Электрофоретический анализ продуктов трансляции в бесклеточных системах из миокарда кролика в норме и при ишемии
Проведено сравнение скорости включения радиоактивных аминокислот в продукт трансляции в реконструированных бесклеточных системах, включающих цитозол и полисомы из нормального и ишемизированного миокарда. Показано, что изменение белоксинтезирующей активности зависит главным образом от препаратов рибо...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Дата: | 1989 |
| Автор: | |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1989
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155178 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Электрофоретический анализ продуктов трансляции в бесклеточных системах из миокарда кролика в норме и при ишемии / Р.К. Масколюнас // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 5. — С. 81-83. — Бібліогр.: 10 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860077572255121408 |
|---|---|
| author | Масколюнас, Р.К. |
| author_facet | Масколюнас, Р.К. |
| citation_txt | Электрофоретический анализ продуктов трансляции в бесклеточных системах из миокарда кролика в норме и при ишемии / Р.К. Масколюнас // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 5. — С. 81-83. — Бібліогр.: 10 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Биополимеры и клетка |
| description | Проведено сравнение скорости включения радиоактивных аминокислот в продукт трансляции в реконструированных бесклеточных системах, включающих цитозол и полисомы из нормального и ишемизированного миокарда. Показано, что изменение белоксинтезирующей активности зависит главным образом от препаратов рибосом. Электрофоретический анализ продуктов трансляции с последующей авторадиографией продемонстрировал некоторое перераспределение белковых фракций в системе из ишемизированного миокарда.
Порівняно швидкості включення радіоактивних амінокислот у продукт трансляції в реконструйованих безклітинних системах, які містять цитозол і полісоми з нормального та ішемізованого міокарда. Показано, що зміна білоксинтезуючої активності залежить головним чином від препаратів рибосом. Електрофоретичний аналіз продуктів трансляції з наступною авторадіографією продемонстрував деякий перерозподіл білкових фракцій у системі з ішемізованого міокарда.
The rate of radioactive amino acid incorporation into transnational product in the reconstructed protein-synthesizing cell-free systems, consisting of cytosol and polyribosomes from normal and ischemic myocardium is compared. The alteration in protein-synthesizing activity is shown to depend mainly on the properties of polyribosomal preparations. Electrophoretical analysis of the translations! products with subsequent fluorography has revealed redistribution of some protein fractions in the system from ischemic myocardium.
|
| first_indexed | 2025-12-07T17:14:34Z |
| format | Article |
| fulltext |
УДК 616.127+616.12—005.4
Р. К. Масколюнас
ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПРОДУКТОВ
ТРАНСЛЯЦИИ В БЕСКЛЕТОЧНЫХ СИСТЕМАХ
ИЗ МИОКАРДА КРОЛИКА В НОРМЕ И ПРИ ИШЕМИИ
Проведено сравнение скорости включения радиоактивных аминокислот в продукт тран-
сляции в реконструированных бесклеточных системах, включающих цитозол и полисо-
мы из нормального и ишемизированного миокарда. Показано, что изменение белоксин-
тезирующей активности зависит главным образом от препаратов рибосом. Электрофо-
ретический анализ продуктов трансляции с последующей авторадиографией продемон-
стрировал некоторое перераспределение белковых фракций в системе из ишемизирован-
ного миокарда.
Известно, что при ишемии сердечной мышцы происходят значительные
структурно-функциональные изменения основных компонентов трансля-
ционного аппарата [1, 2], приводящие к нарушению метаболических
процессов в клетке [3]. В предыдущих работах [4, 5] с помощью бес-
клеточных белоксинтезирующих систем из миокарда кролика были
изучены скорость и уровень биосинтеза белка в сердце в норме и при
данной патологии, а также охарактеризован пул рибосом. Нами было
обнаружено, что при тотальной ишемии происходит ярко выраженное
перераспределение между классами свободных от мембран и мембрано-
связанных рибосом, уменьшается доля полисом в препаратах суммар-
ных и свободных рибосом.
Пытаясь выяснить биологический смысл такого перераспределе-
ния, в настоящей работе изучали функциональную активность разных
классов рибосом, а также провели электрофоретический анализ про-
дуктов трансляции эндогенных мРНК в бесклеточных белоксинтезиру-
ющих системах, полученных из нормальной и ишемизированной сердеч-
ной мышцы.
Исследования проведены на кроликах-самцах весом 2,5—3,5 кг.
Моделью тотальной ишемии служил аутолиз изолированного сердца
согласно методу [6]. Продолжительность аутолиза составляла 30 мин.
Для изучения активности препаратов рибосом была использована ре-
конструированная бесклеточная белоксинтезирующая система, включа-
ющая цитозол и рибосомы. Цитозол, препараты суммарных, свободных
от мембран и мембраносвязанных рибосом выделяли, как описано в
[7, 8] с некоторыми модификациями. Об интенсивности полипептидно-
го синтеза судили по включению меченой аминокислоты в ТХУ-нерас-
творимый продукт трансляции после 15-минутной инкубации, радиоак-
тивность проб определяли согласно [9].
Электрофорез белков в 13 %-ном полиакриламидном геле (ПААГ)
в присутствии DS-Na проводили по методу Лэммли [10] с небольшими
Включение 14С-лейцина в TХУ-нерастворимый продукт трансляции в системе,
реконструированной из цитозола и рибосом разных классов (в пмолях на 1 мг
рибосом) в норме и при 30-минутном аутолизе (М±т)
14C-Ieuclne incorporation into T С Α-insoluble product of translation in reconstructed
cell-free system consisting of cytosol and various classes of ribosomes (pmol/mg
of ribosomes) in norm and after 30 min autolysis (M±m)
П р и м е ч а н и е . Ph И Р и — рибосомы из интактного и ишемизированного мио(.
соответственно; Цн и Ц и — цитозол из интактного и ишемизированного миокарде"
ответственно. Время инкубации 15 мин.
* Изменения статистически недостоверны.
82 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. № 5 6 -9 -419 81
модификациями. Гели после электрофореза обрабатывали препаратом
Amplify («Amersham», США) в течение 1 ч, высушивали и экспониро-
вали с пленкой PM-B при температуре —80 °С.
Результаты экспериментов, проведенных с использованием гомо-
генной бесклеточной белоксинтезирующей системы, состоящей из цито-
зола и рибосомных препаратов, показали существенное изменение ско-
рости включения метки в продукт трансляции при данной патологии
(таблица). Использование же перекрестных систем позволило оценить
влияние ишемии на рибосомные препараты и
цитозол в отдельности. Оказалось, что отмечен-
ные изменения зависят, главным образом, от
препаратов рибосом, так как активность свобод-
ных рибосом уменьшается на 2 8 % , а актив-
ность мембраносвязанных — значительно увели-
чивается, в то время как белоксинтезирующая
активность цитозола из ишемизированнои ткани
уменьшается в значительной степени.
Увеличение относительного содержания
мембраносвязанных рибосом и их функциональ-
ной активности может быть связано с \'величе-
Радиоавтограф электрофоретического разделения в 13 %-
ном ПААГ продуктов трансляции в реконструированной
бесклеточной системе: 1 — белки, синтезированные в бес-
клеточной системе из интактного миокарда; 2 — то же из
ишемизированного миокарда. Стрелками обозначены неме-
ченые белки-маркеры: а — бычий сывороточный альбумин
(67 ООО); б — яичный альбумин (43 ООО); в — химотрипси-
ноген (25 ООО); г —миоглобин (18 ООО)
Polyacrylamide gel (13 %) electrophoresis of 14C-Iabelled
translation products in the reconstructed cell-free system.
1 — proteins synthesized in the cell-free system from intact
myocardium; 2 — proteins synthesized in the cell-free system
from ischemic myocardium. Arrows indicate nonradioactive
molecular weight standards: a — bovine serum albumin
(67 kD), 6 —ovalbumin (43 kD), в — chymotrypsinogen
(25 kD), г —myoglobin (18 kD)
предназначенных на экспорт (эластин, коллаген
и др.). С другой стороны, присоединение рибосом к мембранам, воз-
можно, стабилизирует полисомную структуру пула рибосом, что позво-
ляет продолжать синтез белков, синтезирующихся свободными поли-
сомами в нормальных условиях.
Элекτрофоретический анализ продуктов трансляции с последую-
щей авторадиографией показал некоторое перераспределение белковых
фракций в системе из ишемизированного миокарда (рисунок, дорожка
2). Однако отличия не так велики, чтобы подтвердить первое предпо-
ложение. Скорее всего, при данном патологическом состоянии могут
реализоваться обе вышеуказанные возможности.
Идентификация полипептидов, появляющихся во время ишемии,
позволила бы более углубленно исследовать механизм изменения бел-
кового синтеза в условиях этой патологии.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Аминоацил-тРНК-синтетазы и их высокомолекулярные комплексы при эксперимен-
тальной ишемии миокарда / Л . Л . Иванов, А. И. Тамулявичюс, Л . Ю. ЛУКОШЯВИЧЮС
и др. / / Молекуляр. биология.— 1984.— № 5,— С. 1326—1329.
2. Изучение молекулярных основ нарушения биосинтеза белка при экспериментальном
инфаркте миокарда и аутолизе м и о к а р д а / М . И. Коваленко, Г. А. Родовичюс,
А. И. Тамулявичюс и д р . / / М о л е к у л я р . биология.— 1984.— Вып. 37.— С. 18—21.
3. Reimer К. A., Ideker R. Е. Myocardial ischemia and infarction: anatomic and bio-
chemical substrates for ischemic cell death and ventricular a r r h y t h m i a s / / H u m . Pat-
hol— 1987.-18, N 5 ,—P. 462—475.
нием синтеза белков,
82 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. № 5 6-9-419 81
4. Масколюнас Р. КЛекис А. В., Коваленко М. И. Биосинтез белка в бесклеточных
белоксинтезирующих системах из миокарда кролика при тотальной ишемии / / Био-
полимеры и клетка.— 1989.—5, № 1.— С. 84—86.
5. Масколюнас Р. К. Структурно-функциональные изменения в пуле рибосом миокар-
диальных клеток кроликов при тотальной и ш е м и и / / С б . науч. тр. 1-ой респ. конф.
молодых ученых медиков ЛитССР.— Каунас, 1988.— С. 54—57.
6. Morphological and biochemical changes in autolyzing dog heart muscle / L. C. Armi-
ger, R. N. Seelye, V. M. Carnell et a l . / / L a b . Invest.— 1976.—34, N 4 .—P. 357—362.
7. Явич Μ. П., Лерман Μ. И. Бесклеточная система белкового синтеза из сердечной
мышцы к р о л и к а / / В о п р . мед. химии.— 1976.— JVb 3.— С. 307—327.
8. Берман А. Е. Метод выделения полирибосом, свободных и связанных с мембрана-
ми цитоплазматической сети / /Соврем , методы в биохимии.— М . : Медицина, 1977.—
С. 300—303.
9. Изучение молекулярных механизмов гипоальбуминемии на модели эксперименталь-
ного инфаркта миокарда / А . В. Лекис, Л. Ю. Лукошявичюс, М. И. Коваленко,
О. В. Булдакова / /Биополимеры и клетка.— 1985.— 1, № 6.— С. 322—327.
10. Laemmli U. К. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of
bacteriophage Tl / / Nature.— 1970.—227, N 5259.—P. 680—685.
Ии-т молекуляр. биологии и генетики Получено 20.03.89
АН УССР, Киев
ELECTROPHORETICAL ANALYSIS OF TRANSLATION
PRODUCTS IN THE CELL-FREE SYSTEMS
FROM NORMAL AND ISCHEMIC RABBIT MYOCARDIUM
R. K. Maskoliunas
Institute of Molecular Biology and Genetics, Academy of Sciences
of the Ukrainian SSR, Kiev
S u m m a r y
The rate of radioactive amino acid incorporation into translational product in the re-
constructed protein-synthesizing cell-free systems, consisting of cytosol and polyribo-
somes from normal and ischemic myocardium is compared. The alteration in protein-
synthesizing activity is shown to depend mainly on the properties of polyribosomal pre-
parations. Electrophoretical analysis of the translational products with subsequent fluo-
rography has revealed redistribution of some protein fractions in the system from ische-
mic myocardium.
УДК 577.112.088.3
А. Д. Яремчук, Μ. А. Тукало, А. В. Коноваленко,
С. П. Егорова, Г. X. Мацука
ВЫДЕЛЕНИЕ СЕРИЛ-тРНК СИНТЕТАЗЫ
ИЗ THERMUS THERMOPHILIC НВ-27
Описан метод выделения высоко очищенного препарата серил-тРНК синтетазы из Т. ther-
mophilus. Использовали высаливание сульфатом аммония, хроматографию на ДЭАЭ-
сефарозе, оксиапатите, гепарин-сефарозе и гидрофобную хроматографию на поливини-
ловом сорбенте Toyopearl HW-65. Выход очищенного фермента составил 4 мг из 1 кг
клеток Т. thermophilus. Серил-тРНК синтетаза является димером а2-типа. Молекуляр-
ная масса фермента 90000.
Аминоацил-тРНК синтетазы и т Р Н К являются уникальными объектами
для изучения молекулярных механизмов белково-нуклеинового взаимо-
действия. В настоящее время достигнуты определенные успехи в ис-
следовании структуры т Р Н К — аминоацил-тРНК синтетазного комп-
лекса [1]. Однако подобные работы проводились с т Р Н К первого клас-
са, имеющими короткую вариабельную петлю. Экспериментальные же
данные по изучению взаимодействия аминоацил-тРНК синтетаз с т Р Н К
второго класса (с длинной вариабельной петлей) крайне ограниченны.
ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. № 5 6-9-419 81
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155178 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T17:14:34Z |
| publishDate | 1989 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Масколюнас, Р.К. 2019-06-16T10:12:55Z 2019-06-16T10:12:55Z 1989 Электрофоретический анализ продуктов трансляции в бесклеточных системах из миокарда кролика в норме и при ишемии / Р.К. Масколюнас // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 5. — С. 81-83. — Бібліогр.: 10 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0000E9 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155178 616.127+616.12—005.4 Проведено сравнение скорости включения радиоактивных аминокислот в продукт трансляции в реконструированных бесклеточных системах, включающих цитозол и полисомы из нормального и ишемизированного миокарда. Показано, что изменение белоксинтезирующей активности зависит главным образом от препаратов рибосом. Электрофоретический анализ продуктов трансляции с последующей авторадиографией продемонстрировал некоторое перераспределение белковых фракций в системе из ишемизированного миокарда. Порівняно швидкості включення радіоактивних амінокислот у продукт трансляції в реконструйованих безклітинних системах, які містять цитозол і полісоми з нормального та ішемізованого міокарда. Показано, що зміна білоксинтезуючої активності залежить головним чином від препаратів рибосом. Електрофоретичний аналіз продуктів трансляції з наступною авторадіографією продемонстрував деякий перерозподіл білкових фракцій у системі з ішемізованого міокарда. The rate of radioactive amino acid incorporation into transnational product in the reconstructed protein-synthesizing cell-free systems, consisting of cytosol and polyribosomes from normal and ischemic myocardium is compared. The alteration in protein-synthesizing activity is shown to depend mainly on the properties of polyribosomal preparations. Electrophoretical analysis of the translations! products with subsequent fluorography has revealed redistribution of some protein fractions in the system from ischemic myocardium. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Структура и функции биополимеров Электрофоретический анализ продуктов трансляции в бесклеточных системах из миокарда кролика в норме и при ишемии Електрофоретичний аналіз продуктів трансляції у безклітинних системах з міокарда кроля за норми та ішемії Electrophoretical analysis of translation products in the cell-free systems from normal and ischemic rabbit myocardium Article published earlier |
| spellingShingle | Электрофоретический анализ продуктов трансляции в бесклеточных системах из миокарда кролика в норме и при ишемии Масколюнас, Р.К. Структура и функции биополимеров |
| title | Электрофоретический анализ продуктов трансляции в бесклеточных системах из миокарда кролика в норме и при ишемии |
| title_alt | Електрофоретичний аналіз продуктів трансляції у безклітинних системах з міокарда кроля за норми та ішемії Electrophoretical analysis of translation products in the cell-free systems from normal and ischemic rabbit myocardium |
| title_full | Электрофоретический анализ продуктов трансляции в бесклеточных системах из миокарда кролика в норме и при ишемии |
| title_fullStr | Электрофоретический анализ продуктов трансляции в бесклеточных системах из миокарда кролика в норме и при ишемии |
| title_full_unstemmed | Электрофоретический анализ продуктов трансляции в бесклеточных системах из миокарда кролика в норме и при ишемии |
| title_short | Электрофоретический анализ продуктов трансляции в бесклеточных системах из миокарда кролика в норме и при ишемии |
| title_sort | электрофоретический анализ продуктов трансляции в бесклеточных системах из миокарда кролика в норме и при ишемии |
| topic | Структура и функции биополимеров |
| topic_facet | Структура и функции биополимеров |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155178 |
| work_keys_str_mv | AT maskolûnasrk élektroforetičeskiianalizproduktovtranslâciivbeskletočnyhsistemahizmiokardakrolikavnormeipriišemii AT maskolûnasrk elektroforetičniianalízproduktívtranslâcííubezklítinnihsistemahzmíokardakrolâzanormitaíšemíí AT maskolûnasrk electrophoreticalanalysisoftranslationproductsinthecellfreesystemsfromnormalandischemicrabbitmyocardium |