Виділення і рестрикційний аналіз двох плазмід Streptomyces globisporus 1912
Сумарну плазмідну ДНК, виділену за допомогою лужної денатурації і нагрівання лізатів міцелію, очищено в східчастому градієнті щільності хлористого цезію і розділено на дві фракції електрофорезом у гелі звичайної і легкоплавкої агарози. Рестрикційний аналіз фракцій ДНК показав наявність двох плазмід...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Дата: | 1998 |
| Автори: | , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Українська |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1998
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155385 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Виділення і рестрикційний аналіз двох плазмід Streptomyces globisporus 1912 / Б.П. Мацелюх, В.В. Лук'янчук, Л.В. Поліщук, А.Б. Мацелюх, Ю. Pop // Биополимеры и клетка. — 1998. — Т. 14, № 3. — С. 238-241. — Бібліогр.: 8 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859740241847386112 |
|---|---|
| author | Мацелюх, Б.П. Лук'янчук, В.В. Поліщук, Л.В. Мацелюх, А.Б. Pop, Ю. |
| author_facet | Мацелюх, Б.П. Лук'янчук, В.В. Поліщук, Л.В. Мацелюх, А.Б. Pop, Ю. |
| citation_txt | Виділення і рестрикційний аналіз двох плазмід Streptomyces globisporus 1912 / Б.П. Мацелюх, В.В. Лук'янчук, Л.В. Поліщук, А.Б. Мацелюх, Ю. Pop // Биополимеры и клетка. — 1998. — Т. 14, № 3. — С. 238-241. — Бібліогр.: 8 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Биополимеры и клетка |
| description | Сумарну плазмідну ДНК, виділену за допомогою лужної денатурації і нагрівання лізатів міцелію, очищено в східчастому градієнті щільності хлористого цезію і розділено на дві фракції електрофорезом у гелі звичайної і легкоплавкої агарози. Рестрикційний аналіз фракцій ДНК показав наявність двох плазмід pSG1912-I і pSG1912-2, розміри яких становлять 10,3 і 22,4 тис. пар нуклеотидів відповідно. Обидві плазміди стабільно виділяються із штамів стрептоміцета з різними рівнями споруляції та синтезу ландоміцину Е.
Из мицелия трех штаммов Streptomyces globisporus 1912, отличающихся интенсивностью споруляции и уровнем образования антибиотика ландомицина Е, выделены две многокопийные плазмиды pSG1912-l и pSG1912-2 размерами 10,3 и 22,4 тыс. пар нуклеотмдов соответственно. Определено количество сайтов узнавания для рестриктаз Bglll, КрпІ, PvuII и SacI на молекулах ДНК плазмид.
Two plasmids pSG1912-1 (10,3 kb) and pSG1912-2 (22,4 kb) were isolated from mycelium of three Streptomyces globisporus strains differing in the level of sporulation and landomycin E production. The number of restriction sites for endonucleases Bglll, Kpnl, PviJI and Sad was determined in both plasmid molecules.
|
| first_indexed | 2025-12-01T16:56:33Z |
| format | Article |
| fulltext |
I S S N 0233-7657. Биополимеры и клетка. 1998. Т. 14. № 3
Г Е Н Н О И Н Ж Е Н Е Р Н А Я Б И О Т Е Х Н О Л О Г И Я
Виділення і рестрикційний аналіз двох плазмід
Streptomyces globisporus 1912
Б, П. Мацелюх, В- В. Лук'янчук, Л. В, Поліщук, А. Б. Мацелюх, Ю. Pop 1
Інститут мікробіології і вірусології ім. Д . К. Заболотного НАН України
252143, Київ, вул. Академіка Заболотного, 154
1
Інститут органічної хімії Геггінгенського університету, Німеччина
Геттінген, Тамманштрассе, 2
Сумарну плазмідну ДИК, виділену за допомогою лужної денатурації і нагрівання лізатів міцелію,
очищено в східчастому градієнті щільності хлористого цезію і розділено на дві фракції електро
форезом у гелі звичайної і легкоплавкої агарози. Рестрикційний аналіз фракцій Дії К показав
наявність двох плазмід pSGI9I2~I і pSGI912-2, розміри яких становлять 10,3 і 22,4 тис. пар
нуклеотидів відповідно. Обидві плазміди стабільно виділяються із штамів стрептоміцета з
різними рівнями споруляції та синтезу ландоміцину Е.
В с т у п , С т р е п т о м і ц е т и — н а й в и с о к о р о з в и н е н і ш і
п р о к а р і о т и ч н і м і к р о о р г а н і з м и з м і ц е л і а л ь н о ю будо
в о ю к л і т и н і с п о р о у т в о р е н н я м , щ о с т а н о в л я т ь з н а ч
н и й н а у к о в и й і н т е р е с д л я г е н е т и к и і м а ю т ь н е
м е н ш е п р а к т и ч н е з н а ч е н н я д л я б і о т е х н о л о г і ї я к
п р о м и с л о в і п р о д у ц е н т и б і л ь ш о с т і о п и с а н и х а н
т и б і о т и к і в . Р а н і ш е б у л о п о к а з а н о , щ о ш т а м S.
globisporus 1 9 1 2 , в и д і л е н и й у 1967 р . з к а ш т а н о в о г о
г р у н т у , м і с т и т ь п л а з м і д н у Д Н К і с и н т е з у є а н
т и б і о т и к н е в і д о м о ї п р и р о д и , я к и й п р и г н і ч у є р іст
г р а м п о з и т и в н и х м і к р о о р г а н і з м і в , о с о б л и в о с т р е п -
т о м і ц е т і в [ 1 ] . З р о б л е н о с п р о б и р е с т р и к ц і й н о г о
а н а л і з у в и д і л е н о ї Д Н К п л а з м і д и [2 ] і к л о н у в а н н я
ф р а г м е н т і в п л а з м і д и в* с к л а д і в е к т о р а pUC19 у
к л і т и н а х к и ш к о в о ї п а л и ч к и [ 3 ] . З а д а н и м и п о п е
р е д н ь о г о а н а л і з у , р о з м і р п л а з м і д и д о р і в н ю є 11 ,2
т и с я ч п а р н у к л е о т и д і в ( т и с . п . н . ) . А н т и б і о т и ч н а
р е ч о в и н а , в и д і л е н а з а г а р и з о в а н о г о с е р е д о в и щ а
дводобово ї к у л ь т у р и с т р е п т о м і ц е т а , м а є т а к о ж п р о
т и п у х л и н н у а к т и в н і с т ь , п р и г н і ч у ю ч и р іст к а р ц и н о
м и Г е р е н а щ у р і в [ 4 ] . Н е д а в н о в с п і в р о б і т н и ц т в і з
н і м е ц ь к и м и в ч е н и м и б у л о в с т а н о в л е н о м о л е к у л я р
н у с т р у к т у р у а н т и б і о т и к а , я к и м в и я в и л а с я щ е н е
о п и с а н а с п о л у к а п о л і к е т и д н о ї п р и р о д и з г р у п и
а н г у ц и к л і н і в — л а н д о м і ц и н Е [5 ] .
М е т о ю ц і є ї р о б о т и б у л о б і л ь ш д о с к о н а л е
(С) Б П. МАЦЕЛЮХ, В. В. ЛУК'ЯНЧУК, Л. В. ПОЛІЩУК,
А. Б МАЦЕЛЮХ, К) 1Ч>}\ 1998
д о с л і д ж е н н я к і л ь к о с т і і р о з м і р і в п л а з м і д , щ о у с п а д
к о в у ю т ь с я в и х і д н и м ш т а м о м 5 . globisporus 1 9 1 2 , а
т а к о ж й о г о п о х і д н и м и с у б к л о н а м и з р і з н и м и
р і в н я м и с п о р у л я ц і ї і с и н т е з у а н т и б і о т и к а . Ц е д а л о
б з м о г у в и я с н и т и з а л е ж н і с т ь м і ж т а к и м и в а ж л и в и
м и о з н а к а м и к у л ь т у р и , я к с п о р у л я ц і я , у т в о р е н н я
а н т и б і о т и к а і у с п а д к у в а н н я п л а з м і д .
М а т е р і а л и і м е т о д и . У р о б о т і в и к о р и с т а н о т р и
ш т а м и S. globisporus 1 9 1 2 , о д е р ж а н і п р и м о н о с п о -
р о в о м у розс ів і в и х і д н о ї к у л ь т у р и : 1) ш т а м , щ о
н а г а д у є в и х і д н у к у л ь т у р у — д о б р е с п о р у л ю є , с и н
т е з у є а н т и б і о т и к у н е з н а ч н і й к і л ь к о с т і і п р и розс ів і
в и щ е п л я є т р и т и п и к о л о н і й ; 2) с т а б і л ь н и й к л о н ,
я к и й с л а б о с п о р у л ю є і м а є с е р е д н і й р і в е н ь а н
т и б і о т и ч н о ї а к т и в н о с т і ; 3) с т а б і л ь н и й к л о н , я к и й
н е с п о р у л ю є і с и н т е з у є в е л и к у к і л ь к і с т ь л а н
д о м і ц и н у Е .
П л а з м і д н у Д Н К в и д і л я л и з а м е т о д о м К а й з е р а
[ 6 ] з м і ц е л і ю д в о д о б о в о ї к у л ь т у р и , в и р о щ е н о ї в
к о л б а х н а к а ч а л ц і в с е р е д о в и щ і (г/л): К 2 Н Р 0 4 —
2 , 0 , M g S 0 4 - 7 H 2 0 — 0 , 5 , г л ю к о з а — 1,0, п е п т о н —
4 , 0 , д р і ж д ж о в и й е к с т р а к т — 4 , 0 , е к с т р а к т с о л о
д у — 1,0, р Н д о с т е р и л і з а ц і ї — 7 , 2 . М і ц е л і й
л і з у в а л и в Т Е - б у ф е р і ( 2 5 м М т р и с , 2 5 м М N a 2
E D T A , р Н 8 ,0) л і з о ц и м о м (2 м г / м л ) п р и 37 °С
п р о т я г о м ЗО х в , д о л і з а т у д о д а в а л и 0 , 5 о б ' є м у 0 , 3 М
N a O H з 1 % д о д е ц и л с у л ь ф а т о м н а т р і ю , с у м і ш
с т а р а н н о п е р е м і ш у в а л и ( т р и ч і п р о п у с к а л и ч е р е з
2 3 8
ВИДІЛЕННЯ І РЕСТРИКЦІЙНИЙ АНАЛІЗ ДВОХ ПЛАЗМІД
2 0 мл п л а с т и к о в и й ш п р и ц ) і н а г р і в а л и п р и 6 0 °С
п р о т я г о м 3 0 хв . П і с л я о х о л о д ж е н н я л і з а т о б р о б л я
л и к и с л и м ф е н о л о м — х л о р о ф о р м о м ( 1 : 1 ) , д о с у п е р -
н а т а н т у д о д а в а л и д е с я т у ч а с т и н у З М а ц е т а т ) '
н а т р і ю і р і в н и й о б ' є м і з о п р о п а н о л у . О с а д п і с л я
ц е н т р и ф у г у в а н н я в и с у ш у в а л и і р о з ч и н я л и в Т Е -
б у ф е р і . О д е р ж а н у п л а з м і д н у Д Н К о ч и щ а л и у л ь т
р а ц е н т р и ф у г у в а н н я м п р и 5 0 т и с . о б / х в і 18 °С
п р о т я г о м 4 год в с х і д ч а с т о м у г р а д і є н т і щ і л ь н о с т і
х л о р и с т о г о ц е з і ю 17 ]. Б р о м и с т и й е т и д і й е к с т р а г у
в а л и водо н а с и ч е н и м я - б у т а н о л о м і Д Н К о с а д ж у в а
л и п і с л я т р и к р а т н о г о р о з в е д е н н я д е і о н і з о в а н о ю в о
д о ю в 2 , 5 о б ' є м у е т а н о л у . Д а л і п л а з м і д н у Д Н К
ф р а к ц і о н у в а л и за д о п о м о г о ю е л е к т р о ф о р е з у в
0 ,7 % - м у а г а р о з н о м у гел і , в и к о р и с т о в у ю ч и Т В Е -
б у ф е р [8 |. Г е л ь ф а р б у в а л и б р о м и с т и м е т и д і є м і п ід
У Ф с в і т л о м в и р і з а л и п е р е д с м у г а м и п л а з м і д н о ї
Д Н К к в а д р а т и в і д п о в і д н о ї в е л и ч и н и , з а п о в н и в ш и
п у с т о т и 0 ,8 % - ю л е г к о п л а в к о ю а г а р о з о ю . Е л е к т р о
ф о р е з п р о д о в ж у в а л и д о п о я в и с м у г п л а з м і д н о ї
Д Н К у гел і л е г к о п л а в к о ї а г а р о з и . О к р е м і с м у г и
( ф р а к ц і ї ) п л а з м і д н о ї Д Н К в и р і з а л и р а з о м з г е л е м ,
н а г р і в а л и в Т Е - б у ф е р і д о 6 5 °С п р о т я г о м 10 х в і
о ч и щ а л и п о в т о р н о ю о б р о б к о ю ф е н о л о м , ф е н о л о м —
х л о р о ф о р м о м і х л о р о ф о р м о м . Д Н К о с а д ж у в а л и
е т а н о л о м і р о з ч и н я л и в б і д е с т и л ь о в а н і й в о д і .
П л а з м і д н у Д Н К , о ч и щ е н у т а к и м ч и н о м , в и к о р и
с т о в у в а л и д л я р е с т р и к п і й н о г о а н а л і з у за д о п о м о
г о ю Bglll, Краї, РУПІЇ І SacI е н д о н у к л е а з . Hindlll-
ф р а г м е н т и Д Н К ф а г а л я м б д а с л у ж и л и с т а н д а р т а м и
д л я п о б у д о в и к а л і б р у в а л ь н о ї к р и в о ї д л я в и з н а ч е н
н я р о з м і р і в д о с л і д ж у в а н и х п л а з м і д . У робот і в и к о
р и с т а н о р е а к т и в и ф і р м и «S ig raa» ( С Ш А ) д л я м о л е
к у л я р н о - б і о л о г і ч н и х д о с л і д ж е н ь .
Р е з у л ь т а т и т а о б г о в о р е н н я . Н а р и с 1 н а в е д е н о
г е л ь - е л е к т р о ф о р е г р а м у т р ь о х п р е п а р а т і в
п л а з м і д н о ї Д Н К , в и д і л е н о ї із ш т а м і в з р і з н и м и
р і в н я м и с п о р у л я ц і ї і а н т и б і о т и к о у т в о р е н н я п і с л я
п о п е р е д н ь о г о о ч и щ е н н я в г р а д і є н т і щ і л ь н о с т і х л о
р и с т о г о ц е з і ю . П л а з м і д н а Д Н К д о б р е в и р а ж е н а
д в о м а с м у г а м и р і зно ї і н т е н с и в н о с т і , я к і з н а х о д я т ь
с я в зоні г е л ю л е г к о п л а в к о ї а г а р о з и . Д Н К н и ж н ь о ї
з о н и , о д е р ж а н а в а н а л о г і ч н о м у п о п е р е д н ь о м у
досл ід і і н а н е с е н а н а д о р і ж к у 9 , у т в о р ю є дв і с м у
ги — о д н у у в е р х н і й і о д н у у н и ж н і й з о н а х . О т ж е ,
м о ж н а п р и п у с т и т и , щ о п л а з м і д н а Д Н К н и ж н ь о ї
з о н и п р е д с т а в л е н а к о в а л е н т н о з а м к н е н и м и
к і л ь ц е в и м и м о л е к у л а м и ( К З К ) , я к і п і с л я п о в т о р
н и х о б р о б о к ф е н о л о м , ф е н о л о м — х л о р о ф о р м о м і
х л о р о ф о р м о м п р и о ч и с т ц і від а г а р о з и з а з н а ю т ь
о д н о н и т ч а с т и х р о з р и в і в , п е р е т в о р ю ю ч и с ь ч а с т к о в о
у в і д к р и т і к і л ь ц е в і м о л е к у л и ( В К ) . Ч о т и р и п р е п а
р а т и п л а з м і д н о ї Д Н К о д е р ж а н о із л е г к о п л а в к о г о
г е л ю і ї хн і е л е к т р о ф о р е т и ч н і п р о ф і л і н а в е д е н о н а
р и с . 2 . П р е п а р а т 1 в и д і л е н и й із н и ж н ь о ї з о н и
с п о р у л ю ю ч о г о ш т а м а , п р е п а р а т 2 — з т іє ї ж з о н и
Рис. І. Електрофоре грама плазмідної Д Н К , яка проникла в межі гелю легкоплавкої агарози і виділена із спорулюючого {1—4),
слабосгюрулюючого (5—8) і неспорулюючого (10—13) штамів, з також з гелю легкоплавкої агарози, що містила нижню смугу Д Н К
(9)
Рис. 2. Електрофореграма плазмідної Д Н К , виділеної з гелю легкоплавкої агарози (рис. 1): 1, 2 — ДНК з нижньої смуги
спорулюючого штаму, розведена в 2 і 3 рази відповідно; 3, 4 — Д Н К з нижньої смуги слабоспоруюючого і неспорулюючого штамів,
розведена в 2 і 3 рази відповідно; .5 — Д Н К з верхньої смуги спорулюючого штама; 0, 7 — суміш Д Н К з верхньої смуги
слабоспоруюючого і неспорулюючого штамів
2 3 9
МАШіЛЮХ Ь П. ТА ІН.
с л а б о с п о р у л ю ю ч о г о т а н е с п о р у л ю ю ч о г о ш т а м і в .
В ідпов ідно в и д і л е н о п р е п а р а т и 3 і 4 з в е р х н ь о ї
з о н и . Як в и д н о н а р и с . 2 , о б и д в а п р е п а р а т и Д Н К з
н и ж н ь о ї з о н и у т в о р ю ю т ь в гел і д в і о д н а к о в і з а
п о л о ж е н н я м с м у г и , т о б т о в о н и н а л е ж а т ь м е н ш і й за
р о з м і р а м и п л а з м і д і і п р е д с т а в л е н і д в о м а к о н ф о р -
м а ц і й н и м и с т а н а м и м о л е к у л — К З К і В К . Н а
т о м і с т ь п р е п а р а т и Д Н К 3 і 4 з в е р х н ь о ї з о н и
у т в о р ю ю т ь в гелі т р и т і с н і ш е р о з м і щ е н і с м у г и , з
я к и х в е р х н я і н и ж н я ч і т к о в і д р і з н я ю т ь с я в ід с м у г
п о п е р е д н ь о ї п л а з м і д и , і т о м у н е м а є с у м н і в у , щ о
в о н и н а л е ж а т ь і н ш і й і б і л ь ш і й з а р о з м і р а м и
н л а з м і д і . З г а д а н і с м у г и т а к о ж у т в о р ю ю т ь с я К З К і
В К м о л е к у л а м и . С е р е д н я с м у г а м о ж е б у т и В К - ф о р
м о ю м е н ш о ї п л а з м і д и . Н а ш і п р и п у щ е н н я щ о д о
н а я в н о с т і д в о х п л а з м і д в р і з н и х к о н ф о р м а ц і й н и х
с т а н а х б у л и п і д т в е р д ж е н і д а н и м и р е с т р и к ц і й н о г о
а н а л і з у . Я к в и п л и в а є з д а н и х р и с . З і 4 , п р е п а р а т и
Д Н К н и ж н ь о ї з о н и д а ю т ь а н а л о г і ч н і з а р о з м і р а м и
і к і л ь к і с т ю ф р а г м е н т и Д Н К п і с л я р е с т р и к ц і ї , щ о
с в і д ч и т ь п р о ї х н ю н а л е ж н і с т ь д о м е н ш о ї з а
р о з м і р а м и п л а з м і д и , я к у м и н а з в а л и pSG 1912-1,
Ц я п л а з м і д а м а є о д и н с а й т р е с т р и к ц і ї д л я Sad,
п е р е т в о р ю ю ч и с ь п і с л я п е р е в а р у у л і н і й н у м о л е к у
л у р о з м і р о м 1 0 , 3 т и с п . н. ( д о р і ж к и 3 і 14 р и с . 3 ) .
Р е с т р и к т а з а Pvull ( д о р і ж к а 8, р и с . 2 і д о р і ж к а
J , р и с . 3) р о з р і з а є м о л е к у л у Д Н К п л а з м і д и у д в о х
с а й т а х , с п р и ч и н ю ю ч и п о я в у д в о х ф р а г м е н т і в Д Н К
р о з м і р а м и 8 ,5 і 1,8 т и с . п . н . Крпі с а м а , а т а к о ж у
с у м і ш і з Sari у т в о р ю є т р и а н а л о г і ч н и х ф р а г м е н
т и —-6,5 , 2 , 4 і 1,9 т и с п , н . , щ о в сум і с т а н о в и т ь
10 ,8 т и с п . н .
П р е п а р а т и Д Н К 3 і 4 з в е р х н ь о ї з о н и г е л ю
н а л е ж а т ь і н ш і й і б і л ь ш і й п л а з м і д і — pSG1912-2.
В о н и т а к о ж д а ю т ь і д е н т и ч н у к а р т и н у р е с т р и к ц і ї ,
щ о д о в о д и т ь ї х н є с п і л ь н е п о х о д ж е н н я від б і л ь ш о ї
п л а з м і д и , Р е с т р и к т а з а Bglll в и к л и к а є п о я в у о д н о г о
ф р а г м е н т а Д Н К р о з м і р о м 1 9 , 5 т и с п . н . ( д о р і ж к а 7,
р и с . З і д о р і ж к а 4, р и с 4 ) . Р е с т р и к т а з и PvuIIi Sad
р о з щ е п л ю ю т ь м о л е к у л у Д Н К п л а з м і д и у т р ь о х
с а й т а х . С у м а р о з м і р і в j P v w / 7 - ф р а г м е н т і в п р е п а р а т і в
З і 4 с т а н о в и т ь 2 3 , 6 і 2 2 , 4 т и с п . н. в і д п о в і д н о , а
т а к а ж с у м а £ а с \ / - ф р а г м е н т і в — 2 4 , 2 і 2 2 , 4 т и с п .
н . , щ о с в і д ч и т ь п р о д о б р е у з г о д ж е н н я о д е р ж а н и х
д а н и х . В н а с л і д о к п о д в і й н о г о п е р е в а р у Д Н К
п л а з м і д и р е с т р и к т а з а м и Sad і Крпі о д е р ж а н о
ш і с т ь ф р а г м е н т і в , с у м а р о з м і р і в я к и х д о р і в н ю є 2 2 , 5
т и с п. н . Т а к и м ч и н о м , н а п і д с т а в і р е с т р и к ц і й н о г о
а н а л і з у м о ж н а в в а ж а т и , щ о п л а з м і д а pSG1912-2
м а є р о з м і р 2 2 , 4 т и с п . н .
Рис. 3. Електрофоретичний аналіз плазмід, оброблених рестриктазами: 1—5 — Д Н К з нижньої смуги слабоспорулюючого і
неспорулюючого штамів; 6 — Д Н К фага лямбда + Hindlll; 7—11 — Д Н К з верхньої смуги спорулюючого штама; 12—15 — Д Н К з
нижньої смуги спорулюючого штама; Рестриктази: Bglll — 1, 7, 0; Pvul—2, в, ІЗ; Sad— 3, 9, 14; Крпі —-15; Sad + Крпі — 4,
10; контроль — 5, И
Рис. 4. Електрофоретичний аналіз плазмід, оброблених рестриктазами: 1—2 — Д Н К з нижньої смуги спорулюючого штаму; 3 —
Д Н К фага лямбда + Hindlll; 4—6 — суміш Д Н К з нижньої зони слабоспорулюючого і неспорулюючого штамів; рестриктази: ВатНІ
— 1, Крпі — 2; Bglll — 4; Pvull — 5 \ Sad — 6
2 4 0
В и х о д я ч и з і н т е н с и в н о с т і с м у г в а г а р о з н о м у
гелі п р е п а р а т і в Д Н К , в и д і л е н и х з а м е т о д о м К а й з е
р а , м о ж н а в в а ж а т и о б и д в і п л а з м і д и б а г а т о -
к о л і й н и м и . С п р о б и е л і м і н у в а т и п л а з м і д и з а д о п о
м о г о ю р і з н и х ф а к т о р і в ( У Ф о п р о м і н е н н я с п о р і
ф р а г м е н т о в а н о г о м і ц е л і ю , ї х н я о б р о б к а б р о м и с т и м
е т и д і є м і н і т р о з о г у а н і д и н о м т а в и р о щ у в а н н я п р и
п і д в и щ е н і й т е м п е р а т у р і ) н е д а л и п о з и т и в н и х р е
з у л ь т а т і в , щ о м о ж е в к а з у в а т и н а в а ж л и в е з н а ч е н н я
обох п л а з м і д д л я ж и т т є д і я л ь н о с т і к л і т и н с т р е п
т о м і ц е т а . П л а з м і д и с у м і с н і і м а ю т ь д е я к і о д н а к о в і
з а р о з м і р а м и ф р а г м е н т и п і с л я о б р о б к и р е с т р и к т а -
з а м и ВатНІ і КрпІ, Н е в и к л ю ч е н а м о ж л и в і с т ь , щ о
в о н и с п о р і д н е н і і в і д н о с я т ь с я д о о д н і є ї р о д и н и .
Б і о л о г і ч н а ф у н к ц і я п л а з м і д п о к и щ о з а л и ш а є т ь с я
н е в и з н а ч е н о ю .
Б. П. Мацелюх, В. В. Лукьянчук, Л. В. Полищук, А. Б.
Мацелюх, Ю. Pop
В ы д е л е н и е и р е с т р и к ц и о н н ы й а н а л и з д в у х п л а з м и д
Streptomyces globisporus 1912
Резюме
Из мицелия трех штаммов Streptomyces globisporus 1912,
отличающихся интенсивностью сгюруляции и уровнем образо
вания антибиотика ландомицина Е, выделены две многокопий-
ные плазмш)ы pSG1912-l и pSG1912-2 размерами 10,3 и 22,4
тыс. пар нуклеотмдов соответственно. Определено количест
во сайтов узнавания для рестриктаз Bglll, КрпІ, PvuII и SacI
на молекулах ДНК плазмид.
ВИДІЛЕННЯ 1 РЕСТРИКЦІЙНИЙ АНАЛІЗ ДВОХ ПЛАЗМІД
В. P. Matselyukh, V. V. Lukyanch.uk, L. V. Polishchuk,
А. В. Matselyukh, J. Rohr
Isolation and restriction analysis of two plasmids from Streptomyces
globisporus 1912
Summary
Two plasmids pSG 1912-1 (10,3 kb) and pSG1912-2 (22,4 kb) were
isolated from mycelium of three Streptomyces globisporus strains
differing in the level of sporulation and landomycin E production.
The number of restriction sites for endonucleases Bglll, Kpnl,
PvuII and SacI was determined in both plasmid molecules.
СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ
1. Полищук Л. В., Дехтяренко Т. Д., Стефанишин Е. Е. и
др. Плазмиды стрептомицетов глобиспориновой группы / /
Микробиол. ж у р н . — 1 9 8 5 . - 4 7 , № 4 .—С. 83—88.
2. Стефанишин Е. Е., Дехтяренко Т. Д., Полищук Л. В. и
др. Рестрикционный анализ плазмиды pSG19l2 II Там
ж е . — 1 9 8 6 . — 4 8 , № 2 . — С . 7 9 — 8 0 .
3 . Заверуха В. В., Полевода Б. В., Полищук Л. В., Мацелюх
Б. П. Клонирование фрагментов стрептомицетной плаз
миды pSG1912 в составе вектора pUC19 II Там же .—
1992 .—54, № 5 .—С. 3 0 — 3 4 .
4. Поліщук Л. В., Ганусевич I. /.,, Мацелюх Б. Я. Вивчення
протипухлинної дії антибіотиків, що продукуються Strep
tomyces globisporus 1912 на моделі карциноми Герена у
щурів / / Там ж е . — 1 9 9 6 . — 5 8 , № 2 .—С 5 5 — 5 8 .
5. Matselyukh В., Polishchuk L., Rohr J. Plasmid-induced syn
thesis of antibiotics in Streptomycetes II Biol. Streptomy-
cetes.—Ohrbeck, 1996 .—P. 38.
6. Kieser T. Plasmid isolation by alkaline lysis (Streptomyces or
E. coli): procedure 2 II Genetic manipulation of Streptomyces.
A laboratory manual.—Norwich: The John Innes Found.,
1985.—P. 8 5 — 9 2 .
7. Rychlik W. Fast separations of plasmid DNA using discon
tinuous gradients in the preparative ultracentrifuge / / Bio-
Techniques.— 1995 .—18, N 1.—P. 9 0 — 9 2 .
8. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное кло
нирование.—М.: Мир, 1984. — 1 6 2 с.
Надійшла до редакції 14.07.97
241
http://Lukyanch.uk
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155385 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-01T16:56:33Z |
| publishDate | 1998 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Мацелюх, Б.П. Лук'янчук, В.В. Поліщук, Л.В. Мацелюх, А.Б. Pop, Ю. 2019-06-16T17:16:53Z 2019-06-16T17:16:53Z 1998 Виділення і рестрикційний аналіз двох плазмід Streptomyces globisporus 1912 / Б.П. Мацелюх, В.В. Лук'янчук, Л.В. Поліщук, А.Б. Мацелюх, Ю. Pop // Биополимеры и клетка. — 1998. — Т. 14, № 3. — С. 238-241. — Бібліогр.: 8 назв. — укр. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0004D3 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155385 Сумарну плазмідну ДНК, виділену за допомогою лужної денатурації і нагрівання лізатів міцелію, очищено в східчастому градієнті щільності хлористого цезію і розділено на дві фракції електрофорезом у гелі звичайної і легкоплавкої агарози. Рестрикційний аналіз фракцій ДНК показав наявність двох плазмід pSG1912-I і pSG1912-2, розміри яких становлять 10,3 і 22,4 тис. пар нуклеотидів відповідно. Обидві плазміди стабільно виділяються із штамів стрептоміцета з різними рівнями споруляції та синтезу ландоміцину Е. Из мицелия трех штаммов Streptomyces globisporus 1912, отличающихся интенсивностью споруляции и уровнем образования антибиотика ландомицина Е, выделены две многокопийные плазмиды pSG1912-l и pSG1912-2 размерами 10,3 и 22,4 тыс. пар нуклеотмдов соответственно. Определено количество сайтов узнавания для рестриктаз Bglll, КрпІ, PvuII и SacI на молекулах ДНК плазмид. Two plasmids pSG1912-1 (10,3 kb) and pSG1912-2 (22,4 kb) were isolated from mycelium of three Streptomyces globisporus strains differing in the level of sporulation and landomycin E production. The number of restriction sites for endonucleases Bglll, Kpnl, PviJI and Sad was determined in both plasmid molecules. uk Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Генно-инженерная биотехнология Виділення і рестрикційний аналіз двох плазмід Streptomyces globisporus 1912 Выделение и рестрикционный анализ двух плазмид Streptomyces globisporus 1912 Isolation and restriction analysis of two plasmids from Streptomyces globisporus 1912 Article published earlier |
| spellingShingle | Виділення і рестрикційний аналіз двох плазмід Streptomyces globisporus 1912 Мацелюх, Б.П. Лук'янчук, В.В. Поліщук, Л.В. Мацелюх, А.Б. Pop, Ю. Генно-инженерная биотехнология |
| title | Виділення і рестрикційний аналіз двох плазмід Streptomyces globisporus 1912 |
| title_alt | Выделение и рестрикционный анализ двух плазмид Streptomyces globisporus 1912 Isolation and restriction analysis of two plasmids from Streptomyces globisporus 1912 |
| title_full | Виділення і рестрикційний аналіз двох плазмід Streptomyces globisporus 1912 |
| title_fullStr | Виділення і рестрикційний аналіз двох плазмід Streptomyces globisporus 1912 |
| title_full_unstemmed | Виділення і рестрикційний аналіз двох плазмід Streptomyces globisporus 1912 |
| title_short | Виділення і рестрикційний аналіз двох плазмід Streptomyces globisporus 1912 |
| title_sort | виділення і рестрикційний аналіз двох плазмід streptomyces globisporus 1912 |
| topic | Генно-инженерная биотехнология |
| topic_facet | Генно-инженерная биотехнология |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155385 |
| work_keys_str_mv | AT macelûhbp vidílennâírestrikcíiniianalízdvohplazmídstreptomycesglobisporus1912 AT lukânčukvv vidílennâírestrikcíiniianalízdvohplazmídstreptomycesglobisporus1912 AT políŝuklv vidílennâírestrikcíiniianalízdvohplazmídstreptomycesglobisporus1912 AT macelûhab vidílennâírestrikcíiniianalízdvohplazmídstreptomycesglobisporus1912 AT popû vidílennâírestrikcíiniianalízdvohplazmídstreptomycesglobisporus1912 AT macelûhbp vydelenieirestrikcionnyianalizdvuhplazmidstreptomycesglobisporus1912 AT lukânčukvv vydelenieirestrikcionnyianalizdvuhplazmidstreptomycesglobisporus1912 AT políŝuklv vydelenieirestrikcionnyianalizdvuhplazmidstreptomycesglobisporus1912 AT macelûhab vydelenieirestrikcionnyianalizdvuhplazmidstreptomycesglobisporus1912 AT popû vydelenieirestrikcionnyianalizdvuhplazmidstreptomycesglobisporus1912 AT macelûhbp isolationandrestrictionanalysisoftwoplasmidsfromstreptomycesglobisporus1912 AT lukânčukvv isolationandrestrictionanalysisoftwoplasmidsfromstreptomycesglobisporus1912 AT políŝuklv isolationandrestrictionanalysisoftwoplasmidsfromstreptomycesglobisporus1912 AT macelûhab isolationandrestrictionanalysisoftwoplasmidsfromstreptomycesglobisporus1912 AT popû isolationandrestrictionanalysisoftwoplasmidsfromstreptomycesglobisporus1912 |