Intra- and intermolecular interactions mediated by adaptor protein Ruk/CIN85/SETA

• Published in: Біополімери і клітина
• Date: 2005
• Main Authors: Ilnytska, O.M., Drel, V.R., Shuvayeva, H.Yu., Havrylov, S.V., Fedyshyn, Ya.Ya., Mayevska, O.M., Ihumentseva, N.I., Gout, I.T., Buchman, V.L.
• Format: Article
• Language: English
• Published: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2005
• Subjects: Клітинна біологія
• Online Access: https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155118
• Journal Title: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Cite this: Intra- and intermolecular interactions mediated by adaptor protein Ruk/CIN85/SETA / O.M. Ilnytska, V.R. Drel, H.Yu. Shuvayeva, S.V. Havrylov, Ya.Ya. Fedyshyn, O.M. Mayevska, N.I. Ihumentseva, I.T. Gout, V.L. Buchman // Біополімери і клітина. — 2005. — Т. 21, № 1. — С. 48-54. — Бібліогр.: 32 назв. — англ.

Ruk/CIN85l SETA is a member of a separate and evolutionary conserved family of adapter I scaffold proteins implicated in apoptic and receptor tyrosine kinases signalling, rearrangement of actin cytoskeleton and cell adhesion, podocyte and T cell functions. Self-regulation through intra- and intercellular interactions can be supposed for RuklCIN85l SETA as this protein contains SH3 domains and proline-rich sequence, localized within one polypeptide chain, as well as C-terminal coiled-coil region. The ability of Ruk proline-rich motifs to interact with its own SH3 domains in an intramolecular fashion and coiled-coil region to mediate oligomerization between different isoforms was assessed in GST pull down experiments. It was shown that both Ruk SH3A and to a less extent SH3B domains can interact with its own proline-rich sequences in a cooperative manner, while coiled-coil region provide for isoforms oligomerization. SH3C domain appear exerts conformational constraints, imposed on coiled-coil region, restricting the level of oligomerization. We also demonstrated that the ability of exogenous ligands to interact with Ruk polyprotine motifs is changing during the course of TNFa-induced apoptosis of human myelomonocytic W37 cells. RuklCIN85lSETA є представником окремої еволюційно кон­сервативної родини адаптернихі риштувальних білків, залуче­них до апоптичного сигналювання і сигналювання, залежного від рецепторних тирозинових протеїнкіназ, перебудови актинового цитоскелету і адгезії клітин, контролю функцій подоцитів і Т клітин. Оскільки Ruk/CIN85/ SETA містить одно­ часно SH3 домени і багаті на пролін послідовності на рівні одного поліпептидного ланцюга та С-кінцевий суперспіралізований район, можна припустити, що його біологічна ак­тивність регулюється за рахунок внутрішньо- і міжмолеку­лярних взаємодій. Здатність багатих на пролін мотивів Ruk взаємодіяти з власними SH3 доменами та суперспіралізованої ділянки — опосередковувати олігомеризацію різних ізоформ до­сліджували за допомогою методу зв'язування in vitro GST-зли­тих білків. Показано, шр SH3A і, в меншій мірі, SH3B домени Ruk кооперативно взаємодіють із власними багатими на пролін послідовностями, у той час як суперспіралізований район забезпечує олігомеризацію ізоформ. Не виключено при цьому, що SH3C домен чинить конформаційний вплив на суперспіралізований район, обмежуючи, в такий спосіб, ступінь олігомеризації. Нами також встановлено, що здатність екзо­генних лігандів взаємодіяти з багатими на пролін мотивами Ruk координовано змінюється протягом TNFa-індукованого апоптозу мієломоноцитарних клітин лінії U937. Ruk/CIN85l SETA is a member of a separate and evolutionary conserved family of adapter I scaffold proteins implicated in apoptic and receptor tyrosine kinases signalling, rearrangement of actin cytoskeleton and cell adhesion, podocyte and T cell functions. Self-regulation through intra- and intercellular interactions can be supposed for RuklCIN85l SETA as this protein contains SH3 domains and proline-rich sequence, localized within one polypeptide chain, as well as C-terminal coiled-coil region. The ability of Ruk proline-rich motifs to interact with its own SH3 domains in an intramolecular fashion and coiled-coil region to mediate oligomerization between different isoforms was assessed in GST pull down experiments. It was shown that both Ruk SH3A and to a less extent SH3B domains can interact with its own proline-rich sequences in a cooperative manner, while coiled-coil region provide for isoforms oligomerization. SH3C domain appear exerts conformational constraints, imposed on coiled-coil region, restricting the level of oligomerization. We also demonstrated that the ability of exogenous ligands to interact with Ruk polyprotine motifs is changing during the course of TNFa-induced apoptosis of human myelomonocytic W37 cells.