Сиквенс к ДНК С-концевой последовательности капсидного белка ВТМ-изолята томата из района радиологического загрязнения

Из района с плотностью радиологического загрязнения по Cs137 11 Ku/ км2 выделены из растений томата два идентичных изолята вируса табачной мозаики, получены рекомбинантные плазмиды pTVM7 и pTVM7.5, содержащие кДНК полного провируса и иммуноспецифическую С-концевую последовательность кДНК капсидного...

Повний опис

Збережено в:

Бібліографічні деталі
Дата:	1996
Автори:	Бойко, А.Л., Степанюк, С.А., Гарифулин, О.М.
Формат:	Стаття
Мова:	Russian
Опубліковано:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1996
Назва видання:	Биополимеры и клетка
Онлайн доступ:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154233
Теги:	Додати тег Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:	Сиквенс к ДНК С-концевой последовательности капсидного белка ВТМ-изолята томата из района радиологического загрязнения / А.Л. Бойко, С.А. Степанюк, О.М. Гарифулин // Биополимеры и клетка. — 1996. — Т. 12, № 5. — С. 100-105. — Бібліогр.: 23 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-154233
record_format	dspace
spelling	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1542332025-02-09T17:37:50Z Сиквенс к ДНК С-концевой последовательности капсидного белка ВТМ-изолята томата из района радиологического загрязнения Секвенс кДНК С-кінцевої послідовності капсидного білка BTM-ізолята томата з району радіологічного забруднення Sequencing analysis cDNA for C-terminus part of capsid protein for tomato TVM isolated from region with nuclear contamination Бойко, А.Л. Степанюк, С.А. Гарифулин, О.М. Из района с плотностью радиологического загрязнения по Cs137 11 Ku/ км2 выделены из растений томата два идентичных изолята вируса табачной мозаики, получены рекомбинантные плазмиды pTVM7 и pTVM7.5, содержащие кДНК полного провируса и иммуноспецифическую С-концевую последовательность кДНК капсидного белка для одного из выделенных изолятов. Структурные белки полученных вирусов характеризуются довольно высокой – 19 ±1,9 к Да (17,5 к Да для стандартного штамма ВТМ) молекулярной массой по результатам DS-Na – ПААГ электрофореза. Иммуноблот-анализ трипсиновых фрагментов капсидных белков изолятов и выделенного ранее контрольного штамма далемского изолята не выявил отличий в распределении иммуноактивных фрагментов относительно антисыворотки контроля. По сиквенсу к ДНК pTVM7.5 обнаружена консервативная замена остатка серина на треонин в положении 148 для гомологичного района капсидного белка далемского штамма ВТМ, что может свидетельствовать об иммунологической значимости данного района капсидного белка изолята. Предложен возможный механизм опосредованных физиологическими процессами в инфицированном растении появления и сохранения подобной замены. Із района зі щільністю радіологічного забруднення по Cs13711 Кі/км2 виділено з рослин томата два ідентичних ізоляти вірусу тютюнової мозаїки, отримано рекомбінантні плазміди pTVM7 і PTVM7.5, що містять відповідно кДНК повного провірусу і імуноспецифічну С-кінцеву послідовність кДНК капсидного білка для одного з виділених ізолятів. Структурні білки отриманих вірусів характеризуються досить високою – 19±1,9 кДа (17,5 кДадля стандартногоіитамаВТМ) молекулярною масою за результатами DS-Na – ПААГ електрофорезу. Імуноблот-аналіз трипсинових фрагментів капсидних білків ізолятів і виділеного раніше контрольного ізолята томатного (далемського) штама не виявив відмінностей у розподілі імуноактивних відносно антисироватки контролю фрагментів. Сиквенс кДНКрТУМ7.5 дозволив виявити консервативну заміну залишку серину на треонін у положенні 148 для гомологічного району капсидного білка далемського штама ВТМ, що може свідчити про імунологічну значущість даного району капсидного білка. Запропоновано можливий механізм опосередкованоих фізіологічними процесами в інфікованій рослині появи і збереження такої заміни. Two identical strains of tomato type TVM have been isolated at region with Cs137 nuclear contamination with apparently 11 Cilkm2 activity and recombinant plasmids (pTVM7, pTVM7.5) with insert of cDNA provirus and cDNA for C-end specific capsid protein region correspondently from one of isolated viruses have been obtained. The capsid proteins of isolated strains has unusually higher 19±1,9 kDa molecular weight than standard TVM strain (17,5 kDa) on SDS-PAAG electrophoresis data. There have not been found differences in distribution of immunoactivity trypsin-digested protein fragments between isolated strains and control strain on immunoblot data analysis with control antiserum. Sequencing analysis of cDNApTVM7.Shaveshowedoutononeconservativeaminoacidreplacementofthreonineinsteadofserine in position 148 with comparison of that standard tomato TVM sequencing, which allow to make consideration about immunologically importance of this capsid protein region TVM. Also discussed possible mechanism of appearence and keeping such type aminoacid replacement as mediated of physiological processes in infected plant. 1996 Article Сиквенс к ДНК С-концевой последовательности капсидного белка ВТМ-изолята томата из района радиологического загрязнения / А.Л. Бойко, С.А. Степанюк, О.М. Гарифулин // Биополимеры и клетка. — 1996. — Т. 12, № 5. — С. 100-105. — Бібліогр.: 23 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000450 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154233 578.828.11:577.212.3 ru Биополимеры и клетка application/pdf Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
description	Из района с плотностью радиологического загрязнения по Cs137 11 Ku/ км2 выделены из растений томата два идентичных изолята вируса табачной мозаики, получены рекомбинантные плазмиды pTVM7 и pTVM7.5, содержащие кДНК полного провируса и иммуноспецифическую С-концевую последовательность кДНК капсидного белка для одного из выделенных изолятов. Структурные белки полученных вирусов характеризуются довольно высокой – 19 ±1,9 к Да (17,5 к Да для стандартного штамма ВТМ) молекулярной массой по результатам DS-Na – ПААГ электрофореза. Иммуноблот-анализ трипсиновых фрагментов капсидных белков изолятов и выделенного ранее контрольного штамма далемского изолята не выявил отличий в распределении иммуноактивных фрагментов относительно антисыворотки контроля. По сиквенсу к ДНК pTVM7.5 обнаружена консервативная замена остатка серина на треонин в положении 148 для гомологичного района капсидного белка далемского штамма ВТМ, что может свидетельствовать об иммунологической значимости данного района капсидного белка изолята. Предложен возможный механизм опосредованных физиологическими процессами в инфицированном растении появления и сохранения подобной замены.
format	Article
author	Бойко, А.Л. Степанюк, С.А. Гарифулин, О.М.
spellingShingle	Бойко, А.Л. Степанюк, С.А. Гарифулин, О.М. Сиквенс к ДНК С-концевой последовательности капсидного белка ВТМ-изолята томата из района радиологического загрязнения Биополимеры и клетка
author_facet	Бойко, А.Л. Степанюк, С.А. Гарифулин, О.М.
author_sort	Бойко, А.Л.
title	Сиквенс к ДНК С-концевой последовательности капсидного белка ВТМ-изолята томата из района радиологического загрязнения
title_short	Сиквенс к ДНК С-концевой последовательности капсидного белка ВТМ-изолята томата из района радиологического загрязнения
title_full	Сиквенс к ДНК С-концевой последовательности капсидного белка ВТМ-изолята томата из района радиологического загрязнения
title_fullStr	Сиквенс к ДНК С-концевой последовательности капсидного белка ВТМ-изолята томата из района радиологического загрязнения
title_full_unstemmed	Сиквенс к ДНК С-концевой последовательности капсидного белка ВТМ-изолята томата из района радиологического загрязнения
title_sort	сиквенс к днк с-концевой последовательности капсидного белка втм-изолята томата из района радиологического загрязнения
publisher	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate	1996
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154233
citation_txt	Сиквенс к ДНК С-концевой последовательности капсидного белка ВТМ-изолята томата из района радиологического загрязнения / А.Л. Бойко, С.А. Степанюк, О.М. Гарифулин // Биополимеры и клетка. — 1996. — Т. 12, № 5. — С. 100-105. — Бібліогр.: 23 назв. — рос.
series	Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv	AT bojkoal sikvenskdnkskoncevojposledovatelʹnostikapsidnogobelkavtmizolâtatomataizrajonaradiologičeskogozagrâzneniâ AT stepanûksa sikvenskdnkskoncevojposledovatelʹnostikapsidnogobelkavtmizolâtatomataizrajonaradiologičeskogozagrâzneniâ AT garifulinom sikvenskdnkskoncevojposledovatelʹnostikapsidnogobelkavtmizolâtatomataizrajonaradiologičeskogozagrâzneniâ AT bojkoal sekvenskdnkskíncevoíposlídovnostíkapsidnogobílkabtmízolâtatomatazrajonuradíologíčnogozabrudnennâ AT stepanûksa sekvenskdnkskíncevoíposlídovnostíkapsidnogobílkabtmízolâtatomatazrajonuradíologíčnogozabrudnennâ AT garifulinom sekvenskdnkskíncevoíposlídovnostíkapsidnogobílkabtmízolâtatomatazrajonuradíologíčnogozabrudnennâ AT bojkoal sequencinganalysiscdnaforcterminuspartofcapsidproteinfortomatotvmisolatedfromregionwithnuclearcontamination AT stepanûksa sequencinganalysiscdnaforcterminuspartofcapsidproteinfortomatotvmisolatedfromregionwithnuclearcontamination AT garifulinom sequencinganalysiscdnaforcterminuspartofcapsidproteinfortomatotvmisolatedfromregionwithnuclearcontamination
first_indexed	2025-11-28T20:16:14Z
last_indexed	2025-11-28T20:16:14Z
_version_	1850066576375545856
fulltext	ISSN 0233-7657. Биополимеры и клетка. 1996. Т. 12. № 5 Сиквенс к ДНК С-концевой последовательности капсидного белка ВТМ-изолята томата из района радиологического загрязнения А. Л. Бойко*, С. А. Степанюк, О. М. Гарифулин Киевский национальный университет имени Тараса Шевченко 252017, Киев, ул. Владимирская, 64 Из района с плотностью радиологического загрязнения noCs137 11 Ки/ км2 выде- лены из растений томата два идентичных изолята вируса табачной мозаики, получены рекомбинантные плазмиды pTVM7 и pTVM7.5, содержащие кДНК пол- ного провируса и иммуноспецифическую С-концевую последовательность кДНК капсидного белка для одного из выделенных изолятов. Структурные белки полу- ченных вирусов характеризуются довольно высокой — 19 ±1,9 к Да (17,5 к Да для стандартного штамма ВТМ) молекулярной массой по результатам DS-Na — ПААГ электрофореза. Иммуноблот-анализ трипсиновых фрагментов капсид- ных белков изолятов и выделенного ранее контрольного штамма далемского изо- лята не выявил отличий в распределении иммуноактивных фрагментов относи- тельно антисыворотки контроля. По сиквенсу к ДНК pTVM7.5 обнаружена кон- сервативная замена остатка серина на треонин в положении 148 для гомологичного района капсидного белка далемского штамма ВТМ, что может свидетельствовать об иммунологической значимости данного района капсидного белка изолята. Предложен возможный механизм опосредованных физиологиче- скими процессами в инфицированном растении появления и сохранения подобной замены. Введение. Особенности развития вирусной инфекции в растении в экологи- ческих условиях Украины остаются малоизученными. Данные, полученные по вирусным изолятам из регионов, подвергшихся радиоактивному загряз- нению, могут помочь в решении ряда вопросов, связанных с выяснением молекулярно-генетических и биохимических основ фитопатогенности виру- сов, причин и условий появления их новых штаммовых форм и субтипов в природе в конкретной экологической нише. Создание рекомбинантных провирусных конструкций позволит выявить родственные вирусы в расти- тельной ткани при выбраковке зараженных растений путем гибридизацион- ного анализа [1]. Кроме того, обнаружение новых вирусных штаммов дает возможность использовать эти патогены как биологические индикаторы изменения экологической ситуации, в том числе и для мониторинга загряз- ненных зон Украины, где все более важное значение приобретает проблема минимальных и пороговых доз радиоактивного облучения [4]. Одним из аспектов проблемы является стимулирующее влияние низкоэнергетических доз облучения на физиологические и биохимические процессы в целых •Correspondence address. © А. Л- БОЙКО, с . А. СТЕПАНЮК, О. М. ГАРИФУЛИН, 1996 100 СИКВЕНС кДНК С-КОНЦЕВОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ БЕЛКА растениях [2, 5, 7, 8]. Однако на уровне растительной клетки природа активации этих процессов описана менее отчетливо [2, 3, 6, 7]. Как модельная система ВТМ обладает рядом ценных в молекулярно-ге- нетическом отношении качеств, поскольку есть все основания полагать, что in cell существует давление отбора, селективно подчиненное биохимическо- му состоянию физиологических процессов и направленное на отбор популя- ций транкскрипционно активных (-)-цепей РНК-вирусов наиболее подхо- дящих по спектру аминоацил-тРНК компонентов трансляционного аппарата инфицированной клетки [9 ]. В этом плане можно отметить, с одной стороны, зависимость ВТМ от метаболических процессов клетки растения- хозяина, с другой — его автономность как независимой генетической систе- мы, не интегрирующей, в отличие от многих вирусов животных, с геномом растения. Так, штаммы ВТМ, выделенные из разных видов растений, в большей степени отличаются друг от друга по нуклеотидной последовательности, чем искусственно получаемые химическими агентами (азотистая кислота) РНК- мутанты ВТМ. Нуклеотидная последовательность гена структурного белка ВТМ отличается от таковой далемского (томатного) штамма по 18 % нуклеотидов и от последовательности штамма U2 — по 26 % нуклеотидов. В свою очередь, различие между далемским штаммом и штаммом U2 составляет 30 %, и все три названных штамма отличаются от штамма, выделенного из подорожника, по 53—56 % нуклеотидных последовательно- стей [10]. В РНК всех четырех штаммов ВТМ менее вариабельными являются положения 87—94 и 113—122, расположенные на С-конце струк- турного белка ВТМ [10]. Изменения в последовательности структурного белка ВТМ коррелируют с изменением таких его свойств, как электрофоре- тическая подвижность, температурная устойчивость и антигенная детерми- нированность [10]. Целью настоящей работы было получение изолята ВТМ из растений томата, произрастающих в районе радиологического загрязнения, с после- дующим анализом иммунодоминантной С-концевой последовательности его капсидного белка. Для решения данной задачи осуществлено клонирование провируса ВТМ-изолята. Также субклонирован провирусный фрагмент, ответственный за синтез белка оболочки, и проведен анализ его первичной нуклеотидной последовательности. Материалы и методы. Инфицированный материал отбирали из расте- ний томата, имеющих по габитусу слабые симптомы мозаики, в условиях темно-серой, оподзоленной почвы с 2—3,5 Cu/км2 из района «Пуща-Води- ца» Киевщины с плотностью загрязнения по Cs137 11 Ки/км2. Для отбора чистой линии вирусов использовали растения-индикаторы Datura stramonium (страмониум) и Nicotiana glutinosa (глютиноза). После нескольких раундов пассирования через единичные некрозы вирус выделяли из системно пораженных растений томата, инфицированных одиночным пассированным некрозом. Листья массой 0,3 кг, хранивцшеся при —20 °С, быстро гомогенизиро- вали в фосфатном буфере, согласно [11 ]. Очистку в дальнейшем проводили с модификацией по [12], применяя ПЭГ/NaCl (4 %/0,1 М) и осаждение с последующим ультрацентрифугированием («Beckman», SV-40). DS-Na — ПААГ-электрофорез существляли в системе Лэммли [13]. Для определения количества белка по методу Лоури [14] использовали спектрофотометр фирмы «PalUnicam» (Англия). Трипсинизацию и иммуноблот-анализ пепти- дов белка оболочки изолята проводили по методике Зальцман и Мосс [11 ], используя ранее полученную антисыворотку к контрольному далемскому штамму ВТМ. РНК изолятов выделяли фенольным методом по Маниатису [15]. Клонирование провирусной геномной РНК осуществляли с примене- 101 БОЙКО А. Л. И ДР. нием поли(А)-полимеразы и обратной транскриптазы производства «Promega», (США) [14], используя синтетические PstI олигонуклеотиды- адапторы производства «Boehringer Mannheim» (Германия). Поли (А)-РНК получали фракционированием тотального продукта реакции с поли(А)-пол- имеразой на олиго(ёТ)-целлюлозе (Туре 7, «Pharmacia LKB», Швеция) [15]. Поли(А)-кДНК для клонирования получали согласно [15, 16], исполь- зуя 500 ед. поли(А)-полимеразы. Реакцию вели в течение 2 ч при 37 °С в следующих условиях: 50 мМ трис-HCl, рН 7,5, 10 мМ MgCl2, 15 мМ дитиотриитол, 5 мМ МпС12, 100 мМ КС1, 1 мМ АТР. Двухцепочечную кДНК синтезировали, как описано в [16]. При субклонировании фрагментов провирусной кДНК использовали рестриктазы производства «Boehringer Mannheim». Вектором служила плаз- мида pUC18, рекомбинанты трансформировали в клетки XL1 Escherichia colL Гибридизационный анализ рекомбинантных клонов, фиксированных на нейлоновых («Хийу Калур», Эстония) фильтрах с размером пор 0,45 мкм, проводили согласно Маниатису [15]. При отмывке фильтров в строгих условиях предельная концентрация NaCl составляла 0,03 М (65 °С), в нестрогих условиях — 0,3 М (5 °С). Зонды кДНК для гибридизации синтезировали с помощью обратной транскриптазы на имевшихся кДНК ВТМ дикого типа для 5'- и 3'-концевых районов его РНК. Условия синтеза зондов были такими же, как при синтезе кДНК для клонирования. Реакции сиквенса проводили по Сенгеру [17], используя стандартный набор произ- водства «Ферментас» (Вильнюс) и меченный изотоп [35S ]dATP производства «Amersham» (Англия). Результаты и обсуждение. Коэффициент экстинкции с учетом свето- рассеяния составил Е 2 6 О - 2; А 2 6 О / 2 8 О = 1 , 2 4 , что соответствует аналогичным параметрам, определенным для РНК-вирионов ВТМ [11]. В DS-Na — ПААГ геле в треках с образцами заметна одна гомогенная полоса вирусного белка, что свидетельствует о довольно высокой степени чистоты препаратов. Мг для белка оболочки можно принять равной 19 кДа [12]. Для изолятов томата распределение иммуноблот-фрагментов трипсино- вых пептидов было идентично таковому для ранее выделенного контрольно- го томатного штамма ВТМ. Для обнаружения единичных нуклеотидных замен и уточнения штаммовой принадлежности выделенных изолятов ВТМ было осуществлено определение н^клеотидной последовательности кДНК- конструкции pTVM7.5 для С-концевого района капсидного белка одного из изолятов томата, полученной субклонированием соответствующего фраг- мента из его провирусной конструкции pTVM7 (рис. 1). На рис. 2 Рис. 1. Результаты блот-гибри- дизационного анализа несколь- ких клонов соответствующей последовательности с зондом кДНК для белка оболочки стан- дартного штамма ВТМ, получен- ных субклонированием из кДНК провируса табачного изолята. кДНК клонов, дающих позитив- ный сигнал (L9, СЗ), взяты для дальнейшего анализа нуклео- тидной последовательности 102 СИКВЕНС кДНК С-КОНЦЕВОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ БЕЛКА приведены результаты компьютерного поиска гомологии для секвенирован- ной последовательности в сравнении с соответствующей последовательно- стью томатною (далемского) штамма ВТМ. Точечная нуклеотидная замена, обнаруженная нами по сиквенсу, приводит к единичной аминокислотной замене в положении 148 капсидного белка для выделенного вируса, причем эта замена носит консервативный характер, согласно данным Дэйхоф [18], по семействам аминокислотных консервативных замен. В то же время треонин замещает «типично» вирусную аминокислоту, причем в серин-бо- гатом районе капсидного белка далемского штамма ВТМ (четыре аминокис- лотных остатка на участке 146—158). Ранее в работе [19] показано, что С-концевая область капсидного белка ВТМ экспонирована наружу как в целом вирусе, так и в отдельных субъединицах. За связывание с рецептором клетки в процессе вирусной инфекции, по-видимому, также отвечает С-концевой эпитоп. Инфекцион- ность вируса уменьшалась на 75—94 % при обработке вируса МКА, специфичным к С-концевому участку белка, но сохранялась, если до взаимодействия вируса с МКА последние обрабатывали синтетическими конъюгатами полилизин — тетрапептид [19]. По результатам работ, в белке ВТМ, состоящем из 158 аминокислотных остатков, антигенная специфич- ность в положении 93—112 изменялась при удалении в этом пептиде 12 аминокислотных остатков с МН2-конца, но утрачивалась полностью даже при удалении трех остатков с СООН-конца [19]. Согласно вышеизложенному, консервативность обнаруженной замены может свидетельствовать об иммунологической специфике данного района капсидного белка, важного при первичном акте взаимодействия вируса с клеточными рецепторами. Одним из возможных объяснений появления и сохранения такой заме- ны, на наш взгляд, может быть создание в инфицированной клетке определенного селективного преимущества для экспрессии ранее «молча- щих» вирусных мРНК, возникающих в клетке в силу спонтанной мутаци- онной изменчивости и содержащих неважные для конформации и функции белка точечные мутации, триплеты которых будут соответствовать изменив- шимся в клетке наборам тРНК и аминокислот [9, 10]. Такое изменение может быть спровоцировано и изменившейся экологической ситуацией в нише произрастания растения, в том числе, и обусловленное радиологиче- ским ее загрязнением, что может, по мнению Кузина и Гродзинского [20, 21 ], приводить к своеобразной радиостимуляции физиологических процес- сов в растении. 103 БОЙКО А. Л. И ДР. Иллюстрацией к положению о самостоятельной эволюции экстрахромо- сомных нуклеиновых кислот, основное предназначение которых заключает- ся в «эгоистичном» усиленном воспроизведении, является «эволюция» in vitro РНК, синтезируемой репликазой фага Qb, описанная в работах Спигельман [21, 22]. А. Л. Бойко, С. А. Степанюк, О. М. Гарифулін Секвенс кДНК С-кінцевої послідовності капсидного білка BTM-ізолята томата з району радіологічного забруднення Резюме Із района зі щільністю радіологічного забруднення по Cs13711 Кі/км2 виділено з рослин томата два ідентичних ізоляти вірусу тютюнової мозаїки, отримано рекомбінантні плазміди pTVM7 і PTVM7.5, що містять відповідно кДНК повного провірусу і імуноспецифічну С-кінцеву послідов- ність кДНК капсидного білка для одного з виділених ізолятів. Структурні білки отриманих віру- сів характеризуються досить високою — 19±1,9 кДа(17,5 кДадля стандартногоіитамаВТМ) молекулярною масою за результатами DS-Na — ПААГ електрофорезу. Імуноблот-аналіз трипсинових фрагментів капсидних білків ізолятів і виділеного раніше контрольного ізолята томатного (далемського) штама не виявив відмінностей у розподілі імуноактивних відносно антисироватки контролю фрагментів. Сиквенс кДНКрТУМ7.5 дозволив виявити консерватив- ну заміну залишку серину на треонін у положенні 148 для гомологічного району капсидного білка далемського штама ВТМ, що може свідчити про імунологічну значущість даного району кап- сидного білка. Запропоновано можливий механізм опосередкованоих фізіологічними процесами в інфікованій рослині появи і збереження такої заміни. A. L. Boyko, S. A. Stepanujk, О. М. Garifulin Sequencing analysis cDNA for C-terminus part of capsid protein for tomato TVM isolated from region with nuclear contamination Summary 137 Two identical strains of tomato type TVM have been isolated at region with Cs nuclear contamination with apparently 11 Сі/km2 activity and recombinant plasmids (pTVM7, pTVM7.5) with insert of cDNA provirus and cDNAfor С-end specific capsid protein region correspondently from one of isolated viruses have been obtained. The capsid proteins of isolated strains has unusually higher 19 ±1,9 kDa molecular weight than standard TVM strain (17,5 kDa) on SDS-PAAG electrophoresis data. There have not been found differences in distribution of immunoactivity trypsin-digested protein fragments between isolated strains and control strain on immunoblot data analysis with control antiserum Sequencing analysis of cDNA pTVM7.5 have showed outonone conservative aminoacid replacement of threonine instead of serine in position 148 with comparison of that standard tomato TVM sequencing, which allow to make considera- tion about immunologically importance of this capsid protein region TVM. Also discussed possible mechanism of appearence and keeping such type aminoacid replacement as mediated of physiological processes in infected plant. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Сассон А. Биотехнология: свершения и надежды.—M.: Мир, 1987.—411 с. 2. Кузин A. M. О различии ведущих молекулярных механизмов при действии радиации на организм в больших и малых дозах / / Изв. АН СССР.—1980.—6.—С. 883—890. 3. Тимофеев-Ресовский Н. ^.Биофизическая интерпретация явлений радиостимуляции рас- тений / / Биофизика.—1956.—1, № Т.—С. 616—627. 4. Тимофеев-Ресовский Н. В. О радиоактивных загрязнениях биосферы и мерах борьбы с этими загрязнениями / / Сб. работ лаборатории биофизики (Тр. Ин-та биологии УФ АН СССР).— Свердловск, 1962.—Т. IV, Вып. 22.—С. 7—16. 5. Бойко А. Л. Экология вирусов растений.—К.: Вища школа, 1990.—167 с. 6. Кузин А. М. Структурно-метаболическая гипотеза в радиобиологии.—M.: Наука, 1970.— 222 с. 7. Кузин А. М. Молекулярные механизмы стимулирующего действия ионизирующего излучения на семена растений / / Радиобиология.—1972.—12, №5.—С. 635—643. 8. Gordon S. A.t Weber Я P. Studies on the mechanism of phytohormone damage by ionizing radiation. I. The radiosensitivity of indoleacetic acid / / Plant Physiol.—1955.—30, N 3.— P. 200—210. 104 СИКВЕНС кДНК С-КОНЦЕВОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ БЕЛКА 9. Sugiyama Т., Korant В. D., Lonberg-Holm К. К. RNA virus gene expression and its control / / Ann. Rev. Microbiol.—1972.—26.—P. 457. 10. Henning В., Wittmann H. G. The nature of virus multiplication / / Kado and Agrawal, 1972.—P. 546. 11. Методы вирусологии и молекулярной биологии.—M.: Мир, 1972.—480 с. 12. Noordam D. Identification of plant viruses. Methods and experiments / / Ed. Noordam D.— Wageningen: Pudoc., 1973.—277 p. 13. Laemmli U. K. Cleavage of structure proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / / Nature.—1970.—227.—P. 680—685. 14. Lowry О. H. et al 11 J. Biol. Chem.—1951.—193.—P. 265. 15. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование—М.: Мир, 1984.— 479 с. 16. Гловер Д. Клонирование ДНК. Методы.—M.: Мир, 1988.—538 с. 17. Sanger F., Miklen SCoulson A. R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors 11 Proc. Nat. Acad. Sci. USA.—1977.—74.—P. 5463—5467. 18. Atlas of Protein Sequence and Structure / Ed. Dayhoff M. О. 11 New York: Nat. Biomed. Res. Found, 1979.—P. 345—352. 19. Френкель-Конрад X. Химия и биология вирусов.— M.: Мир, 1972.—460 с. 20. Кузин А. М. Структурно-метаболическая гипотеза в радиобиологии.—M: Наука, 1970.— 222 с. 21. Гродзинский Д М. Биологическое узнавание в физиологических процессах растения / / Физиология и биохимия культурных растений.—1985.—17, № 3.—С. 211—219. 22. Levisohn R.t Spiegelman S. II Proc. Nat. Acad. Sci. USA.—1968.—60.—P. 866—872. 23. Levisohn R., Spiegelman S. 11 Ibid.—1969.—63.—P. 805—811. УДК 578.828.11:577.212.3 Поступила в редакцию 03.08.95

Сиквенс к ДНК С-концевой последовательности капсидного белка ВТМ-изолята томата из района радиологического загрязнения

Репозитарії

Схожі ресурси