Выделение и характеристика препарата индивидуальной изоакцепторной тРНК₁ᶜᵉᵖ из печени быка
В две стадии проведено выделение индивидуальной изоакцепторной тPHKᵢᶜᵉᵖпечени быка с высоким выходом: из 1 г суммарного препарата тРНК получено 4 мг тРНК₁ᶜᵉᵖ. У дві стадії виділено індивідуальну ізоакцепторну тPHKᵢᶜᵉᵖ печінки бика з високим виходом: з 1 г сумарного препарату тРНК отримано 4 мг тРНК₁...
Saved in:
| Published in: | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Date: | 1987 |
| Main Authors: | , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1987
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155030 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Выделение и характеристика препарата индивидуальной изоакцепторной тРНК₁ᶜᵉᵖ из печени быка / Л.Г. Калачнюк, Л.А. Козак, М.А. Тукало, Г.Х. Мацука // Биополимеры и клетка. — 1987. — Т. 3, № 5. — С. 274-276. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155030 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Калачнюк, Л.Г. Козак, Л.А. Тукало, М.А. Мацука, Г.Х. 2019-06-16T08:40:47Z 2019-06-16T08:40:47Z 1987 Выделение и характеристика препарата индивидуальной изоакцепторной тРНК₁ᶜᵉᵖ из печени быка / Л.Г. Калачнюк, Л.А. Козак, М.А. Тукало, Г.Х. Мацука // Биополимеры и клетка. — 1987. — Т. 3, № 5. — С. 274-276. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.0001FC https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155030 547.963.3 В две стадии проведено выделение индивидуальной изоакцепторной тPHKᵢᶜᵉᵖпечени быка с высоким выходом: из 1 г суммарного препарата тРНК получено 4 мг тРНК₁ᶜᵉᵖ. У дві стадії виділено індивідуальну ізоакцепторну тPHKᵢᶜᵉᵖ печінки бика з високим виходом: з 1 г сумарного препарату тРНК отримано 4 мг тРНК₁ᶜᵉᵖ . Two stages were applied for high yield isolation of individual isoacceptor serine tRNA1 from the bovine liver, summing up 4 mg of tRNA₁ᶜᵉᵖ from 1 g of total tRNA. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Генно-инженерная биотехнология Выделение и характеристика препарата индивидуальной изоакцепторной тРНК₁ᶜᵉᵖ из печени быка Виділення і характеристика препарату індивідуальної ізоакцепторної тРНК₁ᶜᵉᵖ з печінки бика Isolation and characteristic of the individual isoacceptor tRNA₁ᶜᵉᵖ preparation from the bovine liver Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Выделение и характеристика препарата индивидуальной изоакцепторной тРНК₁ᶜᵉᵖ из печени быка |
| spellingShingle |
Выделение и характеристика препарата индивидуальной изоакцепторной тРНК₁ᶜᵉᵖ из печени быка Калачнюк, Л.Г. Козак, Л.А. Тукало, М.А. Мацука, Г.Х. Генно-инженерная биотехнология |
| title_short |
Выделение и характеристика препарата индивидуальной изоакцепторной тРНК₁ᶜᵉᵖ из печени быка |
| title_full |
Выделение и характеристика препарата индивидуальной изоакцепторной тРНК₁ᶜᵉᵖ из печени быка |
| title_fullStr |
Выделение и характеристика препарата индивидуальной изоакцепторной тРНК₁ᶜᵉᵖ из печени быка |
| title_full_unstemmed |
Выделение и характеристика препарата индивидуальной изоакцепторной тРНК₁ᶜᵉᵖ из печени быка |
| title_sort |
выделение и характеристика препарата индивидуальной изоакцепторной трнк₁ᶜᵉᵖ из печени быка |
| author |
Калачнюк, Л.Г. Козак, Л.А. Тукало, М.А. Мацука, Г.Х. |
| author_facet |
Калачнюк, Л.Г. Козак, Л.А. Тукало, М.А. Мацука, Г.Х. |
| topic |
Генно-инженерная биотехнология |
| topic_facet |
Генно-инженерная биотехнология |
| publishDate |
1987 |
| language |
Russian |
| container_title |
Биополимеры и клетка |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Виділення і характеристика препарату індивідуальної ізоакцепторної тРНК₁ᶜᵉᵖ з печінки бика Isolation and characteristic of the individual isoacceptor tRNA₁ᶜᵉᵖ preparation from the bovine liver |
| description |
В две стадии проведено выделение индивидуальной изоакцепторной тPHKᵢᶜᵉᵖпечени быка с высоким выходом: из 1 г суммарного препарата тРНК получено 4 мг тРНК₁ᶜᵉᵖ.
У дві стадії виділено індивідуальну ізоакцепторну тPHKᵢᶜᵉᵖ печінки бика з високим виходом: з 1 г сумарного препарату тРНК отримано 4 мг тРНК₁ᶜᵉᵖ .
Two stages were applied for high yield isolation of individual isoacceptor serine tRNA1 from the bovine liver, summing up 4 mg of tRNA₁ᶜᵉᵖ from 1 g of total tRNA.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155030 |
| citation_txt |
Выделение и характеристика препарата индивидуальной изоакцепторной тРНК₁ᶜᵉᵖ из печени быка / Л.Г. Калачнюк, Л.А. Козак, М.А. Тукало, Г.Х. Мацука // Биополимеры и клетка. — 1987. — Т. 3, № 5. — С. 274-276. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT kalačnûklg vydelenieiharakteristikapreparataindividualʹnoiizoakceptornoitrnk1cepizpečenibyka AT kozakla vydelenieiharakteristikapreparataindividualʹnoiizoakceptornoitrnk1cepizpečenibyka AT tukaloma vydelenieiharakteristikapreparataindividualʹnoiizoakceptornoitrnk1cepizpečenibyka AT macukagh vydelenieiharakteristikapreparataindividualʹnoiizoakceptornoitrnk1cepizpečenibyka AT kalačnûklg vidílennâíharakteristikapreparatuíndivídualʹnoíízoakceptornoítrnk1cepzpečínkibika AT kozakla vidílennâíharakteristikapreparatuíndivídualʹnoíízoakceptornoítrnk1cepzpečínkibika AT tukaloma vidílennâíharakteristikapreparatuíndivídualʹnoíízoakceptornoítrnk1cepzpečínkibika AT macukagh vidílennâíharakteristikapreparatuíndivídualʹnoíízoakceptornoítrnk1cepzpečínkibika AT kalačnûklg isolationandcharacteristicoftheindividualisoacceptortrna1ceppreparationfromthebovineliver AT kozakla isolationandcharacteristicoftheindividualisoacceptortrna1ceppreparationfromthebovineliver AT tukaloma isolationandcharacteristicoftheindividualisoacceptortrna1ceppreparationfromthebovineliver AT macukagh isolationandcharacteristicoftheindividualisoacceptortrna1ceppreparationfromthebovineliver |
| first_indexed |
2025-11-24T16:09:57Z |
| last_indexed |
2025-11-24T16:09:57Z |
| _version_ |
1850850908042166272 |
| fulltext |
CLONING OF THE ΖΕΑ MAIZE G E N O M E DNA S E Q U E N C E S CAPABLE
OF A U T O N O M O U S REPLICATION IN SACCHAROMYCES CEREVISIAE
V. N. Shulzhenko, V. A. Kordyum
Institute of Molecular Biology and Genetics
Academy of Sciences of the Ukrainian SSR, Kiev
S u m m a r y
DNA f r a g m e n t s of maize genome funct ioning as au tonomously repl icat ing sequences
(ARS) in yeast were inserted into EcoRI-site of plasmid pYF40 bear ing the His3 marker
of yeast Saccharomyces cerevisiae. Two plasmids with inserts were selected which trans-
formed s t ra in His~ S. cerevisiae LL20(leu2-3leu2-llhis3-llhis3-15) into His+ with a fre-
quency of (1-3) -102 t r an s fo rman t s per 1 μ ^ of plasmid DNA. ARS-plasmids are located
in yeast cells in a nonintegra ted form, that is confirmed by the isolation of plasmid DNA
from them, with which both E. coli and S. cerevisiae cells are t ransformed. Size of cloned
EcoRI DNA f r a g m e n t s is about 0.8 MD.
1. Gorman /. Α., Dove W. F., Warren N. Isolat ion of physar ium DNA segments that
support au tonomous replication in y e a s t / / М о ї . and Gen. Genet.— 1981.— 183, N 2.—
P. 306—313.
2. Loppes RClaude D. Chloroplast and nuclear DNA f r agmen t s from Chlatnydomonas
promot ing high frequency t rans fo rmat ion of y e a s t / / C u r r . Genet.— 1983.— 7, N 6.—
P. 473—480.
3. Characterization of human chromosomal DNA sequences which replicate autonomously
in Saccharomyces cerevisiae / J. F. Montiel, C. J. Norbury, M. F. Tuite et a l . / / N u c l .
Acids Res.— 1984.— 12, N 2 . — P . 1049—1068.
4. Isolation and character izat ion of sequences f rom mouse chromosomal DNA with ARS
funct ion in yeasts / G. E. Roth, IT. M. Blanton, L. F. Hager , V. A. Z a k i a n / / M o l . and
Cell. Biol.— 1983.—3, N 11.—P. 1898—1908.
5. Skatrud P. L·., Qucener S. W. Cloning of DNA f r agmen t from Cephalosporiutn acre-
monium which funct ions as an autonomous replication sequence in v e a s t / / C u r r . Ge-
net.— 1984.— 8, N 3.— P. 155—163.
6. Molecular c loning of tobacco chromosomal and chloroplast DNA segments capable of
replication in yeast / U. Hirofumi, O. Takeshi, O. Toshifumi et a l . / / M o l . and Gen.
Genet.— 1983.— 192, N 1—2.—P. 1—4.
7. Chimeric p lasmids for cloning of deoxyribonucleic acid sequences in Saccharomyces
cerevisiae J R. K. Storms, J. B. McNeil, P. S. Knaudekar et a l . / / J . Bac te r id .— 1979.—
N 1 .—P. 73—82.
8. Clewell D. В., Helinski D. R. Supercoiled circular DNA-protein complex in Escherichia
coli. Pur i f icat ion and induced conversion to an open circular DNA form // Proc. Nat.
Acad. Sci. USA.— 1969.—62, N 6 . — P . 1159—1166.
9. Birnboim H. C., Doly / . A rapid alkaline extraction procedure for screening recom-
binant plasmid D N A / / N u c l . Acids Res.— 1979.—7, N 6 . — P . 1513.
10. Мирошниченко Г. П., Дьяченко Α. Φ. Современные методы выделения Д Н К из выс-
ших растений/ /Успехи соврем, биологии.— 1981.— 91, № 1.— С. 49—60.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Получено 21.01.86
Киев
УДК 547.963.3
ВЫДЕЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТА
ИНДИВИДУАЛЬНОЙ ИЗОАКЦЕПТОРНОЙ ТРНКСер
ИЗ ПЕЧЕНИ БЫКА
Л. Г. Калачнюк, Л. А. Козак, Μ. А. Тукало, Г. X. Мацука
Структурно-функциональные исследования т Р Н К из эукариотических организмов свя-
заны с трудностью получения в достаточных количествах гомогенного полинуклеотид-
ного материала. Обычно для очистки изоакцепторных т Р Н К животных приходится ис-
пользовать многостадийные схемы очистки, что в результате приводит к низкому вы-
ходу индивидуальных препаратов [1].
В настоящей работе выделение индивидуальной изоакцепторной тРНКі С е р печени
быка, имеющей длинную вариабельную петлю, проведено всего в две стадии с высоким
выходом.
274 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА.-1987 . -Т . 3, № 5
Материалы и методы. Препараты суммарной т Р Н К получены по методу Брунгра-
бср [2]. Смесь аминоацил-тРНК-синтетаз (АРСаз) выделяли из печени быка по [3].
Бензоилированную ДЭАЭ-целлюлозу (БД-целлюлозу) синтезировали по методу
Тснсра [4]. Первую колонку с БД-целлюлозой готовили, как описано в [5], вторую —
подобно первой, исключив ионы M g 2 + из всех буферных растворов.
Акцепторную активность т Р Н К С е р определяли по уровню образования 14С-серил-
т Р Н К при избытке фермента в условиях реакции аминоацилирования [1].
Исчерпывающий гидролиз т Р Н К і С е р Т г Р Н К а з о й («Sankyo Со», Япония) прово-
дили в 0,01 Μ трис-HCl, рН 7,5, при 20 °С, 17 ч. В пробу объемом 30 мкл вносили
т Р Н К , Т і - Р Н К а з у из расчета 1 ед. активности фермента на 10 мкг т Р Н К .
Хроматографию олигонуклеотидов Т г Р Н К а з н о г о гидролизата проводили на мик-
роколонках с ДЭАЭ-целлюлозой при рН 7,5 в 7 Μ мочевине [6] с использованием мик-
роколоночного жидкостного хроматографа «Милихром».
В работе использовали следующие реактивы: 14С-серин (удельная активность
4,4 ГБк/ммоль, «Chemapol», Ч С С Р ) ; натриевую соль A T P («Serva», Ф Р Г ) ; MgCl 2 , 2-
меркаптоэтанол («Мегск», Ф Р Г ) ; NaCl осч.
Результаты и обсуждение. Выделение индивидуальной сериновой т Р Н К из печени
быка проводили комбинацией двух хроматографий на колонках с БД-целлюлозой . На
первой стадии очистки использовали хроматографию суммарной т Р Н К на БД-целлюло-
зе по [5].
При хроматографии 1 г суммарного препарата т Р Н К печени быка в данной системе
получено три пика серин-акцепторной активности. Фракции, содержащие первый пик
(80 мг), объединяли и осаждали спиртом ( т Р Н К і С е р ) .
40 мг т Р Н К і С е р рехроматографировали вторично на колонке ( 2 X 3 0 см) с Б Д - ц е л -
люлозой в отсутствие ионов Μ g 2 + при 4 °С. т Р Н К элюировали со скоростью 55 мл/ч
в градиентах концентраций 0,2—1,3 Μ NaCl (750 мл) и 1,3—2,0 Μ NaCl с градиентом
этанола от 0 до 10 % (450 мл) в буфере 0,01 Μ NaAc, рН 4,5, 1 мМ 2-меркаптоэтанол.
В пределах первого градиента происходила элюция большей части т Р Н К . т Р Н К і С е р ,
обладающая , как и т Р Н К і С е р из печени крыс [7], высокой гидрофобностью, элюирова-
лась в спиртовом градиенте. В результате хроматографии получено 2 мг т Р Н К і С е р высо-
кой степени чистоты.
Чистоту выделенного препарата проверяли по его акцепторной активности, элек-
трофорезе в полиакриламидном геле (8 %) в 7 Μ мочевине, а т а к ж е по наличию при-
месных олигонуклеотидов в олигонуклеотидной карте Т і -РНКазного гидролизата
тРНКі С е р , где найдено очень низкое количество примесных олигонуклеотидов. Это сви-
детельствует о высокой степени чистоты полученного препарата.
Таким образом, использованная схема очистки т Р Н К і С е р является эффективной
для препаративного выделения т Р Н К . При ее применении из 1 г суммарной т Р Н К вы-
делили 4 мг т Р Н К і С е р с высокой степенью чистоты, что подтверждено при расшифровке
ее первичной структуры. Исходя из полученных предварительных данных, первичная
структура т Р Н К і С е р печени быка имеет высокую гомологию с т Р Н К з С е р печени кры-
сы [7].
ISOLATION AND C H A R A C T E R I S T I C O F T H E I N D I V I D U A L
I S O A C C E P T O R tRNAi S e r P R E P A R A T I O N F R O M T H E B O V I N E LIVER
L. G. Kalachnyuk, L. A. Kozak, M. A. Tukalo, G. Kh. Matsuka
Ins t i tu te of Molecular Biology and Genetics,
Academy of Sciences of the Ukra in ian SSR, Kiev
S u m m a r y
Two s t ages were applied for high yield isolat ion of individual isoacceptor ser ine tRNAi
f rom the bovine liver, s u m m i n g up 4 m g of tRNAi S e r f rom 1 g of total tRNA.
1. Методы выделения суммарных т Р Н К и индивидуальных т Р Н К Л е й и т Р Н К Ф е н и з
животных т к а н е й / М . И. Коваленко, Н. И. Желтовская , А. В. Ельская и д р . / / М е т о д ы
молекуляр. биологии.— Киев : ЕІаук. думка, 1979.— С. 98—111.
2. Brungraber Ε. A. Simplif ied procedure for p repara t ion of «soluble» RNA f rom ra t li-
v e r / / B i o c h e m . and Biophys. Res. Communs .— 1962.— 8, N 1.— P. 1—3.
3. Keller E., Zamechnick P. The effect of guanos ine d iphosphate and t r iphospha te on in-
corpora t ion of labelled amino acids into prote ins /,/ J. Biol. Chem.— 1956 — 221 Ν ι —
P. 45—49.
4. The separation of soluble r ibonucleic acids on benzola ted DEAE-cel lu lose / J. Gi l lam,
S. Mi l lward , D. Blew et a l . / / B i o c h e m i s t r y . — 1967.—6, N 10 .—P. 3043—3048.
БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА—1987.—Т. З, № 5 275
5. Diamond Α., Dudock В. S t ruc tu re and proper t ies of a bovine liver UGA supressor
ser ine tRNA with a t r ip tophan a n t i c o d o n / ' / C e l l — 1 9 8 1 — 2 5 , N 2 . — P . 497—506.
6. Тукало Μ. Α., Васильченко И. Г., Власов В. В. Ультрамикроспектрофотометрические
методы исследования первичной структуры т Р Ы К //' Методы молекуляр. биологии,—
Киев : Наук, думка, 1979.—С. 111 — 126.
7· Rogg //., Μ tiller P., Slaechelin Μ. Nucleot ide sequences of ra t liver ser ine tRNA.
S t ruc tu re of ser ine tRNA 3 and par t ia l nucleot ide sequences of serine tRNA 2 a // Eur . J .
Biochem.— 1975.—53, N 1 .—P. 115—127.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Получено 20.02.87
Киев
УДК 577.212
ХИМЕРНЫЙ ГЕН RPOC-LACZ'
РЕКОМБИНАНТНОЙ ПЛАЗМИДЫ pUC19,
СОХРАНЯЮЩЕЙ β-ГАЛАКТОЗИДАЗНУЮ АКТИВНОСТЬ
В КЛЕТКАХ ESCHERICHIA COLI
Ε. Б. Патон, Α. Η. Живолуп
Д л я изучения функциональной топографии основного фермента транскрипции Е. co-
li— ДНК-зависимой РНК-полимсразы — ранее были сконструированы рекомбинантные
нитевидные фаги М13тр8 и mWB [1] и рекомбинантная плазмида pUC19 [2] со встро-
енным / ^ / / / - В - ф р а г м е н т о м космиды pJC703 [3], содержащем гены rplJ, rplL и гроВ
(кодирующие рибосомные белки L10, L7/L12 и β-субъсдиницу РНК-полимеразы) , а так-
ж е участок гена гроС (β ' -субъединица РНК-полимеразы) . Было обнаружено, что при
клонировании в нитевидных векторных фагах встраивание вышеуказанного фрагмента
происходит в единственной ориентации, так, что направление транскрипции с промото-
ров lac (вектора) и P j (клонированного фрагмента) совпадает. При клонировании в
плазмиде pUC 19 [4] т а к ж е наблюдалась однонаправленная ориентация [2] встраивае-
мого фрагмента , но она была противоположной его ориентации в нитевидных фагах [1].
В первом и во втором случаях при отборе рекомбинантных клонов мы использовали
то обстоятельство, что встраивание чужеродного фрагмента Д Н К в полилинкерную об-
ласть вектора нарушает структуру гена lacZ'. Это приводит к потере голубой окраски
на индикаторной среде с И П Т Г (изопропилтиогалактозид) и X-gal (5-бромо-4-хлоро-
З-индолил-р-О-галактозид) [5] клетками, содержащими рекомбинантную Д Н К - Извест-
ны, однако, случаи [6, 7] , когда совпадение рамки считывания гена lacZ' вектора и ге-
на, содержащегося во встроенном ф р а ш е н т е , может привести к образованию гибрид-
ного белка, сохраняющего способность к α-комплементации [8] и обеспечивающего
активность β -галактозидазы, проявляющуюся в голубой окраске клеток Е. coli, вклю-
чающих рекомбинантную Д Н К . Из анализа нуклеотидной последовательности плазми-
ды pUC 19 [4] и клонируемого BglII-B-фрагмента [9—121 стало очевидно, что при
встраивании последнего в ВатНІ-сайт полилинкерной области pUC19 возможно слия-
ние генов гроСг и lacZ' с сохранением рамки считывания и образованием гибридного
гена (при клонировании в нитевидных фагах M13tnp8 и тр9 рамка считывания нару-
шается) . Д л я проверки этого предположения, т. е. возможной альтернативной ориента-
ции В^"/ / / -Б-фрагмента pJC703 при конструировании [2] рекомбинантной плазмиды
pUC19y результатом которого явилось бы образование химерного гена rpoC'-lacZ', коди-
рующего способный к α-комплемснтации химерный донорный пептид β -галактозидазы,
мы провели анализ полученных ранее [2] клонов Е. coli, обладающих устойчивостью к
ампициллину (кодируемой геном векторной плазмиды pUC19) и голубой окраской на
среде, содержащей И П Т Г и Z-ga l (Z-gal синтезирован в лаборатории А. Г. Терентьева,
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, и является аналогом X-ga l ) . Учитывая,
что ген гроВ, содержащийся в Б £ / / / - £ - ф р а г м е н т е pJC703 (рис. 1), несет доминантную
мутацию устойчивости к рифампицину ( r i f r ) гроВЗ, голубые клоны Е. coli, полученные
в результате трансформации компетентных клеток Е. coli JM101 [5] лигазной смесыо
BglII-гидролизата pJC703 с £ а ш / / / - г и д р о л и з а т о м pUC19, перекалывали на среду, со-
д е р ж а щ у ю 100 м к г / м л рифампицина. В результате этого были отобраны 50 клонов
Е. coli, обладающих Ш^'-фенотипом и голубой окраской. Д а л е е гілазмидную Д Н К из
276 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА.—1987,—Т. 3, № 5
|