Преимущества Z-gal при селекции рекомбинантов по Lac-фенотипу
Рассмотрены преимущества использования Z-gal в качестве хромогенного субстрата β-галактозидазы при селекции рекомбинантов по Lac-фенотипу.
Gespeichert in:
| Datum: | 1989 |
|---|---|
| Hauptverfasser: | , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1989
|
| Schriftenreihe: | Биополимеры и клетка |
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155110 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Преимущества Z-gal при селекции рекомбинантов по Lac-фенотипу / Ε.Б. Патон, А.Г. Терентьев // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 4. — С. 106-108. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155110 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1551102025-02-23T20:22:13Z Преимущества Z-gal при селекции рекомбинантов по Lac-фенотипу Переваги Z-gal при селекції рекомбінантів за Lac-фенотипом Advantages of Z-gal during selection of recombinants on Lac phenotype Патон, Е.Б. Терентьев, А.Г. Краткие сообщения Рассмотрены преимущества использования Z-gal в качестве хромогенного субстрата β-галактозидазы при селекции рекомбинантов по Lac-фенотипу. Розглянуто переваги використання Z-gal як хромогенного субстрату β-галактозидази при селекції рекомбінантів за Lac-фенотипом. Advantages of Z-gal use as a chromogenic substrate of (5-galactosidase, when selecting recombinants by Lac phenotype, are discussed. 1989 Article Преимущества Z-gal при селекции рекомбинантов по Lac-фенотипу / Ε.Б. Патон, А.Г. Терентьев // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 4. — С. 106-108. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0000DE https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155110 577.2.08 ru Биополимеры и клетка application/pdf Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Краткие сообщения Краткие сообщения |
| spellingShingle |
Краткие сообщения Краткие сообщения Патон, Е.Б. Терентьев, А.Г. Преимущества Z-gal при селекции рекомбинантов по Lac-фенотипу Биополимеры и клетка |
| description |
Рассмотрены преимущества использования Z-gal в качестве хромогенного субстрата β-галактозидазы при селекции рекомбинантов по Lac-фенотипу. |
| format |
Article |
| author |
Патон, Е.Б. Терентьев, А.Г. |
| author_facet |
Патон, Е.Б. Терентьев, А.Г. |
| author_sort |
Патон, Е.Б. |
| title |
Преимущества Z-gal при селекции рекомбинантов по Lac-фенотипу |
| title_short |
Преимущества Z-gal при селекции рекомбинантов по Lac-фенотипу |
| title_full |
Преимущества Z-gal при селекции рекомбинантов по Lac-фенотипу |
| title_fullStr |
Преимущества Z-gal при селекции рекомбинантов по Lac-фенотипу |
| title_full_unstemmed |
Преимущества Z-gal при селекции рекомбинантов по Lac-фенотипу |
| title_sort |
преимущества z-gal при селекции рекомбинантов по lac-фенотипу |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| publishDate |
1989 |
| topic_facet |
Краткие сообщения |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155110 |
| citation_txt |
Преимущества Z-gal при селекции рекомбинантов по Lac-фенотипу / Ε.Б. Патон, А.Г. Терентьев // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 4. — С. 106-108. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. |
| series |
Биополимеры и клетка |
| work_keys_str_mv |
AT patoneb preimuŝestvazgalpriselekciirekombinantovpolacfenotipu AT terentʹevag preimuŝestvazgalpriselekciirekombinantovpolacfenotipu AT patoneb perevagizgalpriselekcíírekombínantívzalacfenotipom AT terentʹevag perevagizgalpriselekcíírekombínantívzalacfenotipom AT patoneb advantagesofzgalduringselectionofrecombinantsonlacphenotype AT terentʹevag advantagesofzgalduringselectionofrecombinantsonlacphenotype |
| first_indexed |
2025-11-25T01:54:06Z |
| last_indexed |
2025-11-25T01:54:06Z |
| _version_ |
1849725441970012160 |
| fulltext |
с увеличением новосинтезированных мРНК или это обусловлено акти-
вацией процесса инициации биосинтеза белка на предшествующих
матрицах, пока еще не выяснено.
Таким образом, экспериментально установлено повышение полипеп-
тидпого синтеза на эндогенных матрицах в бесклеточной системе, вы-
деленной из зародышей высокогетерозисных гибридных растений. При
добавлении экзогенной матрицы процент стимуляции синтеза у роди-
тельских форм таких гибридов значительно выше, чем в поколении F i .
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Активность рибосом проростков гибридных и инбредных ф о р м к у к у р у з ы в бескле-
точной системе синтеза белка / JL Т. Оплачко , С. С. Костышин, Л . А. Я к о в л е в а ,
Μ. М. М а р ч е н к о / / Ф и з и о л о г и я растений.— 1985—32, № 4 — С . 710—714.
2. Еркеев М. И., Кудоярова Г. Р. Изучение активности белоксинтезирующей системы
у г етерози сн их гибридов к у к у р у з ы / / Т а м ж е . — 1981.—28, № 4.— С. 880—883.
3. Конарев В. Г. Б и о х и м и я и м о л е к у л я р н а я генетика г е т е р о з и с а / / Г е т е р о з и с . — М и н с к :
Н а у к а и техника , 1982 .—С. 163—178.
4. Yamada M., Ishige Т., Ohkawa Y. R e a p p r a i s a l of A s h b y ' s h y p o t h e s i s on h e t e r o s i s of
phys io log ica l t r a t s in maize , Zea mays L. / / E u p h v t i c a . — 1985.—34, N 3.— P. 593—
598.
5. Yamada M. H e t e r o s i s in e m b r y o of rnaise, Zea mays L. / / B u l l . N a t . Ins t . Agrob io l .
Res — 1985.— N 1.— P. 85—98.
6. Roberts B. E., Patterson В. M. E f f i c i en t t r a n s l a t i o n of t obacco m o s a i c v i r u s R N A a n d
rabb i t g lob in 9S R N A in a ce l l - f ree s y s t e m f r o m c o m m e r c i a l w h e a t g e r m / / P roc . N a t .
Acad . Sci. U S A . — 1973.—70, N 5 . — P . 2330—2334.
7. Marcus A., Efron D., Weks D. P. The w h e a t e m b r y o ce l l - f ree s y s t e m / / Me th . E n z y -
mol .— 1 9 7 4 . — 3 0 . — P . 749—761.
8. Mans R. /., Novelli G. D. M e a s u r e m e n t of the i n c o r p o r a t i o n of r a d i o a c t i v e a m i n o ac ids
in to p ro te in by a f i l t r e -pape r disk m e t h o d / / A r c h . Biochem. a n d B iophys .— 1961.—
94.— P . 48—53.
9. Синтез Р Н К и белка в ранний период п р о р а с т а н и я з а р о д ы ш е й к у к у р у з ы в связи с
гетерозисом / С. С. Костышин, Л . Н. Хлус, Л . Т. Оплачко , Μ. М. М а р ч е н к о / / С.-х.
биология .— Г988.— № 1 . — С . 35—38.
Черновиц. гос. ун-т П о л у ч е н о 15.03.88
P E C U L I A R I T I E S O F P R O T E I N S Y N T H E S I S O N E N D O G E N O U S m R N A s
IN C E L L - F R E E S Y S T E M S F R O M G E R M S O F T H E D I F F E R E N T M A I Z E F O R M S
Μ. Λ1 Marchenko, L. T. Oplachko, S. S. I\ost у shin, L. S. Yazlovitskaya
Unive r s i ty , C h e r n o v t s y
S u m m а г у
The ac t iv i ty of po lypep t i de s y n t h e s i s on the e n d o g e n o u s m R N A s a n d p o l y ( U ) in the cell-
f r ee s y s t e m f r o m g e r m s of the d i f f e r e n t m a i z e f o r m s is s t ud i ed . T r a n s l a t i o n a I ac t iv i ty
on the e n d o g e n o u s m R N A s in the ce l l - f ree s y s t e m i so la ted f r o m the hybr id m a i z e g e r m s
is e s t ab l i shed to increase . The po lypep t ide s y n t h e s i s s t i m u l a t i o n by p o l y ( U ) in p a r e n t a l
f o r m s of supe r he te ros i s h y b r i d s is h i g h e r t h a n in g e n e r a t i o n F b
УДК 577.2.08
Ε. Б. Патон, А. Г. Терентьев
ПРЕИМУЩЕСТВА Z gal
ПРИ СЕЛЕКЦИИ РЕКОМБИНАНТОВ ПО Lac-ФЕНОТИПУ
Рассмотрены преимущества использования Z - g a l в качестве хромогенного субстрата
$-галактозидазы при селекции рекомбинантов по Lac-фенотипу.
Lac+-фенотип, обеспечиваемый экспрессией гена IacZ, является одним
из маркеров, наиболее часто используемых в практике конструирования
ISSN 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА 1989. Τ. 5. JMe 4 107
рекомбинаитных ДНК. Селекция по этому признаку проводится при
использовании в качестве векторных средств широкого круга плазмид,
фагов и их гибридов — фазмид [1—4]. Часто она основывается на утере
рекомбинантами £ас+-фенотипа вследствие встраивания чужеродной
Д Н К в структурную последовательность гена IacZ, нарушающую ее
рамку считывания. Для визуализации Lac+-фенотипа среда для отбора
рекомбинантов обычно включает хромогенный субстрат β-галактозида-
зы X-gal (5-бром, 4-хлор, 3-индолил, Р-/)-галактопираиозид), обусловли-
вающий голубую окраску /.ас+-колоний. На практике мы столкнулись
с необходимостью в целом ряде случаев вести отбор рекомбинантов на
основании восстановления активности β-галактозидазы при восполнении
структурной и/или регуляторной областей гена IacZ. Применяя X- и
Z-gal (5-бром, 3-индолил, Р-/)-галактопиранозид), мы заметили, что
последний обеспечивает более интенсивную синюю окраску Lae+-кло-
пов. В определенных случаях, когда при первичном скрининге реком-
бинантов желательно оцепить уровень экспрессии гена IaeZ1 вариабель-
ность и большая интенсивность окраски является преимуществом, об-
легчающим селекцию. В частности, при конструировании рекомбинант-
пой плазмиды на основе pUC18, в которой промотор Iae удален или
репрессирован, необходимо было выбрать ориентацию встраиваемого
фрагмента ДНК, обеспечивающую транскрипцию образовавшегося ге-
на rplL'-IacZf лишь с очень слабого по сравнению с PIAC промотора PL 12
[5]. Уровень активности β-галактозидазы в данном случае был меньше
1 ед. Миллера, что в 100—200 раз ниже такового в случае транскрип-
ции с Piac. Успешный отбор рекомбинантов, таким образом, прямо со-
относился с интенсивностью обеспечиваемого Z-gal £ас+-фенотипа. Мы
убедились в преимуществах Z-gal и при работе с плазмидой pNM481
[6]. В данном случае возможность оценки уровня экспрессии гибрид-
ных генов IaeZ, коррелирующая с интенсивностью синей окраски кло-
пов, обеспечила удобство первичного скрининга рекомбинаитных плаз-
мид, когда ген IaeZ становился чувствительным к сигналам инициации
транскрипции и трансляции разной эффективности [7]. В сконструи-
рованных рекомбинаитных плазмидах ρΙΚ5, содержащей ген rplJ'-laeZ',
и р1К7 с геном rplL'-laeZ' транскрипция гибридных генов обеспечива-
лась весьма слабым промотором Р4 векторной плазмиды [7]. В задачу
исследования входило сравнение уровня экспрессии этих генов, обеспе-
чиваемого данным промотором и промоторами с другой силой, но иден-
тичными для обоих генов. Селекцию рекомбинаитных плазмид после
лигирования р1К5 и р1К7 с фрагментами ДНК, содержавшими промо-
торы Ρβ и PLH, значительно облегчила возможность визуальной пред-
варительной оценки уровня экспрессии гена IaeZ. Преимуществом воз-
можности первичного скрининга рекомбинантов по интенсивности обес-
печиваемой Z-gal синей окраски может быть случай клонирования чу-
жеродной Д Н К методом «shotgun», в результате чего функциональная
активность гена IaeZ может быть восстановлена при слиянии его с раз-
ными фрагментами, отличающимися, однако, по эффективности обеспе-
чиваемого уровня экспрессии β-галактозидазы.
Суммируя все вышеизложенное, можно заключить, что применение
Z-gal, обеспечивающего более интенсивную окраску І,ас+-колоний Е.
Colii позволяет в целом ряде случаев осуществить простой и достовер-
ный первичный скрининг рекомбинантов по этому признаку.
С П И С О К Л И Т Е Р А Т У Р Ы
1. Yanish-Perron СVieira /., Messing J. Improved М13 phage cloning vectors and host
s t ra ins: sequences nucleotide of the M13mpl8 and pUC19 v e c t o r s / / G e n e . — 1985.—33,
N 1 .—P. 103—119.
2. Vieira /., Messing J. The pUC plasmids, an M 13mp7-derived system for insertion mu-
tagenesis and sequencing with synthetic universal p r i m e r s / / I b i d . — 1982.—19, N 2.—
P. 259—268.
3. Zinder N. D., Boeke J. D. The f i lamentous phage (Ff) as vectors for recombinant
D N A - a r e v i e w / / I b i d . — N 1.— P. 1—10.
ISSN 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА 1989. Τ. 5. JMe 4 1 0 7
4. Dente L., Cesareni G., Cortese R. pEMBL: a new fami ly of s ingle s t r anded p l a s m i d s / /
NucL Acids Res.— 1982.—11, N 6 . — P . 1646—1655.
5. Патон Ε. Б., Крупская И. В., Живолуп А. Н. Однонаправленная ориентация при
клонировании фрагментов гр/Д'Л./Х-гроВС-оперона Escherichia coli в многокопийной
плазмиде pUC / / Биополимеры и клетка.— 1989.—5, № 1.— С. 58—66.
6. Minton N. Improved p lasmid vec tors for isola t ion of t r a n s l a t i o n lac gene f u s i o n s / /
Gene.— 1984.—31, N 2 . — P . 269—273.
7. Патон Ε. Б., Крупская И. ВЖиволуп А. Н. Изучение регуляции экспрессии гена
rplL Escherichia coli методом слияния с геном IacZ в плазмиде pNM481 / / Биополи-
меры и клетка .— 1989.—5, № 2 . — С . 99—102.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Киев Получено 19.01.89
A D V A N T A G E S O F Z-GAL D U R I N G S E L E C T I O N
O F R E C O M B I N A N T S ON LAC P H E N O T Y P E
E. B. Paton, A. G. T e r e n t y e v
S u m m a r y
A d v a n t a g e s of Z-ga l use as a ch romogen ic s u b s t r a t e of β -ga lac tos idase , w h e n se lec t ing
r ecombinan t s by Lac phenotype , a re d iscussed.
108 I S S N 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И К Л Е Т К А 1989. Τ. 5. JMe 4 107
|