Простой метод выделения гаплоидных протопластов из форм множественных почек риса
Для получения протопластов риса использовали одномесячные гаплоидные растения из форм множественных почек, культивируемые стерильно на питательной среде с 0,3 М сахарозой. С этой же целью молодые листья обрабатывали раствором, содержащим 2 % фермента драйселазы и 0,4 М сахарозу, и инкубировали в теч...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Дата: | 1987 |
| Автори: | , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1987
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155258 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Простой метод выделения гаплоидных протопластов из форм множественных почек риса / Хуинг Суан Тхао, Чинь Ман Зунг, Нго Кэ Сыонг // Биополимеры и клетка. — 1987. — Т. 3, № 6. — С. 320-322. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859787683501441024 |
|---|---|
| author | Хуинг Суан Тхао Чинь Ман Зунг Нго Кэ Сыонг |
| author_facet | Хуинг Суан Тхао Чинь Ман Зунг Нго Кэ Сыонг |
| citation_txt | Простой метод выделения гаплоидных протопластов из форм множественных почек риса / Хуинг Суан Тхао, Чинь Ман Зунг, Нго Кэ Сыонг // Биополимеры и клетка. — 1987. — Т. 3, № 6. — С. 320-322. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Биополимеры и клетка |
| description | Для получения протопластов риса использовали одномесячные гаплоидные растения из форм множественных почек, культивируемые стерильно на питательной среде с 0,3 М сахарозой. С этой же целью молодые листья обрабатывали раствором, содержащим 2 % фермента драйселазы и 0,4 М сахарозу, и инкубировали в течение ночи при комнатной температуре. Протопласты были получены центрифугированием с двумя фазами (верхняя содержала раствор солей W₅, нижняя — 0,4 М сахарозу) и взяты из среднего слоя между ними.
Для отримання протопластів рису використано одномісячні гаплоїдні рослини з форм множинних бруньок, стерильно культивовані на живильному середовищі з 0,3 М сахарозою. З цією ж метою молоде листя обробляли розчином, що містить 2 % ферменту драйселази і 0,4 М сахарозу, та інкубували протягом ночі за кімнатної температури. Протопласти отримано центрифугуванням з двома фазами (верхня містила розчин солей W₅, нижня – 0,4 М сахарозу) і взято з середнього шару між ними.
One-month old sterile plantlets grown on the 0.3 M sucrose medium were used for protoplast isolation. The young part of leaves were cut onto small pices (1 mm) and left for over night incubation in the 2 % v/v driselase solution containing glucose 0.4 M. Isolated protoplasts were purified by two-phase centrifugation (the upper phase contains solution of salts, the lower one — 0.4 M of sucrose and other nutritional constituents). The purified protoplasts were suspended between two phases.
|
| first_indexed | 2025-12-02T10:30:01Z |
| format | Article |
| fulltext |
2. Строение некоторых триптических пептидов гранулина вируса гранулеза озимой сов-
ки, Agrotis segetum / Т. Л . Левитина, С. Б. Серебряный, Н. В. Роднин, Э. А. Коз-
л о в / / Т а м же,— 1986,—2, № 1.—С. 30—35.
3. Three-dimensional s t ruc ture of cata lase f rom Penicillium vitale at 2.0 A r e s o l u t i o n /
B. K. Vainshtein, W. R. Melik-Adamyan, V. V. Barynin et al. / / J. Мої. Biol.— 1986.—
188, N 1.—P. 49—61.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Киев Получено 24.03.87
Ин-т биохимии им. А. В. Палладина АН УССР, Киев
УДК 581.1.085
ПРОСТОЙ МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ ГАПЛОИДНЫХ ПРОТОПЛАСТОВ
ИЗ ФОРМ МНОЖЕСТВЕННЫХ ПОЧЕК РИСА
Хуинг Cyan Тхао, Чинь Ман Зунг, Hгo Кэ Сыонг
С 1975 года получение гаплоидного риса стало шаблонным [1]. Гаплоидные растения
в течение длительного времени могут сохраняться и размножаться в форме множест-
венных почек. Природа множественных почек была объяснена впервые так называемым
«эффектом многопобсговости» [2—4]. С тех пор был предпринят ряд серьезных усилий,
направленных на изучение такой важной группы растений, как хлебные злаки, включая
рис [5]. Тем не менее проблема все еще не решена, так как получить культуру прото-
пластов непосредственно из растений риса очень трудно. Единственным источником
протопластов у риса был каллус. Последующая регенерация растений из культуры про-
топластов показала, что этот путь не является осуществимым, поскольку тотипотент-
ность каллусов, особенно пыльцевых, из которых выделяли протопласты, часто была
утрачена [6]. Стремясь найти решение, мы использовали в качестве исходного материа-
ла множественные почки. Протопласты, изолированные непосредственно из проростков,
являются более однородными, и из них легче осуществить регенерацию растений.
Проростки риса были получены при возделывании гаплоидных множественных
почек на среде MC [7], дополненной 15 % (по объему) кокосового молока, 1 г /л пеп-
тона (соевый ферментативный пептон), 15 мг /л тиаминхлорида, 0,2 мг /л нафтилуксус-
ной кислоты и 0,3 M сахарозой. Величину рН устанавливали на уровне 5,8 с помощью
0,1 н. NaOH. Культуру содержали при 28 °С и освещали флюоресцентными лампами
в 2000 лк с чередованием 8 ч света и 16 ч темноты. Протопласты выделяли из моло-
дых листьев одномесячных проростков, выращенных в стерильных условиях в колбах
Эрленмейера объемом 0,5 л, содержащих 150 мл питательной среды. Одним из фак-
торов, эффективно влияющих на рост проростков и массу листьев, пригодных для
изоляции протопластов, являлась концентрация сахарозы (табл. 1).
В течение первой недели при нормальной концентрации сахарозы (0,1 М) наблю-
дался лучший результат, но наибольшего размера проростки достигали через 4 педели
на среде с 0,3 M сахарозой. На этой же среде была получена и наибольшая масса
листьев. Молодые листья затем измельчали и погружали в раствор, содержащий 2 %
Т а б л и ц а 1
Влияние сахарозы на рост (см) полученных из множественных почек проростков риса
и массу их листьев (мг)
Effects of sucrose on the growth of muUishoots originated rice plantlets and leaf harvest
Показатели
Концентрация сахарозы в среде, M
Показатели
0,1 0.2 0,3 0.4
Возраст
1 неделя 10 7 5 4
4 недели 18 25 30 20
Масса листьев в одной колбе 100 200 700 200
320 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. — 1987. — Т. 3, .V> G
драйселазы, 0,4 M глюкозу и разбавленную втрое среду MC, и выдерживали в течение
ночи. Эффективность изоляции и очистки протопластов представлена в табл. 2.
Одинаково просто выделять протопласты из каллусов и непосредственно из мо-
лодых листьев. Количество протопластов из листьев было достаточным для их даль-
нейшего культивирования после очистки от осколков и раствора фермента (рисунок).
Протопласты риса имеют свойство находиться в виде суспензии в растворе 0,4 M са-
харозы и не «всплывать», как другие мезофильные протопласты. В среде W*, содер-
Протопласты из множественных почек риса
Pro top las t s f rom mult ishoots of rice
жащей в 500 мл 4500 мг NaCl, 9200 мг CaCl2, 400 мг KCl, 500 мг глюкозы, протопласты
«оседают», но в значительной степени разрушаются и смешиваются с осколками. При-
менение двухфазного центрифугирования, как показано на схеме, дает наиболее вы-
Солевой
pacmвор W5
Очищенные
протопласты
0,4 М
сахароза
сокую эффективность очистки и позволяет получать до 80 % изолированных прото-
пластов, что вполне достаточно для начала роста культуры с оптимальной плотностью.
Т а б л и ц а 2
Эффективность изоляции и очистки протопластов методом бвухфазного
центрифугирования
Efficiency of isolation and purification by two-phase centrifugation
Количество протопластов, млн шт.
Размер протопластов,
MKM В пробе 100 мг После очистки
(%)
В растворе
W5
В растворе 0,4 M
сахарозы
5 - 9
10—25
Более 25
3 , 2
8 , 0
0 , 9
2 , 3 ( 7 3 )
6 , 2 (77)
0 , 7 ( 7 7 )
0 , 9
1,1
0 , 2
Очень мало
0 , 7 3
0 , 0 7
В с е г о 12,1 9 , 2 ( 7 5 ) 2 , 2 0 ,80
321 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. — 1987. — Т. 3, .V> G
Приведенные выше результаты позволяют сделать вывод, что проростки, происхо-
дящие из гаплоидных множественных почек риса, могут служить хорошим источни-
ком гаплоидных протопластов. Используя выращиваемые in vitro множественные поч-
ки, можно изменять способы предобработки и процедуру культивирования протопластов
для упрощения процессов их изоляции и последующего культивирования. Мы надеем-
ся также, что изолированные таким способом протопласты могут быть сопоставимы
с мезофильными протопластами, выделенными непосредственно из нормальных и ин-
тактных растении, и являться основой физиологически и эпигенетически гомогенного
стерильного материала для работы с гаплоидными протопластами в течение всего
года и в любых климатических условиях. Такая система, вероятно, перспективна для
риса, злакового растения, а также для других растений, в том числе и двудольных,
при модельных исследованиях in vitro.
A SIMPLE METHOD FOR ISOLATION OF HAPLOID PROTOPLASTS
FROM FORMS OF RICE MULTISHOOTS
Huynh Xuan Thao, Trinh Manh Dung, Ngo Ke Suong
Institute of Experimental Biology, Ho Chi Minh City, Vietnam
S u m m a r y
One-month old sterile plantlets grown on the 0.3 M sucrose medium were used for
protoplast isolation. The young part of leaves were cut onto small pices (1 mm) and
left for over night incubation in the 2 % v / v driselase solution containing glucose
0.4 M. Isolated protoplasts were purified by two-phase centrifugation (the upper phase
contains solution of salts, the lower one — 0.4 M of sucrose and other nutritional
constituents). The purified protoplasts were suspended between two phases.
1. Establishment of an efficient medium for anther culture of rice through comparative
experiments on nitrogen sources / C. C. Chu, С. C. Wang, C. S. Sun et al. / / Sci. Si-
nica.— 1975.— N 5.— P. 659—668.
2. King P. Potrykus I., Thomas E. In vitro genetics of cereals: problem and perspecti-
ves / / Physiol. V e g . - 1978.— 16, N 2.— P. 381—399.
3. Further studies on plantlet production from cultured tissues of Sorghum bicolor /
D. I. Dunstan, К. C. Short, H. Dhaliwal et al. / / Protoplasma.— 1979.— 101, N 4.—
P. 355—361.
4. Thomas E., King P. /., Potrykus I. Improvement of crop plants via single cells in
vitro —an assessment J JZ. Pflanzenzucht.— 1979.—82, N 1.—P. 1—30.
5. Vasil I. K. Regeneration of plants from single cells of cereals and grasses / / Genetic
engineering in eukaryotes / Eds P. F. Lurquin, A. Kleinhofs.— New York : Plenum PubL
Co., 1983.— P. 233—252.
6. Глеба Ю. Ю., Ситник K. Μ. Клеточная инженерия растений.— Киев : Наук, думка,
1984.— 160 с.
7. Murashige Т., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with to-
bacco tissue cultures J J Physiol. Plant.— 1962.— 15, N 4.— P. 473—497.
Ин-т эксперим. биологии Нац. центра Получено 04.06.8S
науч. исследований СРВ, Хошимин
УДК 579.887.111:579.252
В ДНК МИКОПЛАЗМ, ОБЛАДАЮЩИХ ПОДВИЖНОСТЬЮ,
ОБНАРУЖЕНЫ ФРАГМЕНТЫ, ГОМОЛОГИЧНЫЕ ГЕНУ
АКТИНА ЭУКАРИОТ
О. А. Чернова, Н. А. Меркулова, С. Н. Борхсениус
Микоплазмы — собирательное название представителей класса Mollicutes — самых ма-
лых из свободноживущих прокариотических организмов. Большинство микоплазм —
симбионты, многие — паразиты, некоторые микоплазмы — возбудители болезней чело-
века, животных, растений [1, 2]. Как правило, они неподвижны, но некоторые пато-
генные микоплазмы, в частности, Mycoplasma pneumoniae (возбудитель атипичной пнев-
322 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. — 1987. — Т. 3, .V> G
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155258 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-02T10:30:01Z |
| publishDate | 1987 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Хуинг Суан Тхао Чинь Ман Зунг Нго Кэ Сыонг 2019-06-16T15:00:56Z 2019-06-16T15:00:56Z 1987 Простой метод выделения гаплоидных протопластов из форм множественных почек риса / Хуинг Суан Тхао, Чинь Ман Зунг, Нго Кэ Сыонг // Биополимеры и клетка. — 1987. — Т. 3, № 6. — С. 320-322. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.000205 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155258 581.1.085 Для получения протопластов риса использовали одномесячные гаплоидные растения из форм множественных почек, культивируемые стерильно на питательной среде с 0,3 М сахарозой. С этой же целью молодые листья обрабатывали раствором, содержащим 2 % фермента драйселазы и 0,4 М сахарозу, и инкубировали в течение ночи при комнатной температуре. Протопласты были получены центрифугированием с двумя фазами (верхняя содержала раствор солей W₅, нижняя — 0,4 М сахарозу) и взяты из среднего слоя между ними. Для отримання протопластів рису використано одномісячні гаплоїдні рослини з форм множинних бруньок, стерильно культивовані на живильному середовищі з 0,3 М сахарозою. З цією ж метою молоде листя обробляли розчином, що містить 2 % ферменту драйселази і 0,4 М сахарозу, та інкубували протягом ночі за кімнатної температури. Протопласти отримано центрифугуванням з двома фазами (верхня містила розчин солей W₅, нижня – 0,4 М сахарозу) і взято з середнього шару між ними. One-month old sterile plantlets grown on the 0.3 M sucrose medium were used for protoplast isolation. The young part of leaves were cut onto small pices (1 mm) and left for over night incubation in the 2 % v/v driselase solution containing glucose 0.4 M. Isolated protoplasts were purified by two-phase centrifugation (the upper phase contains solution of salts, the lower one — 0.4 M of sucrose and other nutritional constituents). The purified protoplasts were suspended between two phases. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Краткие сообщения Простой метод выделения гаплоидных протопластов из форм множественных почек риса Простий метод виділення гаплоїдних протопластів з форм множинних бруньок рису A simple method for isolation of haploid protoplasts from forms of rice multishoots Article published earlier |
| spellingShingle | Простой метод выделения гаплоидных протопластов из форм множественных почек риса Хуинг Суан Тхао Чинь Ман Зунг Нго Кэ Сыонг Краткие сообщения |
| title | Простой метод выделения гаплоидных протопластов из форм множественных почек риса |
| title_alt | Простий метод виділення гаплоїдних протопластів з форм множинних бруньок рису A simple method for isolation of haploid protoplasts from forms of rice multishoots |
| title_full | Простой метод выделения гаплоидных протопластов из форм множественных почек риса |
| title_fullStr | Простой метод выделения гаплоидных протопластов из форм множественных почек риса |
| title_full_unstemmed | Простой метод выделения гаплоидных протопластов из форм множественных почек риса |
| title_short | Простой метод выделения гаплоидных протопластов из форм множественных почек риса |
| title_sort | простой метод выделения гаплоидных протопластов из форм множественных почек риса |
| topic | Краткие сообщения |
| topic_facet | Краткие сообщения |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155258 |
| work_keys_str_mv | AT huingsuanthao prostoimetodvydeleniâgaploidnyhprotoplastovizformmnožestvennyhpočekrisa AT činʹmanzung prostoimetodvydeleniâgaploidnyhprotoplastovizformmnožestvennyhpočekrisa AT ngokésyong prostoimetodvydeleniâgaploidnyhprotoplastovizformmnožestvennyhpočekrisa AT huingsuanthao prostiimetodvidílennâgaploídnihprotoplastívzformmnožinnihbrunʹokrisu AT činʹmanzung prostiimetodvidílennâgaploídnihprotoplastívzformmnožinnihbrunʹokrisu AT ngokésyong prostiimetodvidílennâgaploídnihprotoplastívzformmnožinnihbrunʹokrisu AT huingsuanthao asimplemethodforisolationofhaploidprotoplastsfromformsofricemultishoots AT činʹmanzung asimplemethodforisolationofhaploidprotoplastsfromformsofricemultishoots AT ngokésyong asimplemethodforisolationofhaploidprotoplastsfromformsofricemultishoots |