Активность α-химотрипсина, иммобилизованного бислойными фосфолипидными мембранами
Иммобилизация α-химотрипсина бислойными фосфолипидными липосомами приводит к увеличению константы Михаэлиса в 2,3 раза и снижению во столько же раз максимальной скорости процесса (субстрат: n-нитрофенилацетат) из-за влияния диффузионных факторов. Кінетичні параметри ферментативного гідролізу класич...
Saved in:
| Published in: | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Date: | 1997 |
| Main Authors: | , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1997
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155190 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Активность α-химотрипсина, иммобилизованного бислойными фосфолипидными мембранами / Ю.Е. Шапиро, А.В. Смирнова, И.Ф. Макаревич, А.В. Улесов // Биополимеры и клетка. — 1997. — Т. 13, № 3. — С. 213-217. — Бібліогр.: 16 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859629040857513984 |
|---|---|
| author | Шапиро, Ю.Е. Смирнова, А.В. Макаревич, И.Ф. Улесов, А.В. |
| author_facet | Шапиро, Ю.Е. Смирнова, А.В. Макаревич, И.Ф. Улесов, А.В. |
| citation_txt | Активность α-химотрипсина, иммобилизованного бислойными фосфолипидными мембранами / Ю.Е. Шапиро, А.В. Смирнова, И.Ф. Макаревич, А.В. Улесов // Биополимеры и клетка. — 1997. — Т. 13, № 3. — С. 213-217. — Бібліогр.: 16 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Биополимеры и клетка |
| description | Иммобилизация α-химотрипсина бислойными фосфолипидными липосомами приводит к увеличению константы Михаэлиса в 2,3 раза и снижению во столько же раз максимальной скорости процесса (субстрат: n-нитрофенилацетат) из-за влияния диффузионных факторов.
Кінетичні параметри ферментативного гідролізу класичного субстрату, n-нітрофенілацетату, у присутності а-хімотрипсину, іммобілізованого чи не іммобілізованого фосфоліпідними бішаровими ліпосомами, суттєво відрізняються. Іммобілізація α-хімотрипсину спричинює збільшення константы Міхаеліса і зниження максимальної швидкості процессу в 2,3 раза. Ці відмінності обумовлені дифузійними факторами, виникаючими при імобілізації ферменту. Дійсно, величина ефективної константи Міхаеліса, розрахована з урахуванням коефіцієнта дифузії компонентів реакційної системи, практично збігається з експериментально знайденою для α-хімотрипсину, імобілізованого ліпосомами.
The kinetic parameters for enzymatic hydrolysis of classic substrate, n-nitrophenyl acetate, in presence of α-chymotrypsin immobilized and nonimmobilized by phospholipid bilayer liposomes are essentially different. The immobilization of α-chymotrypsin tends to increase of the value of Michaelis constant and to decrease of the value of maximum, rate by a factor of 2.3. These distinctions are conditioned by diffusional factors arised with immobilization of enzyme. Indeed, the value of appropriate Michaelis constant calculated according to the diffusion coefficient for components of reaction medium is practically in agreement with experimental constant for α-chymotrypsin immobilized by phospholipid vesicles.
|
| first_indexed | 2025-12-07T13:09:08Z |
| format | Article |
| fulltext |
I S S N 0233-7657. Биополимеры и клетка. 1997. Т. 13. № 3
Активность а-химотрипсина, иммобилизованного
бислойными фосфолипидными мембранами
Ю. Е. Шапиро, А- В. Смирнова, И. Ф. Макаревич, А. В. Улесов
Физико-химический институт им. А. В. Богатского НАН Украины
270080, Одесса, Черноморская дорога, 86
Государственный научный центр лекарственных средств
310085, Харьков, ул. Астрономическая, 33
Иммобилизация а-химотрипсшш бислойными фосфолипидными липосомами приводит к увеличе
нию константы Михаэлиса в 2,3 раза и снижению во столько же раз максимальной скорости
процесса (субстрат: п-нитрофенилацетат) из-за влияния диффузионных факторов.
Введение. Переход от воды как среды фермента
тивной реакции к органическому растворителю или
выход из оптимального диапазона рН и температу
ры в водной фазе сопровождаются либо денатура
цией фермента, либо резким падением его катали
тической активности с исчезновением субстратной
специфичности [1 ].
Этого можно избежать, создавая водо- или
органорастворимые биокаталитические системы, в
качестве которых могут быть использованы обра
щенные мицеллы ПАВ [ 2 ] , ламеллярные структу
ры [3] или липосомы [4 ] . При этом фермент
оказывается защищенным от денатурирующего
воздействия и его активность практически не сни
жается [51.
Следует отметить, что данные об организации
биокаталитических ансамблей дополняют наши
представления о строении и функционировании
биологических мембран и расширяют возможности
практического использования ферментативного ка
тализа в биотехнологии, для химического анали
за — определения с помощью ферментов как водо
растворимых, так и нерастворимых в воде субстра
тов, для создания новых лекарственных форм на
основе ферментов.
При иммобилизации фермента внутри фосфо-
липидных липосом в процессе ферментативной ре
акции молекулы субстрата диффундируют через
© Ю. Е. Ш А П И Р О , А. В. С М И Р Н О В А , И. Ф . М А К А Р Б В И Ч ,
А. В. У Л Е С О В , 1997
липидный бислой к месту локализации фермента,
а продукты реакции — в обратном направлении.
Поэтому диффузионные факторы должны оказы
вать существенное влияние на кинетику реакции.
Их влияние на активность «-химотрипсина, иммо
билизованного моноламеллярными бислойными ли
посомами, рассмотрено в настоящей работе.
Для математического описания гетерогенной
каталитической системы в работе [6 ] приняты
следующие допущения:
1) диффузия субстрата внутри матрицы может
быть описана первым законом Фика с эффектив
ным коэффициентом диффузии О о ф , не зависящим
от концентрации и усредненным по всей биоката
литической частице, без учета того, что в ней
могут быть поры и непроницаемые участки;
2) специфические взаимодействия между суб
стратом и фосфолипидной мембраной отсутствуют;
3) скорость V ферментативной реакции описы
вается уравнением
V = = ~ ^ = K m a x С/(ІС' М + С), (1)
где С — локальная концентрация субстрата в био
каталитической частице; V"m a x и К'м — истинные
кинетические параметры ферментативного процес
са внутри носителя, которые предполагаются по
стоянными по всей частице.
В общем случае концентрация субстрата на
заданной глубине х бислойной мембраны описыва
ется уравнением стационарности [7] :
213
Ш А П И Р О Ю. Е. И Д Р .
° 0 = к'ш 1Е ]™1/{К'" + с)' (2)
где к'kat — истинная каталитическая константа ско
рости ферментативной реакции внутри носителя;
[Е \ т т — концентрация иммобилизованного липо-
сомами фермента; / — толщина бислоя. Общее ко
личество фермента в одной биокаталитической ча
стице [Е ] « [Е ] і г а тЛ/, где А — площадь внутренней
(или наружной) поверхности мембраны.
Вклад диффузии субстрата предложено [6]
охарактеризовать фактором F, названным факто
ром эффективности:
= 2_ ohal-l = 2th[al/2) (3)
al shal al '
где a = (к'ш[Е]ітт/К'моУ/2. При С « Км и al> 3
F - 2/al. (4)
Для приближенной оценки удобно принять,
что значения &'ка1 и К'м, определяющие параметр а,
мало отличаются от кинетических параметров ре
акции, протекающей в воде. Наблюдаемое значе
ние константы Михаэлиса можно найти из простого
соотношения: Км ~ К'м/PF, где Р — коэффициент
распределения [7 ]. При al < 1 фактор F отличает
ся от единицы не более чем на 10 %, т. е.
влиянием диффузии можно пренебречь. При al > 1
фактор F заметно меньше единицы, и диффузион
ные факторы вносят существенный вклад в кинети
ку процесса. Таким образом, отличие al от едини
цы может служить критерием влияния диффузии
на скорость реакции.
Материалы и методы. В работе использовали
очищенный методом гель-фильтрации а-химотрип-
син (ЕС 3,4.21.1) производства «Биохимреактив»
(Олайне, Латвия). Концентрация а-химотрипсина
в опытах составляла (1 ,8±0 ,6 ) • 10 _ < ) М.
В качестве буферной системы использовали
0,1 М раствор трис-(оксиметил)-аминометана
(трис) с добавлением 0,1 М раствора НС1 до опти
мального для химотрипсина значения рН 8 , 0 ± 0 , 1 .
Значения рН буферных растворов измеряли на
иономере ЭВ-74.
я-Нитрофенилацетат синтетизовали кипячени
ем полуторного избытка уксусного ангидрида с
я-нитрофенолятом натрия в течение 1 ч. Продукт
перекристаллизовывали дважды из абсолютного
этанола [8 ]. Температура плавления полученного
вещества составляла 79,8 °С, что соответствует
справочным данным (/п л = 79 °С). Хроматографиче-
ское определение и спектр ПМР показали, что
синтезированное вещество достаточно чистое.
я-Нитрофенол, использованный для построе
ния спектрофотометрической калибровочной пря
мой, был перекристаллизован трижды.
Исходный раствор субстрата готовили, раство
ряя навески я-нитрофенилацетата в 1 мл ацетонит-
рила, а затем разбавляя ацетонитрильный раствор
буфером 0,1 М трис-HCl. Конечные растворы суб
страта содержали 10 % (v/v) ацетонитрила.
Раствор свободной или липосомной формы
фермента и раствор субстрата смешивали в соотно
шении 2:1. Концентрацию субстрата, используе
мую в параллельных опытах, варьировали от
3 , 4 - 1 0 4 до 3 ,4-10 3 М при одинаковой концентра
ции фермента.
Для приготовления липосом использовали сум
марную смесь фосфолипидов соевых бобов: фосфа-
тидилхолина, фосфатидилинозита и фосфатидной
кислоты. Причем жирнокислотный состав фосфо
липидов соевых бобов следующий [9J: 16:0, 14 %;
18:0, 4 %; 18:1, 12 %; 18:2, 65 %; 18:3, 5 %.
Иммобилизацию осуществляли при совместной
обработке раствора фермента и водной (буферной)
дисперсии мультиламеллярных липосом ультразву
ком с помощью диспергатора УЗДН-1УЧ2. Время
ультразвуковой обработки составляло 20 мин. Не-
иммобилизованный липосомами фермент отделяли
от иммобилизованного гель-фильтрацией на сефа-
дексе G-50 методом, описанным в работе [10] .
Ферментативную активность измеряли спект-
рофотометрически по выделению продукта реакции
^-нитрофенола (я-нитрофенолят-иона), имеющего
максимум поглощения при 400 нм. Полоса погло
щения я-нитрофенола не совпадает с таковой ис
ходного субстрата (я-нитрофенилацетата) при
312 нм. Спектрофотометрическое определение про
водили на спектрофотометре Perkin-Elmer Lambda-
9. Возможности прибора позволяют делать измере
ния в УФ- и видимой областях с погрешностью: для
длины волны — ± 0 , 2 нм, для оптической плотно
сти — ±0 ,003 А. Реакционную смесь помещали в
кювету с длиной оптического пути 1 см. В качестве
раствора сравнения использовали раствор трис-бу-
фера. Сканирование осуществляли через проме
жутки времени, равные 30 с, в течение 15 мин
прохождения ферментативного процесса.
Результаты и обсуждение. В водных средах
я-нитрофенилацетат подвержен самопроизвольно
му гидролизу. Поэтому первоначально в «холо
стом» опыте определяли константу скорости нефер
м е н т а т и в н о г о г и д р о л и з а , с о с т а в и в ш у ю
(5 ,92±0,25) • 1 0 4 с 1 . Величина полученной кон
станты почти на два порядка меньше таковой для
ферментативного процесса в присутствии а-химот
рипсина, которая составляет (4 ,99±0,22) • 10~2 с 1 .
Поэтому можно утверждать, что самопроизвольный
214
А К Т И В Н О С Т Ь а - Х И М О Т Р И П С И Н А , И М М О Б И Л И З О В А Н Н О Г О МЕМБРАНАМИ
(fPJ/t) • К)7, М1с
о-
48 -38 -28 -18 -8 -68 -58
(105/t)ln [[S]0/([S]Q-[P])],c-i
Рис. 1. Анаморфозы в координатах Фостера—Ниманна для
определения кинетических параметров реакции гидролиза п-
нитрофенилацетага, катализируемого а-химотрипсином, рас
творенным в водном буферном растворе (7) и находящимся в
бислойных фосфолипидных липосомах (2) (рН 8,0, 20 °С)
[KM(Kp^SJ0)/(KPKM)J'J04, м
-5-
35~\
[S]0 • 10\ м
Рис. 2. Анаморфозы в координатах S0 — Км(Кр + S0) / (Км-
- Кр), построенные для тех же каталитических систем, что и на
рис. 1
= (6 ,24±0,04) • 10 4 М и максимальной скорости
F m a x = (8 ,99±0,13* 10 7 М/с оказались близкими к
литературным данным [12] (Км = 7 * 10 4 М).
Измерения ферментативной активности пока
зали, что иммобилизация а-химотрипсина в липо
сомах вносит изменения в кинетические параметры
ферментативного процесса гидролиза. Основные
причины этих изменений — влияние на процесс
внутридиффузионных факторов. Поэтому для
оценки внутридиффузионных ограничений необхо
димо найти коэффициенты диффузии молекул суб
страта и продукта реакции.
Можно предположить, что диффузия достаточ
но липофильных молекул /і-нитрофенилацетата и
«-нитрофенола через фосфолипидный бислой про
исходит по схеме пассивного транспорта. При этом
трансмембранный перенос молекул фосфолипида
определяет скорость диффузии липофильных моле
кул.
Согласно данным МакКоннела [14] , константы
скоростей перехода спин-меченного фосфатидилхо-
лина из внешнего монослоя везикулярной мембра
ны во внутренний (kt) и из внутреннего во внеш
ний (k0) составляет 0,04 и 0,07 ч 1 при 30 °С
соответственно. Для подобного обратимого процес
са:
метка во k0
внутреннем монослое
можно записать:
метка во
внешнем монослое
dN, , (5)
где Nj и N0 — число спин-меченных молекул во
внешнем и внутреннем монослоях. Учитывая рав
новесность процесса, получаем
(б)
гидролиз я-нитрофенилацетата не вносит сущест
венных погрешностей при определении параметров
активности а-химотрипсина.
Результаты спектрофотометрического опреде
ления параметров активности обрабатывали с ис
пользованием интегральной формы уравнения Ми-
хаэлиса — Ментен методом Фостера — Ниманна
[ П ] .
На рис. 1 и 2 приведены анаморфозы для
раствора а-химотрипсина в трис-буфере и а-химот
рипсина, иммобилизованного бислойными липосо-
мами. Обработка результатов эксперимента позво
дила найти значения кинетических параметров
реакции ферментативного гидролиза гс-нитрофени-
гіацетата. В растворе в трис-буфере значения Км =
(7)
Подставляя равенства (6) и (7) в уравнение
(5), можно преобразовать его следующим образом:
d(JNi - A f в н )
dt
(8)
где k = k, + k0.
Из уравнения (8) число молекул можно выра
зить через количество молей вещества:
d{nt - я? а в н)
dt -к(п, - п\ равм)
(9)
Если процесс диффузии описывается уравнени
ем Фика, то
215
Ш А П И Р О К). В. И Д Р .
J_ dn
A dt
-D (ІС
dx" (10)
где A = лй — площадь поверхности мембраны; d —
наружный диаметр везикулы; D — коэффициент
трансмембранной диффузии; dn/dt — число молей,
переносимых через поверхность А.
При условии стационарности транспорта через
мембрану в уравнении (10) переходим к конечным
разностям:
1 dn
nd2 dt
-D
(с. - cf a B H)
І
(11)
где / — толщина бислойной мембраны.
Подставляя в уравнение (11) соотношение (9),
получаем уравнение
равн
= D I
(12)
из которого, учитывая, что С = n/V, где V - лі (d2-
- 2dl + 4 /З / 2 ) — объем фосфолипидного бислоя,
можно найти коэффициент диффузии D:
D = —ті = kl\d2 - 2dl + 4/3/2W2. (13)
лd
Значения коэффициента диффузии D и факто
ра эффективности F рассчитаны с использованием
полученных экспериментальных данных о катали
тической активности (к'ш, К'м) и геометрических
размеров везикул из фосфатидилхолина и фосфа-
тидилинозита, определенных [14] методом малоуг
лового рассеяния рентгеновских лучей. Как видно
из табл. 1, коэффициенты диффузии довольно
малы, поэтому фактор эффективности F < 1. Отсю
да следует, что диффузионные ограничения, накла
дываемые на доступность активного центра фер-
Табліща 1
Значения геометрических параметров фосфолипидпых
везикул из фосфатидилхолина (ФХ) и фосфатидилинозита
(ФИ), расчетных величин коэффициента диффузии и
фактора эффективности
Таблица 2
Кинетические параметры ферментативного гидролиза
п-нитрофенияацетата неиммобилизованным и
иммобилизованным в фосфолипидпых лшюсомах
а-химотрипсином
Каталитическая система Км, M К°фм, M V'max, М/с
«-Химотрипсин
неиммобилизо-
ванный
иммобилизован
ный в лшюсомах
( 6 , 2 4 ±
± 0 , 0 4 ) 10
( 1 , 4 6 ±
± 0 , 0 2 ) 10 1,42-10"
(8 ,99 ±
t 0 , 1 3 ) 1 0 _ i
( 3 , 9 9 ±
Ь0,04) 10~;
мента, иммобилизованного в липосомах, действи
тельно сказываются на значениях кинетических
параметров процесса.
Известно, что диффузионные ограничения, на
кладываемые на доступ субстрата к активному
центру иммобилизованного фермента, неизменно
приводят к тому, что величина константы Михаэ-
лиса оказывается больше значения, полученного
для свободного фермента, а величина Утлк — мень
ше или равной исходной [15] . Как видно из табл.
2, расчетное значение Км
эф, полученное делением
Км, найденного для неиммобилизованного фермен
та, на величину F = 0,88 при значении коэффици
ента распределения Р - 0,5, оказалось практически
совпадающим с величиной Км, определенной для
а-химотрипсина, иммобилизованного фосфолипид
ными везикулами. Это свидетельствует о том, что
учет диффузионных факторов при иммобилизации
cr-химотрипсина выполнен, в общем, правильно.
Из табл. 2 видно, что иммобилизация а-химот
рипсина фосфолипидными липосомами способству
ет увеличению константы Михаэлиса в 2,34 раза и
понижению Vmeix в 2,25 раза. Можно предположить,
что эти изменения обусловлены либо неконкурент
ным ингибированием фермента молекулами фосфо-
липидов, приводящим к падению скорости образо
вания продукта реакции, либо уменьшением кон
с т а н т ы с к о р о с т и k+l о б р а з о в а н и я
фермент-субстратного комплекса по известной схе
ме (Км =(*_!+ *+2)/*,.,):
к+\
Е + S ES Е + Р.
Полученные результаты качественно согласу
ются с выводами, сделанными ранее [16] для
216
ферментативного катализа в пленках из нитрата
целлюлозы разной толщины.
Таким образом, для определения истинных
значений каталитических параметров фермента
тивного процесса при иммобилизации фермента
липосомами необходим учет диффузионных факто
ров.
Работа выполнена при финансовой поддержке
Госкомитета Украины по науке и технологиям
(грант 1.01.02.02/018-93).
К). Є. Шапіро, А. В. Смирнова, I. Ф. Макаревич, А. В. У лесов
Активність «-хімотрипсину, іммобілізованого бішаровими фос-
фоліпідними мембранами
Резюме
Кінетичні параметри ферментативного гідролізу класичного
субстрату, п-нітрофенілацетату, у присутності а-хімотрип-
сину, іммобілізованого чи не іммобілізованого фосфоліпідними
бішаровими ліпосомами, суттєво відрізняються. Іммобілі
зація а-хімотрипсину спричинює збільшення константы Мі-
хаеліса і зниження максимальної швидкості процессу в 2,3
раза. Ці відмінності обумовлені дифузійними факторами,
виникаючими при імобілізації ферменту. Дійсно, величина
ефективної константи Міхаеліса, розрахована з урахуванням
коефіцієнта дифузії компонентів реакційної системи, прак
тично збігається з експериментально знайденою для а-хімо
трипсину, імобілізованого ліпосомами.
Yu. Е. Shapiro, A. V. Smirnova, I. F. Makarevich, А. V. Ulesov
An activity of a-chymotrypsin immobilized by bilayer phospholipid
membranes
Summary
The kinetic parameters for enzymatic hydrolysis of classic substrate,
p-nitrophenyl acetate, in presence of a-chymotrypsin immobilized
and nonimmobilized by phospholipid bilayer liposomes are essen
tially different. The immobilization of a-chymotrypsin tends to
increase of the value of Michaelis constant and to decrease of the
value of maximum rate by a factor of 2.3. These distinctions are
conditioned by diffusiotml factors arised with immobilization of
enzyme. Indeed, the value of appropriate Michaelis constant calcu
lated according to the diffusion coefficient for components of
reaction medium is practically in agreement with experimental
constant for a-chymotrypsin immobilized by phospholipid vesicles.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Мартинек К. Успехи биоорганического катализа / Под.
А К Т И В Н О С Т Ь а Х И М О Т Р И П С И Н А , И М М О Б И Л И З О В А Н Н О Г О МЕМБРАНАМИ
ред. И. В. Березина, К. Мартинек.—М.: Изд-во МГУ,
1979 .—105 с.
2. Мартинек К., Левашов А. В., Клячко II. Л., Березин И. В.
Катализ водорастворимыми ферментами в органических
растворителях / / Докл. АН СССР. — 1 9 7 7 . — 2 3 6 , № 4.—
С. 9 2 0 — 9 2 3 .
3. Шапиро Ю. Е., Пыхтеева Е. Г., Левашов А. В., Клячко Н.
Л. Морфология обращенных фибриллярных мицелл и лио-
тропных фаз Бридж-96 в циклогексане, инкапсулирующих
альбумин / / Биол. мембраны. — 1993 .—10 , № 4.—С. 397—
408.
4. Липосомы в биологических системах / Под ред. Г. Гре-
гориадиса, А. Аллисона.—М.: Медицины, 1983.—156 с.
5. Хмельницкий Ю. Л., Левашов А. В., Клячко II. Л.,
Мартинек К. Микрогетерогенная среда для химических
(ферментативных) реакций на основе коллоидного раст
вора воды в органическом растворителе / / Успехи хи
м и и . — 1 9 8 4 . — 5 3 , № 4 . — С . 5 4 5 — 5 6 5 .
6. Березин И. В., Варфоломеев С. Д. Биокинетика. — М.:
Наука, 1979.—127 с.
7. Березин И. В., Клибанов А. М., Мартинек К. Кинетико-
термодинамические аспекты катализа иммобилизованными
ферментами / / Успехи химии. — 1 9 7 5 . — 4 4 , № 1.—С. 17—
47.
8. Chattaway F. D. Acetylation in aqueous alkaline solutions III.
Chem. S o c — 1 9 3 1 . — N 9 — P . 2 4 9 5 — 2 4 9 9 .
9. Drouet X. Accumulation of sulphite by Saccharomyces ce-
revisiae and Zygosaccharomyces bailii as affected by phos
pholipid fatty-acyl unsaturation and chain length / / Brit.
Haemato l .—1989 .—73.—P. 143—149 .
10. Krauth W.f Werner D. Analysis of the most tightly bound
proteins in eukaryotic DNA / / Biochim. et biophys. acta.—
1979 .—564 .—P. 3 9 0 — 4 0 1 .
11. Березин. И. В., Мартинек К. Основы физической химии
ферментативного катализа.—М.: Высш. шк, 1977.—250 с.
12. Wahlby S. Rate of acetylation of «-chymotrypsin by p-
nitrophenyl [I - , 4 C] acetate studied by isolation of [ I 4 C]-ace ty l
enzyme / / Acta Chim. S c a n d . — 1 9 7 0 . — 2 4 . — P . 2429—2434
13. Kornberg R. D., McConnell H. Inside-outside transitions of
phospholipids in vesicle membranes / / Biochemistry.—1971 .—
10, N 7 .—P. 111-1120.
14. Cain Sautillan G., Blaisie J. K. Membrane Research.—
New York: Acad, press, 1978.—
15. Тривен M7 Иммобилизованные ферменты.—M.: Мир,
1983.—68 с.
16. Goldman R., Kedem О., Katchalski Е. Papain collogion
membranes II. Analysis of the kinetics behaviour of enzymes
immobilized in artificial membranes / / Biochemistry.—1968.—
7.—P. 4518—4520 .
УДК 661 Л 85.1 +547.96+541.128.135
Поступила в редакцию 02.07.96
217
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155190 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T13:09:08Z |
| publishDate | 1997 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Шапиро, Ю.Е. Смирнова, А.В. Макаревич, И.Ф. Улесов, А.В. 2019-06-16T10:34:31Z 2019-06-16T10:34:31Z 1997 Активность α-химотрипсина, иммобилизованного бислойными фосфолипидными мембранами / Ю.Е. Шапиро, А.В. Смирнова, И.Ф. Макаревич, А.В. Улесов // Биополимеры и клетка. — 1997. — Т. 13, № 3. — С. 213-217. — Бібліогр.: 16 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000481 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155190 661.185.1+547.96+541.128.135 Иммобилизация α-химотрипсина бислойными фосфолипидными липосомами приводит к увеличению константы Михаэлиса в 2,3 раза и снижению во столько же раз максимальной скорости процесса (субстрат: n-нитрофенилацетат) из-за влияния диффузионных факторов. Кінетичні параметри ферментативного гідролізу класичного субстрату, n-нітрофенілацетату, у присутності а-хімотрипсину, іммобілізованого чи не іммобілізованого фосфоліпідними бішаровими ліпосомами, суттєво відрізняються. Іммобілізація α-хімотрипсину спричинює збільшення константы Міхаеліса і зниження максимальної швидкості процессу в 2,3 раза. Ці відмінності обумовлені дифузійними факторами, виникаючими при імобілізації ферменту. Дійсно, величина ефективної константи Міхаеліса, розрахована з урахуванням коефіцієнта дифузії компонентів реакційної системи, практично збігається з експериментально знайденою для α-хімотрипсину, імобілізованого ліпосомами. The kinetic parameters for enzymatic hydrolysis of classic substrate, n-nitrophenyl acetate, in presence of α-chymotrypsin immobilized and nonimmobilized by phospholipid bilayer liposomes are essentially different. The immobilization of α-chymotrypsin tends to increase of the value of Michaelis constant and to decrease of the value of maximum, rate by a factor of 2.3. These distinctions are conditioned by diffusional factors arised with immobilization of enzyme. Indeed, the value of appropriate Michaelis constant calculated according to the diffusion coefficient for components of reaction medium is practically in agreement with experimental constant for α-chymotrypsin immobilized by phospholipid vesicles. Работа выполнена при финансовой поддержке Госкомитета Украины по науке и технологиям (грант 1.01.02.02/018-93). ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Структура и функции биополимеров Активность α-химотрипсина, иммобилизованного бислойными фосфолипидными мембранами Активність α-хімотрипсину, іммобілізованого бішаровими фосфоліпідними мембранами An activity of α-chymotrypsin immobilized by bilayer phospholipid membranes Article published earlier |
| spellingShingle | Активность α-химотрипсина, иммобилизованного бислойными фосфолипидными мембранами Шапиро, Ю.Е. Смирнова, А.В. Макаревич, И.Ф. Улесов, А.В. Структура и функции биополимеров |
| title | Активность α-химотрипсина, иммобилизованного бислойными фосфолипидными мембранами |
| title_alt | Активність α-хімотрипсину, іммобілізованого бішаровими фосфоліпідними мембранами An activity of α-chymotrypsin immobilized by bilayer phospholipid membranes |
| title_full | Активность α-химотрипсина, иммобилизованного бислойными фосфолипидными мембранами |
| title_fullStr | Активность α-химотрипсина, иммобилизованного бислойными фосфолипидными мембранами |
| title_full_unstemmed | Активность α-химотрипсина, иммобилизованного бислойными фосфолипидными мембранами |
| title_short | Активность α-химотрипсина, иммобилизованного бислойными фосфолипидными мембранами |
| title_sort | активность α-химотрипсина, иммобилизованного бислойными фосфолипидными мембранами |
| topic | Структура и функции биополимеров |
| topic_facet | Структура и функции биополимеров |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155190 |
| work_keys_str_mv | AT šapiroûe aktivnostʹαhimotripsinaimmobilizovannogobisloinymifosfolipidnymimembranami AT smirnovaav aktivnostʹαhimotripsinaimmobilizovannogobisloinymifosfolipidnymimembranami AT makarevičif aktivnostʹαhimotripsinaimmobilizovannogobisloinymifosfolipidnymimembranami AT ulesovav aktivnostʹαhimotripsinaimmobilizovannogobisloinymifosfolipidnymimembranami AT šapiroûe aktivnístʹαhímotripsinuímmobílízovanogobíšarovimifosfolípídnimimembranami AT smirnovaav aktivnístʹαhímotripsinuímmobílízovanogobíšarovimifosfolípídnimimembranami AT makarevičif aktivnístʹαhímotripsinuímmobílízovanogobíšarovimifosfolípídnimimembranami AT ulesovav aktivnístʹαhímotripsinuímmobílízovanogobíšarovimifosfolípídnimimembranami AT šapiroûe anactivityofαchymotrypsinimmobilizedbybilayerphospholipidmembranes AT smirnovaav anactivityofαchymotrypsinimmobilizedbybilayerphospholipidmembranes AT makarevičif anactivityofαchymotrypsinimmobilizedbybilayerphospholipidmembranes AT ulesovav anactivityofαchymotrypsinimmobilizedbybilayerphospholipidmembranes |