Исследование первичной структуры каталазы гриба Penicillium vitale. 2. Триптические пептиды модифицированной по остаткам лизина каталазы

Выяснено строение 63 триптических пептидов каталазы P. vitale, модифицированной по остаткам лизина малеиновым ангидридом. 40 пептидов содержат неперекрывающиеся аминокислотные последовательности, включающие 650 остатков аминокислот, что составляет 93 % длины полипептидной цепи, установленной согласн...

Повний опис

Збережено в:

Бібліографічні деталі
Дата:	1998
Автори:	Левитина, Т.Л., Гусак, Н.М., Мирошниченко, О.С., Бобровская, М.Т., Гудкова, Л.В., Латышко, Н.В., Козлов, Э.А.
Формат:	Стаття
Мова:	Russian
Опубліковано:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1998
Назва видання:	Биополимеры и клетка
Теми:	Структура и функции биополимеров
Онлайн доступ:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154693
Теги:	Додати тег Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:	Исследование первичной структуры каталазы гриба Penicillium vitale. 2. Триптические пептиды модифицированной по остаткам лизина каталазы / Т.Л. Левитина, Н.М. Гусак, О.С. Мирошниченко, М.Т. Бобровская, Л.В. Гудкова, Н.В. Латышко, Э.А. Козлов // Биополимеры и клетка. — 1998. — Т. 14, № 2. — С. 105-110. — Бібліогр.: 6 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-154693
record_format	dspace
spelling	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1546932025-02-09T09:33:43Z Исследование первичной структуры каталазы гриба Penicillium vitale. 2. Триптические пептиды модифицированной по остаткам лизина каталазы Дослідження первинної структури каталази гриба Penicillium vitale. 2. Триптичні пептиди модифікованої за залишками лізину каталази Investigation of the primary structure of Penicillium vitale catalase. 2. Tryptic peptides of maleilated catalase Левитина, Т.Л. Гусак, Н.М. Мирошниченко, О.С. Бобровская, М.Т. Гудкова, Л.В. Латышко, Н.В. Козлов, Э.А. Структура и функции биополимеров Выяснено строение 63 триптических пептидов каталазы P. vitale, модифицированной по остаткам лизина малеиновым ангидридом. 40 пептидов содержат неперекрывающиеся аминокислотные последовательности, включающие 650 остатков аминокислот, что составляет 93 % длины полипептидной цепи, установленной согласно данным рентгеноструктурного анализа. З'ясовано побудову 63 триптичних пептидів каталази Р. vitale, модифікованої за залишками лізину малеїновим ангідридом. 40 пептидів містять амінокислотні послідовності, які не перекриваються та включають 650 залишків амінокислот, що складає 93 % довжини поліпептидного ланцюга, встановленої згідно з даними рентгеноструктурного аналізу. The ammo acid sequence of 63 maleilated P. vitale catalase tryptic peptides was determined. 40 peptides have non-overlapping amino acid sequences, comprising 650 amino acid residues, which make up 93 % of the polypeptide chain based on the X-ray analysis data. 1998 Article Исследование первичной структуры каталазы гриба Penicillium vitale. 2. Триптические пептиды модифицированной по остаткам лизина каталазы / Т.Л. Левитина, Н.М. Гусак, О.С. Мирошниченко, М.Т. Бобровская, Л.В. Гудкова, Н.В. Латышко, Э.А. Козлов // Биополимеры и клетка. — 1998. — Т. 14, № 2. — С. 105-110. — Бібліогр.: 6 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0004C1 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154693 ru Биополимеры и клетка application/pdf Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
topic	Структура и функции биополимеров Структура и функции биополимеров
spellingShingle	Структура и функции биополимеров Структура и функции биополимеров Левитина, Т.Л. Гусак, Н.М. Мирошниченко, О.С. Бобровская, М.Т. Гудкова, Л.В. Латышко, Н.В. Козлов, Э.А. Исследование первичной структуры каталазы гриба Penicillium vitale. 2. Триптические пептиды модифицированной по остаткам лизина каталазы Биополимеры и клетка
description	Выяснено строение 63 триптических пептидов каталазы P. vitale, модифицированной по остаткам лизина малеиновым ангидридом. 40 пептидов содержат неперекрывающиеся аминокислотные последовательности, включающие 650 остатков аминокислот, что составляет 93 % длины полипептидной цепи, установленной согласно данным рентгеноструктурного анализа.
format	Article
author	Левитина, Т.Л. Гусак, Н.М. Мирошниченко, О.С. Бобровская, М.Т. Гудкова, Л.В. Латышко, Н.В. Козлов, Э.А.
author_facet	Левитина, Т.Л. Гусак, Н.М. Мирошниченко, О.С. Бобровская, М.Т. Гудкова, Л.В. Латышко, Н.В. Козлов, Э.А.
author_sort	Левитина, Т.Л.
title	Исследование первичной структуры каталазы гриба Penicillium vitale. 2. Триптические пептиды модифицированной по остаткам лизина каталазы
title_short	Исследование первичной структуры каталазы гриба Penicillium vitale. 2. Триптические пептиды модифицированной по остаткам лизина каталазы
title_full	Исследование первичной структуры каталазы гриба Penicillium vitale. 2. Триптические пептиды модифицированной по остаткам лизина каталазы
title_fullStr	Исследование первичной структуры каталазы гриба Penicillium vitale. 2. Триптические пептиды модифицированной по остаткам лизина каталазы
title_full_unstemmed	Исследование первичной структуры каталазы гриба Penicillium vitale. 2. Триптические пептиды модифицированной по остаткам лизина каталазы
title_sort	исследование первичной структуры каталазы гриба penicillium vitale. 2. триптические пептиды модифицированной по остаткам лизина каталазы
publisher	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate	1998
topic_facet	Структура и функции биополимеров
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/154693
citation_txt	Исследование первичной структуры каталазы гриба Penicillium vitale. 2. Триптические пептиды модифицированной по остаткам лизина каталазы / Т.Л. Левитина, Н.М. Гусак, О.С. Мирошниченко, М.Т. Бобровская, Л.В. Гудкова, Н.В. Латышко, Э.А. Козлов // Биополимеры и клетка. — 1998. — Т. 14, № 2. — С. 105-110. — Бібліогр.: 6 назв. — рос.
series	Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv	AT levitinatl issledovaniepervičnojstrukturykatalazygribapenicilliumvitale2triptičeskiepeptidymodificirovannojpoostatkamlizinakatalazy AT gusaknm issledovaniepervičnojstrukturykatalazygribapenicilliumvitale2triptičeskiepeptidymodificirovannojpoostatkamlizinakatalazy AT mirošničenkoos issledovaniepervičnojstrukturykatalazygribapenicilliumvitale2triptičeskiepeptidymodificirovannojpoostatkamlizinakatalazy AT bobrovskaâmt issledovaniepervičnojstrukturykatalazygribapenicilliumvitale2triptičeskiepeptidymodificirovannojpoostatkamlizinakatalazy AT gudkovalv issledovaniepervičnojstrukturykatalazygribapenicilliumvitale2triptičeskiepeptidymodificirovannojpoostatkamlizinakatalazy AT latyškonv issledovaniepervičnojstrukturykatalazygribapenicilliumvitale2triptičeskiepeptidymodificirovannojpoostatkamlizinakatalazy AT kozlovéa issledovaniepervičnojstrukturykatalazygribapenicilliumvitale2triptičeskiepeptidymodificirovannojpoostatkamlizinakatalazy AT levitinatl doslídžennâpervinnoístrukturikatalazigribapenicilliumvitale2triptičnípeptidimodifíkovanoízazališkamilízinukatalazi AT gusaknm doslídžennâpervinnoístrukturikatalazigribapenicilliumvitale2triptičnípeptidimodifíkovanoízazališkamilízinukatalazi AT mirošničenkoos doslídžennâpervinnoístrukturikatalazigribapenicilliumvitale2triptičnípeptidimodifíkovanoízazališkamilízinukatalazi AT bobrovskaâmt doslídžennâpervinnoístrukturikatalazigribapenicilliumvitale2triptičnípeptidimodifíkovanoízazališkamilízinukatalazi AT gudkovalv doslídžennâpervinnoístrukturikatalazigribapenicilliumvitale2triptičnípeptidimodifíkovanoízazališkamilízinukatalazi AT latyškonv doslídžennâpervinnoístrukturikatalazigribapenicilliumvitale2triptičnípeptidimodifíkovanoízazališkamilízinukatalazi AT kozlovéa doslídžennâpervinnoístrukturikatalazigribapenicilliumvitale2triptičnípeptidimodifíkovanoízazališkamilízinukatalazi AT levitinatl investigationoftheprimarystructureofpenicilliumvitalecatalase2trypticpeptidesofmaleilatedcatalase AT gusaknm investigationoftheprimarystructureofpenicilliumvitalecatalase2trypticpeptidesofmaleilatedcatalase AT mirošničenkoos investigationoftheprimarystructureofpenicilliumvitalecatalase2trypticpeptidesofmaleilatedcatalase AT bobrovskaâmt investigationoftheprimarystructureofpenicilliumvitalecatalase2trypticpeptidesofmaleilatedcatalase AT gudkovalv investigationoftheprimarystructureofpenicilliumvitalecatalase2trypticpeptidesofmaleilatedcatalase AT latyškonv investigationoftheprimarystructureofpenicilliumvitalecatalase2trypticpeptidesofmaleilatedcatalase AT kozlovéa investigationoftheprimarystructureofpenicilliumvitalecatalase2trypticpeptidesofmaleilatedcatalase
first_indexed	2025-11-25T07:18:09Z
last_indexed	2025-11-25T07:18:09Z
_version_	1849745830186057728
fulltext	ISSN 0233-7657. Биополимеры и клетка. 1998. Т. 14. № 2 СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ БИОПОЛИМЕРОВ Исследование первичной структуры каталазы гриба Penicillium vitale. 2. Триптические пептиды модифицированной по остаткам лизина каталазы Т. Л. Левитина, Н. М. Гусак, О- С. Мирошниченко, М. Т. Бобровская, Л- В. Гудкова1, Н. В. Латышко1, Э. А. Козлов Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины 252143, Киев, ул. Академика Заболотного, 150 1 Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины 252030, Киев, ул. Леонтовича, 9 Выяснено строение 63 триптических пептидов каталазы P. vitale, модифицированной по остат кам лизина малеиновым ангидридом. 40 пептидов содержат неперекрывающиеся аминокислотные последовательности, включающие 650 остатков аминокислот, что составляет 93 % длины полипептидной цепи, установленной согласно данным рентгеноструктурного анализа. Введение. Данное сообщение представляет собой очередное из серии под общим заголовком, опреде ляющим конечную цель публикации, и посвящено выяснению строения триптических пептидов, полу ченных расщеплением трипсином каталазы P. vi tale, модифицированной малеиновым ангидридом. Как следует из первого сообщения [1], все пол ученные триптические пептиды из ^модифициро ванной каталазы могли перекрыть 84 % длины полипептидной цепи белка. Поэтому целью насто ящего исследования было не только выяснение строения более крупных пептидов, но и получение ранее неизвестных триптических пептидов, необхо димых для перекрывания всей полипептидной це пи. Сообщение, посвященное малеилированию, расщеплению малеил-каталазы трипсином, разде лению на фракции и выделению индивидуальных пептидов [2], опубликовано ранее. Опубликована также работа по выяснению строения триптических пептидов из малеил-каталазы [3 ]. Цель дополнен ной и окончательной публикации по этому вопросу обоснована в первом сообщении цикла [1 ]. В настоящей статье не приведены данные по © Т. Л. Л Е В И Т И Н А , Н. М. ГУСАК. О. С. М И Р О Ш Н И Ч Е Н К О , М. Т. Б О Б Р О В С К А Я , Л. В Г У Д К О В А , Н. В. Л А Т Ы Ш К О , Э. А. К О З Л О В , 1 9 9 8 получению новых или дополнительной очистке ра нее изученных фракций и Tm-пептидов, поскольку использованные при этом методы неоднократно нами описаны [4 ]. Материалы и методы. Малеилирование ката лазы, расщепление трипсином, снятие защитных групп и разделение пептидов описаны ранее [2]. Использованные в работе реагенты и условия неко торых экспериментов (высоковольтный электрофо рез, определение аминокислотного состава и N- концевой последовательности пептидов) приведены в предыдущем сообщении [1 ]. Пептиды, содержащие остатки лизина, рас щепляли трипсином <«Serva», Германия) в 0,2 н. бикарбонате аммония, рН 8,0, при 37 °С в течение 4 ч. Результаты и обсуждение. В таблице приведе ны результаты исследований строения Tm-пепти дов, полученные в данной и предыдущих работах. Пептиды, в которых не подчеркнуты стадии дегра дации, опубликованы ранее [3]. Подчеркнутые пептиды — новые или требовавшие коррекции. Об щая стратегия выяснения строения Tm-пептидов следующая. N-концевую аминокислотную последо вательность всех пептидов выясняли ручным мето дом Эдмана (до 10 стадий) и с помощью секвена- тора (более 10 стадий). Пептиды, содержащие ос- 105 Л Е В И Т И Н А Т. Л. И Д Р . Строение триптических пептидов малеил-каталазы P. vitale Строение Т-пептид [ 1] 106 И С С Л Е Д О В А Н И Е П Е Р В И Ч Н О Й С Т Р У К Т У Р Ы КАТАЛАЗЫ P. VITALE Продолжение таблицы 107 Л Е В И Т И Н А Т. Л И Д Р . Окончание таблицы татки лизина, расщепляли трипсином и триптиче ские гидролизаты разделяли высоковольтным элек трофорезом и хроматографией на бумаге. У трип тических пептидов, полученных из Tm-пептидов, определяли N-концевые остатки и аминокислотные составы (данные не приведены). По этим показате лям отыскивали аналоги среди известных Т-пепти- дов немодифицированной каталазы [5]. В таблице в 4-й колонке указаны Т-пептиды, аналогичные триптическим пептидам, полученным из Т т . Стро ение этих пептидов не исследовалось. Исследовали строение только тех триптических пептидов из Т т , аналогов которым не было найдено среди Т-пепти- дов немодифицированной каталазы. Эти новые Т- пептиды в 4-й колонке таблицы подчеркнуты. Дан ные по исследованию их строения приводятся ниже при обсуждении индивидуальных Tm-пептидов. Принцип обозначения Tm-пептидов тот же, что и для Т-пептидов немодифицированной каталазы [6]. Пептиды Tml. Смесь пептидов Т т 4 0 , Т т 5 2 , Т т 5 3 [5], ранее полученную из нерастворимого материала триптического гидролизата малеил-ка талазы, окисляли и разделяли высоковольтным электрофорезом и хроматографией на бумаге. Вы делены два цистеинсодержащих пептида Tml и T m l 2 a с составами: Tml — CysS0 3 H, Asp 4, Thr, Ser, Glu 6, Pro, Gly 3, Ala, Val 2, He, Leu3, Phe^ Trp(+), His, Lys, Arg; T m l 2 a — CysS0 3 H, Asp 2, Ser, Glu 5, Pro, Gly 2, Ala, Val, He, Leu 2, Phe 2 , Trp(+), His, Arg 2. На пептиде T m l 2 a N-концевую последо вательность определяли ручным методом Дансил- Эдман, поэтому на восьмой стадии остаток трипто фана идентифицирован не был. Из сопоставления N-концевых последовательностей Tml и T m l a 2 видно, что второй пептид образовался из первого вследствие расщепления связи Lys-Gln. Очевидно, в этом и других случаях (см. таблицу) образование Tm-пептидов с С-концевым остатком лизина мож но объяснить неполнотой малеилирования катала зы. Сравнивая N-концевые последовательности Tml и T m l a 2 , можно видеть, что остаток глутамина в Tml (положение 16) заменен в T m l a 2 на остаток аргинина (положение 9). Эта замена подтверждает ся и сопоставлением пептидов T m l 2 a и Тн2-1* [1 ]. В сообщении [1 ] уже обсуждалась возможная при чина появления гомологичных пептидов с амино кислотными заменами (обозначены буквой «а») после расщепления каталазы трипсином и протеи- назой из Staphylococcus aureus V8. Можно только добавить, что препараты каталазы выделяли из культуральной среды, получаемой каждый раз за ново. По-видимому, этим можно объяснить появле ние гомологичных пептидов в разных типах проте- олиза. Например, пептиды Т2 [1] и Т т 5 отлича ются единственной заменой валина на лейцин в положении 17. Пептиды Тт2. После расщепления трипсином Т т 2 , Т т 2 2 , Т т 2 3 был выделен триптический пеп тид, не имеющий аналогов среди Т-пептидов немо дифицированной каталазы [1]: Т62 — Leu-(Asp, Ser 3, Glu 2, Gly, Ala 3, Val 2, He, Phe 3)-Lys. Сопостав ляя состав триптических пептидов, полученных из Т т 2 2 и Т т 2 (таблица, колонка 4), можно предпо ложить, что пептид Т т 2 3 занимает С-концевое положение в пептиде Т т 2 2 . Таким же путем мож но прийти к заключению, что пептид Т т 2 2 входит во вторую скобку пептида Т т 2 . Поскольку в состав пептида Т т 2 входят два аргининсодержащих пеп тида Т55 и Т62, а последний входит в Т т 2 \ то мы предположили, что пептид Т55 (Phe-Thr-Arg [1]) занимает С-концевое положение в Т т 2 , Это пред положение подтверждается исследованием пепти- 108 И С С Л Е Д О В А Н И Е П Е Р В И Ч Н О Й С Т Р У К Т У Р Ы КАТАЛАЗЫ P. VITALE дов, полученных расщеплением каталазы протеи- назой V8. Из N-концевых последовательностей Т т 2 и Tm2 J ясно, что ТШ21 занимает N-концевое положение в Т т 2 . Пептиды Тт9. Аминокислотная последова тельность Т т 9 реконструируется из совокупности данных по его секвенированию и пептидов, полу ченных при расщеплении химотрипсином пептида ТнЗ [1 ]. Такая реконструкция подтверждается ис следованием пептидов, полученных в результате расщепления каталазы протеиназой V8. Из сопо ставления строения пептидов Т т 9 и Т т 9 а 1 следует, что второй гомологичен N-концевой последователь ности первого и имеет три замены остатков: глици на на серии, тирозина на валин и валина на лизин. Выход Т т 9 а ' не превышает 1 %. Очевидно, что Тт9\ образовался вследствие расщепления связи Lys-Ala. Пептиды TmlO Выход пептида TmlO не пре вышает 1 %, в то время как выходы TmlO 1 , TmlO 2 и TmlO 3 составляют 20—40 %. Аналогичная ситу ация отмечена нами для соответствующих пепти дов Т6, Т6 1 и Т6 2 [1]. Среди Т-пептидов немоди фицированной каталазы насчитывали пять пепти дов, образовавшихся в результате расщепления неспецифических для трипсина связей [1 L В слу чае Tm-пептидов пептиды TmlO 1—TmlO 3 были единственными, образовавшимися таким образом. В работе [ 1 ] сделано предположение о том, что только связь Phe-Ala в пептиде Т6 (и соответствен но в TmlO) наиболее доступна для расщепления каталазы протеазой (протеазами) в процессе ее выделения или хранения. Исследование пептидов Т т подтвердило это предположение. Однако, по- видимому, только небольшая область в районе связи Phe-Ala доступна для протеаз, поскольку вторая расщепляемая связь находится рядом (пеп тид Т10), в то время как подобные связи Phe-Val и Trp-Gly, также рядом расположенные, не рас щепляются. Пептид Тт13^ При сравнении этого пептида с пептидом Т7 немодифицированной каталазы [1 ] видно, что это гомологичные пептиды, содержащие замену остатка глутамина на серии. Пептид Tml4. Идентификацию N-концевых остатков начинали с восьмой стадии деградации. Пептиды Tml5. Аминокислотные составы: Тм15,15 а — Thr, з , Ser 0 t 8 , P r o 0 6 , G iy 4 5 , Ala 2 5 , Val, 3 , Leu 2 ,Tyr 0 b , Lys, Arg; T m l 5 a ! — Thr, Ser, Pro, Gly 2, Ala2, Leu, Arg: Tml5 ] — Thr 2 , Ser, Gly 3, Ala, Val, Leu, Arg. Из сопоставления аминокислотных соста вов и последовательностей Tml5 J и Т т 1 5 а ! видно, что эти пептиды гомологичны и содержат замены тирозина на валин, пролина на треонин и аланина на глицин. Сравнивая аминокислотный состав Тт15 ,15 а с аминокислотными составами Т т 1 5 ! и Т т 1 5 а \ мы пришли к выводу, что Тт15,15 а пред ставляет собой смесь гомологичных пептидов ТШІ5 1 и Тт\5й 1. Из триптического гидролизата Тт15,15 а не удалось разделить высоковольтным электрофорезом и хроматографией на бумаге пеп тиды, соответствующие ТШІ5 1 и Т т 1 5 а \ которые были получены из разных фракций предваритель ного разделения триптического гидролизата мале ил-каталазы [2]. Пептид Тт16г. Этот пептид гомологичен пеп тиду Т34 немодифицированной каталазы и отлича ется от него заменами серина на глутамин и аланина на треонин. Пептиды Тт19. Сопоставление этих пептидов свидетельствует о том, что они гомологичны и отличаются заменой лейцина на аспарагиновую кислоту. Пептиды Тт23. Мы полагаем, что существует аминокислотная последовательность, гомологичная последовательности Т т 2 3 с заменой остатка проли на на аргинин, и пептиды Т т 2 3 а ! и Т т 2 3 2 образо вались в результате расщепления связи Arg-Ile, что обнаружено ранее на немодифицированной катала- зе (пептиды Т23) [1 ]. Пептиды Тт24. Аминокислотная последова тельность Т т 2 4 а ' гомологична N-концевой после довательности Т т 2 4 а и содержит две замены: изо- лейцина на фенилаланин и глутамина на аргинин. Мы полагаем, что пептид Т т 2 4 а образовался в результате расщепления связи Arg-Gln в последо вательности, гомологичной Т т 2 4 а . Пептид Тт28. Трипсин на пептид не действу ет. На основании этого можно предположить, что в Т т 2 8 имеется связь Lys/Arg-Pro. Среди Т-пепти дов немодифицированной каталазы имеется пептид Т57 с частично известной структурой [1 ], у кото рого аминокислотная последовательность пяти ос татков с N-конца перекрывается с последователь ностью 22—26 пептида Т т 2 8 . Очевидно, что пеп тид Т57 образовался вследствие расщепления связи Trp-Asp в каталазе. Этот факт обсуждался в сооб щении [ 1 ]. Пептид ТтЗЗ. Ранее определена N-концевая аминокислотная последовательность шести остат ков. Поэтому идентификацию N-концевых остат ков начинали с седьмой стадии деградации. Пептиды Тт34. Из сравнения строения этих пептидов видно, что пептиды Т т 3 4 и Т т 3 4 а гомо логичны и содержат три замены: тирозина на аланин, лейцина на пролин и лейцина на глицин. Пептиды Тт35. Аминокислотные составы: Tm35 — Asp 3, Thr, Glu 4, Pro 2 , Gly 3, Ala, Val 4, Met2, 109 Л Е В И Т И Н А Т. Л. И Д Р . Ile 4, Leu4, Phe 3 , His, Lys 2, Arg; Т п Ш 1 — Thr, Glu, Pro, Gly, Val, He, Leu 2, Lys; Tm35 2 — Asp 3, Glu 3, Pro, Gly 2, Ala, Val 3, Met2, Ile 3, Phe 3 , His, Lys, Arg. Из сопоставления аминокислотных составов и по следовательностей этих пептидов следует, что Т т 3 5 СОСТОИТ из Т т 3 5 1 и Т т 3 5 2 , причем Т т 3 5 ? занимает N-концевое положение. После расщепле ния Т т 3 5 и Т т 3 5 2 трипсином из триптических гидролизатов выделены два пептида, не имеющих аналогов среди Т-пептидов немодифицированной каталазы: Т69 — Leu-Val-Pro-Leu-(Thr, Glu, Gly, Не)-Lys и Т70 — Leu-Val-Phe-Asn-Lys. Пептид Тт37. После расщепления трипсином был выделен пептид, аналогов которому нет среди Т-пептидов немодифицированной каталазы: Т71 — Gln-Pro-Ser-Asn-Asn-Arg. Пептид Тт38^ Аналога среди Т-пептидов не модифицированной каталазы не найдено, однако его аминокислотная последовательность гомологич на таковой, состоящей из пептидов Т49 и Т59 [1 ]: Phe-His-Leu-Pro-Arg-Phe-Gln-Gln-Asp-Pro-Asn- Arg. Гомологичные последовательности содержат две замены: аспарагиновой кислоты на аргинин и глицина на фенилаланин. Пептид Тт39. После расщепления трипсином был выделен пептид Т72, не имеющий аналогов среди Т-пептидов немодифицированной каталазы: Phe-Ala-Ile-Ser-Met-Gly-Arg. Таким образом, из триптического гидролизата малеил-каталазы выделено и определено строение 63 пептидов, содержащих в сумме 985 остатков аминокислот. 40 пептидов содержат уникальные неперекрывающиеся аминокислотные последова тельности, насчитывающие в сумме 650 остатков, способных перекрыть 93 % длины полипептидной цепи каталазы, установленной по данным рентге- ноструктурного анализа [6]. Очевидно, какие-то пептиды, как и в случае Т-пептидов немодифици рованной каталазы, не были получены. Однако из триптических гидролизатов малеил-каталазы и Tm-пептидов были выделены 12 пептидов (Т62- Т73), не имеющих аналогов среди Т-пептидов не модифицированной каталазы (T1-T6I) [1]. Эти дополнительные 12 пептидов содержат уникальные аминокислотные последовательности, насчитываю щие 106 остатков аминокислот. Неперекрывающи еся последовательности Т-пептидов немодифициро ванной каталазы содержат всего 590 аминокислот ных остатков. Уникальные аминокислотные последовательности Т-пептидов насчитывают всего 696 остатков аминокислот. С другой стороны, среди всех Tm-пептидов не обнаружено семи пептидов немодифицированной каталазы (Т16, Т32, Т47, Т48, Т50, Т51, Т61), содержащих неперекрываю щиеся последовательности и насчитывающих в сумме 46 остатков аминокислот. Вместе с неперек рывающимися последовательностями Tm-пептидов (650 остатков) это составляет также 696 аминокис лотных остатков. Очевидно, что, по данным для триптических пептидов, каталаза P. vitale содержит не менее 696 остатков аминокислот. Это превыша ет длину полипептидной цепи, установленную по результатам рентгеноструктурного анализа [6 ], на 26 остатков. Т. Л. Левітіна, И. М. Гусак, О. С. Мірошниченко, М. Т. Бобровська, Л. В. Гудкова, Н. В. Латишко, Е. А. Козлов Дослідження первинної структури каталази гриба РепісШіит vitale. 2. Триптичні пептиди модифікованої за залишками лізину каталази Резюме З'ясовано побудову 63 триптичних пептидів каталази Р. vitale, модифікованої за залишками лізину малеїновим ангід ридом. 40 пептидів містять амінокислотні послідовності, які не перекриваються та включають 650 залишків амінокислот, що складає 93 % довжини поліпептид ного ланцюга, встанов леної згідно з даними рентгеноструктурного аналізу. Т. L. Levitina, N. М. Gusak? О. S. Miroshnichenko, М. Т. Bobrovskaya, L. V. Gudkova, N. V. Latyshko, Е. A. Kozlov Investigation of the primary structure of Penicillium vitale catalase. 2. Tryptic peptides of maleilated catalase Summary The amino acid sequence of 63 maleilated P. vitale catalase tryptic peptides was determined. 40 peptides have non-overlapping amino acid sequences, comprising 650 amino acid residues, which make up 93 % of the polypeptide chain based on the X-ray analysis data. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Гусак H. М., Левитина Т. Л., Бобровская М. Т. и др. Исследование первичной структуры каталазы гриба Репі сШіит vitale. 1. Триптические пептиды немодифицирован ной каталазы / / Биополимеры и клетка.—1998.—14, № 1.—С. 62—67. 2. Левитина Т. Л., Мирошниченко О. С, Гудкова Л. В. и др. Триптические пептиды малеил-каталазы гриба Penicillium vitale. 1. Выделение и аминокислотный состав / / Био полимеры и клетка.—1993.—9, № 2 .—С. 3—8. 3. Левитина Т. Л., Бобровская М. Т., Гусак Н. М. и др. Триптические пептиды малеил-каталазы гриба Penicillium vitale. 2. Строение пептидов / / Там ж е . — № 3 .—С. 42—45. 4. Левитина Т. Л., Гусак Я. М., Роднин И. В. и др. Бромциановые фрагменты каталазы гриба Penicillium vitale II Там ж е . — 1 9 8 9 . — 5 , № 5 .—С. 5 5 — 6 3 . 5. Козлов Э. А., Гудкова Л. В., Левитина Т. Л. и др. Дополнительное исследование триптических пептидов ка талазы гриба РепісШіит vitale II Там ж е . — 1 9 9 3 . — 9 , № 1.—С. 22—25 . 6. Vainshtein В. К., Melik-Adamyan W. Я, Barinin V. V. et al. Threedimensional structure of catalase from Penicillium vitale at 2.0 A resolution / / J. Мої. B i o l . — 1 9 8 6 . - 1 8 8 . — P . 4 9 — 6 1 . Поступила в редакцию 25.03.97 по

Исследование первичной структуры каталазы гриба Penicillium vitale. 2. Триптические пептиды модифицированной по остаткам лизина каталазы

Репозитарії

Схожі ресурси