Метод быстрой трансформации энтеробактерий и некоторые факторы, влияющие на его эффективность
Описаны две модификации метода замораживания-оттаивания для трансформации энтеробактерий: стандартная и упрощенная. Первая позволяет в течение 1 ч трансформировать Escherichia coli IM109 и Klebsiella oxytoca VN13 с эффективностью до 2,5·10⁵ трансформантов на 1 мкг ДНК. Вторая дает возможность за 5 м...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Дата: | 1992 |
| Автори: | , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1992
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154318 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Метод быстрой трансформации энтеробактерий и некоторые факторы, влияющие на его эффективность / М.Ф. Алексеев, Н.В. Гуньковская // Биополимеры и клетка. — 1992. — Т. 8, № 3. — С. 46-50. — Бібліогр.: 13 назв. — рос, укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859475372762988544 |
|---|---|
| author | Алексеев, М.Ф. Гуньковская, Н.В. |
| author_facet | Алексеев, М.Ф. Гуньковская, Н.В. |
| citation_txt | Метод быстрой трансформации энтеробактерий и некоторые факторы, влияющие на его эффективность / М.Ф. Алексеев, Н.В. Гуньковская // Биополимеры и клетка. — 1992. — Т. 8, № 3. — С. 46-50. — Бібліогр.: 13 назв. — рос, укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Биополимеры и клетка |
| description | Описаны две модификации метода замораживания-оттаивания для трансформации энтеробактерий: стандартная и упрощенная. Первая позволяет в течение 1 ч трансформировать Escherichia coli IM109 и Klebsiella oxytoca VN13 с эффективностью до 2,5·10⁵ трансформантов на 1 мкг ДНК. Вторая дает возможность за 5 мин трансформировать эти штаммы с эффективностью 1·10⁴ трансфорцантов на 1 мкг ДНК. Модификации были успешно использованы для трансформации Enterobacter cloaceae ССМ1902, Е. aerogenes ССМ2531 и Erwihia carotovora subsp. carotovora ИМВ8351.
Описано дві модифікації методу заморожування – відтавання для трансформації єнтеробактерій: стандартна та спрощена. Перша дозволяє на протязі години трансформувати Escherichia coli JM109 і Klebsiella oxytoca VN13 з ефективністю до 2,5·10⁵ трансформантів на 1 мкг ДНК. Друга дає можливість за 5 хв трансформувати ці штами з ефективністю 1·10⁴ трансформантів на 1 мкг ДНК. Модифікації були успішно використані для трансформації Enterobacter cloaceae ССМ1902, Е. aerogenes ССМ2531 і Erwinia carotovora subsp. carotovora 1MB 8351.
Standard and simplified modifications of freese-thaw method for enterobacteria transformation are described. First enables one to transform E. coli JM109 and K. oxytoca VN13 within 1 hour with an efficiency of about 2.5·10⁵ transformants per microgram of plasmid pUC4k DNA. Simplified modification gives an efficiency of 1·10⁴ transformants per microgram of pUC4k DNA within 5 min. Both modifications were successfully applied for the transformation of Enterobacter cloaceae JMV8351.
|
| first_indexed | 2025-11-24T11:38:37Z |
| format | Article |
| fulltext |
11. White P. J., Kelly. В. Diaminopimelate decarboxylase (£. coli) // Ibid.—1971.—17„
N 1,— P. 140—145.
12. Work E. Diaminopimelic acid // Ibid.— 1963.— 6, N 3,—P. 624—634.
13. Баздырева M. H., Куцева JI. С. Спёктрофотометрический метод определения лизи-
на в культуральиой жидкости Brevibdcterium 22 / / Прикл. биохимия и микробио-
логия.— 1974,— 10, № 5,— С. 756—760.
14. Kalcheva Е. О., Faiziev М. М„ Maluta S. S. The isolation and comparative analysis
of diaminopimelate decarboxylases from Streptococcus bovis and Bacillus subtitis/l'
Biochem. and Biotechnol. Electronic Express.—1991.— 1, N 4,—P. 7—14.
15. Pouzitle 'kolonizacneho preparatu Amylastim v stimulacii bachoroveho typu traveni»
mlidat prezuvavcov j V. Kmet, G. I. Kalachnyuk, S. Konik et al.//Veter. Med.—
1987,— 32, N 5.— P. 705—709. •
16. DAP-decarbbxylase activity and lysine production by rumen bacteria /1. Styriak,
E. O. Kalcheva, V. Kmet, S. S. Maljuta // Arch. Anim. Nutr.—1991,—38,—P. 317—
323.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН Украины, Киев Получено 03.07.91
Ин-т микробиологии АН УзССР, Ташкент
Ин-т физиологии животных САН, Кошице, ЧСАР
УДК 577.2.08+579254.2
М. Ф. Алексеев, Н. В. Гуньковская
МЕТОД БЫСТРОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ
И НЕКОТОРЫЕ ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ
НА ЕГО ЭФФЕКТИВНОСТЬ
Описаны две модификации метдда замораживания-оттаивания для трансформации эн-
теробактерий: стандартная и упрощенная. Первая позволяет в течение I ч трансфор-
мировать Escherichia coli IM109 и Klebsiella oxytoca VN13 с эффективностью до
2,5-10s трансформантов на 1 мкг ДНК. Вторая дает возможность за 5 мин трансфор-
мировать эти штаммы с эффективностью 1-104 трансфорцантов на 1 мкг ДНК. Моди-
фикации были уЬпешно использованы для трансформации Enterobacter cloaceae
ССМ1902, Е. aerogenes ССМ2531 и Erwihia carotovora subsp. carotovora ИМВ8351.
Введение. Трансформация энтеробактерий плазмидной ДНК являете®
обычной процедурой в молекулярном клонировании. Однако относи-
тельно низкая трансформируемое^ природных штаммов Klebsiella
2] и других энтеробактерий является причиной того, что в эти орга-
низмы, как правило, вводятся готовые генноинженерные конструкции.
При такой организации экспериментов фактор времени играет большую
роль и, следовательно, проблема разработки быстрых, но достаточно
эффективных методов введения плазмидной ДНК в энтеробактерии яв-
ляется актуальной. Стандартные процедуры, используемые для приго-
товления компетентных клеток Klebsiella и других энтеробактерий
(обычно для этих целей используется метод, разработанный Cohen [3]г
и его модификации), занимают много времени. При этом способы дли-
тельного хранения компетентных клеток бактерий, отличных от Esche-
richia coli, разработаны слабо. Более того, обычно нет необходимости
(или возможности) хранить препараты компетентных клеток всех
штаммов, с которыми работают в лаборатории. Недавно Merrick et at.
[4] опубликовали модифицированный метод замораживания — оттаива-
нйя для трансформации Е. со И и Klebsiella. Несмотря на довольно вы-
сокую эффективность этого метода (до 7-104 трансформантов на 1 мкг
ДНК для К. aerogenes), о,н включает, в себя довольно длительные эта-
пы «разгонки» ночной культуры (2 ч) и инкубации клеток после оттаи-
вания (2—4 ч). Мы предлагаем две модификации этого метода: стан-
дартную и упрощенную. Последняя исключает использование обеих
этих стадий и позволяет в течение 5 мин произвести трансформацию
© М. Ф. АЛЕКСЕЕВ, Н. В. ГУНЬКОВСКАЯ, 1992
46 •' " . \ ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1992. Т. 8. № 3
E. coli и К. oxytoca с эффективностью около 1-10* трансформантов на
1 мкг ДНК. ; Л
Материалы и методы. В работе использовали штаммы Е. coli JM109'
(гес Al, end Al, gyr А96, thi, hsd R17, s'up E44, rel Al, A—, A (lac-proA,.
B), F', tra D36, lac IqZA-M15) [5] ; K- oxy-
toca VN13 — дикий тип, изолирована из ШюятяОа
почвы рисовых полей северного Вьетнама
[6]. Штаммы Enierobacter cloaceae
ССМ1902 (ССМ — Чехо-Словацкая коллек-
Рис. 1. Влияние температуры и скорости оттаивания
на эффективность трансформации: 1 — К. oxytoca
VN13, оттаивание в водяной бане; 2— то же в воз-
душном термостате; 3 — Е. coli JM109, оттаивание в ,
водяной бане; 4 — то же в воздушном термостате 0 в 20 30 40 tt
дня микроорганизмов), Е. aerogenes ССМ2531, Erwinia carotovora subsp.
carotovora ИМВ8351 (ИМВ — коллекция микроорганизмов Ин-та мик-
робиологии и вирусологии АН Украины) получены от О. Е. Жеребило.
Плазмида pUC4k [7] (любезно предоставлена С. Ю. Ермаковой, МГУ
им. Ломоносова) была очищена равновесным центрифугированием а
градиенте плотности CsCl, как описано в [8] .
Ниже приводятся протоколы стандартной^ и упрощенной модифи-
каций метода Merrjck et al [4].
С чашки со свежими (6—24 ч) колониями соскребите 1—-2 колонии
размером 2—3 мм или эквивалентное количество материала (старай-
тесь не захватить агар). Клетки суспендируйте в 100 мкл предвари-
тельно охлажденного до 0°С 0,1 М СаС12 в пластиковой центрифуж-
ной пробирке (1,55мл). В суспензию добавьте ДНК в объеме не более
10 мкл. После этого заморозьте клетки в жидком азоте (30—60 с) и
поместите на водяную баню (32 °С) на 2 мин для оттаивания. Далее
( с т а н д а р т н а я м о д и ф и к а ц и я ) клетки разведите 900 мкл LB,
инкубируйте L ч при 37 °С и высейте соответствующие разведения на
селективную чашку (при необходимости можно сконцентрировать клет-
,ки центрифугированием); ( у п р о щ е н н а я м о д и ф и к а ц и я) сразу
высейте все клетки или часть на селективную чашку.
Результаты и обсуждение. В л и я н и е к р а т к о в р е м е н н о г о
з а м о р а ж и в а н и я на ж и з н е с п о с о б н о с т ь к л е т о к . Опре-
деление, числа жизнеспособных клеток Е. coli. и К. oxytoca й суспензии
до и после замораживания при —196 °С показало, что титр клеток Е.
coli JM109 и К. oxytoca VN13 снижается соответственно на 13 и 50 %,
т. е. в меньшей степени, чем в работе Merrick et al. [4]. По-видимому,
это объясняется генетическими свойствами штаммов.
В л и я н и е т е м п е р а т у р ы и с к о р о с т и о т т а и в а н и я
н а э ф ф е к . т и в н о с т ь . т р а н с ф о р м а ц и и . Для определения вли-
яния температуру и скорости оттаивания на эффективность трансфор-
мации, клетки суспендировали в СаСЬ, смешивали с ДНК и заморажи-
вали в жидком азоте. Оттаивание производили в водяной бане (при
,0°С — 30 мин, при других t — 2 мин) или в воздушном термостате
(при 23°С— 10 мин; 30; 37°С — 8,мин). Результаты представлены на
рис. 1. Как. видно, размораживание клеток в воздушном термостате не
столь эффективно, как аналогичный процесс в водяной бане (по-види-
мому, вследствие более низкой скорости оттаивания). Оптимальная
температура оттаивания для обоих штаммов 32 °С.
В л и я н и е к о н ц е н т р а ц и и к л е т о к . Данные, иллюстриру-
ющие влияние концентрацйи клеток на эффективность трансформации,
представлены на рис. 2. Из них следует, что эффективность трансфор-
мации несколько падает при снижении концентрации клеток в суспен-
ISSN 0233-7667. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1992. Т.. 8. J* 3 4 7
зии для К. oxytoca VN13. Штамм Е. coli JM109 имеет оптимум кон-
центрации клеток около 1-10®.
В л и я н и е к в н ц е н т р а ц и и СаС12. Оптимальную концентра-
цию СаС12 определяли следующим образом: клетки Е. coli JM109 и К.
oxytoca VN13 суспендировали при 0°С в стерильной деионизованной
воде до концентрации 1,8-109 и 1,1-1010 кл/мл соответственно, смеши-
вали с ДНК и фасовали по 90 мкл в предварительно охлажденные пла-
Рис. 2. Влияние концентрации клеток на' эффективность трансформации: 1 — К. оху-
ioca VN13- 2 — Е. coli JM109
Рис. 3. Влияние инкубации' в СаС12 до замораживания на эффективность трансформа-
ции: 1 — К. oxytoca VN13; 2-Е. coli JM109
стиковые центрифужные пробирки (1,5 мл). В каждую пробирку до-
бавляли по 10 мкл стоковых 10-кратных растворов СаСЬ до концентра-
ции 12,5; 25; 50; 75\ 100 и 200 мМ. Эффективность трансформации ус-
танавливали после цикла замораживания — оттаивания и 1 ч инкуба-
ции в среде LB для экспрессии селективного маркера. Оптимальной для
Е. coli JM109 и К. oxytoca VN13 является концентрация СаС12 75 мМ.
В л и я н и е д о п о л н и т е л ь н о й и н к у б а ц и и в с р е д е
LB. Для его определения производили высевы из одной пробирки до и
после инкубации в LB в течение 1 ч при 37 °С. По нашим данным, та-
кая инкубация увеличивает количество трансформантов в 3—8,7 и 2,5—
10 раз соответственно" для К. oxytoca VN13 и Е. coli JM109. Это уве-
личение, по-видимому, является следствием адаптации бактериальных
клеток после стрессового воздействия, каковым является цикл замора-
живания— оттаивания, и того, что за этот период происходит экспрес-
сия селективного маркера.
В л и я н и е к о н ц е н т р а ц и и к л е т о к п р и д о п о л н и -
т е л ь н о й и н к у б а ц и и . Для определения влияния концентрации
клеток при дополнительной инкубации после оттаивания суспензии ее
разводили в 10 и 100 раз в среде LB и физиологическом растворе, ин-
кубировали разведения 1 ч при 37 °С и высевали на селективные чаш-
ки. Как при инкубации в LB, так и при инкубации в физиологическом
растворе эффективность трансформации увеличивалась в 1,6 и 1,8 ра-
за соответственно для К. oxytoca VN13 и Е. coli JM109 при разведении
в 100 раз по сравнению с разведением в 10 раз.
В л и я н и е и н к у б а ц и и в СаСЬ До з а м о р а ж и в а н и я .
Результаты, иллюстрирующие влияние инкубации в СаСЬ до замора-
живания на эффективность трансформации, представлены на рис. 3.
Как можно видеть из этого рисунка, введение в стандартный протокол
30-минутного периода инкубации в СаС12 до замораживания увеличи-
вает эффективность трансформации К. oxytoca VN13 и Е. coli JM109
соответственно в 4 и 3 раза.
В л и я н и е м а р к е р а , и с п о л ь з у е м о г о д л я с е л е к ц и и .
Е. coli JM109 трансформируется плазмидой pUC4k по маркеру Арг с
48 ISSN 0233-7667. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1992. Т.. 8. J* 3 48
частотой, вдвое большей, чем по маркеру Кт г . Мы не располагает ана-
логичными данными для Штамма К. oxytoca VN13 вследствие его при-
родной устойчивости к ампициллину в концентрации свыше 200 мкг/мл.
В л и я н и е т е м п е р а т у р ы з а м о р а ж и в а н и я оценивал^
следующим образом: клетки суспендировали в СаС12 при 0°С, смеши-
вали с ДНК, фасовали в предварительно охлажденные до 0°С сте-
рильные центрифужные пробирки (1,5 мл) и замораживали при соот-
ветствующей температуре. После размораживания клетки высевали на
селективные чашки.
Влияние температуры замораживания на эффективность трансформации
Режим замораживания
Эффективность трансформа-
ции (число трансфер м*нтов
на 1 мкг ДНК)
Режим замораживания
Е. coli JM109 JC. oxytoca
VMS
т20°С
стандартная модификация;
стандартная модификэций+ЗЮ мин инкубации в СаСЬ
д о замораживания;
упрощенная модификация
- 7 0 - С . '
стандартная модификация;»
стандартная модификациЗ+ЗО мин инкубации в СаСЬ
до замораживания»
упрощенная модификация
з л ' - д а
2,2- 10Р
25
7&
ilJ&'lO2
9Л& 1
1Э-103 •
з.в-к)3 "
43-но2
Merrick et al. установили, что температура заморажива!ния практи-
чески не оказывает влияния на эффективность трансформации {4]. По
нашим данным, глубокое замораживание при —20 и —70 °С в моро-
зильной камере гораздо менее эффективно, чем замораживание в жид-
ком азоте (таблица).
П р о ц е д у р а - з а м о р а ж и в а н и я — о т т а и в а н и я , впервые
примененная авторами [9] для индукции поглощения фаговой ДНК
клетками Е. coli и Proteus vulgaris, является составной частью многих
высокоэффективных методик трансформации Е. coli [10, 11]. Показано,
что эта процедура может быть использована для трансформации раз-
личных видов Klebsiella [4, 12], Pseudomonas putida, Salmonella ty-
phimurium LR5000 [4] и Agrobacterium tumefaciens [13]. Мы успешно
использовали описанные нами модификации метода 4] для трансфор-
мации Е. coli JM109, К. oxytoca VN13, Е. cloaceae ССМ1902, Е. aeroge-
nes ССМ2531, Е. carotovora subsp. carotovora ИМВ8351. При этом стан-
дартная модификация, практически равная по эффективности методу
Merrick et al. [4], позволяет сократить время, затрачиваемое на транс-
формацию, с 4—6 до 1 ч. Упрощенная модификация позволяет еще бо-
лее сократить вре^я (до 5 мйн). При этом эффективность трансформа-
ции несколько снижается. Описанные модификации чрезвычайно Удоб-
ны для введения готовых генноинженерных конструкций в клетки раз-
личных энтеробактерий и, по-видимому, тех штаммов Pseudomoncts и
Agrobacterium, которые могут быть трансформированы методом замо-
раживания— оттаивания.
S u m m a r y . Standard and simplified modifications of freese-thaw method for
«nterobacteria transformation are described. First enables one to transform E. coll
JM109 and K- oxytoca, VN13 within 1 hour with an efficiency of about 2.5-10s trans-
formers per microgram of plasmid pUC4k DNA. Simplified modification gives an effi-
ciency of 1 1 0 4 transformants per microgram of pUC4k DNA within 5 min. Both modi-
fications were successfully applied for the transformation of Enterobactera cloaceae'
fications were successfully applied for the transformation of Enterobacter cloaceae
JMV8351.
ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1992. Т. 8. № 3 4 - 2-55 49
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Matsumoto Н., Tasaki Г. Genetic recombination in Klebsiella pneumoniae // Jap. J,
Microbiol.—1970,—14, N 2,—P. 129—141.
2. Montgomerie J. Z. Epidemiology of Klebsiella and hospital-associated infections//
Rev. Infect. Diseases.— 1979.— 1, N 5,—P. 736—753.
3. Cohen S. N., Chang A. C. Y., fisu L. Nonchromosomal antibiotic resistance in bacte-
ria: genetic transformation of Escherichia coll by #-f actor DNA//Proc. Nat. Acad.
Sci. USA.—1972,— 69, N 8,—P. 2110—2114.
4. Merrick M-, Gibbips J., Post gate I. A rapid and efficient method for plasmid transfor-
mation of Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli I I J. Gen. Microbiol.— 1987.—
183, N 8.—P. 2053—2057.
5. Клонирование ДНК. Методы / Под ред. Д. Гловера.— М : Мир, 1988.— 538 с. .
6. Азотфиксирующие бактерия. клонируют ксилему корня риса / Т . Н. X. Нгуен,
Т. Н. Б. Тон, Б. А. Тарасенко и др.//Биополимеры и клетка,— 1989 — 5.— № 2.—
C. 97—99.
7. Vieira J., Messing J. The pUC plasmids, an M13mp7-derived system for insertion
mutagenesis and sequencing with synthetic universal ,primers // Gene.—1982.—.19,
N 3.—P. 259—268. *
8. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. — М : Мир,
1984,— 480 с.
9. Frozen-thawed bacteria as recipients of isolated coliphage DNA / S. Y. Dityatkin,
К. V. Lisovskaya, N. N. Pfnzn ava, B. N. Iliashenco // Biochim. et biophys. acta^-
1972.— 281, N 2,— P. 319—323.
10. Hdnahan D. Studies on transformation of Escherichia coli with plasmids / / 1 Mol.
Biol.— 1983,— IBB, N 4, 5.— P. 557—58a
11. Inoue H., Nojima H., Okayama H. High efficiency transformation of Escherichia coli
with plasmids / Gene.—1990.— 93, N 1.— P. 23.
12. Camprubi S., Regue M„ Tomas J. The influence of lipopolysaccharide on the trans-
formation efficiency of Klebsiella pneumoniae // Can. J. Microbiol. —1989.— 35,
N 7.—P. 735—737.
13. Transfection and transformation of Agrobacterium tumefaciens / M. Holsters,
D. de Waele, A. Depipicker et al.//Mol. and Gen. Genet.—1978,—163, N 2 , -
P. 181—187. v
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН Украины, Киев Получено 17. 09.91
кп ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1992. Т. 8. «к 3
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-154318 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-11-24T11:38:37Z |
| publishDate | 1992 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Алексеев, М.Ф. Гуньковская, Н.В. 2019-06-15T13:47:31Z 2019-06-15T13:47:31Z 1992 Метод быстрой трансформации энтеробактерий и некоторые факторы, влияющие на его эффективность / М.Ф. Алексеев, Н.В. Гуньковская // Биополимеры и клетка. — 1992. — Т. 8, № 3. — С. 46-50. — Бібліогр.: 13 назв. — рос, укр. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000326 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154318 577.2.08+579254.2 Описаны две модификации метода замораживания-оттаивания для трансформации энтеробактерий: стандартная и упрощенная. Первая позволяет в течение 1 ч трансформировать Escherichia coli IM109 и Klebsiella oxytoca VN13 с эффективностью до 2,5·10⁵ трансформантов на 1 мкг ДНК. Вторая дает возможность за 5 мин трансформировать эти штаммы с эффективностью 1·10⁴ трансфорцантов на 1 мкг ДНК. Модификации были успешно использованы для трансформации Enterobacter cloaceae ССМ1902, Е. aerogenes ССМ2531 и Erwihia carotovora subsp. carotovora ИМВ8351. Описано дві модифікації методу заморожування – відтавання для трансформації єнтеробактерій: стандартна та спрощена. Перша дозволяє на протязі години трансформувати Escherichia coli JM109 і Klebsiella oxytoca VN13 з ефективністю до 2,5·10⁵ трансформантів на 1 мкг ДНК. Друга дає можливість за 5 хв трансформувати ці штами з ефективністю 1·10⁴ трансформантів на 1 мкг ДНК. Модифікації були успішно використані для трансформації Enterobacter cloaceae ССМ1902, Е. aerogenes ССМ2531 і Erwinia carotovora subsp. carotovora 1MB 8351. Standard and simplified modifications of freese-thaw method for enterobacteria transformation are described. First enables one to transform E. coli JM109 and K. oxytoca VN13 within 1 hour with an efficiency of about 2.5·10⁵ transformants per microgram of plasmid pUC4k DNA. Simplified modification gives an efficiency of 1·10⁴ transformants per microgram of pUC4k DNA within 5 min. Both modifications were successfully applied for the transformation of Enterobacter cloaceae JMV8351. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Генно-инженерная биотехнология Метод быстрой трансформации энтеробактерий и некоторые факторы, влияющие на его эффективность Метод швидкої трансформації ентеробактерій та деякі фактори, що впливають на його ефективність Method for rapid transformation of enterobacteria and some factors influencing its efficiency Article published earlier |
| spellingShingle | Метод быстрой трансформации энтеробактерий и некоторые факторы, влияющие на его эффективность Алексеев, М.Ф. Гуньковская, Н.В. Генно-инженерная биотехнология |
| title | Метод быстрой трансформации энтеробактерий и некоторые факторы, влияющие на его эффективность |
| title_alt | Метод швидкої трансформації ентеробактерій та деякі фактори, що впливають на його ефективність Method for rapid transformation of enterobacteria and some factors influencing its efficiency |
| title_full | Метод быстрой трансформации энтеробактерий и некоторые факторы, влияющие на его эффективность |
| title_fullStr | Метод быстрой трансформации энтеробактерий и некоторые факторы, влияющие на его эффективность |
| title_full_unstemmed | Метод быстрой трансформации энтеробактерий и некоторые факторы, влияющие на его эффективность |
| title_short | Метод быстрой трансформации энтеробактерий и некоторые факторы, влияющие на его эффективность |
| title_sort | метод быстрой трансформации энтеробактерий и некоторые факторы, влияющие на его эффективность |
| topic | Генно-инженерная биотехнология |
| topic_facet | Генно-инженерная биотехнология |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154318 |
| work_keys_str_mv | AT alekseevmf metodbystroitransformaciiénterobakteriiinekotoryefaktoryvliâûŝienaegoéffektivnostʹ AT gunʹkovskaânv metodbystroitransformaciiénterobakteriiinekotoryefaktoryvliâûŝienaegoéffektivnostʹ AT alekseevmf metodšvidkoítransformacííenterobakteríitadeâkífaktoriŝovplivaûtʹnaiogoefektivnístʹ AT gunʹkovskaânv metodšvidkoítransformacííenterobakteríitadeâkífaktoriŝovplivaûtʹnaiogoefektivnístʹ AT alekseevmf methodforrapidtransformationofenterobacteriaandsomefactorsinfluencingitsefficiency AT gunʹkovskaânv methodforrapidtransformationofenterobacteriaandsomefactorsinfluencingitsefficiency |