Клонирование генетического материала Rhizobiuml meliloti, контролирующего процесс образования клубеньков у люцерны
При скрещивании клеток кишечной палочки, несущих клонированную в pRK290 тотальную ДНК эффективного штамма СХМ1 клубеньковых бактерий люцерны, с авирулентными мутантами СХМ1-125 и СХМ1-126 были получены трансконъюганты с разной степенью восстановления симбиотических свойств. Идентифицирована гибридна...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Дата: | 1987 |
| Автори: | , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1987
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155165 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Клонирование генетического материала Rhizobiuml meliloti, контролирующего процесс образования клубеньков у люцерны / В.В. Кучко, Б.В. Симаров // Биополимеры и клетка. — 1987. — Т. 3, № 6. — С. 302-306. — Бібліогр.: 17 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155165 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Кучко, В.В. Симаров, Б.В. 2019-06-16T10:07:25Z 2019-06-16T10:07:25Z 1987 Клонирование генетического материала Rhizobiuml meliloti, контролирующего процесс образования клубеньков у люцерны / В.В. Кучко, Б.В. Симаров // Биополимеры и клетка. — 1987. — Т. 3, № 6. — С. 302-306. — Бібліогр.: 17 назв. — рос. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.000201 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155165 576.851.155:633.31 КЛОНИРОВАНИЕ При скрещивании клеток кишечной палочки, несущих клонированную в pRK290 тотальную ДНК эффективного штамма СХМ1 клубеньковых бактерий люцерны, с авирулентными мутантами СХМ1-125 и СХМ1-126 были получены трансконъюганты с разной степенью восстановления симбиотических свойств. Идентифицирована гибридная плазмида, восстанавливающая у мутанта СХМ1-125 способность к эффективному симбиозу с люцерной. При схрещуванні клітин кишкової палички, які несуть клоновану в pRK290 тотальну ДНК ефективного штаму СХМ1 бульбочкових бактерій люцерни, з авірулентними мутантами СХМ1-125 і СХМ1-126 отримано транскон’югати з різним ступенем відновлення симбіотичних властивостей. Ідентифіковано гібридну плазміду, яка відновлює у мутанта СХМ1-125 здатність до ефективного симбіозу з люцерною. The total DNA of an effective Rhizobium meliloti strain CXM1 was cloned in pRK290 plasmid in E. coli. Transconjugants with the different efficiency of symbiotic properties are obtained during mating of recombinant E. coli clones with avirulent R. meliloti mutants CXM1-125 and CXM1-126. A recombinant plasmid restoring effective symbiosis of CXMI-125 mutant with alfalfa is identified. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Генно-инженерная биотехнология Клонирование генетического материала Rhizobiuml meliloti, контролирующего процесс образования клубеньков у люцерны Клонування генетичного матеріалу Rhizobiuml meliloti, що контролює процес утворення бульбочок люцерни Cloning of genetic material of Rhizobium meliloti controlling the process of alfalfa nodulation Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Клонирование генетического материала Rhizobiuml meliloti, контролирующего процесс образования клубеньков у люцерны |
| spellingShingle |
Клонирование генетического материала Rhizobiuml meliloti, контролирующего процесс образования клубеньков у люцерны Кучко, В.В. Симаров, Б.В. Генно-инженерная биотехнология |
| title_short |
Клонирование генетического материала Rhizobiuml meliloti, контролирующего процесс образования клубеньков у люцерны |
| title_full |
Клонирование генетического материала Rhizobiuml meliloti, контролирующего процесс образования клубеньков у люцерны |
| title_fullStr |
Клонирование генетического материала Rhizobiuml meliloti, контролирующего процесс образования клубеньков у люцерны |
| title_full_unstemmed |
Клонирование генетического материала Rhizobiuml meliloti, контролирующего процесс образования клубеньков у люцерны |
| title_sort |
клонирование генетического материала rhizobiuml meliloti, контролирующего процесс образования клубеньков у люцерны |
| author |
Кучко, В.В. Симаров, Б.В. |
| author_facet |
Кучко, В.В. Симаров, Б.В. |
| topic |
Генно-инженерная биотехнология |
| topic_facet |
Генно-инженерная биотехнология |
| publishDate |
1987 |
| language |
Russian |
| container_title |
Биополимеры и клетка |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Клонування генетичного матеріалу Rhizobiuml meliloti, що контролює процес утворення бульбочок люцерни Cloning of genetic material of Rhizobium meliloti controlling the process of alfalfa nodulation |
| description |
При скрещивании клеток кишечной палочки, несущих клонированную в pRK290 тотальную ДНК эффективного штамма СХМ1 клубеньковых бактерий люцерны, с авирулентными мутантами СХМ1-125 и СХМ1-126 были получены трансконъюганты с разной степенью восстановления симбиотических свойств. Идентифицирована гибридная плазмида, восстанавливающая у мутанта СХМ1-125 способность к эффективному симбиозу с люцерной.
При схрещуванні клітин кишкової палички, які несуть клоновану в pRK290 тотальну ДНК ефективного штаму СХМ1 бульбочкових бактерій люцерни, з авірулентними мутантами СХМ1-125 і СХМ1-126 отримано транскон’югати з різним ступенем відновлення симбіотичних властивостей. Ідентифіковано гібридну плазміду, яка відновлює у мутанта СХМ1-125 здатність до ефективного симбіозу з люцерною.
The total DNA of an effective Rhizobium meliloti strain CXM1 was cloned in pRK290 plasmid in E. coli. Transconjugants with the different efficiency of symbiotic properties are obtained during mating of recombinant E. coli clones with avirulent R. meliloti mutants CXM1-125 and CXM1-126. A recombinant plasmid restoring effective symbiosis of CXMI-125 mutant with alfalfa is identified.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155165 |
| citation_txt |
Клонирование генетического материала Rhizobiuml meliloti, контролирующего процесс образования клубеньков у люцерны / В.В. Кучко, Б.В. Симаров // Биополимеры и клетка. — 1987. — Т. 3, № 6. — С. 302-306. — Бібліогр.: 17 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT kučkovv klonirovaniegenetičeskogomaterialarhizobiumlmelilotikontroliruûŝegoprocessobrazovaniâklubenʹkovulûcerny AT simarovbv klonirovaniegenetičeskogomaterialarhizobiumlmelilotikontroliruûŝegoprocessobrazovaniâklubenʹkovulûcerny AT kučkovv klonuvannâgenetičnogomateríalurhizobiumlmelilotiŝokontrolûêprocesutvorennâbulʹbočoklûcerni AT simarovbv klonuvannâgenetičnogomateríalurhizobiumlmelilotiŝokontrolûêprocesutvorennâbulʹbočoklûcerni AT kučkovv cloningofgeneticmaterialofrhizobiummeliloticontrollingtheprocessofalfalfanodulation AT simarovbv cloningofgeneticmaterialofrhizobiummeliloticontrollingtheprocessofalfalfanodulation |
| first_indexed |
2025-11-26T11:52:16Z |
| last_indexed |
2025-11-26T11:52:16Z |
| _version_ |
1850620262039420928 |
| fulltext |
Генноинженерная
биотехнология
УДК 576.851.155:633.31
КЛОНИРОВАНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА
R H I Z O B I U M L MELILOTI, КОНТРОЛИРУЮЩЕГО ПРОЦЕСС
ОБРАЗОВАНИЯ КЛУБЕНЬКОВ У ЛЮЦЕРНЫ
В. В. Кучко, Б. В. Симаров
Введение. Процесс формирования азотфиксирующих клубеньков бобо-
выми растениями при взаимодействии их с бактериями рода Rhizobium
состоит из большого числа этапов, контролируемых генами обоих сим-
бионтов [1]. В настоящее время с использованием методов генной ин-
женерии установлена структурная организация некоторых генов бак-
терий, ответственных за такие важные симбиотические свойства, к а к
специфичность по отношению к растению-хозяину, способность образо-
вывать клубеньки, синтез нитрогеназного комплекса и др. [2, 3]. Вмес-
те с тем исследована только небольшая часть симбиотических генов
(sym-генов) у ограниченного числа штаммов клубеньковых бактерий,
вследствие чего генетический контроль целого ряда этапов становления
эффективного симбиоза остается малоизученным. В связи с этим пред-
ставляется целесообразным для дальнейшего изучения молекулярных
механизмов взаимодействия клубеньковых бактерий с бобовыми расте-
ниями использовать новые штаммы этих микроорганизмов, а также их
мутанты с измененными симбиотическими признаками.
В данной работе проведено клонирование генетического материала
эффективного штамма CXMl клубеньковых бактерий люцерны и оце-
нены симбиотические свойства гибридов, полученных при введении ре-
комбинантных плазмид в авирулентные мутанты СХМ1-125 и СХМ1-126>
имеющие нарушения в различных nod-генах [4].
Материалы и методы. Список штаммов и плазмид, использованных
в работе, представлен в табл. 1. Клубеньковые бактерии выращивали
на среде 79 [5], дополненной казаминовыми кислотами («Serva», ФРГ)
до конечной концентрации 2 г/л. Для Е. coli применяли среду LB. Се-
лективные среды готовили, добавляя антибиотики («Serva», ФРГ) в
следующих концентрациях: тетрациклин (tc) — 10 мкг/мл, стрептоми-
цин ( s t r ) — 500 мкг/мл, налидиксовая кислота ( п а ї ) — 3 0 мкг/мл, ри-
фампицин (rif) — 30 мкг/мл. Трехродительское скрещивание вели с
участием штамма Е. coli HB101, несущего плазмиду-помощник
PRK2013, на твердой среде LB [6]. Тотальную Д Н К штамма CXMl вы-
деляли по методу Кондороши [7], плазмидную — Бирнбойма — Доли
[8]. Д л я рестрикции использовали фермент EcoRIy а для лигирования —
ДНК-лигазу фага Т4 (ВНИИ прикл. энзимологии, Вильнюс). Препара-
ты плазмидной и тотальной Д Н К анализировали с помощью электро-
фореза в 0,7 %-ной агарозе, в трис-боратном буфере. Трансформацию
клеток Е. coli проводили по схеме Брауна [9]. Симбиотические свойст-
ва трансконъюгантов оценивали в микровегетационных опытах [10] при
инокуляции люцерны сорта Зайкевича.
Результаты и обсуждение. Для клонирования генетического мате-
риала штамма CXMl использована плазмида pRK290y способная реп-
лицироваться и поддерживаться в большинстве видов грам-отрицатель-
302 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. — 1987. — Т. 3, JVb G
ных микроорганизмов и имеющая уникальные сайты для рестрикции
ферментами EcoRI и BglII. Встройку фрагментов тотальной Д Н К
CXMl, полученных в условиях неполной рестрикции, проводили по
ЕсоШ-с&шу. В результате трансформации клеток Е. coli HBlOl лига-
зационной смесью было отобрано около 10000 клонов, устойчивых к
тетрациклину. Для выявления доли трансформантов, несущих гибрид-
ные плазмиды, проведен скрининг 40 клонов, в 15 из которых были об-
наружены рекомбинантные плазмиды, содержащие генетический мате-
риал штамма CXMl в виде фрагментов Д Н К размерами от 4000 до
Рис. 1. Э л е к т р о ф о р е г р а м м а £ с а / ? / - р е с т р и к т о в Д Н К р е к о м б и н а н т н ы х
п л а з м и д , в ы д е л е н н ы х из т р а н с ф о р м а н т о в ш т а м м а Е. coli НВ101 (а —
з), и ДНК фага λ
F i g . 1. The p ic tu re of e l ec t rophore t i c s e p a r a t i o n of EcoRI c l e a v a g e
p r o d u c t s of r e c o m b i n a n t p l a s m i d s D N A i so la t ed f r o m H B l O l t r a n s f o r -
m a n t s (a — з ) ; l ane (и) is a se t of s ize s t a n d a r d s de r ived f r o m a
EcoRI d iges t of b a c t e r i o p h a g e λ D N A
Т а б л и ц а 1
Штаммы и плазмиды, использованные в работе
The strains and plasmids used
Штаммы
и плазмиды Маркеры Источник
30000 пар нуклеотидов (п. н.) (рис. 1). Таким образом, можно предпо-
ложить, что из 10000 трансформантов около 3000 содержат клонирован-
ную Д Н К штамма CXMl. При скрещивании трансформантов Е. coli,
содержащих в составе гибридных плазмид фрагменты генома R. meli-
Ioti1 с авирулентными мутантами штамма CXMl могли образовываться
трансконъюганты, восстановившие способность формировать клубеньки
у проростков люцерны за счет клонированного генетического материала
штамма CXMl. Известно, что растения люцерны способны образовы-
вать клубеньки даже при наличии в инокулюме около 10 вирулентных
303 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. — 1987. — Т. 3, JVb G
клеток на IO8 авирулентных, вследствие чего в условиях стерильного
микровегетационного опыта возможен отбор единичных вирулентных
трансконъюгантов [11]. Поэтому для идентификации гибридных плаз-
мид, несущих гены вирулентности, все полученные трансформанты были
разбиты на 20 групп по 500 клонов. Затем были проведены скрещива-
ния каждой группы, имеющей по нашим расчетам около 150 клонов с
гибридными плазмидами, с авирулентными мутантами СХМ1-125 и
СХМ1-126, полученными под действием УФ-света в нашей лаборатории
[4]. Мутанты не дают реверсий к вирулентности и несут мегаплазмиды,
не отличающиеся по электрофоретической подвижности от мегаплазмид
исходного штамма [14]. По-видимому, потеря способности образовы-
вать клубеньки у обоих штаммов связана с небольшими делециями сим-
бнотической мегаплазмиды, что исключает ревертирование к вирулент-
ности и не влияет на электрофоретическую подвижность кольцевых
молекул Д Н К с молекулярной массой, превышающей 400· IO6. В ре-
зультате скрещиваний 20 групп трансформантов с авирулентными му-
тантами СХМ1-125 и СХМ1-126 с частотой IO -2—IO -3 образовались
трансконъюганты, которые были использованы для инокуляции про-
ростков люцерны. Результаты микровегетационного опыта показали,
что среди трансконъюгантов, образовавшихся в семи вариантах скрещи-
ваний, имеются бактерии, восстановившие способность индуцировать
формирование клубеньков у люцерны. После выделения из клубеньков,
клонирования и проверки на селективных средах отдельные клоны
трансконъюгантов каждого варианта скрещивания были вновь исполь-
зованы для инокуляции проростков люцерны. Результаты проверки сим-
биотических свойств трансконъюгантов представлены в табл. 2. Можно
Т а б л и ц а 2
Типы трансконъюгантов R. meliloti, образующихся при скрещивании
разных групп трансформантов Е. coli с авирулентными мутантами
СХМ1-125 и СХМ1-126
The types of R. meliloti transconjugants obtained from mating
of different groups of E. coli transformants with avirulent mutants
CXM1-125 and CXM1-126
Штаммы-
Доноры (группы трансформантов E coli, несущих гибридные
плазмиды)
реципиенты
6 7 13 20
С ХМ1-125
C X M l -126 I
III
I, II
I , I I , III
I , I I , III
I, II
I, II
П р и м е ч а н и е . I — т р а н с к о н ъ ю г а н т ы , о б р а з у ю щ и е клубеньки, но не
ф и к с и р у ю щ и е азот (Nod+ , F i x - ) ; II — т р а н с к о н ъ ю г а н т ы с низким
уровнем а з о т ф и к с и р у ю щ е й активности, не в ы з ы в а ю щ и е увеличения
массы и н о к у л и р о в а н н ы х ими растений (Nod+ , F i x i , E f f - ) ; I I I — транс-
к о н ъ ю г а н т ы , восстановившие симбиотические свойства до у р о в н я ис-
ходного э ф ф е к т и в н о г о ш т а м м а C X M l ( E f f + ) .
видеть, что по степени восстановления симбиотических свойств транс-
конъюганты могут быть разделены на три класса. В проведенных ранее
экспериментах [15] было показано, что перенос факторов вирулентности
в мутанты СХМ1-125 и СХМ1-126 при помощи плазмиды R68.45 может
сопровождаться появлением трансконъюгантов с различной эффектив-
ностью. Кроме того, имеются данные о том, что у мутанта СХМ1-125
нарушены гены, контролирующие ранние стадии образования клубень-
ков, а у мутанта СХМ1-126 — еще и гены, контролирующие следующие,
более специфические стадии [4]. В связи с этим наши результаты мо-
гут свидетельствовать о том, что: 1) у обоих мутантов, по-видимому,
повреждены гены, контролирующие активность нитрогеназы и эффек-
тивность азотфиксации; 2) эти гены могут находиться на одном клони-
304 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. — 1987. — Т. 3, JVb G
рованном фрагменте Д Н К совместно с генами, контролирующими как
ранние, так и последующие стадии образования клубеньков. Можно
предположить, что появление трех классов трансконъюгантов опреде^
ляется различиями в клонированном генетическом материале штамма
СХМ1, который был введен авирулентным мутантам. Мы провели про-
верку 120 вирулентных трансконъюгантов на наличие у них гибридных
плазмид. У большинства трансконъюгантов были идентифицированы
векторные плазмиды, не содержащие фрагментов Д Н К штамма CXMl.
У некоторых из них в процессе хранения на неселективных средах про-
исходила элиминация плазмиды pRK290, при этом симбиотические
свойства этих штаммов не изменялись. Несколь-
ко эффективных трансконъюгантов, полученных
в скрещивании СХМ1-125 (7) (табл. 2), содер-
жали идентичные друг другу гибридные плазми-
ды, несущие клонированный фрагмент тотальной
Д Н К штамма CXMl размером около 80000 п. н.
(рис. 2). По-видимому, практически все проана-
лизированные трансконъюганты являются гапло-
идными рекомбинантами, у которых восстанов-
ление вирулентности связано с интеграцией кло-
нированных генов в мегаплазмиду или хромо-
сому, после чего векторная плазмида не несет
ризобиальных генов. Известно, что при внутри-
видовых скрещиваниях клубеньковых бактерий
с использованием 7?-плазмид, как правило, воз-
Рис . 2. Э л с к т р о ф о р е г р а м м а EcoRI-рестриктов Д Н К гибрид-
ных плазмид , в ы д е л е н н ы х из э ф ф е к т и в н ы х т р а н с к о н ъ ю г а н -
тов (а, б ) , и Д Н К ф а г а λ (в)
F ig . 2. E l e c t r o p h o r e g r a m of EcoRI d i g e s t D N A of r ecombi -
n a n t p l a s m i d s i so la ted f r o m e f f ec t ive t r a n s c o n j u g a n t s R. me-
liloti (a, 6)\ D N A size s t a n d a r d s de r ived f r o m a EeoRI di-
g e s t of b a c t e r i o p h a g e λ (в)
никают гаплоидные рекомбинанты [16]. Кроме того, установлено,
что стабильность R/ в таких скрещиваниях может зависеть от
величины и природы клонированного фрагмента [17]. Не исключено
также, что отбор гаплоидных трансконъюгантов связан с неспособно-
стью некоторых sym-генов нормально функционировать в составе век-
торной плазмиды pRK290, из-за чего в формировании клубеньков при-
нимают участие преимущественно интегративные формы. В пользу
последнего предположения может свидетельствовать факт задержки
образования клубеньков первичными вирулентными трансконъюганта-
ми по сравнению с исходным штаммом CXMl. Стабильность рекомби-
нантной плазмиды в некоторых эффективных трансконъюгангах, воз-
можно, связана с возникновением спонтанной мутации в одной из кле-
ток реципиентного штамма СХМ1-125, которая привела к нарушениям
в системе рекомбинации.
Таким образом, нами получена коллекция клонов Е. coli, содержа-
щих фрагменты тотальной Д Н К эффективного штамма CXMl клубень-
ковых бактерий люцерны. При скрещивании клонов коллекции с ави-
рулентными мутантами СХМ1-125 и СХМ1-126 в ряде случаев были
обнаружены трансконъюганты, с разной степенью восстановившие сим-
биотические свойства, при этом большинство вирулентных штаммов
оказалось гаплоидными рекомбинантами. У некоторых эффективных
трансконъюгантов была идентифицирована гибридная плазмида, содер-
жащая Д Н К штамма CXMl с суммарным размером £со/?/-фрагментов
не менее 80000 п. н.
305 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. — 1987. — Т. 3, JVb G
C L O N I N G O F G E N E T I C M A T E R I A L O F R H I Z O B I U M M E L I L O T I
C O N T R O L L I N G T H E P R O C E S S O F A L F A L F A N O D U L A T I O N
V. V. Kuchko, В. V. Simarov
Al l -Un ion R e s e a r c h I n s t i t u t e of A g r i c u l t u r a l Mic rob io logy , L e n i n g r a d
S u m m a r y
The t o t a l D N A of a n e f fec t ive Rhizobium meliloti s t r a i n C X M l w a s c loned in pRK290
p l a s m i d in E. coli. T r a n s c o n j u g a n t s w i t h the d i f f e r e n t e f f i c iency of symb io t i c p r o p e r t i e s
a r e o b t a i n e d d u r i n g m a t i n g of r e c o m b i n a n t E. coli c lones w i t h a v i r u l e n t R. meliloti mil ·
t a n t s C X M 1 - 1 2 5 a n d CXM1-126 . A r e c o m b i n a n t p l a s m i d r e s t o r i n g e f f ec t ive s y m b i o s i s of
C X M 1 - 1 2 5 m u t a n t w i t h a l f a l f a is iden t i f i ed .
1. Vinsent / . M. F a c t o r c o n t r o l l i n g the I e g u m e - R h i z o b i u m s y m b i o s i s / / P r o c . s t e enbook
k e t t e r i n g int . s y m p . n i t r o g e n f i xa t i on / E d s W. E. N e w t o n , W . H. O r m e - J o h n s t o n . —
B a l t i m o r e : Un iv . P a r k press , 1 9 8 0 . — P . 103—129.
2. Corbiti D., Barran L., Ditta G. O r g a n i z a t i o n and exp re s s ion of Rhizobium meliloti
n i t r o g e n f i x a t i o n g e n e s / / P r o c . N a t . Acad . Sci. U S A . — 1983.—80, N 1 0 . — P . 3005—
3009.
3. Nucleotide s e q u e n c e of Rhizobium meliloti n o d u l a t i o n g e n e s / I. Torok , E. K o n d o r o s i ,
T. S t r e p k o w s k i et a l . / / М о ї . a n d Gen . Gene t .— 1985.—201, N 2 . — P . 296—300.
4. Чернова Т. А. П е р е н о с д е т е р м и н а н т вирулентности Rhizobium meliloti при к о н ъ ю г а -
ции и а н а л и з симбиотических свойств т р а н с к о н ъ ю г а н т о в : А в т о р е ф . дис. ... к а н д .
биол. наук .— Л . , 1985.— 18 с.
5. AIlen О. N. E x p e r i m e n t s in soil b a c t e r i o l o g y . — M i n n e a p o l i s : B u r g e s s Pub l . Co.,
1959.— 234 p.
6. Broad h o s t r a n g e D N A c l o n i n g s y s t e m f o r g r a m - n e g a t i v e bac t e r i a : c o n s t r u c t i o n of
a g e n e b a n k of Rhizobium meliloti / Q. D i t t a , S. S t a n f i e l d , D. Corb in , D. R. I i e l insk i / /
P roc . N a t . Acad . Sci. U S A . — 1980.—77, N 1 2 . — P . 7347—7351.
7. Mobilization of a Rhizobium meliloti m e g a p l a s m i d e a r r i n g n o d u l a t i o n a n d n i t r o g e n
f i xa t i on g e n e s in to o the r Rh izob ia a n d A g r o b a c t e r i u m / A. Kondoros i , E. Kondoros i ,
C. E. P a n k h u r s t et a l . / / М о ї . a n d Gen . Gene t .— 1982.— 188, N 3 . — P . 433—439.
8. Birnboim H. C., Doly / . A rap id e x t r a c t i o n p r o c e d u r e f o r s c r e e n i n g r e c o m b i n a n t
D N A / / N u c L Ac ids Res .— 1979.—7, N 6 . — P . 1513—1523.
9. Transformation of Escherichia coli C600 by p l a s m i d D N A at d i f f e r e n t p h a s e s of
g r o w t h / M . G. M. B r o w n , A. W e s t o n , I. R. S a u n d e r s , G. O. H u m p h r e y s / / F E M S Mic-
robiol . Le t t .— 1979,— 5, N 3 . — P . 219—222.
10. Федоров С. H., Бутвина О. Ю., Симаров Б. В. М у т а г е н н о е действие У Ф - и з л у ч е н и я
на к л у б е н ь к о в ы е бактерии лю ц е рн ы и а н а л и з симбиотических свойств полученных
а у к с о т р о ф н ы х м у т а н т о в / / Генетика .— 1983.— 19, № 5.— С. 727—736.
11. Аронштам А. А., Чернова Т. А., Симаров Б. В. И с с л е д о в а н и е молекулярно-генети-
ческих м е х а н и з м о в вирулентности к л у б е н ь к о в ы х бактерий. 1. Восстановление сим-
биотических свойств у невирулентных м у т а н т о в Rhizobium meliloti при к о н ъ ю н г а -
ции / / Т а м ж е . — JMb 4.— С. 559—564.
12. Boyer Н. M., Roullard-Dussoix D. A c o m p l e m e n t a t i o n a n a l y s i s of t he r e s t r i c t ion a n d
m o d i f i c a t i o n of D N A in Escherichia coli / / J . Мої . Biol .— 1969.—41, N 3 . — P . 459—
472.
13. Figurski D., Iielinski D. R. Rep l i ca t ion of a n o r i g i n - c o n t a i n i n g d e r i v a t i v e of p l a s m i d
RK2 d e p e n d e n t on a p l a s m i d f u n c t i o n p r o v i d e d in t r a n s / / P roc . N a t . A c a d . Sci.
U S A . — 1979.—76, N 4 . — P . 1648—1652.
14. Федоров С. H., Кучко В. В., Фокина И. Г. Симбиотические и к у л ь т у р а л ь н ы е свой-
ства к л у б е н ь к о в ы х бактерий люцер ны с измененным п л а з м и д н ы м составом / / Б ю л .
В Н И И с.-х. микробиологии .— 1 9 8 5 . — № 4 . — С . 25—28.
15. Чернова Т. А. И с п о л ь з о в а н и е к о н ъ ю г а ц и и с п о м о щ ь ю ^ - ф а к т о р о в в селекции клу-
беньковых бактерий л ю ц е р н ы / / М о л е к у л я р . м е х а н и з м ы генет. процессов: Тез. докл .
V Всесоюз. с и м п о з . — M . , 1 9 8 3 . — С . 123.
16. Beringer J. E., Johnston A. W. В. The gene t i c of t he Rhizobium-legume symbios i s / /
I s o t o p s biol. d i n i t r o g e n f i xa t i on .— V i e n n a : P roc . V i e n n a , 1978.— P . 27—39.
17. Izolation a n d c h a r a c t e r i z a t i o n of an R - p r i m e p l a s m i d f r o m Rhizobium meliloti I
G. B. Kiss , K. Dobo, I. D u s h a et a l . / / J . Bac te r io l .— 1980.— 141, N 1 . — P . 121 — 128.
В Н И И с.-х. микробиологии , Л е н и н г р а д П о л у ч е н о 18.03.86
306 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. — 1987. — Т. 3, JVb G
|