Возможность экспрессии клонированного гена эритропоэтина человека в клетках линии СНО
Ранее нами проведен скрининг геномной библиотеки ДНК человека и идентифицирован рекомбинантннй фаг, содержащий ген эритропоэтина человека — основного фактора дифференцировки клеток эритроидного ряда. В настоящей работе получена плазмида рSVEро, содержащая ген эритропоэтина под контролем промотора ра...
Saved in:
| Published in: | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Date: | 1989 |
| Main Authors: | , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1989
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154407 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Возможность экспрессии клонированного гена эритропоэтина человека в клетках линии СНО / И.А. Крамерова, М.Г. Зеленин, Μ.М. Воронцова, С.Л. Колобков, Т.Е. Монакова // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 2. — С. 47-51. — Бібліогр.: 25 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859981083492220928 |
|---|---|
| author | Крамерова, И.А. Зеленин, М.Г. Воронцова, М.М. Колобков, С.Л. Монакова, Т.Е. |
| author_facet | Крамерова, И.А. Зеленин, М.Г. Воронцова, М.М. Колобков, С.Л. Монакова, Т.Е. |
| citation_txt | Возможность экспрессии клонированного гена эритропоэтина человека в клетках линии СНО / И.А. Крамерова, М.Г. Зеленин, Μ.М. Воронцова, С.Л. Колобков, Т.Е. Монакова // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 2. — С. 47-51. — Бібліогр.: 25 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Биополимеры и клетка |
| description | Ранее нами проведен скрининг геномной библиотеки ДНК человека и идентифицирован рекомбинантннй фаг, содержащий ген эритропоэтина человека — основного фактора дифференцировки клеток эритроидного ряда. В настоящей работе получена плазмида рSVEро, содержащая ген эритропоэтина под контролем промотора ранних генов вируса SV40. В культуральной жидкости клеток линии СНО, трансфецированных плазмидой рSVEро, обнаружена эритропоэтическая активность. Плазмида рSVEро может быть использована в экспериментах по генотерапии соматических клеток.
Раніше нами проведено скринінг геномної бібліотеки ДНК людини і ідентифіковано рекомбінантний фаг, що містить ген еритропоетину людини – основного фактора диференціювання клітин еритроїдного ряду. Отримано плазміду рSVEро, що містить ген еритропоетину під контролем промотору ранніх генів вірусу SV40. У культуральній рідині клітин лінії СНО, трансфекованих плазмідою рSVEро, виявлено еритропоетичну активність. Плазміда рSVEро може бути використана в експериментах з генотерапії соматичних клітин.
In the previous study the human gene encoding erythropoietin, the principal factor of erythroid cells differentiation, has been isolated from human genomic phage library. In this paper the plasmid pSVEpo containing erythropoietin gene under the control of promoter of early SV40 genes is obtained. The biologically active erythropoietin has been detected in conditioned media from CHOtk- cells transfected with pSVEpo plasmid. The plasmid pSVEpo may be used in somatic gene therapy experiments.
|
| first_indexed | 2025-12-07T16:26:21Z |
| format | Article |
| fulltext |
Авторы чрезвычайно благодарны А. А. Ковальской за предостав-
ленный ею олигоиуклеотидиый зонд.
CLONING OF HUMAN a r A N T I T R Y P S I N GENE
AND POSSIBLE ASPECTS OF ITS UTILIZATION
N. S. Neznanovf I. V. Makarovat I. A. Kramerovaf K. G. Gazaryan
Institute of Molecular Genetics, Academy of Sciences of the USSR, Moscow
Institute of Medical Biotechnology, Ministry of Public Health, Moscow
S u m m a r y
The human a r a n t i t r y p s i n gene has been cloned. A cDNA molecule, containing almost
the whole coding sequence is isolated. Nucleotide sequence is determined for the regu-
latory region of ct]AT gene, responsible for its expression in the liver. The possibility to
use cloned genes for the gene therapy of some diseases is discussed.
1. Fagerhol Μ. KCox D. W. The Pi polymorphism: genetic, biochemical and clinical
aspects of human αϊ a n t i t r y p s i n / / A d v . Hum. Genet.—1981.—11, N 1 — P . 1—62.
2. Complete sequence of the cDNA for human αϊ antitrypsin and the gene for the S
v a r i a n t / G . L. Long. T. Chandra, S. L. C. Woo et al. / / Biochemistry.— 1984,—23,
N 21.—P. 4828—4837.
3. αϊ antitrypsin deficiency detection by direct analysis of the mutation in the g e n e /
V. J. Kidd, R. B. Wallace, K. Itakura, S. L. C. W o o / / N a t u r e . — 1983,—304, N 5923.—
P. 230—234.
4. Woo S. L. C. A sensitive and rapid method for recombinant phage s c r e e n i n g / / M e t h .
Enzymol.— 1979.—68.— P. 389—405.
5. Sanger F.f Nicklen S.f Coulson A. R. DNA sequencing with chain-terminating inhi-
bitors / / Proc. Nat. Acad. Sci. USA.— 1977.—74, N 12.—P. 5463—5467.
6. The isolation and characterization of a linked δ- and β-globin gene from a cloned
library of human DNA / R. W, Lawn, E. F. Fritsch, R. C. Parker et al. / / Cell.—
1978.—15, N 4 .—P. 1157—1174.
7. Perlino E., Cortese R.f Ciliberto G. The human αϊ antitrypsin gene is transcribed
from the two different promoters in macrophages and hepatocvtes / / The EMBO J.—
1987.—6, N 9 .—P. 2767—2771.
8. Ciliberto G., Dente L., Cortese R. Cell-specific expression of a transfected human OSi
antitrypsin g e n e / / C e l l . — 1985.—41, N 2 .—P. 531—540.
9. Expression of the approte inase inhibitor gene in human monocytes and macropha-
ges / D. H. Perlmutter, F. Cole, P. Kilbridge et al. / / Proc. Nat. Acad. Sci. USA.—
1985.—82, N 3 .—P. 795—799.
10. Carrell R. Therapy by instant evo lu t i on / /Na tu re .— 1984.—312, N 5989 — P . 14.
11. Synthesis in yeast of a functional oxidation-resistant mutant of human a\ antitryp-
s i n / S . Rosenberg, P. J. Barr, R. C. Najarian et a l . / / I b i d . — N 5989.—P. 77—80.
Ин-т молекуляр. генетики АН СССР, Москва Получено 10.12.87
Ин-т биомед. технологии МЗ СССР, Москва
У Д К 612.349.7.018
ВОЗМОЖНОСТЬ ЭКСПРЕССИИ КЛОНИРОВАННОГО ГЕНА
ЭРИТРОПОЭТИНА ЧЕЛОВЕКА В КЛЕТКАХ ЛИНИИ CHO
И. А. Крамерова, М. Г. Зеленин,
Μ. М. Воронцова, С. Л. Колобков, Т. Е. Монакова
Введение. В настоящее время идентифицировано множество белковых
факторов, принимающих участие в контроле пролиферации и диффе-
ренцировки кроветворных клеток — интерлейкины (IL-1, 2, 3 и др.),
факторы, стимулирующие колониеобразование гранулоцитов (G-CSF),
гранулоцитов и макрофагов (GM-CSF), эритроидных клеток (ЕРА) и
др. Факторы, стимулирующие образование колоний (IL-3, G-CSF,
GM-CSF, EPA и др.), как правило, не специфичны по отношению к
ранним предшественникам различных ростков кроветворения. В част-
Б И О П О Л И М Е Р Ы И К Л Е Т К А — 1989.—Т. 5, Л° 2 4* 4 7
пости, пролиферация ранних предшественников эритроидных клеток
стимулируется GM-CSF, IL-3 и EPA [1—3].
Наиболее специфичным фактором, который, по-видимому, запуска-
ет дифференцировку клеток эритроидного ряда, является эритропоэтин
[4]. Это гликопротеидный гормон с молекулярной массой 34000, из
которой на долю углеводного компонента приходится примерно 50 %
[5]. Основное место синтеза эритропоэтина во взрослом организме —
почки [6], у эмбриона — печень [7]. Концентрация эритропоэтина в
Плазмида pSVEpo. HindIII-BgiII/BamHI-фрагмент со-
держит полную кодирующую последовательность гена
эритропоэтина человека; PVUI I-Hindi 11-фрагмент —
промотор ранних генов вируса SV40; BatnHI/BglII-
EcoRI-фрагмент — З'-концевая последовательность гена
большого Т-антигена вируса SV40, содержащая сигна-
лы полиаденилирования; ECORI-PUUII-фрагмент — плаз-
мидная часть, содержащая ген устойчивости к ампицил-
лину. Размер плазмиды 6,7 тыс. пар нуклеотидов
Expression vector for erythropoietin {Еро) gene. pSVEpo
(6, 7 kb) contains the complete coding region of human
Epo gene (Hindi 11-BglI I/BamHI f r agment ) ; simian vi-
rus 40 early promoter (PvuII-HindIII f r agment ) ; the 3 '
terminal region of SV40 large T ant igene gene, inclu-
ding polyadenylation signals (BamHI/BglII-EcoRI f rag-
ment) ; and plasmid sequence (ECORI-PVUII f ragment)
плазме низкая ((15—30) · 10~3 ед/мл) [8], что вероятно, объясняется вы-
сокой чувствительностью к нему компетентных эритроидных клеток [9,
10]. Снижение уровня циркулирующего эритропоэтина приводит к раз-
витию анемий [Πι]. Попытки использовать эритропоэтин в качестве
терапевтического средства для лечения анемий у экспериментальных
животных дали положительные результаты [12]. Низкое содержание
эритропоэтина в физиологическом материале и трудности, связанные с
выделением больших количеств высокоочищенного препарата, долгое
время ограничивали применение эритропоэтина в медицинской практике.
Клонирование гена эритропоэтина человека и создание эффектив-
ных продуцентов эритропоэтина на основе клеток животных позволило
получать большие количества высокоочищенного гормона [5, 13, 14].
Клинические испытания препарата па пациентах с анемическими синд-
ромами дали положительные результаты [15, 16].
Ранее мы провели скрининг библиотеки геномной Д Н К человека,
используя в качестве зонда 17-члеппый олигонуклеотид, гомологичный
фрагменту гена эритропоэтина человека. С помощью рестрикционного
картирования и определения пуклеотидной последовательности фраг-
мента ДНК, содержащего область гомологии с зондом, было показано,
что идентифицированный клон действительно содержит геи эритропоэ-
тина человека [17].
Материалы и методы. Для псреклонпрования гена эритропоэтина человека в
плазмидном векторе pSV2gpt [18] провели лигирование HindIII-BglII-фрагментов вы-
деленного фагового клона и плазмиды pSV2gtp, обработанной рестриктазами HindIII
и BamIII (рисунок). Клоны, содержащие ген эритропоэтина, отбирали по гибридиза-
ции in situ на бактериальных колониях. Зонд метили с помощью [·γ-32Ρ]ΑΤΦ (ВО
«Изотоп», Ташкент, отд-ние) и полинуклеотидкиназы до удельной активности 5 Х
X10 7 ими-мин - 1 · м к г - 1 олигонуклеотида. Приготовление фильтров и гибридизацию осу-
ществляли по стандартной методике [19], за исключением того, что гибридизацию и
отмывку вели при 49 °С.
В экспериментах по трансфекции использовали линию клеток CHOtk-, получен-
ную в лаборатории. Клетки выращивали на чашках Петри в смеси сред 199 и Игла
( 1 : 1 ) с добавлением 10 % сыворотки крупного рогатого скота. Транзиторную транс-
фекцию проводили в чашках Петри диаметром 10 см. На 1 чашку вносили 7-Ю5 кле-
ток. Через сутки среду меняли на DMEM («Flow laboratory», Англия) с 10 % эмбри-
ональной телячьей сыворотки и вносили кальций-фосфатный преципитат [20], содер-
жащий 10 мкг плазмиды pSVEpo и 10 мкг Д Н К из тимуса теленка в качестве носи-
4 8 Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА— 1989.—Т. 5, Л° 2 4* 48
теля. Через 18 ч среду меняли на ростовую и оставляли на 48 ч. Затем культуральную
жидкость сливали, центрифугировали при 400 g в течение 10 мин и супернатант ис-
пользовали для биологического тестирования на активность эритропоэтина. В качестве
отрицательного контроля использовали культуральную жидкость клеток CHOtk-, тран-
сфецированных плазмидой pSV2gpt.
Эритропоэтическую активность тестировали по индукции образования бензидин-
иоложительных колоний в культуре костного мозга мышей in vitro [21], а также по
включению 3Н-тимидина в клетки селезенки мышей с фенилгидразиновой анемией [22].
В качестве положительного контроля использовали сыворотку мышей с индуцирован-
ной анемией, содержащей 5—10 ед/мл эритропоэтина [23].
Результаты и обсуждение. Ген эритропоэтина человека в составе
HindIII-BglII-фрагмента был включен в плазмидный вектор pSV2gpt
[19]. Полученная плазмида pSVEpo содержит ген эритропоэтина чело-
века под контролем промотора ранних генов вируса SV40 (рисунок).
На прилегающем к З'-концу гена участке расположена З'-концевая по-
следовательность гена большого Т-антигена вируса SV40.
Плазмиду pSVEpo использовали для трансфекции клеток из яични-
ка китайского хомячка (линия CHOtk-) для изучения транзиторной
экспрессии гена эритропоэтина человека под контролем промотора ви-
руса SV 40. Культуральную жидкость через 48 ч после трансфекции
тестировали на присутствие эритропоэтической активности, как указано
в разделе «Материалы и методы».
При использовании двух методов тестирования: 1-й — по включе-
нию 3Н-тимидипа в спленоциты [22] и 2-й — по образованиюэритроид-
пых колоний в культуре клеток костного мозга [21] показано, что клет-
ки CHOtk-, трансфецированные плазмидой pSVEpo, секретируют в
среду эритропоэтин с удельной активностью 0,8—1,5 и 0,5—1 ед/мл
соответственно. Расчет количества биологически активного эритропоэ-
тина основан на сравнении с кривой титрования сыворотки, полученной
из селезенки мышей с фенилгидразиновой анемией, содержащей 7 ед/мл
эритропоэтина.
Таким образом, плазмида pSVEpo может быть использована для
экспрессии гена эритропоэтина человека в трансфецированных клетках
животных. Получение продуцента эритропоэтина человека на основе
клеток животных является важной задачей в связи с возможностью
использования эритропоэтина непосредственно в качестве терапевтиче-
ского средства [15, 16]. Однако количество эритропоэтина, необходи-
мое для лечения хронических анемий (в частности анемий, связанных
с хронической почечной недостаточностью) чрезвычайно велико (до
500 ед. препарата на 1 кг веса больного человека) [\Щ. Очевидно, что
более эффективным в случаях, когда требуются не разовые, а система-
тические инъекции препарата, явилось бы введение в организм боль-
ного клеток, продуцирующих эритропоэтин.
В настоящее время разработаны методы, позволяющие с высокой
эффективностью вводить новую генетическую информацию в геном со-
матических клеток животных. Один из подходов основан на применении
регровируспых векторов. В случае исправления дефектов, связанных с
недостаточным уровнем экспрессии генов, кодирующих секретируемые
биологически активные вещества (к которым относится и эритропоэ-
тин), применение ретровирусных векторов является перспективным.
Показана принципиальная возможность инфекции клеток костного
мозга in vitro ретровирусными векторами, в которых ген устойчивости
к антибиотику G4I8 находится под контролем различных вирусных про-
моторов [24]. Было обнаружено, что при использовании подходящего
промотора (в случае клеток костного мозга — промотора гена тимидин-
киназы вируса герпеса) происходит эффективная экспрессия гена и ин-
теграция Д Н К вектора в геном клеток костного мозга, причем последу-
ющие генерации клеток продолжают экспрессировать ген устойчивости
к G418 на высоком уровне. При пересадке стволовых клеток, инфици-
рованных ретровирусным вектором, в селезенке мыши обнаруживали
Б И О П О Л И М Е Р Ы И К Л Е Т К А — 1 9 8 9 . - Т . 5, К° 2 4 - 8-930 49
большое количество устойчивых к G418 клеток в течение по крайней
мере 8 мес.
Перспективным представляется применение метода электростиму-
ляции для введения генетического материала в первичные культуры
клеток [25]. Эффективность трапсфекции при использовании электро-
стимуляции возрастает примерно в 100 раз по сравнению с другими
методами трансфекции клеток.
Наряду с клетками костного мозга в «экспериментальной генотера-
пии» используют также фибробласты кожи [24]. Фибробласты челове-
ка относительно легко культивировать in vitro, их можно подвергать
биохимической селекции, препаративно наращивать полученные клоны
и использовать их для трансплантации. Полученная в настоящей работе
плазмида pSVEpo перспективна для использования с целью трансфек-
ции первичной культуры фибробластов пациентов с недостатком цир-
кулирующего эритропоэтина и последующей аутотрансплантации.
E X P R E S S I O N OF THE CLONED HUMAN
ERYTHROPOIETIN GENE IN CHO CELLS
I. A. Kramerova, M. G. Zelenin, M. M. Vorontsova
S. L. Kolobkov, T. E. Monakova
Research Inst i tute of Biomedical Technology,
Ministry of Public Heal th of the USSR, Moscow
S u m m a r y
In the previous study the human gene encoding erythropoietin, the principal factor of
erythroid cells differentiat ion, has been isolated from human genomic phage library.
In this paper the plasmid pSVEpo containing erythropoietin gene under the control of
promoter of early SV40 genes is obtained. The biologically active erythropoietin has-
been detected in conditioned media from CHOtk- cells t ransfected with pSVEpo plasmid*
The plasmid pSVEpo may be used in somatic gene therapy experiments.
1. Genomic cloning, characterization and mult i l ineage growth-promoting activity of
human GM-CSF / K. Kaushansky, P. J. O ' Hara , K. Berkner, G. M. Segal / / Proc. Nat .
Acad. Sci. USA.— 1986.—83, N 10.—P. 3101—3105.
2. Human IL-3 (Multi SCF) : identification by expression cloning of a novel hematopoi-
etic growth factor related to murine I L - 3 / Y . - C . Yang, A. B. Ciarletta, P. A. Temple,
M. P. C h u n g / / C e l l . — 1986.—47, N 1 .—P. 3—10.
3. Molecular characterization and expression of the gene encoding human erythroid-po-
tent ia t ing a c t i v i t y / J . C. Gasson, D. W. Golde, S. E. Kaufman et al. / / Nature.—
1985.—315, N 6022.—P. 768—771.
4. Goldwasser E. Erythropoietin and differentiat ion of red blood c e l l s / / F e d . Proc.—
1975 . -34 , N 13.—P. 2285—2292.
5. Cloning and expression of the human erythropoietin gene / F. K. Lin, S. Suggsr
C.-H. Lin et al. / / Proc. Nat. Acad. Sci. USA.— 1985.—82, N 22 .—P. 7580—7584.
6. Ersleu A. J. In vitro production of erythropoietin by kidneys perfused with a serum-
free s o l u t i o n / / B l o o d — 1974.—44, N 1.—P. 77—85.
7. Fried W. The liver as a sourse of extrarenal erythropoietin production / / Ibid —
1972.—40, N 1 .—P. 671—677.
8. Cotes P. M. Immunoreact ive erythropoietin in serum. 1. Evidence for the validi ty
of the assay method and physiological relevance of e s t i m a t e s / / B r i t . J. Haematol .—
1982.—50, N 2 .—P. 427—438.
9. Krantz S. B., Goldwasser E. Specific binding of erythropoietin to spleen cells in-
fected with anemia strain of Friend v i r u s / / P r o c . Nat. Acad. Sci. USA.— 1984—81
N 23.— P. 7574—7578.
10. Mufson R. A., Gesner T. G. Binding and internalization of recombinant human eryth-
ropoietin in murine erythroid precursor c e l l s / / B l o o d — 1987.—69, N 5 . — P 1585—
1590.
11. Plasma erythropoietin in health and d i s e a s e / A . J. Erslev, J. Саго, O Miller R Sil-
ver / / A n n . Clin. Lab. Sci.— 1980.—10, N 4 . — P . 250—257.
12. Eschbach /. W., Mladenouic J.f Garcia / . F. The anemia of chronic renal fai lure in
sheep. Response to erythropoietin-rich plasma in vivo / / J . Clin. Invest — 1984—74
N 2 . — P . 434—441.
13. Isolation and characterization of genomic and cDNA clones of human erythropoie-
tin / K. Jacobs, C. Shoemaker, R. Rudensdorf , S. D. N e i l l / / N a t u r e . — 1985 —313
N 6005,— P. 806—810. '
50 Б И О П О Л И М Е Р Ы И К Л Е Т К А — 1989.—Т. 5, Л° 2 4* 50
14. Human erythropoietin gene: high level expression in stably transfccted mammalian
cells and chromosomal localization / J. S. Powell, IC L. Berkner. R. V. Lebo, J. W.
A d a m s o n / / P r o c . Nat. Acad. Sci. USA.— 1986.—83, N 17.—P. 6465—6469.
15 Correction of the anemia of end-stage renal disease with recombinant human eryth-
ropoietin / / N e w Eng. J. Med.— 1987.—316, N 2,—P. 73—78.
16. Effect of human erythropoietin derived from recombinant DNA on the anemia of pa-
tients maintained by chronic hacmodialysis / C. G. Winearls, D. 0 . Oliver, M. S. Pip-
pard et a l . / /Lance t .— 1986.—2, N 8517.—P. 1175—1178.
17. Клонирование гена эритропоэтина человека / И. А. Крамерова, Н. С. Незнанов,
В. М. Божков и др. / / Молекуляр. генетика.— 1988.— № 7.— С. 26—28.
18. Mulligan R. Cv Berg P. Selection for animal cells that express Escherichia coli gene
coding for xantine-guanine phosphoribosyltransferase / / Proc. Nat. Acad. Sci. USA.—
1981.-78, N 4.—P. 2072—2076.
19. Grunstein M., Hogness D. Colony hybridization: a method for the isolation of clo-
ned DNAs that contain a specific gene / / Ibid.— 1975.—72, N 10.—P. 3961—3965.
20. Graham F. L., Van der Eb A. J. A new technique for the assay of infectivity of hu-
man adenovirus 5 DNA//Viro logy .— 1973.—52, N 2.—P. 456—467.
21. Монакова Т. Ε. Гомеостатические процессы в изолированных системах и организ-
мах.— Красноярск : Медицина, 1983.—210 с.
22. Krysial G. A simple microassay for erythropoietin based on 3H-thimidine incorporati-
on into spleen cells treated with phenylhydraz ine / /Exp. Hematol.— 1983.—11, N 7.—
P. 649—660.
23. Radioimmunoassay of erythropoietin: circulating levels in normal and polycythemic
human being / J . F. Garcia, S. Ebbe, L. Hollander et a l . / / J . Lab. and CHn. Med.—
1982,—99, N 6.—P. 624—635.
24 Modulation of gene expression in multiple hematopoietic cell leneages following ret-
roviral vector gene transfer / M.-C. Magli, J. E. Dick, D. Huszar et a l . / / P r o c . Nat.
Acad. Sci. USA.— 1987,—84, N 3.—P. 789—794.
25. Potter H., Weir L., Leder P. Enhancer-dependent expression of human immunoglobu-
lin genes introduced into mouse pre-B lymphocytes by electroporation / / Ibid.—
1984.-81, N 22,— P. 7161—7165.
НИИ биомед. технологии МЗ СССР, Москва Получено 10.12.87
УДК 577.212:577.352.27
ЭКСПРЕССИЯ β-ГАЛАКТОЗИДАЗЫ Escherichia coli
В ГЕПАТОЦИТАХ МЫШИ
И. Е. Костецкии, С. П. Шпилевая, JI. И. Лихачева,
Л. Г. Жарова, Д. М. Иродов, В. С. Кириллова, В. А. Кордюм
Введение клонируемых генов в отдельные органы и ткани взрослого ор-
ганизма является важным средством изучения их функционирования, а
также механизмов, регулирующих экспрессию этих генов, что позволяет
охарактеризовать работы в этом направлении как поиск путей генной
терапии. К настоящему времени достаточно хорошо разработаны мето-
ды трансформации эукариотических клеток in vitro (среди них Са-фос-
фатный, ДЭАЭ-декстраповый, электропорация, микроинъекция и др.).
Поэтому один из подходов в генной терапии основан на трансформации
in vitro извлеченных из организма животного клеток и после селек-
ции— их обратная трансплантация тому же животному [1—4]. Однако
наряду с очевидными достоинствами метода ретрансплантации клеток
животных в ряде случаев он не может применяться с достаточной эф-
фективностью, из-за чего прямая инъекция генетического материала
непосредственно в орган или ткань может оказаться предпочтительнее.
Так, при интраперитонеальной инъекции Са-фосфатного преципитата
Д Н К через сутки были обнаружены значительные количества чужерод-
ной Д Н К в животных тканях новорожденных крыс, особенно в печени
и селезенке [5, 6]. Экзогенная Д Н К активно транскрибировалась, и
экспрессия генов инсулина, человеческого гормона роста прослежива-
лась по белковым продуктам в печени и селезенке или по соответству-
ющим транскриптам.
Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА— 1989.—Т. 5, Л° 2 4* 51
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-154407 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T16:26:21Z |
| publishDate | 1989 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Крамерова, И.А. Зеленин, М.Г. Воронцова, М.М. Колобков, С.Л. Монакова, Т.Е. 2019-06-15T15:12:56Z 2019-06-15T15:12:56Z 1989 Возможность экспрессии клонированного гена эритропоэтина человека в клетках линии СНО / И.А. Крамерова, М.Г. Зеленин, Μ.М. Воронцова, С.Л. Колобков, Т.Е. Монакова // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 2. — С. 47-51. — Бібліогр.: 25 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0000A5 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154407 612.349.7.018 Ранее нами проведен скрининг геномной библиотеки ДНК человека и идентифицирован рекомбинантннй фаг, содержащий ген эритропоэтина человека — основного фактора дифференцировки клеток эритроидного ряда. В настоящей работе получена плазмида рSVEро, содержащая ген эритропоэтина под контролем промотора ранних генов вируса SV40. В культуральной жидкости клеток линии СНО, трансфецированных плазмидой рSVEро, обнаружена эритропоэтическая активность. Плазмида рSVEро может быть использована в экспериментах по генотерапии соматических клеток. Раніше нами проведено скринінг геномної бібліотеки ДНК людини і ідентифіковано рекомбінантний фаг, що містить ген еритропоетину людини – основного фактора диференціювання клітин еритроїдного ряду. Отримано плазміду рSVEро, що містить ген еритропоетину під контролем промотору ранніх генів вірусу SV40. У культуральній рідині клітин лінії СНО, трансфекованих плазмідою рSVEро, виявлено еритропоетичну активність. Плазміда рSVEро може бути використана в експериментах з генотерапії соматичних клітин. In the previous study the human gene encoding erythropoietin, the principal factor of erythroid cells differentiation, has been isolated from human genomic phage library. In this paper the plasmid pSVEpo containing erythropoietin gene under the control of promoter of early SV40 genes is obtained. The biologically active erythropoietin has been detected in conditioned media from CHOtk- cells transfected with pSVEpo plasmid. The plasmid pSVEpo may be used in somatic gene therapy experiments. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Дискуссии Возможность экспрессии клонированного гена эритропоэтина человека в клетках линии СНО Можливість експресії клонованого гена еритропоетину людину в клітинах лінії СНО Possibility of the expression of a cloned human erythropoietin gene in CHO cells Article published earlier |
| spellingShingle | Возможность экспрессии клонированного гена эритропоэтина человека в клетках линии СНО Крамерова, И.А. Зеленин, М.Г. Воронцова, М.М. Колобков, С.Л. Монакова, Т.Е. Дискуссии |
| title | Возможность экспрессии клонированного гена эритропоэтина человека в клетках линии СНО |
| title_alt | Можливість експресії клонованого гена еритропоетину людину в клітинах лінії СНО Possibility of the expression of a cloned human erythropoietin gene in CHO cells |
| title_full | Возможность экспрессии клонированного гена эритропоэтина человека в клетках линии СНО |
| title_fullStr | Возможность экспрессии клонированного гена эритропоэтина человека в клетках линии СНО |
| title_full_unstemmed | Возможность экспрессии клонированного гена эритропоэтина человека в клетках линии СНО |
| title_short | Возможность экспрессии клонированного гена эритропоэтина человека в клетках линии СНО |
| title_sort | возможность экспрессии клонированного гена эритропоэтина человека в клетках линии сно |
| topic | Дискуссии |
| topic_facet | Дискуссии |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154407 |
| work_keys_str_mv | AT kramerovaia vozmožnostʹékspressiiklonirovannogogenaéritropoétinačelovekavkletkahliniisno AT zeleninmg vozmožnostʹékspressiiklonirovannogogenaéritropoétinačelovekavkletkahliniisno AT voroncovamm vozmožnostʹékspressiiklonirovannogogenaéritropoétinačelovekavkletkahliniisno AT kolobkovsl vozmožnostʹékspressiiklonirovannogogenaéritropoétinačelovekavkletkahliniisno AT monakovate vozmožnostʹékspressiiklonirovannogogenaéritropoétinačelovekavkletkahliniisno AT kramerovaia možlivístʹekspresííklonovanogogenaeritropoetinulûdinuvklítinahlíníísno AT zeleninmg možlivístʹekspresííklonovanogogenaeritropoetinulûdinuvklítinahlíníísno AT voroncovamm možlivístʹekspresííklonovanogogenaeritropoetinulûdinuvklítinahlíníísno AT kolobkovsl možlivístʹekspresííklonovanogogenaeritropoetinulûdinuvklítinahlíníísno AT monakovate možlivístʹekspresííklonovanogogenaeritropoetinulûdinuvklítinahlíníísno AT kramerovaia possibilityoftheexpressionofaclonedhumanerythropoietingeneinchocells AT zeleninmg possibilityoftheexpressionofaclonedhumanerythropoietingeneinchocells AT voroncovamm possibilityoftheexpressionofaclonedhumanerythropoietingeneinchocells AT kolobkovsl possibilityoftheexpressionofaclonedhumanerythropoietingeneinchocells AT monakovate possibilityoftheexpressionofaclonedhumanerythropoietingeneinchocells |