містять геном SV40. Показано, що плазміда pYM, до складу якої входить один повний геном SV40 і яка не містить «отруйних» послідовностей, вільно реп лікується в CVI-клітинах. Реплікацію рекомбінантних ДНК, що мають «отруйні» послідовності, можна індукувати введенням вакуолізувального вірусу 40 одночасно з химерними плазмідами, що містять геном SV40.
The replication of the bacterial recombinant plasmids containing SV40 genome has been studied in cultures of simian CVI cells. It is shown that replication of recombinant DNAs having "poison sequences" may be induced by introduction of the vacuolating SV40 virus simultaneously with chimeric plasmids containing SV40 genome.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153803 |
| citation_txt |
Исследование репликации плазмид, содержащих геном SV40, в клетках млекопитающих / С.М. Ландау, Л.К. Сасина, Н.А. Чащин, Л.И. Чащина // Биополимеры и клетка. — 1987. — Т. 3, № 3. — С. 134-136.— Бібліогр.: 6 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT landausm issledovaniereplikaciiplazmidsoderžaŝihgenomsv40vkletkahmlekopitaûŝih AT sasinalk issledovaniereplikaciiplazmidsoderžaŝihgenomsv40vkletkahmlekopitaûŝih AT čaŝinna issledovaniereplikaciiplazmidsoderžaŝihgenomsv40vkletkahmlekopitaûŝih AT čaŝinali issledovaniereplikaciiplazmidsoderžaŝihgenomsv40vkletkahmlekopitaûŝih AT landausm doslídžennâreplíkacííplazmídŝomístâtʹgenomsv40uklítinahssavcív AT sasinalk doslídžennâreplíkacííplazmídŝomístâtʹgenomsv40uklítinahssavcív AT čaŝinna doslídžennâreplíkacííplazmídŝomístâtʹgenomsv40uklítinahssavcív AT čaŝinali doslídžennâreplíkacííplazmídŝomístâtʹgenomsv40uklítinahssavcív AT landausm studiesinreplicationofplasmidscontainingsv40genomeinmammaliancells AT sasinalk studiesinreplicationofplasmidscontainingsv40genomeinmammaliancells AT čaŝinna studiesinreplicationofplasmidscontainingsv40genomeinmammaliancells AT čaŝinali studiesinreplicationofplasmidscontainingsv40genomeinmammaliancells |
| first_indexed |
2025-11-26T06:41:42Z |
| last_indexed |
2025-11-26T06:41:42Z |
| _version_ |
1850615785854074880 |
| fulltext |
12. Ofengand J., Henes C. The function of pseudouridylic acid in t ransfer ribonucleic
a c i d / / J . Biol. Chem.— 1969.—244, N 22 .—P. 6241—6253.
13. The mechanism of codon-anticodon interactions in ribosomes. Heterogeneity of tRNA
complexes with 70S ribosomes of Escherichia coli / S. V. Kirillov, V. I. Makchno,
V. B. Odintsov, Yu. P. S e m e n k o v / / E u r . J. Biochem.— 1978.—89, N 1 .—P. 305—313.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Киев Получено 20.03.86*
УДК 575.155:575.224.46
ИССЛЕДОВАНИЕ РЕПЛИКАЦИИ ПЛАЗМИД,
СОДЕРЖАЩИХ ГЕНОМ SV40, В КЛЕТКАХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ
С. М. Ландау, Л. К. Сасина, Н. А. Чащин, Л. И. Чащина
В настоящее время широко применяют векторы для эукариотических
клеток на основе Д Н К вируса SV40. Основой для исследования функ-
циональной активности таких векторов должно быть изучение их спо-
собности реплицироваться в пермиссивной системе клеток.
Однако в последнее время стало известно, что векторы на основе
pBR322 содержат «ядовитые» последовательности, препятствующие ре-
пликации рекомбинантных молекул в культурах клеток млекопитающих
[1—3]. В связи с этим мы исследовали возможность индуцирования ре-
пликации рекомбинантных молекул, состоящих из плазмиды pBR325
(производная pBR322) и полного генома SV40, в пермиссивной системе
клеток CVI с помощью обезьяньего вакуолизирующего вируса 40.
В перевиваемой системе клеток CVI изучали репликацию бактери-
альных рекомбинантных плазмид, содержащих геном SV40. Исследова-
ли следующие плазмиды: 1) ρΥΜ, созданную на основе pBR322 и содер-
жащую один полный геном SV40 [1] и 2) сконструированные нами на
основе SV40 плазмиды pSV2, pSV9, содержащие один ( p S V 2 ) и два
(pSV9) полных генома SV40 [4]. Все исследованные химерные плаз-
мидные молекулы были получены с помощью рестриктазы В а т Н І , ко-
торая расщепляет молекулу Д Н К SV40 в позднем районе, кодиру-
ющем капсидные белки вириона, и гидролизует плазмиды pBR322 или
pBR325 в районе гена устойчивости к тетрациклину.
Д л я изучения репликации бактериальными плазмидами (0,5—
0,6 мкг) обрабатывали культуры клеток млекопитающих во флаконах
объемом 50 мл в присутствии кальций-фосфатного преципитата. Плаз-
мидные Д Н К из клеток млекопитающих выделяли в динамике инфек-
ции [3]. Проводили дот-гибридизацию выделенных из культур клеток
CVI плазмидных Д Н К с 32P-SV40 (3-Ю7 имп/мкг) или 3 Ф -pBR322
(108 имп/мкг).
Еще до изучения репликации рекомбинантных бактериальных плаз-
мид в клетках млекопитающих необходимо было выяснить динамику
синтеза обезьяньего вакуолизирующего вируса SV40. Было показано,
что при инфицировании обезьяньих клеток вирусной суспензией пик
синтеза вирусной Д Н К обнаруживается через одни или двое суток, что
совпадает с данными литературы [5]. Позднее количество свободной ви-
русной Д Н К уменьшается. Через 6—7 сут практически не удается обна-
ружить вирусной Д Н К в эписомальном состоянии (рисунок, а).
Синтез Д Н К плазмиды ρΥΜ, так же как и вирусной Д Н К , возрас-
тает через сутки (рисунок, б) . Однако в отличие от Д Н К вируса SV40
рекомбипантную плазмиду ρΥΜ удается выявить даже спустя 7 сут
после трансфекции (рисунок, в), что свидетельствует о длительной са-
мопроизвольной ее репликации в культурах клеток млекопитающих.
Эти данные согласуются с данными литературы [3]. Расчет соотношения
площадей пиков авторадиограммы на рисунке, б, показал, что площадь
пика нулевой точки инфекции относится к площадям пиков первых,
вторых и третьих суток инфекции как 1 : 1 ; 4 : 1 ; 3 : .1,7. соответственно.
134 Б И О П О Л И М Е Р Ы И К Л Е Т К А . - 1987 — т . 3, № 3
То есть количество плазмидной Д Н К увеличивается примерно вдвое
(1,7 раза) по сравнению с количеством Д Н К , связавшейся с культурой
клеток сразу после обработки (нулевая точка инфекции).
Первое пятно на рисунке, <5, соответствует 0,4 мкг Д Н К рУМ. Пло-
щадь пика Д Н К на третьи сутки инфекции больше в 2,3 раза , т. е. со-
ответствует 0,92 мкг. По-видимому, можно ориентировочно рассчитать
Изучение репликации рекомбинантных плазмид, содержащих геном SY40 в культурах
обезьяньих клеток CVI, методом дот-гибридизации (а, б — гибридизация с 3 2 Р - Д Н К
SV40, 3-Ю 7 ими/мкг; в — д — с 3 2 Р - p B R 3 2 2 , 108 имп/мкг; последовательность пятен
слева направо, пиков соответствующих авторадиограмм — справа налево): а — репли-
кация Д Н К вируса SV40 (нулевая точка инфекции, 1, 2, 3-й сут); б — репликация плаз-
миды рУМ (0,4 мкг, нулевая точка, 1, 2, 3-й сут); β — т о же (нулевая точка,· 1, 3, 4,
7-е сут); г — репликация рекомбинантной плазмиды pSV2 (нулевая точка,. 1, 3, 4,
5-е сут); д—репликация химерной плазмиды pSV9 при совместном введении с виру-
сом SY40 (нулевая точка, 1, 2, 3, 4, 5-е сут)
Studies in replication of recombinant plasmids containing SV40 genome in cultures of
simian CVI cells by the dot-hybridization technique (а, б — hybridization with 3 2P-SV40
DNA, 3-107 p u l s e ^ g , 6-0 — with 3 2 P - p B R 3 2 2 , 108 pu l s e / ^g ; seque,nce of spots, fгощ. the
left to the right, and that of peaks of the corresponding au toradiograms from ,th(e,,right
to the lef t ) : a — replication of SV40 DNA (zero point of infection, 1st, 2nd,, 3d'(i \ays);
б — replication of pYM plasmid (0.4 μg, zero point, 1st, 2nd, 3d days) ; в — the same' (zero
point, 1st, 3d, 4th, 7th days) ; г — replication of recombinant pS V2 plasmid (,zexp\ppinjt.,. j st>
2nd, 3d, 4th, 5th days) ; д— replication of chimeric pSV9 plasmid simiiltaneO.^sty^ji^liro-
duced with SV40 virus (zero point of infection, 1st, 2nd, 3d, 4th, 5th days) ' : ;
количество копий реплицирующихся плазмид в клетке. Известно, что
сам вирус SV40 или его Д Н К инфицируют лишь часть клеток культу-
ры CVI. По нашим предыдущим данным [6], Д Н К вируса SV40 ин-
фицирует до 6 % клеток. Если предположить, что лишь в 6 % клеток
реплицируется pYMy то каждая инфицированная клетка на третьи сут-
ки репликации плазмиды будет содержать примерно 105 молекул Д Н К
(во флаконе (50 мл) содержится примерно 106 клеток CVI).
Результаты введения сконструированных нами бактериальных
плазмид pSV2 и pSV9 в культуры клеток млекопитающих показали, что
они не реплицируются в пермиссивных для них культурах клеток СVI
(рисунок, г). Д Н К плазмиды pSV2 или pSV9 удавалось выявить мето-
БИОПОЛИМЕРЫ II К Л Е Т К А , - 1987.—т. 3, К? 3 4 * 135
дом дот-гибридизации с 3 2Р-pBR322 только на нулевой точке инфекций,
т. е. при выделении Д Н К из культур клеток сразу же после их
обработки.
Уже через сутки Д Н К pSV2 или pSV9 методом дот-гибридизации
выявить не удавалось, из чего следовало, что при отсутствии реплика-
ции плазмидной Д Н К в клетках млекопитающих ее количество резко
уменьшается. Это находит свое объяснение в литературе [3]. Показано,
что плазмида pBR322 содержит «ядовитые» последовательности, пре-
пятствующие репликации рекомбинантных Д Н К в культурах клеток
млекопитающих. Эти же авторы [3] показали, что плазмида ρΥΜ не
содержит «ядовитых» последовательностей и поэтому свободно репли-
цируется в культурах клеток.
Д л я того чтобы индуцировать репликацию химерных рекомбинант-
ных плазмид pSV2 или pSV9 в культурах клеток, мы вводили эти плаз-
миды одновременно с вирусом SV40, полагая, что при попадании хи-
мерных молекул и вирусных частиц в одну клетку синтезированный
Т-антиген вируса свяжется с origin SV40 плазмид pSV2 или pSV9, ин-
дуцируя их репликацию. И действительно, совместная трансфекция ви-
руса SV40 с плазмидой pSV2 или pSV9 приводила к репликации этих
бактериальных плазмид в культурах клеток млекопитающих (рисунок,
д). Репликация плазмидной Д Н К наблюдается в течение тех же сроков,
что и репликация вируса SV40. На пятые сутки количество плазмидной
Д Н К резко уменьшается (рисунок, д).
Таким образом, с помощью вируса SV40 можно индуцировать реп-
ликацию бактериальных плазмид, содержащих геном SV40, в клетках
млекопитающих, что открывает новые перспективы для использования
этого методического подхода.
STUDIES IN REPLICATION OF PLASMIDS CONTAINING SV40
GENOME IN MAMMALIAN CELLS
S. M. Landau, L. К. Sasina, Ν. A. Chashchin, L. I. Chashchina
Institute of Molecular Biology and Genetics,
Academy of Sciences of the Ukrainian SSR, Kiev
S u m m a r y
The replication of the bacterial recombinant plasmids containing SV40 genome has been
studied in cultures of simian CVI cells. It is shown that replication of recombinant
DNAs having «poison sequences» may be induced by introduction of the vacuolating
SV40 virus simultaneously with chimeric plasmids containing SV40 genome.
1. Gynheung Α., Hidaka КSiminovitch L. Expression of bacterial β-galactozidase in
animal cells / / Мої. and Cell. Biol.— 1982.—2, N 12.—P. 1628—1632.
2. O'Hare K., Benoist C., Bretnach R. Transformation of -mouse fibroblast to methotrexa-
te resistance by a recombinant pl'asmid expressing a prokaryotic dihydrofolate re-
d u c t a s e / / P r o c . Nat. Acad. Sci. USA.— 1981.—78, N 3 .—P. 1527-^1531.
3. Lusky M., Botchan M. Inhibition of SV40 replication of simian cells by specific
pBR32? DNA sequences / /Na tu re .— 1981.—293, N 3 .—P. 79—81.
4. Сасина JI. К., Ландау С. Μ., Кордюм В. А. Конструирование и анализ гибридных
плазмид, содержащих геном вируса SV40 / /Молекуляр . генетика, микробиология и
вирусология.— 1986.—№ 1.—С. 26—30.
5. Cereghini S., Yaniv Μ. Assembly of transfected DNA into chromatin: structural chan-
ges in the origin-promoter-enhancer region upon replication / / EMBO J.— 1984.—3,
N 6 .—P. 1243—1253.
6. Ландау С. Μ., Гудзь-Горбань А. П., Костомаха Л. К. Выявление функциональной
активности Д Н К SV40 / /Молекуляр . биология.— 1983.—Вып. 35.—С. 10—13.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Киев Получено 28.03.86
136 БИОПОЛИМЕРЫ И К Л Е Т К А . - 1987. - т. 3, № 3
|