Иммуноэлектронно-микроскопическое определение локализации серил-тРНК синтетазы в клетках высших эукариот
Локализацию серил-тРНК синтетазы (CepPC) изучали на ультратонких срезах ткани надпочечника быка, фиксированных глутаровым альдегидом и заключенных в смолу "Lowycril К4 М" при температуре – 35 °С. Ультратонкие срезы обрабатывали поликлональными аффинно очищенными антителами к CepPC и компле...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Datum: | 1990 |
| Hauptverfasser: | , , , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1990
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154067 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Иммуноэлектронно-микроскопическое определение локализации серил-тРНК синтетазы в клетках высших эукариот / Л.Л. Сидорик, В.И. Попенко, Н.Е. Черни, М.А. Тукало, С.Ф. Берестень, Г.Х. Мацука // Биополимеры и клетка. — 1990. — Т. 6, № 5. — С. 72-77. — Бібліогр.: 12 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-154067 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Сидорик, Л.Л. Попенко, В.И. Черни, Н.Е. Тукало, М.А. Берестень, С.Ф. Мацука, Г.Х. 2019-06-15T06:37:26Z 2019-06-15T06:37:26Z 1990 Иммуноэлектронно-микроскопическое определение локализации серил-тРНК синтетазы в клетках высших эукариот / Л.Л. Сидорик, В.И. Попенко, Н.Е. Черни, М.А. Тукало, С.Ф. Берестень, Г.Х. Мацука // Биополимеры и клетка. — 1990. — Т. 6, № 5. — С. 72-77. — Бібліогр.: 12 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000290 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154067 577.152.6:576.31 Локализацию серил-тРНК синтетазы (CepPC) изучали на ультратонких срезах ткани надпочечника быка, фиксированных глутаровым альдегидом и заключенных в смолу "Lowycril К4 М" при температуре – 35 °С. Ультратонкие срезы обрабатывали поликлональными аффинно очищенными антителами к CepPC и комплексами белок А – коллоидное золото. Наиболее интенсивно метилась цитоплазма: определенное количество метки обнаруживалось и в ядре клеток, преимущественно в зоне расположения диффузного хроматина, хотя некоторое количество частиц золота отмечалось и в зоне расположения компактного хроматина. Присутствие CepPC в ядре клеток эукариот может быть связано с возможными дополнительными функциями CepPC в ядре, кроме участия в синтезе серил-тРНК. Локалізацію серил-тРНК синтетази (CepPC) вивчали на ультратонких зрізах тканини наднирника бика, фіксованих глутаровим альдегідом і занурених в смолу "Lowycril К4 М" за температури –35 ° С. Ультратонкі зрізи обробляли поліклональними афінно очищеними антитілами до CepPC і комплексами білок А-колоїдне золото. Найінтенсивніше включала мітку цитоплазма: певну кількість мітки виявляли і в ядрі клітин, переважно в зоні розташування дифузного хроматину, хоча деяку кількість частинок золота відзначено і в зоні локалізації компактного хроматину. Присутність CepPC у ядрі клітин еукаріотів може бути пов’язана з додатковими функціями CepPC у ядрі, крім участі у синтезі серил-тРНК. Localization of seryl-tRNA-synthetase (SerRS) was studied on ultrathin (UT) section of bovine kidney cells fixed with glutaraldehyde and embedded in «Lowycril K4M» resin at – 35 °C. The UT sections were treated with the polyclonal affined-purified antibodies against SerRS and the complexes of protein A with colloidal gold 20 nm in size. In the cells the cytoplasm was the most intensely labelled. A great amount of SerRS was found in the cell nuclei: the label was concentrated over the diffuse chromatin localization regions, a minimal binding being observed over compact chromatin. The presence of SerRS in the eucaryotic cell nucleus may evidence for the possible regulatory role of SerRS in eucaryotes. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Структура и функции биополимеров Иммуноэлектронно-микроскопическое определение локализации серил-тРНК синтетазы в клетках высших эукариот Імуноелектронно-мікроскопічне визначення локалізації серил-тРНК синтетази в клітинах вищих еукаріотів Immunoelectron-microscopic study of seryl-tRNA-synthetase localization in cells of higher eucaryotes Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Иммуноэлектронно-микроскопическое определение локализации серил-тРНК синтетазы в клетках высших эукариот |
| spellingShingle |
Иммуноэлектронно-микроскопическое определение локализации серил-тРНК синтетазы в клетках высших эукариот Сидорик, Л.Л. Попенко, В.И. Черни, Н.Е. Тукало, М.А. Берестень, С.Ф. Мацука, Г.Х. Структура и функции биополимеров |
| title_short |
Иммуноэлектронно-микроскопическое определение локализации серил-тРНК синтетазы в клетках высших эукариот |
| title_full |
Иммуноэлектронно-микроскопическое определение локализации серил-тРНК синтетазы в клетках высших эукариот |
| title_fullStr |
Иммуноэлектронно-микроскопическое определение локализации серил-тРНК синтетазы в клетках высших эукариот |
| title_full_unstemmed |
Иммуноэлектронно-микроскопическое определение локализации серил-тРНК синтетазы в клетках высших эукариот |
| title_sort |
иммуноэлектронно-микроскопическое определение локализации серил-трнк синтетазы в клетках высших эукариот |
| author |
Сидорик, Л.Л. Попенко, В.И. Черни, Н.Е. Тукало, М.А. Берестень, С.Ф. Мацука, Г.Х. |
| author_facet |
Сидорик, Л.Л. Попенко, В.И. Черни, Н.Е. Тукало, М.А. Берестень, С.Ф. Мацука, Г.Х. |
| topic |
Структура и функции биополимеров |
| topic_facet |
Структура и функции биополимеров |
| publishDate |
1990 |
| language |
Russian |
| container_title |
Биополимеры и клетка |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Імуноелектронно-мікроскопічне визначення локалізації серил-тРНК синтетази в клітинах вищих еукаріотів Immunoelectron-microscopic study of seryl-tRNA-synthetase localization in cells of higher eucaryotes |
| description |
Локализацию серил-тРНК синтетазы (CepPC) изучали на ультратонких срезах ткани надпочечника быка, фиксированных глутаровым альдегидом и заключенных в смолу "Lowycril К4 М" при температуре – 35 °С. Ультратонкие срезы обрабатывали поликлональными аффинно очищенными антителами к CepPC и комплексами белок А – коллоидное золото. Наиболее интенсивно метилась цитоплазма: определенное количество метки обнаруживалось и в ядре клеток, преимущественно в зоне расположения диффузного хроматина, хотя некоторое количество частиц золота отмечалось и в зоне расположения компактного хроматина. Присутствие CepPC в ядре клеток эукариот может быть связано с возможными дополнительными функциями CepPC в ядре, кроме участия в синтезе серил-тРНК.
Локалізацію серил-тРНК синтетази (CepPC) вивчали на ультратонких зрізах тканини наднирника бика, фіксованих глутаровим альдегідом і занурених в смолу "Lowycril К4 М" за температури –35 ° С. Ультратонкі зрізи обробляли поліклональними афінно очищеними антитілами до CepPC і комплексами білок А-колоїдне золото. Найінтенсивніше включала мітку цитоплазма: певну кількість мітки виявляли і в ядрі клітин, переважно в зоні розташування дифузного хроматину, хоча деяку кількість частинок золота відзначено і в зоні локалізації компактного хроматину. Присутність CepPC у ядрі клітин еукаріотів може бути пов’язана з додатковими функціями CepPC у ядрі, крім участі у синтезі серил-тРНК.
Localization of seryl-tRNA-synthetase (SerRS) was studied on ultrathin (UT) section of bovine kidney cells fixed with glutaraldehyde and embedded in «Lowycril K4M» resin at – 35 °C. The UT sections were treated with the polyclonal affined-purified antibodies against SerRS and the complexes of protein A with colloidal gold 20 nm in size. In the cells the cytoplasm was the most intensely labelled. A great amount of SerRS was found in the cell nuclei: the label was concentrated over the diffuse chromatin localization regions, a minimal binding being observed over compact chromatin. The presence of SerRS in the eucaryotic cell nucleus may evidence for the possible regulatory role of SerRS in eucaryotes.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154067 |
| citation_txt |
Иммуноэлектронно-микроскопическое определение локализации серил-тРНК синтетазы в клетках высших эукариот / Л.Л. Сидорик, В.И. Попенко, Н.Е. Черни, М.А. Тукало, С.Ф. Берестень, Г.Х. Мацука // Биополимеры и клетка. — 1990. — Т. 6, № 5. — С. 72-77. — Бібліогр.: 12 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT sidorikll immunoélektronnomikroskopičeskoeopredelenielokalizaciiseriltrnksintetazyvkletkahvysšihéukariot AT popenkovi immunoélektronnomikroskopičeskoeopredelenielokalizaciiseriltrnksintetazyvkletkahvysšihéukariot AT černine immunoélektronnomikroskopičeskoeopredelenielokalizaciiseriltrnksintetazyvkletkahvysšihéukariot AT tukaloma immunoélektronnomikroskopičeskoeopredelenielokalizaciiseriltrnksintetazyvkletkahvysšihéukariot AT berestenʹsf immunoélektronnomikroskopičeskoeopredelenielokalizaciiseriltrnksintetazyvkletkahvysšihéukariot AT macukagh immunoélektronnomikroskopičeskoeopredelenielokalizaciiseriltrnksintetazyvkletkahvysšihéukariot AT sidorikll ímunoelektronnomíkroskopíčneviznačennâlokalízacííseriltrnksintetazivklítinahviŝiheukaríotív AT popenkovi ímunoelektronnomíkroskopíčneviznačennâlokalízacííseriltrnksintetazivklítinahviŝiheukaríotív AT černine ímunoelektronnomíkroskopíčneviznačennâlokalízacííseriltrnksintetazivklítinahviŝiheukaríotív AT tukaloma ímunoelektronnomíkroskopíčneviznačennâlokalízacííseriltrnksintetazivklítinahviŝiheukaríotív AT berestenʹsf ímunoelektronnomíkroskopíčneviznačennâlokalízacííseriltrnksintetazivklítinahviŝiheukaríotív AT macukagh ímunoelektronnomíkroskopíčneviznačennâlokalízacííseriltrnksintetazivklítinahviŝiheukaríotív AT sidorikll immunoelectronmicroscopicstudyofseryltrnasynthetaselocalizationincellsofhighereucaryotes AT popenkovi immunoelectronmicroscopicstudyofseryltrnasynthetaselocalizationincellsofhighereucaryotes AT černine immunoelectronmicroscopicstudyofseryltrnasynthetaselocalizationincellsofhighereucaryotes AT tukaloma immunoelectronmicroscopicstudyofseryltrnasynthetaselocalizationincellsofhighereucaryotes AT berestenʹsf immunoelectronmicroscopicstudyofseryltrnasynthetaselocalizationincellsofhighereucaryotes AT macukagh immunoelectronmicroscopicstudyofseryltrnasynthetaselocalizationincellsofhighereucaryotes |
| first_indexed |
2025-11-26T02:10:39Z |
| last_indexed |
2025-11-26T02:10:39Z |
| _version_ |
1850608151349428224 |
| fulltext |
18. Fluorescence studies of substrate binding to seryl-tRNA synthetase from yeast /
E. Engel1 H. Heider, A. Macklike et al. // Eur. J. B i o c h e m . - 1972,— 29, N 2,—
P. 257—262.
19. Heider H., Gottschalk E., Cramer E. Isolation and characterization of seryl-tRNA
synthetase from yeast / / Ib id — 1971,—20, N 1,—P. 144—152.
20. Kinetic studies on the interaction of seryl-tRNA synthetase with tRNAS e r and Ser
tRNAS e r from yeast / A. Pingoud, D. Riesner, D. Boehme, G. M a s s / / F E B S Lett.—
1973 — 30, N 1,—P. 1—5.
21. Bruton C. J. Probing the sub-structure, evolution and interactions of aminoacyl-tRNA
synthetases // Nonsence mutat ions and tRNA suppressors / Eds J. E. Selis,
J. D. Smith — New York: Acad, press, 1979,— P. 47—68.
22. Eigen M. Self-organization of matter and the evolution of biological macrornole-
cules // Naturwissenschaften.— 1971.— 58, N 10,—P. 465—523.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Киев Получено 27.04.90
Ин-т молекуляр. биологии им. Энгельгардта АН СССР, Москва
УДК 577.152.6:576.31
© Л. Л. Сидорик, В. И. Попенко, Η. Е. Черни, М. А. Тукало,
С. Ф. Берестень, Г. X. Мацука, 1990
ИММУНОЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ЛОКАЛИЗАЦИИ СЕРИЛ-тРНК СИНТЕТАЗЫ
В КЛЕТКАХ ВЫСШИХ ЭУКАРИОТ
Локализацию серил-тРНК синтетазы (CepPC) изучали на ультратонких срезах ткани
надпочечника быка, фиксированных глутаровым альдегидом и заключенных в смолу
<rLowycril К4 М» при —35 °С. Ультратонкие срезы обрабатывали поликлональными
аффинно очищенными антителами к CepPC и комплексами белок А·— коллоидное зо-
лото. Наиболее интенсивно метилась цитоплазма: определенное количество метки
обнаруживалось и в ядре клеток, преимущественно в зоне расположения диффузного
хроматина, хотя некоторое количество частиц золота отмечалось и в зоне расположе-
ния компактного хроматина. Присутствие CepPC в ядре клеток эукариот может быть
связано с возможными дополнительными функциями CepPC в ядре, кроме участия в
синтезе серил-тРНК.
Введение. Биохимическими методами аминоацил-тРНК синтетазы
(КФ 6.1.1) обнаружены как в цитоплазме, так и в различных органел-
лах клетки, в рибосомах, полисомах, а также в составе мультифермент-
ных комплексов [1], что все же не позволяет однозначно судить о вну-
триклеточной локализации этих ферментов. Существенный прогресс в
изучении данной проблемы достигнут с помощью определенных имму-
нохимических подходов благодаря применению для исследования вну-
триклеточной локализации аминоацил-тРНК синтетаз как поликло-
нальных, так и моноклональных антител. Наиболее изученным в этом
отношении ферментом является триптофанил-тРНК синтетаза из под-
желудочной железы крупного рогатого скота, что описано в работах
[2, 3]. Используя комплексы коллоидного золота с моноклональными
и поликлональными моноспецифическими антителами к триптофанил-
т Р Н К синтетазе, было изучено распределение этого фермента в цито-
плазме и органеллах клеток эукариот и прокариот, а также подтвер-
ждены полученные ранее данные по иммунофлюоресцентной микроско-
пии и результаты иммуноцитохимического исследования культуры кле-
ток почки быка после обработки их детергентом тритон X-IOO [2] .
В работе [3] было также показано важное отличие в распределении
аминоацил-тРНК синтетазы в бактериальных и эукариотических клет-
ках — присутствие значительного количества фермента в ядрах клеток
эукариот, что, возможно, связано с дополнительными функциями трип-
тофанил-тРНК синтетазы в ядре, кроме синтеза триптофанил-тРНК.
Разработанный нами новый методический подход [4] к выделению
серил-тРНК синтетазы (CepPC) из печени быка позволяет быстро на-
72 ISSN 0(233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № S
работать значительные количества фермента в гомогенном состоянии,
что дает возможность получить достаточное количество поликлональ-
ных аффинно очищенных антител к СерРС. Настоящая работа посвя-
щена изучению распределения СерРС в клетках высших эукариот с
помощью поликлональных аффинно очищенных антител к этому фер-
менту, применяя непрямой метод маркирования (с использованием
комплексов белка А с коллоидным золотом) ультратонких срезов.
Материалы и методы. Выделение СерРС из печени быка [4], схема иммунизации
животных [5] и получение поликлональных аффинно очищенных антител к СерРС
детально описаны в предыдущей работе (см. статью Сидорик Л. JI., Гудзеры О. И.,
Золотухиной И. М. и др. в этом же номере).
Ф и к с а ц и я к л е т о к и п р и г о т о в л е н и е у л ь т р а т о н к и х с р е з о в .
Кусочки ткани надпочечника быка фиксировали в течение 3 ч в 2 ,5%-ном глутаровом
альдегиде в 0,1 M фосфатном буфере с дальнейшим обезвоживанием образцов в ряду
спиртов возрастающей концентрации и заключением в смолу «Lowycril К4 М» («Βίο-
Science», США), а также полимеризацией при ультрафиолетовом облучении при
—35 0C, как описано ранее [7].
Срезы толщиной 50—70 нм получали на ультратоме «LKB-ΙΙΙ» (Швеция) и по-
мещали на медные сетки, покрытые угольно-формваровой свежеионизированной плен-
кой-подложкой.
П р и г о т о в л е н и е к о м п л е к с о в к о л л о и д н о г о з о л о т а с б е л к а м и .
Коллоидное золото со средним размером частиц 20 нм (Au 20) получали по методу
Френса [8]. Комплексы СерРС с коллоидным золотом готовили, добавляя к 5 мл
раствора коллоидного золота 15 мкл 0,1 M раствора углекислого калия и 250 мкл
СерРС в дистиллированной воде (0,3 мг/мл). Комплексы коллоидного золота с белком
A («Serva», ФРГ) приготовляли по методике [9]. Через 5 мин для дополнительной ста-
билизации полученных комплексов прибавляли 1 %-ный раствор полиэтиленгликоля
(ПЭГ) 20 000 («Ferrak», Западный Берлин) до конечной концентрации 0 ,02%. Д л я
удаления несвязавшегося белка комплексы коллоидного золота с белком А (рА—Au)
центрифугировали 30 мин при 4 °С и 11 000 об/мин на центрифуге К-24 («Janetski»,
Г Д Р ) . Осадок ресуспендировали в 0,5 мл ФСБ-буфера (рН 7,5) с добавлением 0,02 %
ПЭГ-20 000 и 0,02 % азида натрия. Полученные комплексы хранили при 4 °С.
М а р к и р о в а н и е у л ь т р а т о н к и х с р е з о в . Свежеприготовленные ультра-
тонкие срезы обрабатывали 10 мин в растворе 0,2 M глицина в ФСБ (рН 7,5), про-
мывали в трех сменах ФСБ и инкубировали 20 мин при комнатной температуре на
каплях раствора, содержащего 0,5 %-ный БСА в ФСБ, рН 7,5. Затем препараты обра-
батывали поликлональными аффинно очищенными антителами к СерРС (5 мкг/мл) в
ФСБ (рН 7,5), содержащем 0,05 %-ный твин-20 и 0,2 %-ный БСА, в течение 1 ч при
комнатной температуре, промывали в ФСБ и инкубировали с комплексами рА—Au,
разведенными в 15—20 раз в ФСБ (рН 7,5), содержащем 0,2 %-ный БСА и 0 ,05%
твин-20. Концентрацию комплексов определяли спектрофотометрически по поглощению
OD525 = O,45. Описанные условия, как указано в работе [10], препятствуют неспеци-
фическому связыванию комплексов рА—Au на срезах.
Для определения мест связывания СерРС ультратонкие срезы после обработки
0,2 % БСА в ФСБ (рН 7,5) инкубировали с комплексами СерРС — Au, приготовленны-
ми, как описано выше, в присутствии 0,1 % БСА, 0,05 % твин-20 в ФСБ (рН 7,5) в
течение 1,5 ч.
Дальнейшие процедуры описаны в работе [3].
Для проверки специфичности маркирования были поставлены следующие конт-
рольные эксперименты:
а) срезы обрабатывали комплексами рА—Au без предварительной инкубации с
антителами к СерРС;
б) срезы инкубировали с раствором коллоидного золота, не конъюгированного
с макромолекулами;
в) срезы предварительно обрабатывали СерРС (180 мкг/мл) и затем комплекса-
ми СерРС—Au.
Препараты просматривали в электронном микроскопе «JEM-ЮОСХ» при ускоряю-
щем напряжении 80 кВ. Измерения проводили на микрофотографиях с конечным увели-
чением 25 000.
73 ISSN 0(233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № S
Результаты и обсуждение. На рис. 1 представлен ультратонкий
срез ткани надпочечника быка после обработки антителами к СерРС
и комплексами рА—Au. Частицы коллоидного золота присутствуют как
в цитоплазме, так и в ядре клеток. В цитоплазме основная часть метки
локализуется над скоплениями полисом, хотя в отдельных случаях час-
Рис. 1. Локализация СерРС в клетках надпочечника быка. Срезы ткани надпочечника
быка, заключенные в смолу «Lowycril К4 М», обрабатывали поликлональными аффинно
очищенными антителами к СерРС и комплексами белок А •— коллоидное золото. Здесь
и далее обозначения на срезах: Ц — цитоплазма; Я — ядро; Π — поры ядерной обо-
лочки; Як — ядрышко; Kx — компактный хроматин, Дх— диффузный хроматин
Fig. 1. Localization of SerRS in bovine kidney cells. Ultrathin section of bovine kidney
cells in «Lowycril К4М» resin were treated with the polyclonal affined-purified antibo-
dies against SerRS and with the complexes: protein Α-colloidal gold. Marks on the
sections: Ц — cytoplasm, Я — n u c l e u s , Π—nucleus membrane pores, Kx — compact
chromatin, Дх — diffuse chromatin
тицы золота присутствуют в участках, где рибосомы не обнаружены.
Н а д митохондриями клеток просматриваются только одиночные
гранулы.
В ядре комплексы коллоидного золота обнаруживаются над зона-
ми расположения диффузного хроматина. Некоторое количество метки
связывается с компактным хроматином, хотя в последнем случае час-
74 ISSN 0(233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № S
тицы золота расположены чаще всего на границе компактного и диф-
фузного хроматина.
Ядрышки в надпочечнике быка имеют в основном нуклеолонемную
структуру. Частицы золота над ядрышками встречаются достаточно
редко и связаны, в основном, с периферией нуклеолонемы.
Рис. 2. Локализация мест связывания CepPC в клетке. Срезы ткани надпочечника быка,
заключенной в смолу «Lowycril К4 М», обрабатывали комплексами CepPC — Au: а —
•фрагмент периферической части ядра; б — фрагмент клетки. Хорошо видно, что части-
цы золота локализуются по периферии ядра, преимущественно в районе ядерных пор
(толстые стрелки)
Fig. 2. Localization of binding sites of SerRS in the cell. UT sections of bovine kidney
cell in «Lowycril К4М» resin were treated with the SerRS-Au complexes: a — fragment
of periferic part of the nuclei, б — fragment of the cell. Gold granules are localized on
ihe periferic part of the nuclei, mainly in the region of nucleus pores (thick arrows).
Иногда видно, что частицы золота располагаются в районе
ядерных пор.
В целом полученные данные хорошо согласуются с результатами
определения локализации триптофанил-тРНК синтетазы в эукариоти-
ческих клетках [3]. Триптофанил-тРНК синтетаза и CepPC обнаружи-
ваются как в цитоплазме, так и в ядре клеток эукариот, причем в
ядре— предпочтительно в зонах расположения диффузного хроматина.
75 I S S N 0(233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № S
В то же время при использовании поликлональных аффинно очищен-
ных антител к СерРС мы наблюдали некоторое увеличение (по срав-
нению с локализацией триптофанил-тРНК синтетазы с помощью поли-
клональных и моноклональных антител [3] ) метки над структурами
компактного хроматина. Присутствие CepPC в ядре клеток надпочеч-
ника быка хорошо согласуется с иммунофлюоресцентными данными,
показавшими наличие
некоторых аминоацил -
т Р Н К синтетаз в ядрах
клеток эукариот, а так-
ж е с результатами им-
муноцитохимических ис-
следований культуры
клеток почки быка после
обработки их детергентом
тритон X-IOO [2]. Анало-
гичные результаты полу-
чены и Миранде с соавт.
[11]. Авторы этой рабо-
ты выявили фенилала-
нил-тРНК синтетазу в яд-
рах клеток некоторых
эукариот и высказали
Рис. 3. Контроль. Ультратонкий
срез ткани надпочечника быка,
заключенной в смолу «Lowycril
К4 М», обработанный комплек-
сами белок А — коллоидное зо-
лото без предварительной инку-
бации с антителами. На срезе
видны только единичные части-
цы золота (стрелки)
Fig. 3. Control. UT sections of
bovine kidney cells in the «Lo-
wycril К4М» resin were treated
with the complexes protein A —
colloidal gold without incubation
with antibodies. On the section
only separate gold granules are
seen. Scale — 1 nm.
предположение о том, что содержание данного фермента в ядре может
меняться на разных стадиях клеточного цикла. Полученные нами ре-
зультаты могут являться косвенным доводом в пользу высказанного
выше предположения.
В контрольных экспериментах, когда ультратонкие срезы без пред-
варительной инкубации с антителами обрабатывали комплексами рА—
Au, частицы золота на срезах практически отсутствовали (рис. 3) . Н а
высокую специфичность метода указывает и тот факт, что в прослойке
соединительной ткани надпочечника, содержащей большое количество
коллагеновых волокон, метка также отсутствует (данные не приведены).
Интересные результаты были получены, когда срезы ткани надпо-
чечника обрабатывали комплексами СерРС—Au (рис. 2). Хорошо вид-
но, что СерРС не связывается со структурами цитоплазмы. Основная
часть метки локализуется в районе поровых комплексов по периферии
всей ядерной оболочки. Небольшое количество частиц золота присут-
ствует в участках локализации диффузного хроматина.
Со структурами ядрышка CepPC также не связываются.
В контрольных экспериментах, где срезы предварительно обраба-
тывали СерРС, а затем комплексами СерРС—Au или исходным колло-
идным золотом, частицы золота на срезах практически отсутствовали.
76 ISSN 0(233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № S
Полученные данные о локализации мест связывания CepPC со
структурами на срезах хорошо согласуются с результатами биохими-
ческих исследований триптофанил-тРНК синтетазы, в которых было
продемонстрировано, что триптофанил-тРНК синтетаза избирательно
связывается с клеточными белками [12]. Таким образом, наличие мет-
ки по периферии ядра и в районе ядерных пор (рис. 2) может свиде-
тельствовать о локализации специфических белков, связывающихся с
СерРС, в периферических участках ядра и в районе ядерных пор.
Возможно, что присутствие СерРС в ядрах эукариотических клеток
(по аналогии с триптофанил-тРНК синтетазой [3]) связано с дополни-
тельными функциями, которые она может выполнять в эукариотичес-
ких клетках, кроме участия в синтезе серил-тРНК, на что указывает
и неравномерное распределение СерРС внутри ядра.
IMMUNOELECTRON-MICROSCOPIC STUDY OF SERYL-tRNA-SYNTHETASE
LOCALIZATION IN CELLS OF HIGHER EUCARYOTES
L. L. Sidorik, V. I. Popenko, N. E. Cherny, M. A. Tukalo, S. F. Beresten, G. Kh. Matsuka
Institute of Molecular Biology and Genetics,
Academy of Sciences of the Ukrainian SSR, Kiev
V. A. Engelhardt Institute of Molecular Biology,
Academy of Sciences of the USSR, Moscow
S u m m a r y
Localization of seryl-tRNA-synthetase (SerRS) was studied on ultrathin (UT) section of
bovine kidney cells fixed with glutaraldehyde and embedded in «Lowycril К4М» resin
at —35 °С. The UT sections were treated with the polyclonal affined-purified antibodies
against SerRS and the complexes of protein A with colloidal gold 20 nm in size. In
the cells the cytoplasm was the most intensely labelled. A great amount of SerRS was
found in the cell nuclei: the label was concentrated over the diffuse chromatin localiza-
tion regions, a minimal binding being observed over compact chromatin. The presence of
SerRS in the eucaryotic cell nucleus may evidence for the possible regulatory role of
SerRS in eucaryotes.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Киселев Л. Л., Фаворова О. О., Лаврик О. И. Биосинтез белков от аминокислоты
до аминоацил-тРНК·—М. : Наука, 1984.— 408 с.
2. Иммуноморфологическое и биохимическое изучение внутриклеточной локализации
триптофанил-тРНК-синтетазы высших организмов / Е. Л. Палей, В. Н. Баранов,
Η. Е. Зиновьев, Л. Л. Киселев // Биополимеры и клетка.— 1985.— 1, № 2.— С. 70—79.
.3. Иммунно-электронно-микроскопическое определение локализации триптофанил-
тРНК синтетазы в клетках бактерий и высших эукариот / В. И. Попенко, Η. Е. Чер-
ни, С. Ф. Берестень и др. / /Молекуляр. биология — 1989 . -23 , № 6.—С. 1669—1681.
А. Выделение серил-тРНК синтетазы из печени животных экспресс-методом / О. И. Гуд-
зера, Л. Л. Сидорик, И. В. Золотухина и др. / /Биополимеры и клетка.— 1990.— 6,
№ 2,—С. 105—107.
5. Bailey G. S. The production of antisera // Meth. Мої. Biol — New York: Clifton, 1984.—
V. 1,—P. 295—300.
6. Фримель Г. Φ. Иммунологические методы.—Μ. : Медицина, 1987.— 472 с.
7. Carlemalm E., Gavarito R. M., Villinge W. Resin development for electron microsco-
py and an analysis of embedding at low tempera tu re / / J . Microscopy.— 1982.— 126.—
N 1 — P . 123—143.
8. Frens G. Controlled nucleation for the regulation of the particle size in monodisper-
sic gold suspens ions / /Nature Phys. S c i . - 1973.—241.—N 1.—P. 20—22.
9. Roth J. The protein Α-gold technique, qualitative and quantitative approach fie the
antigen localization on thin sections//Techniques in Immunocytochemistry / Eds
G. R. Bullock, P. Petrusz.—London: Acad, press, 1982,— V. 1,—P. 104—133.
10. Roth J., Taotes D. /., Warhol M. J. Prevention of non-specific interactions of gold-
labelled reagents on tissue sections//Histochemistry.— 1989.— 92.— N 1.— P. 47—56.
11. Association of an aminoacyl-tRNA synthetase complex and phenylalanyl-tRNA synthe-
tase with the cytoskeletal framework fraction from mammalian cells / L. Mirande,
D. LeCorre, D. Lonvard et a l . / /Exp . Cell Res.— 1985,—156, N 1,—P. 91—102.
12. Берестень С. Φ., Рубикайте Б. И., Киселев Л. Л. Метод выявления белок-белко-
вых взаимодействий. Обнаружение белка с М. м. 37 кДа, связывающегося с трипто-
фанил-тРНК синтетазой//Биоорг. химия,— 1987— 13, № 10.—С. 1325—1330.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Киев Получено 27.04.90
Ин-т молекуляр. биологии им. Энгельгардта АН СССР, Москва
77 ISSN 0(233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № S
|