Аминокислотная последовательность вокруг остатка цистеина каталазы гриба Penісillium vitale
В работе показано, что полипептидная цепь субъединицы каталазы гриба P. vitale содержит один остаток цистеина. Получены пять пептидов из участка белка, включающего цистеин. Выяснено строение этих пептидов. Реконструирована аминокислотная последовательность участка белка, насчитывающая 31 аминокислот...
Saved in:
| Published in: | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Date: | 1996 |
| Main Authors: | , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1996
|
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154178 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Аминокислотная последовательность вокруг остатка цистеина каталазы гриба Penісillium vitale / О.С. Мирошниченко, Т.Л. Левитина, М.Т. Бобровская, Э.А. Козлов // Биополимеры и клетка. — 1996. — Т. 12, № 5. — С. 46-49. — Бібліогр.: 13 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-154178 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Мирошниченко, О.С. Левитина, Т.Л. Бобровская, М.Т. Козлов, Э.А. 2019-06-15T09:34:34Z 2019-06-15T09:34:34Z 1996 Аминокислотная последовательность вокруг остатка цистеина каталазы гриба Penісillium vitale / О.С. Мирошниченко, Т.Л. Левитина, М.Т. Бобровская, Э.А. Козлов // Биополимеры и клетка. — 1996. — Т. 12, № 5. — С. 46-49. — Бібліогр.: 13 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000448 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154178 577.112.5 В работе показано, что полипептидная цепь субъединицы каталазы гриба P. vitale содержит один остаток цистеина. Получены пять пептидов из участка белка, включающего цистеин. Выяснено строение этих пептидов. Реконструирована аминокислотная последовательность участка белка, насчитывающая 31 аминокислотный остаток и содержащая остаток цистеина. У роботі показано, що поліпептидний ланцюг субодишщі каталази гриба P. vitale мітить один залишок цистеїну. Отримано п'ять пептидів з ділянки білка, що містить цистеїн. З'ясовано будову цих пептидів. Реконструйовано амінокислотну послідовніть ділянки білка, що нараховує 31 амінокислотний залишок та вміщує залишок цистеїну. The P. vitale catalase polypeptide chain was shown to contain 1 residue of cystein. 5 peptides from the polypeptide chain region containing the cystein residue were obtained and their structure was elucidated. The amino acid sequence around the cystein residue, including 31 amino acid residues, was reconstructed. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Аминокислотная последовательность вокруг остатка цистеина каталазы гриба Penісillium vitale Амінокислотна послідовність навкруги залишку цистеїну катал ази гриба Penicillium vitale The amino acid sequence around the cystein residue of Penicillium vitale catalase Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Аминокислотная последовательность вокруг остатка цистеина каталазы гриба Penісillium vitale |
| spellingShingle |
Аминокислотная последовательность вокруг остатка цистеина каталазы гриба Penісillium vitale Мирошниченко, О.С. Левитина, Т.Л. Бобровская, М.Т. Козлов, Э.А. |
| title_short |
Аминокислотная последовательность вокруг остатка цистеина каталазы гриба Penісillium vitale |
| title_full |
Аминокислотная последовательность вокруг остатка цистеина каталазы гриба Penісillium vitale |
| title_fullStr |
Аминокислотная последовательность вокруг остатка цистеина каталазы гриба Penісillium vitale |
| title_full_unstemmed |
Аминокислотная последовательность вокруг остатка цистеина каталазы гриба Penісillium vitale |
| title_sort |
аминокислотная последовательность вокруг остатка цистеина каталазы гриба penісillium vitale |
| author |
Мирошниченко, О.С. Левитина, Т.Л. Бобровская, М.Т. Козлов, Э.А. |
| author_facet |
Мирошниченко, О.С. Левитина, Т.Л. Бобровская, М.Т. Козлов, Э.А. |
| publishDate |
1996 |
| language |
Russian |
| container_title |
Биополимеры и клетка |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Амінокислотна послідовність навкруги залишку цистеїну катал ази гриба Penicillium vitale The amino acid sequence around the cystein residue of Penicillium vitale catalase |
| description |
В работе показано, что полипептидная цепь субъединицы каталазы гриба P. vitale содержит один остаток цистеина. Получены пять пептидов из участка белка, включающего цистеин. Выяснено строение этих пептидов. Реконструирована аминокислотная последовательность участка белка, насчитывающая 31 аминокислотный остаток и содержащая остаток цистеина.
У роботі показано, що поліпептидний ланцюг субодишщі каталази гриба P. vitale мітить один залишок цистеїну. Отримано п'ять пептидів з ділянки білка, що містить цистеїн. З'ясовано будову цих пептидів. Реконструйовано амінокислотну послідовніть ділянки білка, що нараховує 31 амінокислотний залишок та вміщує залишок цистеїну.
The P. vitale catalase polypeptide chain was shown to contain 1 residue of cystein. 5 peptides from the polypeptide chain region containing the cystein residue were obtained and their structure was elucidated. The amino acid sequence around the cystein residue, including 31 amino acid residues, was reconstructed.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154178 |
| citation_txt |
Аминокислотная последовательность вокруг остатка цистеина каталазы гриба Penісillium vitale / О.С. Мирошниченко, Т.Л. Левитина, М.Т. Бобровская, Э.А. Козлов // Биополимеры и клетка. — 1996. — Т. 12, № 5. — С. 46-49. — Бібліогр.: 13 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT mirošničenkoos aminokislotnaâposledovatelʹnostʹvokrugostatkacisteinakatalazygribapenísilliumvitale AT levitinatl aminokislotnaâposledovatelʹnostʹvokrugostatkacisteinakatalazygribapenísilliumvitale AT bobrovskaâmt aminokislotnaâposledovatelʹnostʹvokrugostatkacisteinakatalazygribapenísilliumvitale AT kozlovéa aminokislotnaâposledovatelʹnostʹvokrugostatkacisteinakatalazygribapenísilliumvitale AT mirošničenkoos amínokislotnaposlídovnístʹnavkrugizališkucisteínukatalazigribapenicilliumvitale AT levitinatl amínokislotnaposlídovnístʹnavkrugizališkucisteínukatalazigribapenicilliumvitale AT bobrovskaâmt amínokislotnaposlídovnístʹnavkrugizališkucisteínukatalazigribapenicilliumvitale AT kozlovéa amínokislotnaposlídovnístʹnavkrugizališkucisteínukatalazigribapenicilliumvitale AT mirošničenkoos theaminoacidsequencearoundthecysteinresidueofpenicilliumvitalecatalase AT levitinatl theaminoacidsequencearoundthecysteinresidueofpenicilliumvitalecatalase AT bobrovskaâmt theaminoacidsequencearoundthecysteinresidueofpenicilliumvitalecatalase AT kozlovéa theaminoacidsequencearoundthecysteinresidueofpenicilliumvitalecatalase |
| first_indexed |
2025-11-24T16:09:56Z |
| last_indexed |
2025-11-24T16:09:56Z |
| _version_ |
1850850897038409728 |
| fulltext |
ISSN 0233-7657. Биополимеры и клетка. 1996. Т. 12. № 5
Аминокислотная последовательность вокруг остатка
цистеина каталазы гриба Репісillит vitale
О. С. Мирошниченко, Т. Л. Левитина, М. Т. Бобровская, Э. А, Козлов
Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины
252143, Киев, ул. Академика Заболотного, 150
В работе показано, что полипептидная цепь субъединицы каталазы гриба P. vitale
содержит один остаток цистеина. Получены пять пептидов из участка белка,
включающего цистеин. Выяснено строение этих пептидов. Реконструирована
аминокислотная последовательность участка белка, насчитывающая 31 амино-
кислотный остаток и содержащая остаток цистеина.
Введение. Ранее нами был определен аминокислотный состав каталазы [1 ]
и частично изучены пептиды, полученные расщеплением ее трипсином
[2—5], стафилококковой протеазой [6] и бромцианом [7]. Однако ни в
одном из исследованных фрагментов остаток цистеина идентифицирован не
был, так как выяснение аминокислотного состава белка и аминокислотной
последовательности пептидов проводилось на белке, не модифицированном
по цистеину. Для определения содержания цистеина, выявления цистеинсо-
держащего фрагмента и определения аминокислотной последовательности
вокруг остатка цистеина мы применили метод ковалентной хроматографии
каталазы [8 ] с последующим расщеплением белка химотрипсином.
Материалы и методы. Каталазу получали по методу [1 ]. Носитель для
ковалентной хроматографии и иммобилизации белка активировали, как
описано в работе [9]. К 2,2 г пористого стекла CPG/Thiol («Pierce», США)
добавляли 10 мл 0,1- М аммоний-бикарбонатного буферного раствора, рН
8,0, содержащего 50 мМ дитиотреитол («Sigma», США) и 3 мМ EDTA.
NaCl, выдерживали 4 ч при 40 °С, после чего носитель промывали на
фильтре водой, содержащей 3 мМ ЭДТА.ИаО, затем 50 и 100 %-м
метанолом. К влажному стеклу добавляли 10 мл раствора 2,2'-дипиридил-
дисульфида («Aldrich», США). Для приготовления этого раствора к 100 мг
реагента приливали 5 мл абсолютного этанола, затем по каплям при
перемешивании добавляли 5 мл 0,2 М аммоний-бикарбонатного буферного
раствора, рН 8,0, содержащего 3 мМ EDTA.NaCl. Носитель с добавленным
к нему раствором выдерживали при комнатной температуре при встряхива-
нии в течение 30 ч. Активированный носитель промывали 100 %-м
метанолом и высушивали на воздухе.
Все растворы, необходимые для активации носителя, а также для
иммобилизации и расщепления белка, дегазировали и насыщали гелием.
Для иммобилизации к активированному носителю добавляли 4 мл
0,1 М трис-НС1-буферного раствора, рН 8,0, содержащего 6 М мочевину,
•Correspondence address.
© О с:. МИРОШНИЧЕНКО, Т. л . ЛЕВИТИНА, М. Т. БОБРОВСКАЯ. Э. А. КОЗЛОВ, 1996
46
АМИНОКИСЛОТНАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ВОКРУГ ОСТАТКА ЦИСТЕИНА
затем 100 мг каталазы, растворенной в том же буфере. Иммобилизацию
проводили при встряхивании (4 ч) при комнатной температуре. Носитель с
иммобилизованным белком промывали несколькими порциями буфера для
иммобилизации, водой, 50 и 100 %-м метанолом, высушивали на воздухе.
Иммобилизованную каталазу расщепляли химотрипсином («Serva»,
ФРГ) в растворе 0,1 М NH4HC03, рН 8,0. Химотрипсин (1 мг) добавляли в
два приема, выдерживали при 37 °С в течение 6 ч, после чего конъюгат
промывали 0,1 М NH4HC03, рН 8,0, с 6 М мочевиной, затем тем же
раствором без мочевины.
«Снятие» цистеинсодержащих пептидов проводили в 6 мл 0,1 М
раствора NH4HC03, содержащего 20 мМ /3-меркаптоэтанола, при комнатной
температуре в течение 30 мин, затем носитель промывали еще 4 мл того же
раствора. «Снятые» пептиды лиофилизировали.
Цистеинсодержащие пептиды разделяли высоковольтным электрофоре-
зом на бумаге при рН 1,9, как описано в [10]. Триптические пептиды
получали по [2, 4, 10].
Окисление белка и пептидов осуществляли по методу Хирса [11 ].
Аминокислотний состав определяли на анализаторе аминокислот
Biothronik LC-7000 («Biothronik», ФРГ), как описано [2].
Аминокислотную последовательность определяли ручным методом дан-
сил-Эдман с идентификацией ДНС-аминокислот на полиамидных пластин-
ках [13] или с помощью секвенатора.
Результаты и обсуждение. В результате определения аминокислотного
состава окисленной каталазы было выявлено 0,3 остатка цистеиновой
кислоты на субъединицу белка. Отсюда можно предположить, что субъеди-
ница каталазы с молекулярной массой (м. м.) 75000 [1 ] содержит не более
одного остатка цистеина. Для доказательства этого предположения мы
предприняли попытку выделить цистеинсодержащий химотриптический
пептид. Немодифицированный белок иммобилизовали на активированном
носителе, расщепляли химотрипсином, свободные пептиды удаляли промы-
ванием, а затем «снимали» иммобилизованный цистеинсодержащий матери-
ал, как описано в методической части. Этот материал окисляли и разделяли
высоковольтным электрофорезом при рН 1,9. В результате химотриптиче-
ского гидролиза получены два пептида, содержащих цистеиновую кислоту.
Определены аминокислотный состав и аминокислотная последовательность
зтих пептидов.
ChCl: состав — CysS03H, Asp, Ser, Glu, His, Trp;
строение — ChCl. Gln-Cys-Ser-Asn-His-Trp;
ChC2: состав — CysS03H, Asp, Ser, Glu;
строение — ChC2. Gln-Cys-Ser-Asn.
Исходя из полученных данных можно заключить, что ChCl и ChC2
образовались из одного и того же участка полипептидной цепи каталазы.
Очевидно, субъединица каталазы содержит один остаток цистеина.
Для получения большего фрагмента белка, содержащего остаток цисте-
ина, мы подвергли окислению три триптических пептида (Тн1—ТнЗ) [3],
полученные ранее из нерастворимого материала [2]. Цистеиновая кислота
обнаружена только в пептиде Тн2. После дополнительной очистки Тн2
высоковольтным электрофорезом при рН 1,9 были получены два пептида со
следующеми аминокислотными составами:
Тн2-1. CysS03H, Asp2, Ser, Glu*, Pro, Gly2, Ala, Val, lie, Leu2, Phe2,
Trp(+), His, Arg;
Th2-1'. Asp, G1u4, Pro, Gly2, Ala, Val, lie, Leu2, Phe, Trp(+), Arg.
Оба пептида были секвенированы. На пептиде Тн2-1 пройдено семь
стадий: Gln-Phe-Gln-Cys-Ser-Asn-His-, на пептиде Тн2-Г — 10: Glu-Pro-
Leu-Gln-Gly-Phe-Ile-Asp-Leu-Gly-.
47
МИРОШНИЧЕНКО О. С. И ДР.
Схема выяснения аминокислотной последовательности цистеинсодержащего пептида каталазы
гриба P. vitale. Стрелками указаны стадии деградации по методу Эдмана соответствующих
пептидов
Как видно из аминокислотных последовательностей, пептид ChCl
входит в сотав пептида Тн2-1, удлиняя его последовательность на остаток
триптофана. Из сопоставления аминокислотных составов пептидов Тн2-1 и
Тн2-Г следует, что состав Тн2-1 равен сумме состава Тн2-Г и состава
N-концевой последовательности Тн2-1 плюс остаток триптофана. Тн2-Г
занимает С-концевое полжение в Тн2-1 и возник в результате неспецифи-
ческого расщепления связи Trp-Glu при переварке каталазы трипсином.
Этот вывод подтверждается дальнейшим исследованием триптического цис-
теинсодержащего пептида из малеил-каталазы. Ранее полученную из нера-
створимого материала триптического гидролизата малеил-каталазы смесь
пептидов Тм40, Тм52, Тм53 (4,5) окисляли и разделяли высоковольтным
электрофорезом на бумаге при рН 1,9, вследствие чего был получен один
цистеинсодержащий пептид с составом: CysS03H, Asp4, Thr, Ser, Glu6, Pro,
Gly3, Ala, Vai2, He, Leu3, Phe2, Trpj, His, Lys, Arg. На пептиде с помощью
секвенатора пройдено 20 стадий.
На основании выясненной N-концевой последовательности пептида,
представленного на рисунке, можно сделать вывод о том, что данный пептид
и пептиды ChCl, Тн2-1, Тн2-1 образуются из одного участка полипептид-
ной цепи каталазы. На рисунке обозначены все вышеописанные пептиды,
входящие в этот участок.
О. С. Мірошниченко, Т. Л. Левітіна, М. Т. Бобровська, Е. А. Козлов
Амінокислотна послідовність навкруги залишку цистеїну катал ази гриба Penicillium vitale
Резюме
У роботі показано, що поліпептидний ланцюг субодишщі каталази гриба P. vitale мітить один
залишок цистеїну. Отримано п'ять пептидів з ділянки білка, що містить цистеїн. З'ясовано
будову цих пептидів. Реконструйовано амінокислотну послідовніть ділянки білка, що нараховує
31 амінокислотний залишок та вміщує залишок цистеїну.
О. S. Miroshnitchenko, Т. L. Levitina, M. Т. Bobrovskaya, Е. A. Kozlov
The amino acid sequence around the cystein residue of Penicillium vitale catalase
Summary
The P. vitale catalase polypeptide chain was shown to contain 1 residue of cystein. 5 peptides from the
polypeptide chain region containing the cystein residue were obtained and their structure was elucidated.
The amino acid sequence around the cystein residue, including 31 amino acid residues, was reconstructed.
48
АМИНОКИСЛОТНАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ВОКРУГ ОСТАТКА ЦИСТЕИНА
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Гудкова Л. В.у Кириленко М. Т., Левитина Т. Л., Козлов Э. А. Исследование субъединич-
ной структуры каталазы Penicillium vitale // Укр. биохим. журн.—1985.—57, № 4.—
С. 29—33.
2. Кириленко М. Г., Левитина Т. ЛГудкова Л. В. и др. Триптические пептиды каталазы
гриба Penicillium vitale. 2. Разделение и аминокислотный состав нерастворимых пептидов
/ / Биополимеры и клетка.—1988.-—4, № 1.—С. 40—43.
3. Козлов Э. А., Гудкова Л. ВЛевитина Т. Л. и др. Дополнительное исследование
триптических пептидов каталазы гриба Penicillium vitale II Там же.—1993.—9, № 1.—
С. 2—5.
4. Левитина Т. ЛМирошниченко О. С., Гудкова Л. В. и др. Триптические пептиды
малеил-каталазы гриба Penicillium vitale. 1. Выделение и аминокислотный состав / / Там
же.—№ 2.—С. 3—8.
5. Левитина Т. ЛБобровская М. Т., Гусак Н. М. и др. Триптические пептиды малеил-ка-
талазы гриба Penicillium vitale. 2. Строение пептидов / / Там же.—№ 3.—С. 42—45.
6. Бобровская М. Т., Латьиико Н. В., Левитина Т. Л. и др. Строение некоторых пептидов,
полученных расщеплением каталазы хриба Penicillium vitale стафилококковой протеазой
I I Там же.—1994.—10, № 2.—С. 49—51.
7. Козлов Э. А., Левитина Т. Л., Бобровская М. Т. и др. Дополнительное исследование
бромциановых фрагментов каталазы гриба Penicillium vitle II Там же.—С. 45—48.
8. Егоров Ц. А., Шахпоронов М. ИДавидович Ю. А. и др. Получение нерастворимого
носителя с активированной SH-группой и его использование в химии белка I I Биоорг.
химия.—1977.—3, № 8.—С. 1111—1116.
9. Овчинников Ю. А., Абдулове Н. Г., Богачук А. С. Использование ковалентной хроматог-
рафии в исследовании структуры мембранных белков I I Биол. мембраны.—1985.—2,
№ 10.—С. 962—975.
10. Козлов Э. А., Кириленко М. Т., Левитина Т. Л. и др. Триптические пептиды каталазы
гриба Penicillium vitale. 1. Разделение и аминокислотный состав растворимых пептидов
/ / Биополимеры и клетка.—1987.—3, № 5.—С. 40—45.
11. Hirs С. Н. IV. Determination of cystein as cysteic acid II Meth. Enzymol.—1967.—11.—
P. 59—62.
12. Easly C. W. Combination of specific colour reactionsuseful in the peptide mappingtechniques / /
Biochim. et biophys. acta.—1969.—107, N 2.—P. 386—388.
13. Гусак H. M.t Овандер M. #., Дробот Л. Б., Серебряный С. Б. Определение структуры
пептидов комбинированным методом Дансил-Эдман / / Методы молекуляр. биологии.—
Киев: Наук, думка, 1979.—142 с.
УДК 577.112.5 Поступила в редакцию 30.01.96
49
|