Клонирование гена ApoAl человека и его экспрессия в фибробластах мыши
Клонирован ген AпoAl человека и получена его экспрессия в культуре мышиных фибробластов линии LTK⁻. Клоновано ген AпoAl людини і отримано його експресію в культурі мишачих фиб-робластів ліній LTK⁻. The human ApoAl gene has been cloned and its expression has been obtained in the culture of murine fib...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Дата: | 1989 |
| Автори: | , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1989
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155214 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Клонирование гена ApoAl человека и его экспрессия в фибробластах мыши / В.Н. Шульженко, Л.Л. Лукаш, Л.Н. Шуляк, Е.В. Усенко, В.А. Кордюм // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 5. — С. 105-107. — Бібліогр.: 5 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155214 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Шульженко, В.Н. Лукаш, Л.Л. Шуляк, Л.Н. Усенко, Е.В. Кордюм, В.А. 2019-06-16T11:04:27Z 2019-06-16T11:04:27Z 1989 Клонирование гена ApoAl человека и его экспрессия в фибробластах мыши / В.Н. Шульженко, Л.Л. Лукаш, Л.Н. Шуляк, Е.В. Усенко, В.А. Кордюм // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 5. — С. 105-107. — Бібліогр.: 5 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0000EF https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155214 577.21 Клонирован ген AпoAl человека и получена его экспрессия в культуре мышиных фибробластов линии LTK⁻. Клоновано ген AпoAl людини і отримано його експресію в культурі мишачих фиб-робластів ліній LTK⁻. The human ApoAl gene has been cloned and its expression has been obtained in the culture of murine fibroblasts of the LTK⁻ line. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Генно-инженерная биотехнология Клонирование гена ApoAl человека и его экспрессия в фибробластах мыши Клонування гена ApoAl людини і його експресія у фібробластах миші Cloning of human ApoA1 gene and its expression in murine fibroblasts Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Клонирование гена ApoAl человека и его экспрессия в фибробластах мыши |
| spellingShingle |
Клонирование гена ApoAl человека и его экспрессия в фибробластах мыши Шульженко, В.Н. Лукаш, Л.Л. Шуляк, Л.Н. Усенко, Е.В. Кордюм, В.А. Генно-инженерная биотехнология |
| title_short |
Клонирование гена ApoAl человека и его экспрессия в фибробластах мыши |
| title_full |
Клонирование гена ApoAl человека и его экспрессия в фибробластах мыши |
| title_fullStr |
Клонирование гена ApoAl человека и его экспрессия в фибробластах мыши |
| title_full_unstemmed |
Клонирование гена ApoAl человека и его экспрессия в фибробластах мыши |
| title_sort |
клонирование гена apoal человека и его экспрессия в фибробластах мыши |
| author |
Шульженко, В.Н. Лукаш, Л.Л. Шуляк, Л.Н. Усенко, Е.В. Кордюм, В.А. |
| author_facet |
Шульженко, В.Н. Лукаш, Л.Л. Шуляк, Л.Н. Усенко, Е.В. Кордюм, В.А. |
| topic |
Генно-инженерная биотехнология |
| topic_facet |
Генно-инженерная биотехнология |
| publishDate |
1989 |
| language |
Russian |
| container_title |
Биополимеры и клетка |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Клонування гена ApoAl людини і його експресія у фібробластах миші Cloning of human ApoA1 gene and its expression in murine fibroblasts |
| description |
Клонирован ген AпoAl человека и получена его экспрессия в культуре мышиных фибробластов линии LTK⁻.
Клоновано ген AпoAl людини і отримано його експресію в культурі мишачих фиб-робластів ліній LTK⁻.
The human ApoAl gene has been cloned and its expression has been obtained in the culture of murine fibroblasts of the LTK⁻ line.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155214 |
| citation_txt |
Клонирование гена ApoAl человека и его экспрессия в фибробластах мыши / В.Н. Шульженко, Л.Л. Лукаш, Л.Н. Шуляк, Е.В. Усенко, В.А. Кордюм // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 5. — С. 105-107. — Бібліогр.: 5 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT šulʹženkovn klonirovaniegenaapoalčelovekaiegoékspressiâvfibroblastahmyši AT lukašll klonirovaniegenaapoalčelovekaiegoékspressiâvfibroblastahmyši AT šulâkln klonirovaniegenaapoalčelovekaiegoékspressiâvfibroblastahmyši AT usenkoev klonirovaniegenaapoalčelovekaiegoékspressiâvfibroblastahmyši AT kordûmva klonirovaniegenaapoalčelovekaiegoékspressiâvfibroblastahmyši AT šulʹženkovn klonuvannâgenaapoallûdiniíiogoekspresíâufíbroblastahmiší AT lukašll klonuvannâgenaapoallûdiniíiogoekspresíâufíbroblastahmiší AT šulâkln klonuvannâgenaapoallûdiniíiogoekspresíâufíbroblastahmiší AT usenkoev klonuvannâgenaapoallûdiniíiogoekspresíâufíbroblastahmiší AT kordûmva klonuvannâgenaapoallûdiniíiogoekspresíâufíbroblastahmiší AT šulʹženkovn cloningofhumanapoa1geneanditsexpressioninmurinefibroblasts AT lukašll cloningofhumanapoa1geneanditsexpressioninmurinefibroblasts AT šulâkln cloningofhumanapoa1geneanditsexpressioninmurinefibroblasts AT usenkoev cloningofhumanapoa1geneanditsexpressioninmurinefibroblasts AT kordûmva cloningofhumanapoa1geneanditsexpressioninmurinefibroblasts |
| first_indexed |
2025-11-25T22:45:09Z |
| last_indexed |
2025-11-25T22:45:09Z |
| _version_ |
1850570668566904832 |
| fulltext |
Генноинженерная
биотехнология
УДК 577.21
В. Н. Шульженко, Л. Л. Лукаш,
Л. Н. Шуляк, Е. В. Усенко, В. А. Кордюм
КЛОНИРОВАНИЕ ГЕНА AnoAl ЧЕЛОВЕКА
И ЕГО ЭКСПРЕССИЯ В ФИБРОБЛАСТАХ МЫШИ
Клонирован ген AnoAl человека и получена его экспрессия в культуре мышиных фиб-
робластов линии LTK~.
Белковый продукт гена AnoAl человека является основным во фракции
липопротеинов высокой плотности. Данные литературы свидетельству-
ют о том, что с нарушением баланса липопротеинов высокой и низкой
плотности коррелирует развитие атеросклероза человека [1, 2]. В этой
связи клонирование гена AnoAl человека представляет значительный
интерес как в плане изучения молекулярных механизмов возникнове-
ния атеросклероза, так и в плане возможного практического его ис-
пользования для целей генной терапии.
Мы провели скрининг 300 ООО рекомбинантных фагов библиотеки
генов человека зондом к гену AnoAl [3]. В качестве зонда использо-
вали химически синтезированный 40-членный олигонуклеотид, компле-
ментарный фрагменту структурной части гена AnoAl человека [4].
PsiZ-фрагмент Д Н К рекомбинантного фага, дающий положительный
сигнал при блот-гибридизации с используемым зондом, был субклони-
рован в составе плазмиды pUC18. Картирование при использовании
рестрикционных эндонуклеаз
HindlIU PvuII, SacI9 XhoIt TagI по-
казало идентичность длины полу-
ченных рестрикционных фрагмен-
тов с таковыми гена AnoAl чело-
века [4].
Рестрикционная карта плазми-
Рис. 1. Рестрикционная карта плазмиды
pUC18-kuo
Fig. 1. Restriction map of plasmid pUCl8-
Apo
ды pUC18-kno приведена на рис. 1. Частичное определение первичной
структуры клонированного фрагмента Д Н К подтвердило ее идентич-
ность с таковой для гена AnoAl человека, фланкирующей 5'-конец как
со стороны структурной части, так и со стороны 5'-нетранслируемой
области гена.
Для изучения экспрессии клонированного гена были использованы
три различные молекулярные конструкции: плазмиды pUC18-Auo и
pUC18-Auo\ содержащие ген AnoAl человека под собственным промо-
тором с различной ориентацией клонированного гена AnoAl, а также
плазмида paLl-kno, которая отличается от плазмиды pUC18-kno нали-
105 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. JVs 5
чием клонированного по BamHI-сайту полилинкера промотора PHK-
полимеразы III.
Трансфекцию мышиных фибробластов линии LTK~~ проводили Ca-
фосфатным методом [5] из расчета 20 мкг плазмидной Д Н К на фла-
кон клеток объемом 50 мл. Затем клетки отмывали и заливали средой
без сыворотки. Через сутки (1-е сут) эту среду полностью сливали и
замораживали, а клетки заливали свежей. Через двое суток (2—3-е
сут) процедуру повторяли. Следующими точками были 6-е сут (3—6-е
Рис. 2. Динамика секреции AnoAl человека в культуральную среду после трансфекции
мышиных фибробластов различными плазмидами: а — pUC18-Anor; б — pUC18-kno\
в—paLl-Апо; г — контроль
Fig. 2. Dynamics of the human ApoAl gene secretion into the culture liquid after trans-
fection of murine fibroblasts with various plasmids: a — pUC18-Apo; б — pUC18-Apo;
в — paLl-Apo; г — control
сут), Ю-е сут (6—10-е сут) и 13-е сут (10—13-е сут). После этого од-
новременно проводили иммуноферментное тестирование AnoAl в куль-
туральной среде и в клеточных лизатах, используя конъюгаты на осно-
ве пероксидазы хрена.
В клеточных лизатах белок не был обнаружен. Данные иммуно-
ферментного определения AnoAl в культуральной среде представлены
на рис. 2. Максимальная секреция белка в культуральную среду наб-
людалась на 3—10-е сут после введения плазмидных ДНК. Добавление
в культуральную среду липидов (яичный лецитин : холестерин : дице-
тилфосфат в соотношении 7 : 2 : 1 ) не приводило к увеличению секре-
ции AnoAl. Во всех случаях в течение 10 дней наблюдений превыше-
ние количества тестируемого белка над уровнем контроля (клетки без
введения плазмидной ДНК) наблюдали после трансфекции paLl-Auo.
Поскольку калибровочная кривая на основе известных концентра-
ций AnoAl позволяет достоверно определить 10 нг белка в 1 мл куль-
туральной среды, то количество тестируемого AnoAl человека после
трансфекции pUC18-Ano и pUC18-Anor сопоставимо с чувствительно-
стью метода. По-видимому, собственный промотор гена AnoAl челове-
ка (7-членный АТ-богатый участок в положении —264 —258) [2], по
крайней мере для системы клеток LTK~, является слабым. Однако в
том случае, когда ген AnoAl находится под контролем промотора PHK-
полимеразы III человека, общее количество тестируемого белка пре-
вышало фон в 2,5 раза, что в абсолютных величинах более чем на по-
рядок выше чувствительности метода.
Таким образом, нами показана экспрессия клонированного гена
AnoAl человека в культуре мышиных фибробластов линии LTKr. Бе-
лок тестировался в культуральной среде и не тестировался в клетках.
Добавление липидов в культуральную среду не приводило к увеличе-
нию секреции белка трансфицированными клетками. Строение молеку-
лярной конструкции, содержащий ген AnoAl человека, влияет на
уровень экспрессии гена.
106 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. JVs 5
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Apolipoproteins and cardiovascular risk: genetics and epidemiology / Ch. F. Sina,
E. Boerwinkle, P. P. Moll, J. D a v i g n o n / / A n n . Biol. Clin.— H985-—43.— P. 411—417.
2. Breslow J. L. Human apolipoprotein molecular biology and genetics variation / / Ann.
Rev. Biochem.— 1985.—54.—P. 699^-727.
3. Маниатис TФрич ЭСэмбрук Дж. Молекулярное клонирование.— М . : Мир, 1984.—
480 с.
4. Karatanasis S. КZannis V. /., Breslow J. L. Isolation and characterization of the
human apolipoprotein A-1I g e n e / / P r o c . Nat. Acad. Sci. USA.—1983 . -80 , N 20.—
P. 6147—6151.
5. Гловер Д. Клонирование Д Н К . — Μ . : Мир, 1988.—538 с.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики Получено 10.03.89
АН УССР, Киев
Харьк. НИИ терапии МЗ УССР
CLONING OF HUMAN ApoAl GENE AND ITS EXPRESSION
IN MURINE FIBROBLASTS
V. N. Shulzhenko, L. L. Lukash, L. N. Shulyak, Ε. V. Usenko, V. A. Kordyum
Institute of Molecular Biology and Genetics,
Academy of Sciences of the Ukrainian SSR, Kiev
Research Institute of Therapy, Ministry of Public Health
of the Ukrainian SSR, Kharkov
S u m m a r y
The human ApoAl gene has been cloned and its expression has been obtained in the cul-
ture of murine fibroblasts of the LTK~ Iina
107 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. JVs 5
|