Бромциановые фрагменты каталазы гриба Penicillium vitale
Каталазу P. vitale расщепляли бромцианом. Гель-фильтрованием через сефадексы, ионообменной хроматографией на различных ионообменниках, экстракцией бутанолом и водным буфером, высоковольтным электрофорезом на бумаге выделены девять фрагментов, насчитывающих в сумме 387 аминокислотных остатков (50 % п...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Дата: | 1989 |
| Автори: | , , , , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1989
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155175 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Бромциановые фрагменты каталазы гриба Penicillium vitale / Т.Л. Левитина, Η.Μ. Гусак, Η.В. Роднин, Μ.Т. Кириленко, О.С. Мирошниченко, С.А. Атепалихина, Л.В. Гудкова, Э.А. Козлов // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 5. — С. 55-63. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860139374352531456 |
|---|---|
| author | Левитина, Т.Л. Гусак, Н.М. Роднин, Н.В. Кириленко, М.Т. Мирошниченко, О.С. Атепалихина, С.А. Гудкова, Л.В. Козлов, Э.А. |
| author_facet | Левитина, Т.Л. Гусак, Н.М. Роднин, Н.В. Кириленко, М.Т. Мирошниченко, О.С. Атепалихина, С.А. Гудкова, Л.В. Козлов, Э.А. |
| citation_txt | Бромциановые фрагменты каталазы гриба Penicillium vitale / Т.Л. Левитина, Η.Μ. Гусак, Η.В. Роднин, Μ.Т. Кириленко, О.С. Мирошниченко, С.А. Атепалихина, Л.В. Гудкова, Э.А. Козлов // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 5. — С. 55-63. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Биополимеры и клетка |
| description | Каталазу P. vitale расщепляли бромцианом. Гель-фильтрованием через сефадексы, ионообменной хроматографией на различных ионообменниках, экстракцией бутанолом и водным буфером, высоковольтным электрофорезом на бумаге выделены девять фрагментов, насчитывающих в сумме 387 аминокислотных остатков (50 % полипептидной цепи белка). Исследовали N-концевые аминокислотные последовательности, триптические и химотриптические пептиды этих фрагментов. В результате установлена полная аминокислотная последовательность фрагментам включающего 61 остаток аминокислот, и частичная аминокислотная последовательность двух фрагментов, насчитывающих в сумме 37 остатков.
Каталазу P. vitale розщеплювали бромціаном. Гель-фільтруванням через сефадекси, іонообмінною хроматографією на різних іонообмінниках, екстракцією бутанолом і водним буфером, високовольтним електрофорезом на папері виділено дев’ять фрагментів, які налічують у сумі 387 амінокислотних залишків (50 % поліпептидного ланцюга білка). Досліджували N-кінцеві амінокислотні послідовності, триптичні і хімотриптичні пептиди цих фрагментів. У результаті встановлено повну амінокислотну послідовність фрагмента, який включає 61 амінокислотний залишок, і часткову амінокислотну послідовність двох фрагментів, які налічують у сумі 37 залишків.
Nine fragments containing 387 amino acid residues were isolated from product of cyanogen bromide treatment of P. vitale catalase by Sephadex gel-filtration, ion-exchange chromatography, butanol extraction and high-voltage paper electrophoresis. Tryptic, chymotryptic peptides and N-terminal sequence of some P. vitale catalase cyanogen bromide fragments were investigated. Complete and partial amino acid sequences of fragments including 61 and 37 amino acid resudies, respectively, were determined.
|
| first_indexed | 2025-12-07T17:48:47Z |
| format | Article |
| fulltext |
STUDIES IN HYDRATION ENERGETICS OF NUCLEIC ACID COMPONENTS
BY THE DIFFERENTIAL ! ^ S P E C T R O S C O P I C METHOD
V. A. Sorokinf V. L. Galkinf V. A. Valeev, E. S. Arkhipovaf
G. 0. Gladchenko, Yu. P. Blagoi
Institute for Low Temperature Physics and Engineering,
Academy of Sciences of the Ukrainian SSR, Kharkov
S u m m a r y
Differential UV spectra of CMP, UMP, AMP, IMP, GMP and Guo are obtained, which
are due to dehydration of these substances during heating of their aqueous solutions from
20 to 90 °С. The enthalpies and entropies of hydration characterizing the interaction bet-
ween water molecules and heteroatoms of the base rings are calculated. The entropy
term greatly contributed to the variations of the free Gibbs energy for UMP, IMP, AMP,
GMP a:id Guo. The enthalpy and entropy terms are comparable for CMP.
УДК 577.і 12.5
Т. Л. Левитина, Η. Μ. Гусак, Η. В. Роднин, Μ. Т. Кириленко,
О. С. Мирошниченко, С. А. Атепалихина, Л. В. Гудкова, Э. А. Козлов
БРОМЦИАНОВЫЕ ФРАГМЕНТЫ
КАТАЛАЗЫ ГРИБА PENICILLIUM VITALE
Каталазу P. Oitale расщепляли бромцианом. Гель-фильтрованием через сефадексы, ио-
нообменной хроматографией на различных ионообменниках, экстракцией бутанолом и
водным буфером, высоковольтным электрофорезом на бумаге выделены девять фраг-
ментов, насчитывающих в сумме 387 аминокислотных остатков (50 % полипептидной
цепи белка). Исследовали N-концевые аминокислотные последовательности, триптичес-
кие и химотриптические пептиды этих фрагментов. В результате установлена полная
аминокислотная последовательность фрагментам включающего 61 остаток аминокислот,
и частичная аминокислотная последовательность двух фрагментов, насчитывающих в
сумме 37 остатков.
Н а с т о я щ е е с о о б щ е н и е я в л я е т с я п р о д о л ж е н и е м с е р и и п у б л и к а ц и й , по-
священных исследованию первичной структуры каталазы P. viiale.
П е р з ы е три работы [1—3] освещают р е з у л ь т а т ы изучения триптиче-
с к и х п е п т и д о в .
Материалы и методы. Расщепление белка бромцианом осуществляли по методу
Гросса и Виткопа [4]. 800 мг ( ~ 1 0 мкМ) каталазы и 100 мг триптофана растворяли
в 50 мл 70 %-ной НСООН. Добавляли бромдиан (500 мг в 2 мл НСООН), выдержива-
ли 22 ч при комнатной температуре в темноте и лиофилизировали.
О 0 е с с о л и в а н и е проводили на колонке (3X90 см) с сефадексом G-25 («Phar-
macia», Швеция), уравновешенным аммиачной водой.
Г е л ь-ф и л ь τ ρ υ в а н и е через сефадекс G-75 (грубый) («Pharmacia»). Раство-
рители: а) 0,2 M трис-НСІ-буфер, рН 8,7, содержащий 6 M Gu-HCl; б) 20 %-ная
НСООН. Полученные фракции обессоливали.
И о н о о б м е н н а я х р о м а т о г р а ф и я . ДЭАЭ-сефадекс А-25 («Pharmacia»).
Исходный буфер: 0,025 M трис-HCl, рН 7,4, содержащий 6 M мочевину. Линейный
градиент: 150 мл исходного буфера и 150 мл этого же буфера с добавкой 0,4 M KCl.
Сульфопропил(SP)-сефадекс С-50 («Pharmacia»). Исходный буфер: универсальная бу-
ферная смесь, рН 3,7 [5], содержащая 6 M мочевину. Вогнутый градиент: 75 мл уни-
версальной буферной смеси, содержащей б M мочевину, и 75 мл этой же смеси с до-
бавкой 0,5 M KCl. Фракции, полученные ионообменной хроматографией, обессоливали.
В ы с о к о э ф ф е к т и в н а я ж и д к о с т н а я х р о м а т о г р а ф и я (ВЖХ). При-
меняли систему FPLC («Pharmacia»). Колонка MOHOQ. Исходный буфер: 0,02 M трис-
НСІ, рН 7,4, содержащий 6 M мочевину. Градиент создавали исходным буфером, со-
держащим 1 M KCl. Полученные фракции обессоливали.
Э к с т р а к ц и я б у т а н о л о м . Материал фракции растворяли в 50 мл 20 %-ной
ISSN 0253-7057. Б И О П О Л И М Е Р Ы II КЛЕТКА. 1989. Т. 5. № 5 55
НСООН, насыщенной я-бутанолом. К раствору добавляли 25 мл я-бутанола, насыщен-
ного 20 %-ной НСООН, и встряхивали. После разделения суспензии отбирали три
фракции — бутанольную (Б), промежуточную (П) и водную (В). Полученные фрак-
ции упаривали на роторном испарителе.
Э к с т р а к ц и я б у ф е р о м . Лиофильно высушенный материал фракции экстра-
гировали 0,025 M Na-ацетатным буфером, рН 4,5, содержащим 0,1 M NaCL Осадок от-
деляли центрифугированием. Супернатант обессоливали.
В ы с о к о в о л ь т н ы й э л е к т р о ф о р е з (В/В) на бумаге проводили в течение
1,5 ч при градиенте напряжения 40—60 В/см на приборе, сконструированном в Ин-те
микробиологии и вирусологии АН УССР [6], в электролитах ЭФ1, рН 6,5 (пиридин:
уксусная кислота : вода ( 1 0 0 : 4 : 8 9 6 ) ) , ЭФ2, рН 1,9 (муравьиная кислота : уксусная
кислота: вода (41,2:10:948,8)). Бумага FN 17 («Filtrak», ГДР) .
Х р о м а т о г р а ф и я н а б у м а г е . Применяли систему БХ1 (пиридин : бута-
нол : уксусная кислота : вода (10 : 1 5 : 3 : 12)). Бумага та же, что и для электрофореза.
Э л е к т р о ф о р е з в полиакриламидном геле (ПААГ) проводили по методу, опи-
санному в литературе [7].
Р а с щ е п л е н и е трипсином и химотрипсином осуществляли, как описано ра-
нее [1, 3].
П о с л е д о в а т е л ь н о с т ь а м и н о к и с л о т определяли ручным методом Эд-
мана в сочетании с дансилированием [8] и на секвенаторе 890 С («Вескшап», США)
с последующей идентификацией РТН-аминокислот в системе HPLC («Pharmacia»).
А м и н о к и с л о т н ы й с о с т а в определяли на анализаторе аминокислот
ААА-331 (ЧССР). Пробы гидролизовали 5,7 н. HCl, содержащей 0,1 % фенола, в те-
чение 24 ч при 105—IlO0C в вакууме.
Результаты и обсуждение. Смесь бромциановых фрагментов разде-
ляли на четыре фракции гель-фильтрованием через сефадекс G-75
(рис. 1). Для дальнейшего разделения каждой из фракций мы апроби-
ровали комбинации различных методов. В результате была выбрана
схема, приводящая к оптимальным результатам (рис. 2). Цифрами или
буквами в квадратных рамках обозначены фракции, полученные на
каждом этапе и подвергнутые дальнейшему разделению, подчеркну-
тыми цифрами — фракции, содержащие минорные количества матери-
ала; дальнейшему разделению их не подвергали; латинскими буквами
в рамках — N-концевые остатки аминокислот фракций, включающих
от двух до пяти фрагментов (по числу N-концевых остатков). Эти де-
вять фракций содержали такое количество материала, которое при
Рис. 1. Разделение продукта (180 мг) рас-
щепления бромцианом каталазы P. vitale
на колонке (2,2X90 см) с сефадексом
G-75, уравновешенным растворителем «а»
(«Материалы и методы»). Скорость элюции
15 мл/ч, объем фракции 2,5 мл
Fig. 1. Separation of P. vitale catalase cya-
nogen bromide f ragments on a column
(2.2X90 cm) with Sephadex G-75 equilibra-
ted by 0.2 M tris. HCl, pH 8.7 containing
6 M Gu. HCl. Flow rate —115 ml/h, fract ion
volume — 2.5 ml
последующем разделении не давало бы высоких выходов индивиду-
альных фрагментов, необходимых для выяснения аминокислотной по-
следовательности имеющейся техникой. Поэтому эти фракции далее не
разделяли.
На рис. 3—б представлены результаты разделения некоторых
фракций на отдельных этапах схемы. В табл. 1 приведены аминокис-
лотные составы полученных фрагментов. Лактон гомосерина на анали-
заторе аминокислот ААА-331 выходит одним пиком с гистидином. По-
этому в табл. 1 под гистидином понимается либо сам гистидин, либо
лактон, либо их смесь. Гомосерин на анализаторе может элюироваться
либо вместе с глутаминовой кислотой или с серином, либо самостоя-
56 ISSN 0253-7057. БИОПОЛИМЕРЫ II КЛЕТКА. 1989. Т. 5. № 5 56
Рис. 2. Схема разделения бромциановых фрагментов каталазы Р. υ it ale: G-75, 6 M мо-
чевина (а); ДЭАЭ-сефадекс, 6 M мочевина (б); экстракция бутанолом (в); экстракция
буфером, рН 4,5 (г); SP-сефадекс, 6 M мочевина (d); G-75, 20 %-ная НСООН (е);
FPLC, MOHOQ, 6 M мочевина (ж); В / В электрофорез, рН 6,5 (з)
Fig. 2. Scheme of isolation of P. vitale catalase cyanogen bromide fragments: G-75, 6 M
urea (a); DEAE-sephadex, 6 M urea (6); butanol extraction (e); buffer extraction,
pH 4.5 (г); S'P-sephadex, 6 M urea (d); G-75, 20 % HCOOH (e); FPLC, monoQ, 6 M
urea (я/е); В / В electrophoresis, pH 6.5 .(з)
на колонке (2,2Х
». Скорость элюции
Рис. 3. Разделение фракций І-Б (α), Ι-Π (б) и I-B (в) рис. 2)
Х 9 0 см) с сефадексом G-75, уравновешенным растворителем
20 мл/ч, объем фракции 3 мл
Fig. 3. Separation of І-Б (α), І-П (б) and I-B (β) fractions (Fig. 2) on a column (2.2X
X 9 0 cm) with Sephadex G-75 equilibrated by 2 0 % HCOOH. Flow rate — 2 0 ml/h,
fraction volume — 3 ml
Рис. 4. Разделение фракций II (α), III (б) и IV (в) (рис. 1) на колонке ( 1 , 4 χ ΐ 8 см)
с ДЭАЭ-сефадексом А-25. Буфер и градиент см. «Материалы и методы». Скорость элю-
ции 20 мл/ч, объем фракции 5 мл
Fig. 4. Separation of fraction II (a), III (6) and IV (в) (Fig. 1) on a column (1.4X
X 1 8 cm) with DEAE-sephadex A-25. Start-buffer: 0.025 M tris. HCl, pH 7.4, containing
6 M urea. Linear g rad ien t—150 ml start-buffer and 150 ml start-buffer containing
0.4 M KCl. Flow rate — 20 ml/h, fraction volume — 5 ml·
58 ISSN 0253-7057. БИОПОЛИМЕРЫ II КЛЕТКА. 1989. Т. 5. № 5 57
тельно между ними. В приведенных фрагментах мы не смогли одно-
значно идентифицировать гомосерин. Так как фрагменты BrCN6 и
BrCNT получены в смеси, аминокислотный состав BrCN6 выписан в
табл. 1 на основании структуры этого фрагмента [9], установленной
на смеси двух фрагментов. Зная аминокислотный состав фракции III-I,
соотношение фрагментов BrCN6 и
f ^ i ^ BrCN7 во фракции, нетрудно было
^ ориентировочно подсчитать амино-
кислотный состав фрагмента
BrCN7, который и приведен в
табл. 1. Аминокислотный состав
фракций III-4-3 и IV-2-2 различа-
ется только по содержанию гисти-
дина. Поэтому мы предполагаем,
что эти фракции включают один
фрагмент BrCN9, содержащий го-
мосерин (III-4-3), и лактон гомосе-
рина (IV-2-2). В табл. 1 приведен
состав последнего.
С максимальным выходом
(25 %) получен фрагмент BrCN6
Рис. 5. ВЖХ в системе FPLC фракций I-B-2 (α), I-B-3 (б) (рис. 3, в) и III-3 (в),
111-4 (г) (рис. 4, б). Колонка MOHOQ. Буфер и градиент см. «Материалы и методы»
Fig. 5. FPLC — chromatography of fractions Ι-Β-2 (α), I-B-3 (б) (Fig. З, в) and ІІІ-З
(в), III-4 (г) (Fig. 4, б). Start-buffer 0.02 M tris. HCl, рН 7.4, containing 6 M urea. Li-
near gradient — start-buffer containing I M KCl. Column monoQ
Рис. 6. Разделение фракции II-I (рис. 4, а) на колонке (1X22 см) с SP-сефадексом
С-50. Буфер и градиент см. «Материалы и методы». Скорость элюции 12 мл/ч, объем
фракции 5 мл
Fig. 6. Separation of fraction II-I (Fig. 4, a) on a column (1X22 cm) with SP-sephadex
C-50. Sta.rt-buffer pH 3.7 containing 6 M urea. Concave gradient — 75 ml of start-buf-
fer and 75 ml of start-buffer containing 0.5 M KCl. Flow ra t e— 12 ml/h, fraction volu-
me — 5 ml
(фракция III-I, рис. 2). Эта фракция содержала фрагменты BrCN6 и
BrCN7 в соотношении 4 : 1 соответственно, как было установлено элек-
трофорезом в ПААГ (данные не приведены). BrCN6 имел молекуляр-
ную массу 7000, a BrCN7 — около 11 000. Выход фрагмента BrCN5
(фракция П-З-с, рис. 2) составил 10 %. Молекулярная масса его, по
данным электрофореза в ПААГ, —8000. Выход фрагментов BrCN4 и
BrCN8 не превышал 3 %. Этого количества хватило для расщепления
трипсином, разделения полученных пептидов В/В электрофорезом на
бумаге в одном электролите и определения аминокислотного состава
триптических пептидов. Выход фрагментов BrCNl — BrCN3 и BrCN9
составил менее 1 %, что оказалось достаточным лишь для деградации
по Эдману.
Ниже приведены результаты исследования первичной структуры
каждого фрагмента. Аминокислотные составы пептидов, полученных
при расщеплении BrCN4 — BrCN8 трипсином (T) и химотрипсином
(Ch), сведены в табл. 2. Стадии деградации по Эдману обозначены
стрелкой под последовательностью.
58 ISSN 0253-7057. БИОПОЛИМЕРЫ II КЛЕТКА. 1989. Т. 5. № 5 58
Т а б л и ц а 1
Аминокислотный состав бромциановых фрагментов каталазы P. Oitale
The amino acid composition of cyanogen bromide fragments of P. vitale catalase
Состав фрагментов (фракций)
Амино-
кислота
B
rC
N
l
(Ι
-Π
-3
-3
)
B
rC
N
2
(І
-В
-2
-2
)
B
rC
N
3
(I
-B
-3
-3
)
B
rC
N
4
(І
І-
І-
2-
3)
(B
rC
N
5
(I
I-
3-
е)
(IIII)
9Ν
Ο
-Ή
Ui —I
B
rC
N
8
(I
II
-3
-4
)
σ>οΓ
Z<N
y >
CQtl
Сум-
ма
Lys — 1,0(1) 2,0(2) 1,5(2)
His — 0,7(1) 0,7(1) —
Arg — 1,0(1) 1,3(1) 1,0(1)
Asp 1,0(1) 3,8(4) 3,6(4) 5,0(5)
Thr 0,7(1) 1,9(2) 1,8(2) 2,1(2)
Ser — 2,0(2) 1,6(2) 3,7(4)
Glu 1,1(1) 3,0(3) 4,0(4) 2,2(2)
Pro — 1,2(1) 1,0(1) 6,0(6)
Gly — 2,0(2) 2,6(3) 2,9(3)
Ala — 2,7(3) 2,6(3) 3,9(4)
Val 0,8(1) 2,0(2) 2,3(3) 1,6(2)
lie 1,9(2) 1,0(1) 2,0(2) 1,4(2)
Leu 1,2(1) 2,1(2) 2,5(3) 4,8(5)
Tyr — 0,5(1) 0,7(1) U ( 2 )
Phe
H. Ser
— 1,9(2) 0,9(1) 1,0(1)
Всего 7 28 33 41
N-конец Asp Tyr Leu H. o.
M ( I ) — 5,9(6) 1,0(1) — 13
— 3 2,0(2) 0,9(1) 1,4(2) 10
2,9(3) 6 3,5(4) 0,8(1) — 17
10,0(10) 10 12,3(12) 3,9(4) 1,8(2) 52
3,0(3) 2 7,0(7) 1,6(2) — 21
7,0(7) 1 6,7(7) 0,7(1) 1,0(1) 25
10,6(11) 7 13,4(13) 5,0(5) 2,1(2) 48
6,0(6) 6 3,5(4) 2,0(2) — 26
4,8(5) 7 9,0(9) 2,0(2) 1,0(1) 32
4,9(5) 2 13,8(14) 1,3(1) 1,3(1) 33
4,6(5) 2 5,0(5) 2,5(3) 0,8(1) 24
2,8(3) 3 2,5(3) 1,2(1) 0,8(1) 18
7,1(7) 6 8,0(8) 4,0(4) 1,7(2) 38
2,0(2) 1 1,3(2) — — 9
4,7(5) 4 2,9(3) 1,6(2) 0,9(1) 19
1 (1) — 2
73 61 100 30 14 387
Asp Phe H. o. H. 0. H. o.
П р и м е ч а н и е . Η. о. — N-конец не определяется.
Ф р а г м е н т BrCNl. Asp-Val-Ile-Ile-Glu-(Thr, Leu). Очевидно, что
фрагмент получен в результате неспецифического по С-концу расщеп-
ления каталазы, скорее всего, до обработки ее бромцианом, так как
известно, что при хранении каталаза подвергается частичной деграда-
ции [10].
Ф р а г м е н т BrCN2. Tyr-(Lys, Arg, Asx4, Thr2 , Ser2 , Glx3, Pro,
Gly2, Ala3, Val2 , lie, Leu2, Phe 2 ) -Η. Ser.
Т а б л и ц а 2
Аминокислотный состав триптических и химотриптических пептидов бромциановых
фрагментов каталазы
Amino acid composition of tryptic and chymotryptic peptides of P. vitale catalase
cyanogen bromide fragments
Lys 1,3(1)
His —
Arg —
Asp 2,1(2)
Thr 1,0(1)
Ser 0,8(1)
Glu 0,8(1)
Pro + (D
Giy —
Ala 0,8(1)
Vnl
lie
Lcu
Tvr 1,0(1)
Phe
Ii. Ser —
Всего 9
UO(I)
- 0,9(1)
1,0(1) 0,9(1)
- 1,1(1)
1,0(1) 1,2(1)
- 1,0(1)
- 2,1(2)
2,0(2)
2 10
— 1,2(1)
0,5(1) —
5,8(6) —
1,6(2) —
2,1(2) 0,8(1)
5,1(5) —
4,0(4) + (1)
2,3(2) 1,1(1)
3,1(3) —
2,7(3) —
1,3(2) —
2,0(2) —
1,3(2) —
2,0(2} —
36 4
1,0(1) —
2.3(2) 1,6(2)
1,1(1) —
1,0(1) 1,4(2)
2,6(3) 2,0(2)
+ (D 2,0(2)
1,7(2) 2,3(2)
1,7(2) 1,1(1)
0,5(1) 0,8(1)
1,0(1) 0,7(1)
2,0(2) 0,8(1)
1,7(2) —
19 14
— 1,0(1)
- 1,0(1)
1,0(1) -
1,0(1) 1,2(1)
- -M! )
— 1,4(1)
1,0(1)
0,9(1) 0,7(1)
0,8(1) 0,7(1)
2 , 2 ( 2 ) —
1,0(1) 0 ,8(1)
8 8
58 ISSN 0253-7057. Б И О П О Л И М Е Р Ы II КЛЕТКА. 1989. Т. 5. № 5 59
Окончание табл. 2
Lys — — — —
His — — 0,7(1) 0,9(1) 0,4 1,2(1) 1,1(1) —
Arg 1,1(1) 1,0(1) 1,9(2) 0,9(1) — 1,2(1) — — —
Asp 2,1(2) 1,9(2) 2,1(2) 3,3(3) 1,0(1) 0,7(1) 0,9(1) 1,0(1) 1,0(1)
Thr 0,7(1) 0,9(1) — — 1,1(1) — 1,0(1)
Ser 0,9(1) — — — 0,9(1)
Glu 2,0(2) 1,1(1) 1,9(2) — 1,2(1) 1,6(2) — 1,4(1)
Pro 0,8(1) 3,2(3) 0,8(1) — + (1) + (1) — —
Gly 1,9(2) 1,7(2) — 1,8(2) 3,0(3) — 1,0(1)
Ala 0,9(1) 1,0(1) — • — 0,8(1)
Val 0,8(1) — 1,0(1) — 0,7(1)
lie 0,9(1) 0,9(1) — 1,0(1) — 1,0(1) —
Leu 1,7(2) 2,5(3) 1,1(1) — — — — — 0,8(1)
Tyr 1,0(1) — — — 0,7(1) — —
Phe 0,8(1) 0,9(1) 1,0(1) — — — — — —
Η. Ser — — — 0,3(1) 0,9(1) — — 0,5(1)
Всего 13 11 15 8 6 5 11 3 9
Lys — — — —
His 0,8(1) 0,8(1) 1,0(1) 1,1(1)
Arg 1,0(1) 1,9(2) 2,0(2) 3,1(3)
Asp
Thr
Ser
1,3(1) 1,0(1) 1,0(1) 4,9(5) Asp
Thr
Ser Z
Glu 2,0(2) — 1,0(1)
Pro 1,2(1) 3,2(3) 2,8(3) 2,5(3)
Gly 2,0(2) 1,0(1) — 2,0(2)
AIa — 1,0(1) U(I) 2,0(2)
Val — . —
U(I)
—
lie 1,1(1) 1,0(1) 1,0(1) 0,8(1)
Leu 1,0(1) —
Tyr — — —
Phe 1,0(1) 1,0(1) — —
Η. Ser — — — 0,5(1)
Всего 11 11 9 19
— — — 0,8(1) —
0,5(1) — — — —
1,0(1) — — — —
3,8(4) 2,0(2) 2,0(2) 2,4(2) 0,4
0,8(1) — 1,2(2) 0,6(1)
— 0,6(1) 0,8(1) 1,3(1) 1,3(1)
1,1(1) 1,3(1) 2,1(2) 0,7(1) 0,8(1)
— — — + (1) —
2,1(2) — 1,0(1) 2,1(2) 1,2(1)
1,0(1) — 1,1(1) 0,8(1) 0,7(1)
• — 1,0(1) 0,6(1) 0,5(1)
2,0(2) — 2,6(3) 0,5(1)
0,7(1) — — —
— — 2,0(2) —
0,5(1) — — 0,3(1) 0,5(1)
И 8 8 18 8
Ф р а г м е н т BrCN3. Leu-Val-Asp-(Lys2, Arg, Asx3, Thr2, Ser2,
Glx4, Pro, Gly3, Ala3, Val2, І1е2"ГьеТГ2, Тут, Phe)-H. Ser.
Ф р а г м е н т BrCN4. После расщепления трипсином и разделения
В /В электрофорезом в электролите ЭФ2 были получены только два
пептида. BrCN4Tl аналогичен по аминокислотному составу пептиду
Т14, строение которого установлено ранее [3]: Ala-Tyr-Ser-Asn-Thr-
Glu-Pro-Asn-Lys. BrCN4T2. На основании данных по аминокислотному
составу (табл. 2) можно предположить, что пептид содержит не серин,
а гомосерин, который иногда элюируется с колонки анализатора на
месте серина. По-видимому, BrCN4T2 является С-концевым во фраг-
хменте BrCN4.
Ф р а г м е н т BrCN5. После расщепления трипсином и разделения
В /В электрофорезом в электролитах ЭФ1 и ЭФ2 были получены шесть
пептидов, BrCN5Tl. Leu-Phe-(Asp, Ser, Glu, Gly, Ala, Leu, Phe)-Arg.
BrCN5T2 выделен в двух формах — с гистидином и без него. Можно
предположить, что в пептиде содержится не гистидин, а лактон гомо-
серина. В этом случае BrCN5T2 представляет собой С-концевой пеп-
тид фрагмента BrCN5. Из аминокислотных составов BrCN5T5 и
58 ISSN 0253-7057. БИОПОЛИМЕРЫ II КЛЕТКА. 1989. Т. 5. № 5 60
BrCN5T6 (табл. 2) очевидно, что эти пептиды образовались в резуль-
тате расщепления неспецифических для трипсина связей.
Ф р а г м е н т ы BrCN6 и BrCN7. Как описано выше, эти фрагмен-
ты были получены в смеси и представлены во фракции III-I в соотно-
шении 4 : 1 соответственно. Фракцию III-I расщепляли трипсином.
Смесь пептидов разделяли В /В электрофорезом в электролитах ЭФ1
и ЭФ2 и хроматографией на бумаге. Были получены шесть пептидов
(BrCN6-7Tl— BrCN6-7T6) с выходом 10—25 % и четыре пептида
(BrCN6-7T7—BrCN6-710) с выходом 1—7%. BrCN6-7Tl. Phe-Gln-Pro-
Glv-(His, Val, lie)-Arg. BrCN6-7T2. Gly-Val-Asx-Phe-(Asx, Thr ,
Pro, Gly, Leu2)-Arg. BrCN6-7T2 идентичен пептиду T9, строение кото-
рого выяснено ранее [3]. BrCN6-7T3. Leu-Phe-Ser-Tyr-Leu-Asx-Thr-Glx-
(Leu, Asx)-Arg. BrCN6-7T3 идентичен пептиду Т39, строение которого
известно [3]. BrCN6-7T4. His-Gly-(Asn, Gin, Pro, lie, Leu)-Gly-Phe-
Arg-Pro-(Pro, Asn)-Arg. Строение предложено на том основании, что
этот пептид отличается по аминокислотному составу от пептида Т5
(частичное строение которого установлено ранее [3]) только остатком
гистидина. Возможно, пептид Т5 образовался в результате расщепле-
ния каталазы по остатку гистидина при обработке трипсином или в
процессе хранения [10]. BrCN6-7T5. Ala-Pro-Ile-His-Asx-Asx-Asx-Arg.
BrCN6-7T6. Acx-Gly-Ala-Gly-Glx-H. Ser. Очевидно, пептид содержит
лактон гомосерина, а не остаток гистидина (табл. 2) и занимает С-кон-
цевое положение в одном из бромциановых фрагментов фракции ІІІ-І.
BrCN6-7T8. Glx-Gly-Val-(Asx, Thr, Glx, Pro, Gly2, Туг)-Lys. Из амино-
кислотного состава (табл. 2) ясно, что пептид BrCN6-7T10 представ-
ляет собой С-концевой участок второго бромцианового фрагмента, со-
держащегося во фракции III-I.
В результате расщепления смеси BrCN6-7 химотрипсином были
получены семь пептидов. BrCN6-7Chl и BrCN6-7Ch4 выделены с выхо-
дом около 2 0 % , остальные— ~ 5 %. BrCN6-7Chl. Arg-His-Gly-(Asx,
Glx2, Pro, Gly, lie, Leu, Phe), BrCN6-7Chl ' отличается^от~ВгСЫ6-7СЬ1
наличием дополнительного остатка Asx, занимающего в нем N-конце-
вое положение. BrCN6-7Ch2. Gly-Phe-Arg-Pro-Pro-(Arg, His, Asx, Pro,
Ala, lie). Первые пять остатков перекрываются с С-концевой последо-
вательностью пептида BrCN6-7T4. Сравнивая составы и строение
BrCN6-7Ch2 и BrCN6-7Ch2' (табл. 2) можно заключить, что меньший
из них образовался при расщеплении связи Phe-Arg. BrCN6-7Ch3\
Asx-(Arg, His, Asx3, Glx, Gly2, Ala)-Η. Ser. Поскольку в пептиде имеет-
ся гомосерин, то он является С-концевым одного из бромциановых
фрагментов фракции III-I. Исходя из некоторого сходства аминокис-
лотных составов BrCN6-7Ch3' и BrCN6-7Ch3 (табл. 2), можно пред-
положить, что они образовались из одного и того же участка белка.
BrCN6-7Ch4. Ser-(Asx2, Thr, Glx, Leu2, Туг).
Мы предполагаем, что пептиды BrCN6-7T2, BrCN6-7T3, BrCN6-7T6,
BrCN6-7Chl, BrCN6-7Ch4, выделенные с максимальным выходом 20—
25 %, получены из одного мажорного фрагмента фракции 111-І, обозна-
ченного нами BrCN6.
На смеси BrCN6-7 провели 38 стадий деградации на секвенаторе.
На каждой из стадий, начиная с 1-й по 32-ю, было идентифицировано
по одному остатку аминокислоты. Следовательно, ступенчатой дегра-
дации подвергается один из фрагментов фракции ІІІ-І. У другого фраг-
мента N-конец, по-видимому, блокирован. В установленную последова-
тельность входят пептиды BrCN6T2 и BrCN6T3. На этом основании мы
считаем, что выясненная последовательность 32 остатков аминокислот
принадлежит фрагменту BrCN6. Так как первые пять остатков пепти-
да BrCN6-7Ch2 перекрываются с С-концевой последовательностью
ISSN 0253-7057. БИОПОЛИМЕРЫ II КЛЕТКА. 1989. Т. 5. № 5 61
BrCN6-7T4, а пептиды BrCN6-7Ch3 и BrCN6-7Ch3', исходя из их ами-
нокислотного состава (табл. 2), перекрывают последовательность
BrCN6-7T4, BrCN6-7T5 и BrCN6-7T6, ясно, что все перечисленные пеп-
тиды также принадлежат фрагменту BrCN6.
Схема реконструкции фрагмента из фракции III-I приведена на
рис. 7. Триптические и химотриптические пептиды, не вошедшие в сос-
тав фрагмента BrCN6, мы относим к фрагменту BrCN7.
__ _ _ _ _ __ _ _ 2Ц
- . ~ -Arc -Gly - Vcl - Asp - Pna - Thr- Giu - Asp -Pro - L cu-L ей - Gln - Gly - Arg -
/;;;;-'· 1---^-— 0гС\<6Т2 і
Рис. 7. Схема реконструкции полипептидной цепи фрагмента BrCN6 каталазы гриба
Р. υ it ale. Стрелками над последовательностью указаны стадии деградации по Эдману,
проведенные на секвенаторе. Стрелками под последовательностью — деградация соот-
ветствующих пептидов по Эдману ручным методом
Fig. 7. Reconstruction of polypeptide chain of P. vitate catalase BrCN-6 fragment. Arrows
over amino acid sequence show Edman degradation steps estimated by the automatic
sequencer. Arrows under amino acid sequence show Edman manual degradation of the
corresponding peptides
Ф р а г м е н т BrCN8. После расщепления трипсином и разделения
В/В электрофорезом в электролите ЭФ2 получены два пептида. Увели-
ченное содержание серина в них (табл. 2) можно объяснить наличием
в одном пике остатков Ser и Н. Ser. Присутствие в BrCN8Tl и
BrCN8T2 остатка Н. Ser свидетельствует о том, что оба пептида явля-
ются частью С-концевого участка фрагмента BrCN8. Вычитая из а*ми-
нокислотного состава BrCN8Tl состав BrCN8T2, получим аминокис-
лотный состав пептида Т31, строение которого установлено ранее [3]:
Phe-Gly-Phe-Asp- (Pro, Leu) -Leu-Thr-Asp-Lys. Интересно отметить, что
состав BrCN8T2 очень сходен с таковым BrCN7T10 (см. выше). Можно
полагать, что фрагмент BrCN8 входит в состав фрагмента BrCNT и
представляет собой его С-концевую часть.
Ф р а г м е н т BrCN9. Gln-(His, Asx, Ser, Glx2, Gly, Ala, Val7 lie,
Leu2, Phe)-IL Ser. Этот фрагмент не подвергается ступенчатой дегра-
дации. Можно полагать, что на N-конце BrCN9 расположен остаток
Gln, зациклизовавшийся в пирролидонкарбоновую кислоту в процессе
выделения фрагмента.
Таким образом, из продукта расщепления каталазы бромцианом
выделены девять фрагментов, насчитывающих в сумме 387 остатков
аминокислот. Установлена полная аминокислотная последовательность
участка полипептидной цепи каталазы, включающего 61 остаток а м и н о -
кислот, и частичная аминокислотная последовательность двух участ-
ков, включающих в сумме 37 остатков.
Сравнивая первичную структуру фрагмента BrCN6 с аминокислот-
ной последовательностью каталазы печени быка [11], мы обнаружили
в этом белке участок 333—393, гомологичный фрагменту (степень го-
58 ISSN 0253-7057. БИОПОЛИМЕРЫ II КЛЕТКА. 1989. Т. 5. № 5 62
мологии 5 4 % ) . Ниже приведено сравнение участков двух каталаз в
однобуквенном обозначении:
При расчете степени гомологии, кроме идентичных остатков аминокис-
лот (28 остатков, взятых в рамки), мы учитывали и нейтральные за-
мены V a l - ^ I l e , A s p G l u , T h r - ^ S e r , A s n G l n (шесть замен, обо-
значенных звездочкой). В последовательности каталазы гриба остатки
аминокислот внутри скобки расставлены по принципу наибольшей
гомологии, а в положениях 384, 386 и 388 неидентифицированные ос-
татки Asx условно приняты за Asn, Asn и Asp соответственно.
Авторы благодарят Э. JL Ким (Ин-т молекуляр. биологии и гене-
тики АН УССР) за техническую помощь при разделении смеси фраг-
ментов в системе FPLC и В. М. Харченко (ИМБиГ АН УССР) — з а
проведение анализов аминокислотного состава.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Триптические пептиды каталазы гриба Penicillium vitale. 1. Разделение и амино-
кислотным состав растворимых пептидов / Э. А. Козлов, М. Т. Кириленко, Т. Л. Ле-
витина и др. / / Биополимеры и клетка.— 1987.—3, № 5.— С. 240—245.
2. Триптические пептиды каталазы гриба Penicillium vitale. 2. Разделение и амино-
кислотный состав нерастворимых п е п т и д о в / М . Т. Кириленко, Т. Л. Левитина,
Л. В. Гудкова и др. / / Т а м же.— 1988—4, JVb 1.— С. 40—43.
3. Триптические пептиды каталазы гриба Penicillium vitale. 3. Строение некоторых
пептидов / Η. М. Гусак, Т. Л. Левитина, С. А. Атепалихина и др. / / Биополимеры и
клетка.— 1989.—5, JMb 1.—С. 45—52.
4. Gross КWitkop В. Nonenzymatic cleavage of peptide bonds: the methionine residu-
es in bovine pancreatic ribonuclease / / J. Biol. C h e m - 1962.—237, N 6 .—P. 1856—
1865.
5. Лурье Ю. Ю. Справочник по аналитической химии.— Μ. : Химия, 1971.—454 с.
6. Кавсан В. M., Мороз JI. В., Серебряный С. Б. Приспособление для горизонтального
электрофореза на бумаге упрощенной конструкции/ /Укр . биохим. журн.— 1968.—
40, № 1.—С. 104—106.
7. Swank R. Т., Munkers К. D. Molecular weight analysis of oligopeptides by electro-
phoresis in polyacrylamide gel with sodium dodecy l - su l f a t e / /Ana l . Biochem.—
1971.—39, N 2 . — P . 462—477.
8. Определение структуры пептидов комбинированным методом дансил-Эдман /
Η. М. Гусак, Μ. Н. Овандер, Л. Б. Дробот, С. Б. С е р е б р я н ы й / / М е т о д ы молекуляр.
биологии.— Киев : Наук, думка.— 1979.— С. 142—154.
9. Фрагменты полипептидной цепи каталазы гриба Penicillium vitale / Э. А. Козлов,
Т. Л. Левитина, Η. М. Гусак и д р . / / Б и о п о л и м е р ы и клетка.— 1987.—3, Л? 6.—
С. 318—320.
10. Denis С., Roger H., Colin Μ. Proteolytic modification of mouse liver catalase / / B i o -
chem. and Biophys. Res. C o m m u n s . - 1982.—104, N 4 .—P. 1567—.1572.
11. The complete amino acid sequence of bovine liver catalase and partial sequence of bo-
vine erythrocyte catalase / W. A. Schroeder, J. R. Shelton, L. B. Shelton et a!. / / A r c h .
Biochem. Biophys.— 1982.—214, N 1— P. 397—421.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Киев Получено 13.05.88
Ин-т биохимии им. А. В. Палладина АН УССР, Киев
58 ISSN 0253-7057. БИОПОЛИМЕРЫ II КЛЕТКА. 1989. Т. 5. № 5 6 3
CYANOGEN BROMIDE FRAGMENTS OF PENICILLIUM VITALE CATALASE
T. L. Levitina, N. M. Gusak, Ν. V. Rodnint M. T. Kirilenko,
O. S. Miroshnichenko, S. A. Atepalikhina, L. V. Gudkova, E. A. Kozlov
Insti tute of Molecular Biology and Genetics,
Α. V. P a l k d i n Institute of Biochemistry,
Academy of Sciences of the Ukrainian SSR, Kiev
S u m m a r y
Nine f ragments containing 387 amino acid residues were isolated from product of cya-
nogen bromide treatment of P. ν it ale catala.se by 'Sephadex gel-filtration, ion-exchange
chromatography, butanol extraction and high-voltage paper electrophoresis. Tryptic, chy-
motryptic peptides and N-terminal sequence of some P. vitale catalase cyanogen bromide
f ragments were investigated. Complete and partial amino acid sequences of f ragments
including 61 and 37 amino acid resudies, respectively, were determined.
УДК 577.113.4
Ю. В. Пацковский, Т. П. Волощук, А. И. Потопальский
НЕКОТОРЫЕ ОСОБЕННОСТИ
РЕАКЦИИ ПОЛИНУКЛЕОТИДОВ С ТИОФОСФАМИДОМ
В работе проводили изучение направлений алкилирования нуклеиновых кислот проти-
воопухолевым агентом тиофосфамидом, а также этиленимином и моноазиридиндиэтил-
фосфатом. Показано, что степень алкилирования гомополирибонуклеотидов определяет-
ся природой гетероциклических оснований в их составе, что свидетельствует о преиму-
щественном алкилировании остатков азотистых основанийМетодом обращенно-фазо-
вой высокоэффективной жидкостной хроматографии выделены продукты алкилирования
и показано, что алкилирование рибонуклеозидов в свободном виде и в составе поли-
нуклеотидов производными этиленимина происходит в основном по N7 положению гу-
анозина, по Nl — аденозина и по N3 — пиримидиновых нуклеозидов. Уменьшение зна-
чений рН и ионной силы среды приводит к увеличению скорости алкилирования ДНК.
Введение. Тиофосфамид, или тиотэф,— трифункциональный алкилиру-
ющий агент, обладающий противоопухолевым действием [1]. Проти-
воопухолевая активность обнаружена также у ДНК, алкилированной
тиотэфом [2]. Предполагается, что биологическая активность тиотэфа,
как и других электрофильных алкилирующих агентов, обусловлена его
взаимодействием с клеточной ДНК [3]. Однако доказательства, полу-
ченные к настоящему времени, достаточно противоречивы и носят, в
основном, косвенный характер. На примере реакции алкилирования
этиленимином и тиотэфом мононуклеотидов показано, что алкилирова-
ние происходит в основном по остаткам фосфорной кислоты [4]. С дру-
гой стороны, результаты, полученные авторами работы [5], свидетель-
ствуют об алкилировании метилированных аналогов оснований нукле-
иновых кислот тиотэфом в водной среде. Изменение физико-химичес-
ких свойств ДНК вследствие алкилирования (денатурация, фрагмен-
тация, изменение плотности отрицательного заряда, изменение спек-
тральных характеристик) подтверждает возможность модификации
нуклеофильных центров в Д Н К [2, 6, 7]. Однако при этом неясно, ка-
кие нуклеофильные центры в составе нуклеиновых кислот и в каких
условиях оказываются предпочтительными в реакции алкилирования •—
остатки гетероциклических оснований или остатки фосфорной кислоты.
В связи с этим мы решили выяснить основные направления алкилиро-
вания нуклеозидов и полинуклеотидов производными этиленимина —
тиотэфом и моноазиридиндиэтилфосфатом.
Материалы и методы, Ν,Ν',Ν''-триэтиленимид тиофосфорной кислоты (тиотэф,
I) синтезирован по методу [8], моноэтиленимид диэтилового эфира фосфорной кислоты
64 ISSN 0253-7057. Б И О П О Л И М Е Р Ы II КЛЕТКА. 1989. Т. 5. № 5 64
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155175 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T17:48:47Z |
| publishDate | 1989 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Левитина, Т.Л. Гусак, Н.М. Роднин, Н.В. Кириленко, М.Т. Мирошниченко, О.С. Атепалихина, С.А. Гудкова, Л.В. Козлов, Э.А. 2019-06-16T10:11:22Z 2019-06-16T10:11:22Z 1989 Бромциановые фрагменты каталазы гриба Penicillium vitale / Т.Л. Левитина, Η.Μ. Гусак, Η.В. Роднин, Μ.Т. Кириленко, О.С. Мирошниченко, С.А. Атепалихина, Л.В. Гудкова, Э.А. Козлов // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 5. — С. 55-63. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0000E5 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155175 577.112.5 Каталазу P. vitale расщепляли бромцианом. Гель-фильтрованием через сефадексы, ионообменной хроматографией на различных ионообменниках, экстракцией бутанолом и водным буфером, высоковольтным электрофорезом на бумаге выделены девять фрагментов, насчитывающих в сумме 387 аминокислотных остатков (50 % полипептидной цепи белка). Исследовали N-концевые аминокислотные последовательности, триптические и химотриптические пептиды этих фрагментов. В результате установлена полная аминокислотная последовательность фрагментам включающего 61 остаток аминокислот, и частичная аминокислотная последовательность двух фрагментов, насчитывающих в сумме 37 остатков. Каталазу P. vitale розщеплювали бромціаном. Гель-фільтруванням через сефадекси, іонообмінною хроматографією на різних іонообмінниках, екстракцією бутанолом і водним буфером, високовольтним електрофорезом на папері виділено дев’ять фрагментів, які налічують у сумі 387 амінокислотних залишків (50 % поліпептидного ланцюга білка). Досліджували N-кінцеві амінокислотні послідовності, триптичні і хімотриптичні пептиди цих фрагментів. У результаті встановлено повну амінокислотну послідовність фрагмента, який включає 61 амінокислотний залишок, і часткову амінокислотну послідовність двох фрагментів, які налічують у сумі 37 залишків. Nine fragments containing 387 amino acid residues were isolated from product of cyanogen bromide treatment of P. vitale catalase by Sephadex gel-filtration, ion-exchange chromatography, butanol extraction and high-voltage paper electrophoresis. Tryptic, chymotryptic peptides and N-terminal sequence of some P. vitale catalase cyanogen bromide fragments were investigated. Complete and partial amino acid sequences of fragments including 61 and 37 amino acid resudies, respectively, were determined. Авторы благодарят Э.Л. Ким (Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР) за техническую помощь при разделении смеси фрагментов в системе FPLC и В.М. Харченко (ИМБиГ АН УССР) —за проведение анализов аминокислотного состава. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Структура и функции биополимеров Бромциановые фрагменты каталазы гриба Penicillium vitale Бромціанові фрагменти каталази гриба Penicillium vitale Cyanogen bromide fragments of Penicillium vitale catalase Article published earlier |
| spellingShingle | Бромциановые фрагменты каталазы гриба Penicillium vitale Левитина, Т.Л. Гусак, Н.М. Роднин, Н.В. Кириленко, М.Т. Мирошниченко, О.С. Атепалихина, С.А. Гудкова, Л.В. Козлов, Э.А. Структура и функции биополимеров |
| title | Бромциановые фрагменты каталазы гриба Penicillium vitale |
| title_alt | Бромціанові фрагменти каталази гриба Penicillium vitale Cyanogen bromide fragments of Penicillium vitale catalase |
| title_full | Бромциановые фрагменты каталазы гриба Penicillium vitale |
| title_fullStr | Бромциановые фрагменты каталазы гриба Penicillium vitale |
| title_full_unstemmed | Бромциановые фрагменты каталазы гриба Penicillium vitale |
| title_short | Бромциановые фрагменты каталазы гриба Penicillium vitale |
| title_sort | бромциановые фрагменты каталазы гриба penicillium vitale |
| topic | Структура и функции биополимеров |
| topic_facet | Структура и функции биополимеров |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155175 |
| work_keys_str_mv | AT levitinatl bromcianovyefragmentykatalazygribapenicilliumvitale AT gusaknm bromcianovyefragmentykatalazygribapenicilliumvitale AT rodninnv bromcianovyefragmentykatalazygribapenicilliumvitale AT kirilenkomt bromcianovyefragmentykatalazygribapenicilliumvitale AT mirošničenkoos bromcianovyefragmentykatalazygribapenicilliumvitale AT atepalihinasa bromcianovyefragmentykatalazygribapenicilliumvitale AT gudkovalv bromcianovyefragmentykatalazygribapenicilliumvitale AT kozlovéa bromcianovyefragmentykatalazygribapenicilliumvitale AT levitinatl bromcíanovífragmentikatalazigribapenicilliumvitale AT gusaknm bromcíanovífragmentikatalazigribapenicilliumvitale AT rodninnv bromcíanovífragmentikatalazigribapenicilliumvitale AT kirilenkomt bromcíanovífragmentikatalazigribapenicilliumvitale AT mirošničenkoos bromcíanovífragmentikatalazigribapenicilliumvitale AT atepalihinasa bromcíanovífragmentikatalazigribapenicilliumvitale AT gudkovalv bromcíanovífragmentikatalazigribapenicilliumvitale AT kozlovéa bromcíanovífragmentikatalazigribapenicilliumvitale AT levitinatl cyanogenbromidefragmentsofpenicilliumvitalecatalase AT gusaknm cyanogenbromidefragmentsofpenicilliumvitalecatalase AT rodninnv cyanogenbromidefragmentsofpenicilliumvitalecatalase AT kirilenkomt cyanogenbromidefragmentsofpenicilliumvitalecatalase AT mirošničenkoos cyanogenbromidefragmentsofpenicilliumvitalecatalase AT atepalihinasa cyanogenbromidefragmentsofpenicilliumvitalecatalase AT gudkovalv cyanogenbromidefragmentsofpenicilliumvitalecatalase AT kozlovéa cyanogenbromidefragmentsofpenicilliumvitalecatalase |