Трансформация Ltk⁻ aprt⁻ клеток ДНК в составе реконструированных нуклеопротеидных комплексов
Проведена реконструкция нуклеосом в присутствии ДНК, гистонов и в качестве стимуляторов процесса сборки – кислых ДНК-связывающих белков плазмы крови. Наименьшая величина фрагмента ДНК, защищенного от воздействия микрококковой нуклеазы,соответствует величине ДНК из интактной коровой нуклеосомной част...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Дата: | 1988 |
| Автори: | , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1988
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153813 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Трансформация Ltk⁻ aprt⁻ клеток ДНК в составе реконструированных нуклеопротеидных комплексов / Р.А. Захарян, Г.Г. Галстян, Н.Р. Геворкян, М.Г. Галстян, Л.М. Амирханова // Биополимеры и клетка. — 1988. — Т. 4, № 1. — С. 48-53. — Бібліогр.: 27 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860008420753539072 |
|---|---|
| author | Захарян, Р.А. Галстян, Г.Г. Геворкян, Н.Р. Галстян, М.Г. Амирханова, Л.М. |
| author_facet | Захарян, Р.А. Галстян, Г.Г. Геворкян, Н.Р. Галстян, М.Г. Амирханова, Л.М. |
| citation_txt | Трансформация Ltk⁻ aprt⁻ клеток ДНК в составе реконструированных нуклеопротеидных комплексов / Р.А. Захарян, Г.Г. Галстян, Н.Р. Геворкян, М.Г. Галстян, Л.М. Амирханова // Биополимеры и клетка. — 1988. — Т. 4, № 1. — С. 48-53. — Бібліогр.: 27 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Биополимеры и клетка |
| description | Проведена реконструкция нуклеосом в присутствии ДНК, гистонов и в качестве стимуляторов процесса сборки – кислых ДНК-связывающих белков плазмы крови. Наименьшая величина фрагмента ДНК, защищенного от воздействия микрококковой нуклеазы,соответствует величине ДНК из интактной коровой нуклеосомной частицы. Реконструированные комплексы биологически активны в трансформации клеток эукариот (Ltk⁻aprt⁻)
Реконструйовано нуклеосоми за присутності ДНК, гістонів і як стимуляторів процесу складання – кислих ДНК-зв’язувальних білків плазми крові. Найменша величина фрагмента ДНК, захищеного від дії мікрококової нуклеази, відповідає величині ДНК з інтактної корової нуклеосомної частинки. Реконструйовані комплекси біологічно активні у трансформації клітин еукаріотів (Ltk⁻aprt⁻)
The nucleosome reconstitution was carried out in the presence of DNA, histones and anionic DNA-binding proteins of blood plasma, which serve as a stimulator of self-assembly process. The least sizes of DNA fragment protected from the micrococcal nuclease action corresponds to the DNA value from intact core nucleosome particle. Reconstructed complexes are biologically active in transformation of eukaryotic cells (Ltk⁻aprt⁻).
|
| first_indexed | 2025-12-07T16:40:46Z |
| format | Article |
| fulltext |
10. Dobritsa S. V. Restr ic t ion ana lys i s of the Frankia spp. g e n o m e / / F E M S Mic rob io l
Lett .— 1985.— 29, N 1—2.—P. 123—128.
11. Маниатис Т., Фрин Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование — М . : Мир, 1984.—
479 с.
12. Birnboitn / / . С„ Doly L A rapid alkaline extraction procedure for screening recombi-
n a n t pi asm id DNA / / Nucl. Acids Res.— 1979.—7, N 6 . — P . 1513—1523.
13. Evidence for n i t rogen f ixat ion (nif) genes on ind igenous Rhizobium p lasmids /
M. P. Nuti, A. A. Lepidi, R. K. P r a k a s h et a l . / / N a t u r e . — 1979.—282, N 5738.—
P. 533—535.
14. Plasmids in Frankia sp./P. Normand , P. Simonet , J. L. Bu tour et a l . / / J . Bacte-
riol.— 1983.— 155, N 1 . — P . 32—35.
15. Restriction enzyme diges t ion pa t t e rn s of Frankia p l a smids / P. Simonet , P. Normand ,
A. Moiroud, M; L a l o n d e / / P l a n t and Soil.— 1985.—87, N 1 . — P . 49—60.
16. Normand P., Lalonde M. The genet ics of ac t inorhizal Frankia: A r e v i e w / / N i t r o g e n
f ixat ion with non- l egumes / Eds F. A. Skinner , P. Uomala .— Dordrecht : M a r t i n u s
Nijhoff Publ. , 1986,— P. 429—453.
17. Localization of nif genes on a l a rge p lasmid in Frankia sp. s t ra in ULQO132105009 /
P. Simonet , J. H a u r a t , P . N o r m a n d et a l . / / М о ї . and Gen. Genet .— 1986.—204, N 3.—
P. 492—495.
18. Стародубцева JI. И., Даниленко В. Η., Навашин С. М. Плазмиды и нестабильность
генома Streptomyces / / Антибиотики.— 1984.— 29, № 7.— С. 536—555.
19. Involvement of circular in te rmedia tes in the t r ans f e r of T-DNA f rom Agrobacterium
tumefaciens to p lan t cells / Z. Koukolikova-Nicola, R. D. Shill i to, B. Hohn et a l . / /
Nature .— 1985,— 313, N 5999 .—P. 191 — 196.
20. Golden J. \V., Robinson S. /., Haselkorn R. R e a r r a n g e m e n t of n i t rogen f ixat ion ge-
nes du r ing heterocyst d i f fe ren t ia t ion in the cyanobac te r ium Anabaena // I b i d . - - 3 1 4 ,
N 6010,— P. 419—423.
21. Ligon J. M., Nakas / . P. I so la t ion and charac te r iza t ion of the genes f rom Frankia
that code for the component I prote ins of n i t r o g e n a s e / / N i t r o g e n f ixat ion research
p rog re s s / Eds H. J. Evans , P. J. Bot tomley, W. E. Newton.— Dordrecht : M a r t i n u s
Nijhoff Publ. , 1985,— P. 188.
22. Reiteration of n i t rogen f ixat ion gene sequences in Rhizobium phaseoli / C. Quinto ,
H. de la Vega, M. F lores et a l . / / N a t u r e . — 1 9 8 2 , — 299, N 5885 .—P. 724—726.
23. Scolnick P. Α., Haselkorn R. Act ivat ion of extra copies of genes cod ing for n i t rogena-
se in Rhodopseudomonas capsulata / / Ibid.— 1984,— 307, N 5948 ,—P. 289—292.
Ин-т биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, Получено 03.06.86
Пущи но Моск. обл.
УДК 572.5:570.312
ТРАНСФОРМАЦИЯ Ltk- aprt- КЛЕТОК ДНК
В СОСТАВЕ РЕКОНСТРУИРОВАННЫХ
НУКЛЕОПРОТЕИДНЫХ КОМПЛЕКСОВ
Р. А. Захарян, Г. Г. Галстян,
Н. Р. Геворкян, М. Г. Галстян, Л. М. Амирханова
Введение. Перенос гена в клетки млекопитающих привлекает внима-
ние как метод коррекции генетических дефектов in vitro и in vivo
[1, 2]. Ранее Апошяном [3] и нами [4] сообщалось о конструировании
искусственных вирусоподобных частиц (ИВЧ) на основе преформиро-
ванных капсид вируса полномы в качестве переносчика гена в клетки
эукариот. Было показано, что трансформирующая активность ИВЧ на
два порядка выше таковой Д Н К в составе Са2+-преципитата, ДНК-по-
ликатионных комплексов [5—7], метафазной хромосомы [8], липосом-
ных везикул [9, 10]. Использование ИВЧ, однако, в ряде случаев огра-
ниченно, так как в преформированную капсиду вируса полиомы может
быть включена Д Н К с молекулярной массой не более 1,2-106.
Вместе с тем были получены данные о возможности циркуляции
Д Н К пневмококка и вируса полиомы в крови без существенной де-
градации, и что 20-кратное повышение количества введенной в кровь
Д Н К не меняло количества циркулирующей радиоактивной инфекци-
онно активной Д Н К [ Н ] . Это указывает на наличие в крови компо-
нентов, комплексообразование с которыми определяет уровень цирку-
лирующей внеклеточной Д Н К крови, недоступной для нуклеазного рас-
48 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА,— 1988,- Т. 4, № I
щеплення. Об этом свидетельствует и обнаружение анионной природы
ДНК-связывающих белков плазмы крови [12, 13]. Представлялось
целесообразным использовать ДНК-связывающие белки плазмы крови
анионной природы в качестве фактора самосборки нуклеосомоподобных
структур и изучить эффективность переноса гена в клетки млекопи-
тающих в составе реконструированных нуклеосомоподобных структур.
Тот факт, что некоторым из ДНК-связывающих белков крови присуща
избирательная способность проникать в клетки определенных тканей,
опухолей путем обусловленного рецепторами эндоцитоза [14], дает
основание надеяться применять их в качестве целенаправленного пере-
носчика Д Н К . Нуклеосомная упаковка Д Н К в хроматине может рас-
сматриваться как одна из возможных структур, способных обеспечить
процесс переноса Д Н К через плазматическую мембрану. В ряде слу-
чаев была продемонстрирована относительная эффективность процесса
трансформации с помощью переноса Д Н К в составе метафазных хро-
мосом [8] .
Материалы и методы. Выделение Д Н К - с в я з ы в а ю щ и х белков анионной природы ич
плазмы крови мышей проводили после предварительной очистки сыворотки на QAE-
ссфадексе А-50 [12] методом аффинной хроматографии на колонке Д Н К - ц е л л ю л о з ы
[15]. В экспериментах по реконструированию нуклеосом использован тотальный препа-
рат Д Н К - с в я з ы в а ю щ и х белков сыворотки крови.
Р е к о н с т р у и р о в а н и е н у к л е о с о м о п о д о б н ы х с т р у к т у р . В рекон-
струировании нуклеосомоподобных структур использованы гистоны Н2А, Н2В, НЗ и
Н4, выделенные из печени мышей по методу, описанному в работе [16]. К о н ц е н т р а ц и я
кор гистонов определяли спектрофотометрически: А 2 зо = 4,2 и А 2 8о = 0,43 соответствуют
1 мг кор гистонов в 1 мл [17]. Концентрацию Д Н К определяли исходя из того, что
А 2 бо = 20,0 Д Л Я 1,0 мг Д Н К в 1 мл. Самосборку нуклеосомоподобных комплексов про-
водили в буферном растворе А (10 мМ трис-HCl, рН 7,5, 0,15 Μ NaCl, 0,1 мМ фенил-
метилсульфонилфторид (ФСФ) , 0,2 мМ № 2 Э Д Т А ) при соотношении гистоны: Д Н К -
связывающие белки : Д Н К , равном 1,5 : 5 : 1. Гистоны смешивали с Д Н К - с в я з ы в а ю щ и м и
белками плазмы крови в соотношении 1 , 5 : 5 в 10 мМ трис-НС1-буфере, рН 8,0, содер-
ж а щ е м 2 Μ NaCl, 0,2 мМ Ыа2ЭДТА, 0,25 мМ ФСФ, и диализовали 12 ч против буфера
А при трехкратной его смене.
Реконструирование нуклеопротеидного комплекса проводили в буфере А в поли-
этиленовых пробирках: к 20 мкл Д Н К (1 мг /мл) добавляли комплекс гистоны : Д Н К -
связывающие белки в соотношении гистоны : белки : Д Н К , равном 1 , 5 : 5 : 1 ; конечный
объем смеси доводили до 200 мкл; смесь инкубировали при 37 °С в течение 3 ч.
Полученные комплексы пропускали через колонку с сефарозой-4В, уравновешенную
буфером А; реконструированные нуклеосомоподобные комплексы элюировали в сво-
бодном объеме.
Хроматин, освобожденный от H I - и Н5-гистонов был получен по [18] и обработан
микрококковой нуклеазой по [19].
К у л ь т у р а к л е т о к . Культура клеток Ltk~aprt~ получена из Всесоюз. коллек-
ции культур Ин-та цитологии АН СССР. Клетки содержали в среде D M E M с 10 %-ной
бычьей сывороткой и 50 мкг /мл диаминпурина.
Перед трансформацией клетки выращивали в отсутствие диаминпурина, повторно
рассевали в соотношении 1 : 4 в среде D M E M с 10 %-ной бычьей сывороткой в количе-
стве 0,5-106 клеток на чашку. Д л я трансформации использовали тотальную нативную и
рестрицированную эндонуклеазами Hindlll и ВатНІ Д Н К печени кролика в количестве
20 мкг на 106 клеток в составе Са 2 + -преципитата и реконструированной нуклеосомопо-
добной структуры, использованной т а к ж е в виде Са 2+-преципитата.
Д л я отбора ^ + - т р а н с ф о р м а н т о в клетки выращивали на селективной среде, содер-
ж а щ е й гипоксантин, аминоптерин, тимидин [1]; для селекции aprt+-клояоъ трансформи-
рованные клетки рассевали в среде, содержащей 0,05 мМ азасерин и 0,1 мМ аденин.
Колонии выросших клонов tk+ и aprt+ подсчитывали через 20 дней.
Э л е к т р о н н о-м и к р о с к о п и ч е с к о е и с с л е д о в а н и е реконструированных
нуклеосом (коровые глобулы) проводили по методу, описанному в работе [17].
Продукты расщепления ДНК-протеидного комплекса микрококковой нуклеазой
анализировали электрофорезом в 3 %-ном полиакриламидном геле (ПААГ) и 0,5 %-ной
агарозе.
49 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА,— 1988,- Т. 4, № I
Результаты и обсуждение. Процесс самосборки хроматина из Д Н К
и гистонов в присутствии некоторых ДНК-связывающих кислых белков
в качестве стимуляторов описан в работах [16, 21].
Мы изучили способность кислых ДНК-связывающих белков плаз-
мы крови стимулировать в физиологических условиях самосборку нук-
леосом из гистонов и очищенной Д Н К . В буфере А при близкой к
Рис. 1. Электронная микрофотография реконструированных в нуклеосомоподобные
комплексы молекул геномной Д Н К печени кролика. Ув. 200-10 3
Fig. 1. Elect ron microscopy s tudy of reconstructed nucleosomes in the presence of histo-
ries, DNA-b ind ing prote ins f rom plasma, DNA from the rabbit liver. Magni f i ca t ion 2 0 0 X
X 1 0 3
физиологической ионной силе гистоны, добавленные к Д Н К , вызывали
необратимую преципитацию нуклеопротеидных структур, что было ра-
нее показано и в других работах [22, 23]. В системе самосборки нук-
леосом, описанной в методах, взаимодействие комплекса гистоны —
кислые белки с Д Н К не приводило к преципитации Д Н К , наблюдалось
некоторое помутнение смеси, которая к 3 ч инкубации просветлялась.
Полученные ДНК-белковые комплексы после очистки через сефарозу
4В, были изучены с помощью электронной микроскопии. На рис. 1
показано, что кислые ДНК-связывающие белки плазмы крови действи-
тельно способствуют реконструкции нуклеосомоподобных комплексов в
Т а б л и ц а 1
Трансформация Ltk-aprt~-клеток тотальной
геномной ДНК кролика в составе
Са2+-преципитата и реконструированного
нуклеопротеидного комплекса
The transformation Ltk~aprt~ cells by rabbit total
genome DNA in a composition
of Ca2+-precipitate and reconstructed
nucleoprotein complex
Т а б л и ц а 2
Трансформация Ltk~aprt~-клеток
геномной ДНК кролика,
расщепленной эндонуклеазами
рестрикции и реконструированной
в нуклеопротеидные комплексы
The transformation Ltk~aprt-
cells by rabbit genome DNA,
restricted by endonucleases
and reconstructed into
nucleoprotein complexes
Число Число
Эндонуклеаза ^ + - к о л о -
ний на
aprt+-ко-
лоний на
чашку чашку
Hindi II* 85 26
BamHI 0 0
* Среднее из трех чашек для к а ж -
дого эксперимента.
50 Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА,— 1988,- Т. 4, № I
условиях низкой ионной силы. Глобулярные частицы, обнаруживаемые
вдоль молекулы Д Н К , морфологически близки к нуклеосомным ком-
плексам, обнаруживаемым при электронно-микроскопическом изучении
хроматина [24]. Формирование нуклеосомоподобных структур подтвер-
ждено данными нуклеазного расщепления полученных комплексов.
Представленные на рис. 2 результаты свидетельствуют о том, что в
реконструированных нуклеопротеидных структурах наименьшая вели-
чина фрагмента Д Н К , защищенного от воздействия микрококковой ну-
клеазы, равна 140 парам оснований, что соответствует величине Д Н К
из интактной «коровой» нуклеосомной частицы. Обнаруженные гомо-
генные полосы более высокой молеку-
лярной массы также указывают на фор-
мирование реконструированных комплек-
сов с упорядоченной структурой.
В следующей серии экспериментов
изучена биологическая активность ре-
конструированных комплексов. Резуль-
таты, приведенные в табл. 1, свидетель-
ствуют о том, что полученные в работе
нуклеосомоподобные комплексы биоло-
гически активны, причем трансформиру-
ющая активность Д Н К в составе этих
комплексов на порядок выше по сравне-
нию с Д Н К в составе Са2+-преципитата.
Данные табл. 2 подтверждают трансфор-
мирующую активность Д Н К в составе
реконструированных нуклеопротеидных
Рис. 2. Электрофорез в 3 %-ном ПААГ и 0,5 %-
ном агарозном геле фрагментов Д Н К (пары осно-
ваний) , выделенных из нуклеосомоподобных ком-
плексов, обработанных микрококковой нуклеазой:
1 — х р о м а т и н , освобожденный от H I - и Н5-гисто-
нов (маркер) ; 2—4 — Д Н К - б е л к о в ы е комплексы,
полученные в трех отдельных экспериментах по ре-
конструкции
Fig. 2. Micrococcal nuclease d iges t ion of the pro-
ducts of in vi t ro assembly. Deproteinized DNA elec-
t rophores is in 3 % PAAG-0.5 % a g a r o s e gel; DNA
f r a g m e n t s of 140 b. p. were protected.
комплексов: геномная Д Н К кролика, расщепленная эндонуклеазами
Hindi II или ВатНІ и реконструированная в нуклеосомоподобные ком-
плексы, сохраняла свою трансформирующую активность в зависимости
от отсутствия (HindiII) или наличия (ВатНІ) сайта рестрикции вну-
три генов tkr и aprt~ [27]. В экспериментах по трансформации актив-
ность комплекса Д Н К — ДНК-связывающие белки была низкой, в
среднем 1—2 колонии на чашку. Добавление гистонов к Д Н К , как
указывалось выше, вызывало необратимую преципитацию образовав-
шегося комплекса Д Н К — гистон, который не обладал трансформиру-
ющей активностью.
В данном сообщении продемонстрирована принципиальная возмож-
ность использования кислых ДНК-связывающих белков плазмы крови
для реконструкции нуклеосомоподобных структур на основе индивиду-
альных генов и трансформации полученными комплексами клеток мле-
копитающих.
Можно допустить, что нуклеосомоподобная упаковка облегчает
преодоление Д Н К барьеров плазматической, ядерной мембран и созда-
ет благоприятные условия для рекомбинационных процессов; гистоны
также могут способствовать в силу своей нуклеофильности миграции
комплекса из цитоплазмы в ядро.
51 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА,— 1988,- Т. 4, № I
В настоящее время описан целый ряд факторов, стимулирующих
самосборку «коровой» нуклеосомной глобулы из Д Н К и гистонов [16,
21, 22, 25, 26]. По нашим предварительным данным, нуклеосомная упа-
ковка Д Н К независимо от природы факторов самосборки достаточна
для о т н о с и т е л ь н о б о л е е э ф ф е к т и в н о г о п е р е н о с а Д Н К в к л е т к и и транс-
формации. Вместе с тем природа фактора самосборки способна обеспе-
чить селективное преимущество в переносе гена через плазматические
мембраны и трансформации клеток определенных тканей; например,
нами уже получены данные о том, что кислые ДНК-связывающие бел-
ки плазмы, нуклеоплазмин и трансферрин, в составе комплекса с Д Н К
и «коровой» нуклеосомой существенно повышают уровень трансформа-
ции миелоидных клеток костного мозга, по-видимому, за счет обуслов-
ленного рецепторами эндоцитоза.
TRANSFORMATION O F LTK- A P R T - CELLS
BY DNA A S S E M B L E D IN N U C L E O P R O T E I N C O M P L E X E S
R. A. Zakharian, G. G. Galstian, N, R. Gevorkian, Μ. G. Galstian, L. M. Amirkhanova
Ins t i tu te of Experimental Biology, Academy of Sciences of the Armenian SSR, Yerevan
S u m m a r y
The nucleosome reconst i tut ion was carried out in the presence of DNA, histones and anio-
nic DNA-binding proteins of blood plasma, which serve as a s t imulator of self-assembly
process. The least sizes of DNA f r a g m e n t protected f rom the micrococcal nuclease action
corresponds to the DNA value f rom intact core nucleosome particle.
Reconstructed complexes are biologically active in t r ans fo rmat ion of eukaryotic
cells (Ltk~aprt~).
1. Shews Т. ВSakaguchi A. Y. Gene t rans fe r and mapp ing in mammal i an cells in cul-
t u r e / / I n vitro.— 1980.— 11, N 1 .—P. 55—76.
2. Insertion of d rug resis tance genes in an imals / M. Bar-Eli, К. E. Mercola, D. J. Sla-
mon et a l . / / J . Cell. P h y s i o l — 1 9 8 2 . — I l l , N 1 .—P. 213—217.
3. Slilaty S. N., Aposhian Η. V. Gene- t ransfer by polyoma-like particles assembled in
a cell free system / Science.— 1983.— 220, N 4598.— P. 725—727.
4. Захарян P. Α., Гаспарян Э. Т., Апоиіян В. Г. Транспорт гена β -лактамазы в составе
искусственных вирусоподобных частиц в клетки человека и его экспрессия / / Биол.
журн. Армении.— 1982.— 35, № 9 .—С. 730—733.
5. Pellicer Α., Wigler ΜAxel R. The t rans fe r and s table in tegrat ion of the H S V thymi-
dine kinase gene into mouse cells / / Cell — 1978 — 14, N 1.— P. 133—141.
6. Milman G., Herrberg M. Eff icient DNA transfect ion and rapid assay for.· thymidine ki-
nase activity and viral ant igenic d e t e r m i n a n t s / / S o m a t i c Cell Genet.— 1981.— 7,
N 2 . — P . 161 —170.
7. Farber F. E., Eberle R. Effects of cytochalasin and alcaloids d rugs on the biological
expression of H S V DNA / / Exp. Cell Res.— 1976.— 103, Ν 1— P. 15—22.
8. Miller C. L., Ruddle F. H. Cot ransfer of human X-linked markers into muitfne somatic
cells via isolated metaphase c h r o m o s o m e / / P r o c . Nat. Acad. Sci. USA.— 1978.—75,
N 7.— P. 3345—3350.
9. Liposomes as carr iers for gene t rans fe r in vivo / C. Nicolau, Ph. Sor iano C. le Pape
et a l . / / B i o l . Cell.— 1983.—47, N 1 .—P. 121—129.
10. Schaeffer-Ridder Ai., Wang Yuan, Η of Schneider P. A. Liposomes as a gene carr iers:
efficient t r ans fo rma t ion of mouse L-cells by thymidine kinase gene / / Science.—
1982.—215, N 4526 .—P. 166—168.
11. Bendich Α., Vilcrok Т., Borenfreund E. Circula t ing DNA as a possible factor in onco-
genesis / / Ibid.— 1965.— 148, N 3668.— P. 374—376.
12. Brehm S. P., Hoch S. O., Hoch J. A. DNA-binding proteins in human s e r u m / / B i o -
chem. and Biophys. Res. Communs.— 1975 — 63, N 1.— P. 24—31.
13. The fractionation and isolation of DNA-binding proteins f rom human serum /
A. A. Siddiqui, R. H. Jeremy, H. Davies, J. A. H i l l / / B i o c h e m . Soc. Trans.— 1979.—7,
N 5 . — P . 1088—1089.
14. Hemmaplardh DMorgan Ε. H. Transfer r in uptake and release by1 reticulocytes trea-
ted with proteolytic enzymes and neuramidase / / Biochim. et biophys. acta.— 1976.—
426, N 2.— P. 385—393.
15. Litman R. M. A deoxyribonucleic acid polymerase f rom Micrococcus luteus isolated
on deoxyribonucleic a c i d - c e l l u l o s e / / J . Biol. Chem.— 1968.—243 N 23 .—P. 6222—
6233.
16. Rat liver HMGI: a physiological nucleosome assembly factor / C. Bonne-Andrea.
F. Harper , J. Sobczak, A. M. DeRecondo / / T h e EMBO J.— 1984.—3, N 5 . — Ρ 1193—
1199.
52 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА,— 1988,- Т. 4, № I
17. Thomas / . О., Butler P. / . G. Charac te r iza t ion of the octainer of h is tones free in solu-
t i o n / / J . Мої. Biol.— 1977.— 116, N 4.— P. 769—781.
18. Libertini L. J., Small E. W. Sa l t induced t r ans i t ions of chromat in core par t ic les s tu-
died by tyros ine f luorescence an iso t ropy / / Nucl. Acids Res.— 1980.— 8, N 16.—
P. 3517—3533.
19. Lutter L. I. Kinetic ana lys i s of DNAase I c l eavages in the nuc leosome core: evidence
fon a DNA s u p e r h e l i x / / J . Мої. Biol.— 1978.— 124, N 2 , — P . 391—420.
20. Hayashi K. Dis t r ibut ion of h is tone F1 on calf t h y m u s nucleo h is tone D N A / / I b i d . —
1975,—94, N 2.— P. 397—402.
21. Nucleosomes are assembled by an acidic protein which b inds h is tones and t r a n s f e r s
them to D N A / R . A. Laskey, В. M. H o n d a , A. D. Mills, J. T. F i n c h / / N a t u r e . —
1978,—275, N 5679 .—P. 416—420.
22. Stein Α., Whitlock / . ΡBina M. Acidic polypept ides can assemble both h is tones and
chromat in in vitro at physiological ionic s t r eng th / / Proc. Nat . Acad. Sci. USA.—
1979.—76, N 10 .—P. 5000—5004.
23. Ruiz-Cattilo A., Jorcano J. L., Eder G. In vitro core par t ic le and nuc leosome assembly
at physiological ionic s t r eng th / / Ibid.— N 7.— P. 3284—3288.
24. Landtnore J. P., Wooley J. C. Ch roma t in archi tecture: inves t iga t ion of a subuni t of
chromat in by dark field electron microscopy / / Ibid.— 1 9 7 5 . - 7 2 , N 7 — P . 2091—2095.
25. Laskey R. Α., Earnshow W. C. Nucleosome a s s e m b l y / / N a t u r e . — 1980.—286,
N 5775.— P. 763—767.
26. Nelson ΤWiegand K., Brutlag D. Ribonucleic acid and other po lyan ions fac i l i ta te
chromat in assembly in vitro / / Biochemistry.— 1981.— 20, N 9 . — P . 2594—2601.
27. DNA media ted t r ans f e r of the adenine phosphor ibosv l t r ans fe ra se locus into m a m m a -
lian c e l l s / М . Wigler , A. Pell icer, S. Si lverstein et af. / / Proc. Nat . Acad. Sci. USA.—
1979,— 76, N 3,— P. 1373—1376.
Ин-т эксперим. биологии АН АрмССР, Ереван Получено 21.01.86
БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА,— 1988.—Т. 4, № t 53
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-153813 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T16:40:46Z |
| publishDate | 1988 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Захарян, Р.А. Галстян, Г.Г. Геворкян, Н.Р. Галстян, М.Г. Амирханова, Л.М. 2019-06-14T16:49:56Z 2019-06-14T16:49:56Z 1988 Трансформация Ltk⁻ aprt⁻ клеток ДНК в составе реконструированных нуклеопротеидных комплексов / Р.А. Захарян, Г.Г. Галстян, Н.Р. Геворкян, М.Г. Галстян, Л.М. Амирханова // Биополимеры и клетка. — 1988. — Т. 4, № 1. — С. 48-53. — Бібліогр.: 27 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000212 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153813 572.5:576.312 Проведена реконструкция нуклеосом в присутствии ДНК, гистонов и в качестве стимуляторов процесса сборки – кислых ДНК-связывающих белков плазмы крови. Наименьшая величина фрагмента ДНК, защищенного от воздействия микрококковой нуклеазы,соответствует величине ДНК из интактной коровой нуклеосомной частицы. Реконструированные комплексы биологически активны в трансформации клеток эукариот (Ltk⁻aprt⁻) Реконструйовано нуклеосоми за присутності ДНК, гістонів і як стимуляторів процесу складання – кислих ДНК-зв’язувальних білків плазми крові. Найменша величина фрагмента ДНК, захищеного від дії мікрококової нуклеази, відповідає величині ДНК з інтактної корової нуклеосомної частинки. Реконструйовані комплекси біологічно активні у трансформації клітин еукаріотів (Ltk⁻aprt⁻) The nucleosome reconstitution was carried out in the presence of DNA, histones and anionic DNA-binding proteins of blood plasma, which serve as a stimulator of self-assembly process. The least sizes of DNA fragment protected from the micrococcal nuclease action corresponds to the DNA value from intact core nucleosome particle. Reconstructed complexes are biologically active in transformation of eukaryotic cells (Ltk⁻aprt⁻). ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Генно-инженерная биотехнология Трансформация Ltk⁻ aprt⁻ клеток ДНК в составе реконструированных нуклеопротеидных комплексов Трансформація Ltk⁻ aprt⁻ клітин ДНК у складі реконструйованих нуклеопротеїдних комплексів Transformation of ltk⁻ aprt⁻ cells by DNA assembled in nucleoprotein complexes Article published earlier |
| spellingShingle | Трансформация Ltk⁻ aprt⁻ клеток ДНК в составе реконструированных нуклеопротеидных комплексов Захарян, Р.А. Галстян, Г.Г. Геворкян, Н.Р. Галстян, М.Г. Амирханова, Л.М. Генно-инженерная биотехнология |
| title | Трансформация Ltk⁻ aprt⁻ клеток ДНК в составе реконструированных нуклеопротеидных комплексов |
| title_alt | Трансформація Ltk⁻ aprt⁻ клітин ДНК у складі реконструйованих нуклеопротеїдних комплексів Transformation of ltk⁻ aprt⁻ cells by DNA assembled in nucleoprotein complexes |
| title_full | Трансформация Ltk⁻ aprt⁻ клеток ДНК в составе реконструированных нуклеопротеидных комплексов |
| title_fullStr | Трансформация Ltk⁻ aprt⁻ клеток ДНК в составе реконструированных нуклеопротеидных комплексов |
| title_full_unstemmed | Трансформация Ltk⁻ aprt⁻ клеток ДНК в составе реконструированных нуклеопротеидных комплексов |
| title_short | Трансформация Ltk⁻ aprt⁻ клеток ДНК в составе реконструированных нуклеопротеидных комплексов |
| title_sort | трансформация ltk⁻ aprt⁻ клеток днк в составе реконструированных нуклеопротеидных комплексов |
| topic | Генно-инженерная биотехнология |
| topic_facet | Генно-инженерная биотехнология |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/153813 |
| work_keys_str_mv | AT zaharânra transformaciâltkaprtkletokdnkvsostaverekonstruirovannyhnukleoproteidnyhkompleksov AT galstângg transformaciâltkaprtkletokdnkvsostaverekonstruirovannyhnukleoproteidnyhkompleksov AT gevorkânnr transformaciâltkaprtkletokdnkvsostaverekonstruirovannyhnukleoproteidnyhkompleksov AT galstânmg transformaciâltkaprtkletokdnkvsostaverekonstruirovannyhnukleoproteidnyhkompleksov AT amirhanovalm transformaciâltkaprtkletokdnkvsostaverekonstruirovannyhnukleoproteidnyhkompleksov AT zaharânra transformacíâltkaprtklítindnkuskladírekonstruiovanihnukleoproteídnihkompleksív AT galstângg transformacíâltkaprtklítindnkuskladírekonstruiovanihnukleoproteídnihkompleksív AT gevorkânnr transformacíâltkaprtklítindnkuskladírekonstruiovanihnukleoproteídnihkompleksív AT galstânmg transformacíâltkaprtklítindnkuskladírekonstruiovanihnukleoproteídnihkompleksív AT amirhanovalm transformacíâltkaprtklítindnkuskladírekonstruiovanihnukleoproteídnihkompleksív AT zaharânra transformationofltkaprtcellsbydnaassembledinnucleoproteincomplexes AT galstângg transformationofltkaprtcellsbydnaassembledinnucleoproteincomplexes AT gevorkânnr transformationofltkaprtcellsbydnaassembledinnucleoproteincomplexes AT galstânmg transformationofltkaprtcellsbydnaassembledinnucleoproteincomplexes AT amirhanovalm transformationofltkaprtcellsbydnaassembledinnucleoproteincomplexes |