Избирательное введение спин-метки в остаток N-ацетилнейраминовой кислоты олигосахаридной группировки Fab-области иммуноглобулина М

Предложена методика введения спин-метки (2,2,6,6-тетраметил-4-аминопиперидин-1-оксил) в остаток N-ацетилнейраминовой кислоты олигосахаридной группировки Fab-области IgM.

Gespeichert in:
Bibliographische Detailangaben
Datum:1988
Hauptverfasser: Тимофеев, В.П., Лапук, В.А., Чухрова, А.И., Арутюнян, А.Е., Киселева, Т.М.
Format: Artikel
Sprache:Russian
Veröffentlicht: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1988
Schriftenreihe:Биополимеры и клетка
Schlagworte:
Online Zugang:https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153810
Tags: Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:Избирательное введение спин-метки в остаток N-ацетилнейраминовой кислоты олигосахаридной группировки Fab-области иммуноглобулина М / В.П. Тимофеев, В.А. Лапук, А.И. Чухрова, А.Е. Арутюиян, Т.М. Киселева // Биополимеры и клетка. — 1988. — Т. 4, № 2. — С. 75-78. — Бібліогр.: 12 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-153810
record_format dspace
spelling nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1538102025-02-23T18:13:04Z Избирательное введение спин-метки в остаток N-ацетилнейраминовой кислоты олигосахаридной группировки Fab-области иммуноглобулина М Вибіркове введення спін-мітки у залишок N-ацетилнейрамінової кислоти олігосахаридного угруповання Fab-області імуноглобуліну М Selective spin-labelling of N-acetylneuraminic acid residue in oligosaccharide of IgM Fab-region Тимофеев, В.П. Лапук, В.А. Чухрова, А.И. Арутюнян, А.Е. Киселева, Т.М. Структура и функции биополимеров Предложена методика введения спин-метки (2,2,6,6-тетраметил-4-аминопиперидин-1-оксил) в остаток N-ацетилнейраминовой кислоты олигосахаридной группировки Fab-области IgM. Запропоновано методику введення спін-мітки (2,2,6,6-тетраметил-4-амінопіперидин-1-оксил) у залишок N-ацетилнейрамінової кислоти олігосахаридного угруповання Fab-області IgM. A method is proposed for spin-labelling (2,2,6,6-tetramethyl-4-aminopiperidine-I-oxyl) of N-acetylneuraminic acid residue within oligosaccharide of Fafe-region of immunoglobulin M. 1988 Article Избирательное введение спин-метки в остаток N-ацетилнейраминовой кислоты олигосахаридной группировки Fab-области иммуноглобулина М / В.П. Тимофеев, В.А. Лапук, А.И. Чухрова, А.Е. Арутюиян, Т.М. Киселева // Биополимеры и клетка. — 1988. — Т. 4, № 2. — С. 75-78. — Бібліогр.: 12 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000214 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153810 576.8.097:547.963.1 ru Биополимеры и клетка application/pdf Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language Russian
topic Структура и функции биополимеров
Структура и функции биополимеров
spellingShingle Структура и функции биополимеров
Структура и функции биополимеров
Тимофеев, В.П.
Лапук, В.А.
Чухрова, А.И.
Арутюнян, А.Е.
Киселева, Т.М.
Избирательное введение спин-метки в остаток N-ацетилнейраминовой кислоты олигосахаридной группировки Fab-области иммуноглобулина М
Биополимеры и клетка
description Предложена методика введения спин-метки (2,2,6,6-тетраметил-4-аминопиперидин-1-оксил) в остаток N-ацетилнейраминовой кислоты олигосахаридной группировки Fab-области IgM.
format Article
author Тимофеев, В.П.
Лапук, В.А.
Чухрова, А.И.
Арутюнян, А.Е.
Киселева, Т.М.
author_facet Тимофеев, В.П.
Лапук, В.А.
Чухрова, А.И.
Арутюнян, А.Е.
Киселева, Т.М.
author_sort Тимофеев, В.П.
title Избирательное введение спин-метки в остаток N-ацетилнейраминовой кислоты олигосахаридной группировки Fab-области иммуноглобулина М
title_short Избирательное введение спин-метки в остаток N-ацетилнейраминовой кислоты олигосахаридной группировки Fab-области иммуноглобулина М
title_full Избирательное введение спин-метки в остаток N-ацетилнейраминовой кислоты олигосахаридной группировки Fab-области иммуноглобулина М
title_fullStr Избирательное введение спин-метки в остаток N-ацетилнейраминовой кислоты олигосахаридной группировки Fab-области иммуноглобулина М
title_full_unstemmed Избирательное введение спин-метки в остаток N-ацетилнейраминовой кислоты олигосахаридной группировки Fab-области иммуноглобулина М
title_sort избирательное введение спин-метки в остаток n-ацетилнейраминовой кислоты олигосахаридной группировки fab-области иммуноглобулина м
publisher Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate 1988
topic_facet Структура и функции биополимеров
url https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153810
citation_txt Избирательное введение спин-метки в остаток N-ацетилнейраминовой кислоты олигосахаридной группировки Fab-области иммуноглобулина М / В.П. Тимофеев, В.А. Лапук, А.И. Чухрова, А.Е. Арутюиян, Т.М. Киселева // Биополимеры и клетка. — 1988. — Т. 4, № 2. — С. 75-78. — Бібліогр.: 12 назв. — рос.
series Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv AT timofeevvp izbiratelʹnoevvedeniespinmetkivostatoknacetilnejraminovojkislotyoligosaharidnojgruppirovkifaboblastiimmunoglobulinam
AT lapukva izbiratelʹnoevvedeniespinmetkivostatoknacetilnejraminovojkislotyoligosaharidnojgruppirovkifaboblastiimmunoglobulinam
AT čuhrovaai izbiratelʹnoevvedeniespinmetkivostatoknacetilnejraminovojkislotyoligosaharidnojgruppirovkifaboblastiimmunoglobulinam
AT arutûnânae izbiratelʹnoevvedeniespinmetkivostatoknacetilnejraminovojkislotyoligosaharidnojgruppirovkifaboblastiimmunoglobulinam
AT kiselevatm izbiratelʹnoevvedeniespinmetkivostatoknacetilnejraminovojkislotyoligosaharidnojgruppirovkifaboblastiimmunoglobulinam
AT timofeevvp vibírkovevvedennâspínmítkiuzališoknacetilnejramínovoíkislotiolígosaharidnogougrupovannâfaboblastíímunoglobulínum
AT lapukva vibírkovevvedennâspínmítkiuzališoknacetilnejramínovoíkislotiolígosaharidnogougrupovannâfaboblastíímunoglobulínum
AT čuhrovaai vibírkovevvedennâspínmítkiuzališoknacetilnejramínovoíkislotiolígosaharidnogougrupovannâfaboblastíímunoglobulínum
AT arutûnânae vibírkovevvedennâspínmítkiuzališoknacetilnejramínovoíkislotiolígosaharidnogougrupovannâfaboblastíímunoglobulínum
AT kiselevatm vibírkovevvedennâspínmítkiuzališoknacetilnejramínovoíkislotiolígosaharidnogougrupovannâfaboblastíímunoglobulínum
AT timofeevvp selectivespinlabellingofnacetylneuraminicacidresidueinoligosaccharideofigmfabregion
AT lapukva selectivespinlabellingofnacetylneuraminicacidresidueinoligosaccharideofigmfabregion
AT čuhrovaai selectivespinlabellingofnacetylneuraminicacidresidueinoligosaccharideofigmfabregion
AT arutûnânae selectivespinlabellingofnacetylneuraminicacidresidueinoligosaccharideofigmfabregion
AT kiselevatm selectivespinlabellingofnacetylneuraminicacidresidueinoligosaccharideofigmfabregion
first_indexed 2025-11-24T06:33:37Z
last_indexed 2025-11-24T06:33:37Z
_version_ 1849652430862548992
fulltext в Структура и функция биополимеров УДК 576.8.097:547.963.1 ИЗБИРАТЕЛЬНОЕ ВВЕДЕНИЕ СПИН-МЕТКИ В ОСТАТОК N-АЦЕТИЛНЕЙРАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ ОЛИГОСАХАРИДНОЙ ГРУППИРОВКИ Fab-ОБЛАСТИ ИММУНОГЛОБУЛИНА Μ * В. П. Тимофеев, В. А. Лапук, А. И. Чухрова, А. Е. Арутюиян, Т. М. Киселева Введение. Метод спин-метки является весьма информативным при ис- следовании динамической структуры биологических макромолекул [1]. В последнее время с помощью этого метода были выявлены важные особенности динамики молекулы иммуноглобулина Μ ( IgM)—одного из основных участников иммунного ответа организма человека и жи- вотных [2, 3]. При этом использовалась, главным образом, спин-метка по углеводам IgM — 2,2,6,6-тетраметил-4-аминопиперидин-1-оксил (CMI). Однако интерпретация данных в этом случае осложнялась труд- ностью контроля процесса введения спин-метки в IgM и ее последую- щей локализации в макромолекуле. В данной работе показана воз- можность введения CMI только в одну из пяти олигосахаридных груп- пировок (ОГ) IgM (в расчете на μ-цепь), расположенную в Fab-обла- сти. При этом спин-метка локализуется только в остатке N-ацетилней- раминовой кислоты (AcNeu) этой ОГ. Полученные таким образом спин-меченные по Fab-области препараты IgM могут оказаться весьма полезными при исследовании динамики структуры IgM, в частности в процессе связывания антигена. Материалы и методы. М о н о к л о н а л ь н ы й ^ М р 0 щ (болезнь Вальденштрема) выделяли по описанному ранее методу [7], но без стадии лиофилизадии. Гомогенность препарата доказана иммуноэлектрофорезом с использованием овечьей поливалентной антисыворотки против плазмы крови человека. С п и н-м е τ к а С Μ I фирмы «Aldrich Chemical Со.» (США). В в е д е н и е C M I в О Г I g M в у с л о в и я х неконтролируемого окисления N a I 0 4 проводили по описанному методу [2]. В в е д е н и е C M I в О Г I g M п о о с т а т к а м AcNeu [4]. К 1 мл раствора IgM (8,27 мг/мл, или 9 - Ю - 6 М; концентрация AcNeu — 3,6· Ю - 4 М) в 0,006 Μ фосфатном буфере, рН 7,0, содержащем 0,15 Μ NaCl (буфер А), охлажденного до 0-ь4°С, добав- ляют 10 мкл раствора N a I 0 4 в воде (15,6 мг/мл), т. е. до концентрации 7,1·10~4 М, выдерживают 15 мин при 0ч-4°С, добавляют 136 мкл этиленгликоля, т. е. до концент- рации 1,9· 10~3 М, выдерживают 10 мин при 4°С, добавляют 0,62 мг (3,65· 10~6 моля) CMI (сухая навеска или раствор в минимальном объеме этанола) и 0,23 мг (3,65Х Х Ю - 6 моля) NaCNBH3 , т. е. до концентрации 3,14· 10—3 М, выдерживают 16—20 ч при 4°С и диализуют в трубках «Visking» 5 сут против буфера А (6X0,4 л). Таким обра- зом, молярное соотношение AcNeu : N a I 0 4 : CMI : этиленгликоль : NaCNBH3 округленно составляет 1 : 2 : 9 : 5 : 9 . * Представлена членом редколлегии В. И. Ивановым. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА— 1988.—Т. 4, № 2 4 — 7-854 75 П о л у ч е н и е д е с и а л и р о в а н н о г о п р е п а р а т а IgM. Раствор IgM в 0,01 Μ трис-НСІ буфере, рН 8,3—8,4, содержащем 0,15 Μ NaCl (буфер Б) , с кон- центрацией 1,5 мг/мл центрифугируют 15 мин при 7500 об/мин, белок переводят в 0,1 Μ Ыа-ацетатный буфер, рН 6,0, содержащий 0,002 Μ СаС12, 0,15 Μ NaCl, с по- МОЩЫО ячейки «Ашісоп» с мембраной РМ-10, добавляют нейрамииидазу холерного вибриона (фирма «Serva», ФРГ) из расчета 0,1 ед. активности на 1 мг IgM, инкубиру- ют 3,5 сут при 37 °С под толуолом, переводят в буфер Б с помощью ячейки «Агпісоп» с мембраной РМ-30, центрифугируют 15 мин при 7500 об/мин, надосадочную жидкость Рис. 1. Спектры ЭПР нативного и десиалированного IgM, меченного спин-меткой СМІ: 1 — препарат, по- дученный в условиях контролируемого окисления ОГ по AcNeu с помощью N a I 0 4 (^М С И ал -СМ1); 2 — препарат, полученный в условиях неконтролируемого окисления ОГ с помощью N a I 0 4 (IgM-CMI) [2]; З — десиалированный препарат IgM, спин-меченный в условиях получения спектра / ; 4 — свободная спин- метка СМІ (5 -Ю- 6 М). Все растворы — в буфере А (см. «Материалы и методы»). Концентрации препара- тов белков — в пределах 1,5—3,0 мг/мл. Спектры 3 и 4 записаны при одинаковых параметрах, но при усилении в 3 раза большем, чем спектр 1. Все спект- ры записаны при 20 °С Fig. 1. ESR spectra of the native and asialo-IgM la- belled with the spin label СМІ: 1 — the preparation obtained upon controlled NaI04-oxidation of AcNeu in oligosaccharide groups (OG-s) of the IgM (IgM s i a i . - CMI); 2 — the preparation obtained upon noncontrol- led NaI04-oxidation of OG-s (IgM-CMI) [2]; 3 — asialo-IgM spin-labelled as in 1\ 4 — free spin label CMI (5·10~6 M). All solutions are in buffer A (see «Materials and methods»). Protein concentrations are in the range of 1.5-3.0 mg/ml . The spectra 3 and 4 are recorded under the same recording parameters but at 3-fold receiver gain as compa- red with 1. All spectra are recorded at 20 °С концентрируют до 0,35 мг/мл с помощью ячейки «Атісоп» с мембраной РМ-10, от- деляют нейраминидазу гель-фильтрацией на колонке с сефарозой 6В (2X90 см) в бу- фере Б и полученный препарат десиалированного IgM концентрируют до 4—6 мг/мл с помощью ячейки «Атісоп» с мембраной РМ-10. Во всех случаях концентрирования IgM методом ультрафильтрации в фильтрате практически не обнаруживали низкомо- лекулярных продуктов распада белка. О п р е д е л е н и е AcNeu в п р е п а р а т а х IgM. Навеску лиофильно высушенно- го обессоленного препарата IgM гидролизуют 1 ч при 80 °С в 0,1 н. H 2 S0 4 (из расчета 2—3 мл кислоты на 1 мг белка) и затем проводят определение по методу [8]. Спектры ЭПР записывали на приборе «Varian Е-104-А» (США) при амплитуде модуляции ВЧ-поля 0,2 мТл и уровне СВЧ 5 мВт. Для определения расстояния между крайними широкими пиками спектры записывали на развертке поля 0,25 мТл/см при амплитуде модуляции ВЧ-поля 0,4 мТл. Расчет и построение температурно-вязкостной зависимости проводили по описанному ранее методу [1, 9]. Интерпретация спектров ЭПР, обозначения, терминология и анализ описаны ранее [1, 2, 10—12]. Результаты и обсуждение. Для введения СМІ в ОГ биологических макромолекул необходимо предварительное окисление этих ОГ с по- мощью NaI0 4 . Этот процесс плохо поддается контролю и во всяком случае требует дополнительных трудоемких исследований. Недавно была предложена методика окисления с помощью NaI0 4 ОГ гликопро- теиновых и гликолипидных рецепторов лимфоцитов, позволяющая из- бирательно окислять только остатки AcNeu [4]. Мы модифицировали указанную методику и применили этот вариант для введения СМІ в моноклональный IgM (болезнь Вальденштрема). В результате был получен спин-меченный препарат I g M c ^ - C M I , спектр ЭПР которого (рис. I, спектр / ) отличался существенно большей расторможенностью спин-метки, чем в случае спин-меченного препарата IgM-CMI (рис. 1, спектр 2), в котором CMI вводили в условиях неконтролируемого окисления ОГ периодатом Na [2]. Это видно уже при 20 °С по полному отсутствию крайнего широкого пика (КШП) в левой части спектра 76 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА— 1988.—Т. 4, № 2 4 — 7-854 76 ^Мсиал-СМІ, тогда как в спектре IgM-CMI этот КШП хорошо заме- тен. Более наглядно расторможенность ЭПР-спектра I g M c ^ - C M I проявляется при 1 °С и переменной вязкости среды (рис. 2). Ранее мы показали, что при получении IgM-CMI количество свя- занных остатков CMI в расчете на μ-цепь не превышает 2. При этом Рис. 2. Влияние вязкости среды на спектры Э П Р ^ М С И а л - С М І (рис. 1, спектр / ) : 1—0, 2—41, 3—50, 4—55, 5—60,6 % сахарозы. Спектры записаны при 1 °С в буфере А (см. «Материалы и методы»). Концентрация белка « 1 , 5 мг /мл Fig. 2. Influence of the solution viscosity on the ESR spectrum of the IgMS ia i . -CMI (Fig. 1, spectrum / ) : 1—0, 2—41, 5—50, 4—55, 5—60.6% sucrose. Spectra are recorded a t 1°C in buffer A (see «Materials and Methods») . Protein concentrat ion is « 1 . 5 m g / m l Рис. 3. Зависимость расстояния между крайними ши- рокими пиками в ЭПР-спектре IgM, меченного CMI в различных условиях окисления NaI0 4 , от вязкости среды при постоянной температуре (1°С) : А — для IgMcnaл"CMI (см. рис. 2) ; Б — для IgM-CMI [21. Цифры на кривой А соответствуют нумерации спект- ров на рис. 2; вертикальная пунктирная линия отве- чает вязкости раствора при температуре 1 °С в от- сутствие сахарозы Fig. 3. The dependence of a distance between the ou- ter wide peaks of the ESR spectra of the IgM spin- labelled under var ious NaI0 4 -oxidat ion conditions on solution viscosity at the constant temperature (1°C): A — f o r I g M s i a i . - C M I ( s e e F i g . 2 ) ; 5 — f o r I g M - C M I [2]. The digits at the curve A are the same as for ESR spectra in Fig. 2; the vertical dotted line refers to sucrose-free solution at the temperature 1 °С в ЭПР-спектре IgM-CMI наблюдалась суперпозиция двух форм: за- торможенной и расторможенной [2]. Дальнейшее исследование показа- ло, что вторая — расторможенная — форма спектра ЭПР обусловлена вхождением одного из двух остатков CMI в ОГ Fab-области [3]. Такой вывод был сделан на том основании, что спектр ЭПР спин-меченного фрагмента Fab-CMI имел именно такую расторможенную форму: КШП хорошо разрешались в этом спектре лишь при и концентрации сахарозы 47 %. Аналогичное явление мы наблюдаем и в случае ЭПР- спектра I g M c n a л ~СМ1, в котором КШП появлялись лишь при 1 °С и кон- БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА— 1988.—Т. 4, № 2 4 — 7-854 77 центрации сахарозы 41 % (рис. 2, спектр 2; рис. 3). Такое совпадение характеристик ЭПР-спектров Fab-CMI и I g M c ^ - C M I позволяет сде- лать вывод, что в предлагаемых нами условиях удается избирательно ввести СМІ в ОГ Fab-области IgM. Для того чтобы удостовериться, что метка при этом, как можно было ожидать, действительно входит в остаток AcNeu, мы провели спин-мечение по этой же методике предварительно десиалированного нейраминидазой препарата IgM, в котором было удалено 96—97 % AcNeu. Запись спектра ЭПР этого спин-меченного препарата на пре- дельной чувствительности прибора выявила лишь присутствие следов свободной спин-метки (рис. 1, спектры 3, 4) . Это означает, что в де- сиалированный IgM спин-метка в наших условиях не входит. Таким образом, полученные данные показывают, что предлагае- мая нами методика позволяет избирательно вводить спин-метку CMI в ОГ Fab-области IgM, при этом CMI оказывается расположенной на остатках AcNeu. Такой результат можно объяснить тем, что из пяти ОГ в IgM в расчете на μ-цепь [5] именно ОГ в Fab-области является наиболее пространственно доступной и подвижной [3, 6]. SELECTIVE SPIN-LABELLING OF N-ACETYLNEURAMINIC ACID RESIDUE IN OLIGOSACCHARIDE OF IgM Fab-REGION V. P. Timofeev, V. A. Lapuk, Α. I. Tchukhrova, A. E. Arutjunjan, Т. M. Kiseleva Inst i tute of Molecular Biology, Academy of Sciences of the USSR, Moscow N. D. Zelinsky Insti tute of Organic Chemistry, Academy of Sciences of the USSR, Moscow S u m m a r y A method is proposed for spin-labelling (2,2,6,6-tetramethyl-4-aminopiperidine-l-oxyl) of N-acetylneuraminic acid residue within oligosaccharide of Fab-region of immunoglobu- lin M. 1. Тимофеев В. П. Сегментальная подвижность поли(и) и метод спин-метки / /Моле- куляр. биология.— 1986.—20, № 3.—С. 697—711. 2. Тимофеев В. П., Лапук В. А. Исследование необратимого конформационпого пере- хода в иммуноглобулине Μ методом спин-метки, введенной в углеводную и пеп- тидную части его молекулы / / Т а м же.— 1982.—16, № 2.— С. 403—410. 3. Some peculiarities of the dynamics of the immunoglobulin Μ s t r u c t u r e / V . A. Lapuk, V. P. Timofeev, A. I. Tchukhrova et al. / / J . Biomol. Struct, and Dynam.— 1984.— 2, N 1.—P. 63—76. 4. Sharom F. J., Ross Т. E. Spin labelling of sialic acid and galactose residues on lymp- nocyte plasma membrane: effects of lectins on oligosaccharide dynamics / / Мої. Im- munol.—1985,—22, N 5 ,—P. 521—530. 5. Complete amino acids sequence of the Mu heavy chain of a human IgM immunoglo- bulin / F. W. Putnam, G. Florent, C. Paul et al. / / Science.— 1973.—182, N 4109.— P. 287—291. 6. Каверзнева Ε. Д., Чухрова А. И., Виха Г. В. Роль углеводных групп в иммуногло- булинах Μ. V. Стерическая доступность олигосахаридных группировок в макро- иммуноглобулинах/ /Биоорг . химия.— 1978.—4, Лг2 3.— С. 369—374. 7. Лапук В. Α., Шмакова Ф. В., Каверзнева Е. Д. Роль углеводных групп в иммуно- глобулинах Μ. 1. Выделение и характеристика иммуноглобулина Μ человека, име- ющего углеводные группы на L - ц е п я х / / Т а м же.— 1975.—1, № 8.— С. 1134—1139. 8. Warren L. Thiobarbituric acid assay of sialic a c i d / / J . Biol. Chem.— 1959.—234, N 8 .—P. 1971—1975. 9. Измерение времени вращательной корреляции макромолекул методом Э П Р в слу- чае ковалентно связанной спин-метки / И. В. Дудич, В. П. Тимофеев, М. В. Воль- кенштейн, А. Ю. М и ш а р и н / / М о л е к у л я р . биология— 1977—И, № 3.—С. 685—693. 10. Rotational correlation times of IgG and its f r agments spin-labelled at carbohydrate or protein moieties Spatialy fixed position of the Fc carbohydrate / V. P. Timofeev, I. V. Dudich, Yu. K. Sykulev, R. S. Nezlin / / FEBS Lett.—1978.—89, N 2 ,—P. 191— 194. 11. Timofeev V. P., Dudich І. V., Volkenstein Μ. V. Comparative study of dynamic structure of pig and chicken aspar ta te aminotransferases by measur ing the rotational correlation t i m e / / B i o p h y s . Struct, and Mech.— 1980.—1, N 1.—P. 41—49. 12. Тимофеев В. Я. Описание динамического поведения боковых групп глобулярных белков при помощи методов спин-метки, ЯМР и поляризации люминесценции / / Молекуляр. биология.— 1983.—17, № 3.—С. 519—531. Ин-т молекуляр. биологии АН СССР, Москва Получено 10.02.87 Ин-т орг. химии им. Н. Д. Зелинского АН СССР, Москва 78 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА— 1988.—Т. 4, № 2 4 — 7-854 78